Композиции вакцин, содержащие наборы антигенов в виде амилоида бета 1-6
Настоящее изобретение относится к областям молекулярной биологии, вирусологии, иммунологии и медицины. В изобретении предложена композиция, которая содержит упорядоченный и повторяющийся набор антигенов или антигенных детерминант, и, в частности, композиция, которая содержит конъюгат Aβ1-6-пептид-ВПЧ. Более конкретно в изобретении представлена композиция, которая содержит вирусоподобную частицу и связанный с ней по меньшей мере один Aβ1-6-пептид. В изобретение описан также способ получения конъюгатов и упорядоченных и повторяющихся наборов соответственно. Композиции, предлагаемые в изобретении, можно применять для получения вакцин, предназначенных для лечения болезни Альцгеймера, и в качестве фармацевтических агентов, предназначенных для предупреждения или лечения болезни Альцгеймера и для эффективной индукции иммунных ответов, в частности, гуморальных иммунных ответов. Кроме того, установлено, что композиции, предлагаемые в изобретении, прежде всего можно применять для эффективной индукции аутоантигенных иммунных ответов. 6 н. и 39 з.п. ф-лы, 35 ил., 22 пр.
Текст описания приведен в факсимильном виде.
1. Композиция для применения в качестве иммуногена, содержащая:
(а) коровую частицу с по меньшей мере одним первым сайтом присоединения в которой коровой частицей является частица РНКого бактериофага;
(б) по меньшей мере один антиген или антигенную детерминанту с по меньшей мере одним вторым сайтом присоединения,
где антиген или антигенная детерминанта представляет собой Аβ1-6-пептид, и где второй сайт присоединения выбирают из группы, включающей:
(I) сайт присоединения, который не встречается в естественных условиях в антигене или антигенной детерминанте; и
(II) сайт присоединения, который встречается в естественных условиях в антигене или антигенной детерминанте,
где второй сайт присоединения может ассоциироваться с первым сайтом присоединения; и где Aβ1-6-пептид и коровая частица взаимодействуют благодаря этой ассоциации с образованием упорядоченного и повторяющегося набора антигенов.
2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что вирусоподобная частица содержит или в другом варианте состоит из рекомбинантных белков или их фрагментов РНКового бактериофага.
3. Композиция по п.1 или 2, отличающаяся тем, что РНКовый бактериофаг выбирают из группы, включающей:
(а) бактериофаг Qβ;
(б) бактериофаг R17;
(в) бактериофаг fr;
(г) бактериофаг GA;
(д) бактериофаг SP;
(е) бактериофаг MS2;
(ж) бактериофаг M11;
(з) бактериофаг МХ1;
(и) бактериофаг NL95;
(к) бактериофаг f2;
(л) бактериофаг РР7; и
(м) бактериофаг АР205.
4. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что вирусоподобная частица содержит или в другом варианте состоит из рекомбинантных белков или их фрагментов РНКового бактериофага Qβ.
5. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что вирусоподобная частица содержит или в другом варианте состоит из рекомбинантных белков или их фрагментов РНКового бактериофага fr.
6. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что вирусоподобная частица содержит или в другом варианте состоит из рекомбинантных белков или их фрагментов РНКового бактериофага АР205.
7. Композиция по любому из пп.2-6, отличающаяся тем, что рекомбинантные белки содержат или в другом варианте состоят из оболочечных белков РНКовых бактериофагов.
8. Композиция по п.7, отличающаяся тем, что оболочечные белки РНКовых бактериофагов имеют аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей:
(a) SEQ ID NO:4;
(б) смесь SEQ ID NO:4 и SEQ ID NO: 5;
(в) SEQ ID NO:6;
(г) SEQ ID NO:7;
(д) SEQ ID NO:8;
(e) SEQ ID NO:9;
(ж) смесь SEQ ID NO:9 и SEQ ID NO:10;
(з) SEQ ID NO:11;
(и) SEQ ID NO:12;
(к) SEQ ID NO:13;
(л) SEQ ID NO:14;
(м) SEQ ID NO:15;
(н) SEQ ID NO:16; и
(о) SEQ ID NO:28.
9. Композиция по пп.1, 2 и 4-6, отличающаяся тем, рекомбинантные белки содержат или в другом варианте состоят из мутантных оболочечных белков РНКовых бактериофагов.
10. Композиция по п.9, отличающаяся тем, что РНКовый бактериофаг выбирают из группы, включающей:
(а) бактериофаг Qβ;
(б) бактериофаг R17;
(в) бактериофаг fr;
(г) бактериофаг GA;
(д) бактериофаг SP;
(e) бактериофаг MS2;
(ж) бактериофаг M11;
(з) бактериофаг МХ1;
(и) бактериофаг NL95;
(к) бактериофаг f2;
(л) бактериофаг РР7; и
(м) бактериофаг АР205.
11. Композиция по пп.9 и 10, отличающаяся тем, что мутантные оболочечные белки РНКового бактериофага модифицированы путем удаления по меньшей мере одного остатка лизина с помощью замены.
12. Композиция по пп.9 и 10, отличающаяся тем, что мутантные оболочечные белки РНКового бактериофага модифицированы путем добавления по меньшей мере одного остатка лизина с помощью замены.
13. Композиция по пп.9 и 10, отличающаяся тем, что мутантные оболочечные белки РНКового бактериофага модифицированы путем делеции по меньшей мере одного остатка лизина.
14. Композиция по пп.9 и 10, отличающаяся тем, что мутантные оболочечные белки РНКового бактериофага модифицированы путем добавления по меньшей мере одного остатка лизина с помощью инсерции.
15. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что второй сайт присоединения может ассоциироваться с первым сайтом присоединения с помощью по меньшей мере одной ковалентной связи.
16. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что второй сайт присоединения может ассоциироваться с первым сайтом присоединения с помощью по меньшей мере одной непептидной связи.
17. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что Aβ1-6-пептид слит с коровой частицей.
18. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что Aβ1-6-пептид выбирают из группы, включающей:
(а) человеческий Aβ1-6-пептид, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:75;
(б) мышиный Aβ1-6-пептид, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:76;
(в) Aβ1-6-пептид приматов, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:84;
(г) кроличий Aβ1-6-пептид, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:85;
(д) Аβ1-6 пептид лягушки Xenopus laevis, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:86;
(е) крысиный Aβ1-6-пептид, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:87; и
(ж) Aβ1-6-пептид морской свинки, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:88.
19. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что Аβ1-пептид имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:75.
20. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что дополнительно содержит аминокислотный линкер, где аминокислотный линкер содержит или в другом варианте состоит из второго сайта присоединения.
21. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что второй сайт присоединения или аминокислотный линкер, несущий второй сайт присоединения, связывают с Aβ1-6-пептидом на его С-конце.
22. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что второй сайт присоединения или аминокислотный линкер, несущий второй сайт присоединения, выбирают из группы, включающей:
(а) GGC;
(б) GGC-CONH2;
(в) GC;
(г) GC-CONH2;
(д) С; и
(е) C-CONH2.
23. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что Аβ1-6 пептид, несущий по меньшей мере один второй сайт присоединения, представляет собой NH2-DAEFRHGGC-CONH2 (SEQ ID NO:77).
24. Композиция по п.23, отличающаяся тем, что вирусоподобная частица представляет собой вирусоподобную частицу оболочечного белка РНКового фага QP.
25. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанная вирусоподобная частица включает белок оболочки рекомбинантного РНК бактериофага QP с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:4; указанный второй сайт присоединения способен связываться с указанным первым сайтом присоединения через по меньшей мере одну непептидную связь; и указанный пептид Аβ1-6 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:75;
и композиция дополнительно включает аминокислотный линкер, где указанный аминокислотный линкер включает линкер, выбранный из группы включающей (a) CGC, где указанный по меньшей мере один второй сайт присоединения включает указанный линкер, и указанный пептид Аβ1-6 с по меньшей мере одним вторым сайтом присоединения имеет последовательность DAEFRHGGC; или (б) GGC-CONH2, где указанный по меньшей мере один второй сайт присоединения включает линкер, и указанный пептид Aβ1-6 с указанным по меньшей мере одним вторым сайтом присоединения имеет последовательность NH2-DAEFRHGGC-CONH2.
26. Композиция по п.1 или 25, отличающаяся тем, что указанная композиция дополнительно включает гетеробифункциональный кросс-линкер, содержащий функциональную группу, которая может взаимодействовать с указанным первым сайтом присоединения, и дополнительную функциональную группу, которая может взаимодействовать с указанным вторым сайтом присоединения.
27. Композиция по п.26, отличающаяся тем, что указанный гетеробифункциональный кросс-линкер содержит функциональную группу, которая может взаимодействовать с боковой цепью аминогруппы остатка лизина вирусоподобной частицы или по меньшей мере с одной субъединицей вирусоподобной частицы.
28. Композиция по п.26, отличающаяся тем, что указанная дополнительная функциональная группа указанного гетеробифункционального кросс-линкера взаимодействует с цистеиновым остатком, слитым с пептидом Аβ1-6.
29. Композиция по п.26, отличающаяся тем, что указанный гетеробифункциональный кросс-линкер выбирается из SMPH, Sulfo-MBS, Sulfo-GMBS, Sulfo-SlAB, Sulfo-SMPB, Sulfo-SMCC, SVSB, SIA и другими кросс-линкерами, имеющими одну функциональную группу реактивную в отношении аминогрупп и одну функциональную группу реактивную в отношении остатков цистеина.
30. Композиция по п.26, отличающаяся тем, что гетеробифункциональным кросс-линкером является SPDP или Sulfo-LC-SPDP.
31. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики болезни Альцгеймера и родственных заболеваний, содержащая:
(а) композицию по любому из пп.1-29; и
(б) приемлемый фармацевтический носитель.
32. Фармацевтическая композиция по п.21, отличающаяся тем, что дополнительно содержит адъювант.
33. Фармацевтическая композиция по п.31, отличающаяся тем, что представляет собой фармацевтическую композицию вакцины без адъюванта.
34. Композиция вакцины для лечения или профилактики болезни Альцгеймера и родственных заболеваний, содержащая композицию по одному из предыдущих пунктов.
35. Композиция вакцины по п.34, отличающаяся тем, что дополнительно содержит адъювант.
36. Композиция вакцины по п.34, отличающаяся тем, что представляет собой композицию вакцины без адъюванта.
37. Способ получения композиции по любому из предыдущих пунктов, заключающийся в том, что:
(а) получают коровую частицу, несущую по меньшей мере один первый сайт присоединения;
(б) получают по меньшей мере один антиген или антигенную детерминанту, которые с по меньшей мере одним вторым сайтом присоединения,
где антиген или антигенная детерминанта представляет собой Аβ1-6-пептид, и
где второй сайт присоединения выбирают из группы, включающей:
(I) сайт присоединения, который не встречается в естественных условиях в антигене или антигенной детерминанте; и
(II) сайт присоединения, который встречается в естественных условиях в антигене или антигенной детерминанте; и
где второй сайт присоединения может ассоциироваться с первым сайтом присоединения;
(в) объединяют коровую частицу и по меньшей мере один антиген или антигенную детерминанту, где антиген или антигенная детерминанта и коровая частица взаимодействуют благодаря ассоциации с образованием упорядоченного и повторяющегося набора антигенов.
38. Способ иммунизации, заключающийся в том, что животному или человеку вводят композицию по любому из пп.1-36 в эффективном количестве.
39. Способ иммунизации по п.38, отличающийся тем, что антиген или антигенная детерминанта представляет собой аутоантиген.
40. Способ иммунизации по любому из пп.38 и 39, отличающийся тем, что животное представляет собой человека.
41. Способ иммунизации по любому из пп.38-40, отличающийся тем, что антиген или антигенная детерминанта представляет собой человеческий Aβ1-6-пептид.
42. Композиция по любому из пп.1-30, предназначенная для применения в качестве лекарственного средства для лечения или профилактики болезни Альцгеймера и родственных заболеваний.
43. Композиция по любому из пп.31-33, предназначенная для применения в качестве лекарственного средства для лечения или профилактики болезни Альцгеймера и родственных заболеваний.
44. Композиция по любому из пп.34-36, предназначенная для применения в качестве лекарственного средства для лечения или профилактики болезни Альцгеймера и родственных заболеваний.
45. Применение композиции по любому из пп.1-36 для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики болезни Альцгеймера и родственных заболеваний.
