Способ выделения чистой культуры стафилококков


 


Владельцы патента RU 2458990:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова Министерства сельского хозяйства Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам выделения чистой культуры микроорганизмов из патологического биоматериала, и может быть использовано в ветеринарной медицине и животноводстве. Способ предусматривает измельчение патологического биоматериала с последующей его гомогенизацией и приготовлением из него суспензии. В полученную суспензию вносят 3-5% лимонной кислоты из расчета ее содержания в суспензии. Выдерживают в течение 20-30 минут при 10-20°C, добавляют 3-4% янтарной кислоты и выдерживают в течение 20-30 минут при 10-20°C с последующей нейтрализацией суспензии 5-10% раствором аммиака и доведением pH до 7,5-7,6. Нейтрализованную суспензию отстаивают в течение 20-30 минут, декантируют надосадочную жидкость и содержимое осадка высевают на питательную среду, содержащую в 1 л дистиллированной воды 8,0 г лимонной кислоты, 2,0 г цитрата аммония, 3,0 г янтарной кислоты, 2,0 г аспарагина или глицина, 5,0 г фосфорнокислого калия двухзамещенного, 0,5 г сернокислого магния, 0,3 г сернокислого цинка, 3,0 г фосфорнокислого натрия двухзамещенного, 5,0-6,0 г хлористого натрия, 0,1 г сернокислого железа и 40-50 мл глицерина при pH 7,5-7,6. Для получения плотной агаровой питательной среды в жидкую среду, разведенную дистиллированной водой 1:1, добавляют 2,5 г агара на 100 мл жидкой среды и доводят содержание хлористого натрия до 5-6%. Изобретение позволяет сократить сроки выделения стафилококков. 1 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам выделения чистой культуры микроорганизмов из патологического материала.

Известен способ выделения чистой культуры стафилококков путем высева содержимого патологического биоматериала (гной, кровь и т.п.) на чашку Петри с мясопептонным молочно-солевым агаром с 7,5% раствором поваренной соли и 10% молочной сыворотки (Матвеев К.И. Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней. М.: Медицина, 1973. - С.354-355.).

В упомянутом способе отсутствует предварительная обработка патологического материала для уничтожения посторонней микрофлоры (протея, синегнойной и кишечной палочек, стрептококков и т.п.), которая в определенных условиях может подавлять рост и развитие стафилококков и загрязнять культуру.

Известен способ выделения чистой культуры стафилококков на скошенный в пробирках или в чашках Петри мясопептонный или молочно-солевой агар с добавлением 5% кроличьей крови, обеспечивающий прорастание стафилококков на поверхности агара (Коротяев А.И., Бабичев С.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. Учебник для вузов. - СПб, 1998. - с.334-335).

Недостатком способа является отсутствие средств подавления посторонней микрофлоры, необходимость трудоемкого и затратного приготовления и использования мясопептонного или молочно-солевого агара с добавлением 5% кроличьей крови, неравномерный и слабый рост стафилококков и прорастание на поверхности агара посторонней микрофлоры.

Целью предлагаемого изобретения является ускоренное выделение чистой культуры стафилококков.

Предлагается способ выделения чистой культуры стафилококков путем обработки суспензии патологического биоматериала, обсемененного стафилококками и другими микроорганизмами, сначала 3-5%-ной лимонной кислотой в течение 20-30 минут при 10-20°C, затем 3%-ной янтарной кислотой для подавления посторонней микрофлоры в течение 20-30 минут при 10-20°C с последующей нейтрализацией суспензии 5-10%-ным раствором аммиака до pH 7,5-7,6, отстаиванием в течение 20-30 минут, декантацией надосадочной жидкости и высевом содержимого осадка в жидкую питательную среду или на агаровую среду с pH 7,5-7,6.

Технический результат способа - обильный рост чистой культуры стафилококков через 24-36 часов в жидкой питательной среде или на всей поверхности агаровой среды и отсутствие роста посторонней микрофлоры.

Пример осуществления способа

Суспензию из гомогенизированного патологического биоматериала (измельченных кусочков пораженных органов, гноя, крови), полученного от больных животных, инфицированных стафилококками, в объеме 100 мл помещают в стеклянную емкость, вносят лимонную кислоту из расчета 3-5% ее содержания в суспензии, выдерживают в течение 20-30 минут при 10-20°C, затем добавляют 3-4% янтарной кислоты и выдерживают в течение 20-30 минут при температуре 10-20°C. После обработки суспензии кислотами ее нейтрализуют 5-10%-ным раствором аммиака, доводят pH до 7,5-7,6, отстаивают суспензию в течение 20-30 минут, декантируют надосадочную жидкость. Содержимое осадка высевают в жидкую питательную среду, содержащую в 1 л дистиллированной воды 8,0 г лимонной кислоты, 2,0 г цитрата аммония, 3,0 г янтарной кислоты, 2,0 г аспарагина или глицина, 5,0 г фосфорнокислого калия двухзамещенного, 0,5 г сернокислого магния, 0,3 г сернокислого цинка, 3,0 г фосфорнокислого натрия двухзамещенного, 5,0-6,0 г хлористого натрия, 0,1 г сернокислого железа и 40-50 мл глицерина. Реакция среды доводится 5-10%-ным раствором аммиака до pH 7,5-7,6. Питательная среда после приготовления подвергается автоклавированию. Содержимое осадка также можно высевать на поверхность агаровой питательной среды, приготовленной на основе приведенного состава жидкой среды. В жидкую питательную среду упомянутого состава, разведенную в соотношении 1:1 дистиллированной водой, добавляют 2,5 г агара на 100 мл жидкой питательной среды и доводят содержание хлористого натрия до 5-6%. Перед высевом питательную среду подвергают автоклавированию. Присутствие в питательной среде наряду с янтарной кислотой хлористого натрия создает условия, благоприятные для культуры стафилококков, и подавляет рост посторонней микрофлоры. Обильный рост стафилококков проявляется через 24-36 часов в толще жидкой питательной среды и на всей поверхности агаровой среды.

В научно-технической и патентной литературе не обнаружено технических решений, аналогичных заявляемому способу, поэтому способ удовлетворяет условию патентоспособности «новизна».

Технический результат получен благодаря разработанному режиму предварительной обработки патологического биоматериала, а также составу питательной среды для высева стафилококков, полученной как в жидком виде, так и с добавлением агара, сочетание заявляемых признаков удовлетворяет условию патентоспособности «изобретательский уровень».

Предлагаемый способ выделения чистой культуры стафилококков может применяться в ветеринарной медицине и животноводстве в целях диагностики инфекционных болезней животных, вызываемых стафилококками, а также для получения вакцин для профилактики и лечения этих болезней, то есть способ удовлетворяет условию патентоспособности «промышленная применимость».

Таблица
Результаты исследования способа выделения чистой культуры стафилококков
№ п/п Способ и средства подавления посторонней микрофлоры в суспензии патологического материала Рост микроорганизмов при высеве на агаровую питательную среду с глицерином и 5-6% хлористого натрия
Сальмонеллы, 100 тыс. в 1 мл суспензии Кишечная палочка, 100 тыс. в 1 мл суспензии Стафилококки, 100 тыс. в 1 мл суспензии
1 2 3 4 5
1. 3%-ная лимонная кислота в течение 20-30 минут, а затем 3%-ная янтарная кислота 20-30 минут Рост отсутствует Рост отсутствует Обильный рост на поверхности агара через 24-36 часов
2. 5%-ная лимонная кислота в течение 20-30 минут, а затем 4%-ная янтарная кислота Рост отсутствует Рост отсутствует Обильный рост на поверхности агара через 24-36 часов

Способ выделения чистой культуры стафилококков, включающий посев суспензии гомогенизированного патологического биоматериала, обсемененного стафилококками и другими микроорганизмами на питательную среду, отличающийся тем, что перед посевом проводят обработку суспензии вначале 3-5%-ной лимонной кислотой в течение 20-30 мин при температуре 10-20°C, затем 3-4%-ной янтарной кислотой в течение 20-30 мин при температуре 10-20°C, нейтрализуют суспензию 5-10%-ным раствором аммиака до pH 7,5-7,6, после отстаивания в течение 20-30 мин проводят декантацию надосадочной жидкости, а содержимое осадка высевают в жидкую питательную среду, содержащую в 1 л дистиллированной воды 8,0 г лимонной кислоты, 2,0 г цитрата аммония, 3,0 г янтарной кислоты, 2,0 г аспарагина или глицина, 5,0 г фосфорнокислого калия двухзамещенного 0,5 г сернокислого магния, 0,3 г сернокислого цинка, 3,0 г фосфорнокислого натрия двухзамещенного, 5,0-6,0 г хлористого натрия, 0,1 г сернокислого железа и 40-50 мл глицерина при pH 7,5-7,6, или на поверхность агаровой питательной среды, полученной добавлением 2,5% агара в жидкую среду, разведенную дистиллированной водой 1:1, и доведением содержания хлористого натрия до 5-6%.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу диагностики биоматериалов на наличие в них агробактерий. .

Изобретение относится к области медицинской биотехнологии и может быть использовано для получения основного протективного антигена холерного вибриона В-субъединицы холерного токсина, применяемого в дальнейшем для получения антитоксических сывороток, высокоспецифических иммуноглобулинов и диагностических тест-систем, а также в качестве компонента, добавляемого к вакцинным препаратам.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу идентификации микобактерий с помощью полимеразной цепной реакции. .
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано для культивирования дифтерийных микробов в искусственных питательных средах при бактериологической диагностике дифтерии.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению белков, обладающих нейромодуляторным действием по отношению к никотиновым ацетилхолиновым рецепторам человека, и может быть использовано в медицине.
Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и может быть использовано для получения биоинсектицида для борьбы с большой восковой молью. .

Изобретение относится к области промышленной микробиологии, а именно к способам получения биомассы туляремийного микроба, и может быть использован для выделения антигенных компонентов как из клеток, так и из культуральной жидкости для создания диагностических препаратов против возбудителя туляремии.
Изобретение относится к биотехнологии и зоотехнии и может быть использовано при промышленном производстве симбиотического препарата из штамма Escherichia coli VL-613. .

Изобретение относится к медицинским методам диагностики хламидиоза, гарднереллеза, трихоманиаза, уреаплазмоза, микоплазмоза по составу равновесной газовой фазы над цервикальной слизью и может быть использовано для определения наличия их возбудителей в пробе цервикальной слизи.
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в исследовательской работе НИИ и практической работе бактериологических лабораторий клинических учреждений для изучения механизма эпителиально-бактериальных взаимодействий и их роли в формировании нормальных микробиоценозов тела человека.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и биотехнологии и может быть использовано при определении эффективных мер лечения хронических инфекционных заболеваний человека в условиях моделирования в доклинических экспериментах.
Изобретение относится к области медицинской микробиологии и, в частности, к детекции антибиотикоустойчивых штаммов возбудителя чумы. .
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам выделения чистой культуры микроорганизмов из патологического материала. .
Изобретение относится к области микробиологии, а именно - к способу выявления и отбора культур микроорганизмов, способных биохимически разрушать (трансформировать) микотоксины.

Изобретение относится к биохимии, а именно к способам определения обсемененности мочи, секрета предстательной железы, эякулята факультативно-анаэробными и неклостридиально-анаэробными бактериями, и может быть использовано для установления диагностической значимости микроорганизмов при местных инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиотических состояниях урогенитального тракта человека.
Изобретение относится к биохимии, а именно к способам определения обсемененности мочи, секрета предстательной железы, эякулята бактериями, и может быть использовано для установления диагностической значимости микроорганизмов при местных инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиотических состояниях урогенитального тракта человека.

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и касается способа дифференциации бактерий Francisella tularensis subsp.mediasiatica. .

Изобретение относится к области микробиологии. .
Наверх