Моноклональные антитела против nkg2a
Настоящее изобретение относится к иммунологии. Предложено моноклональное антитело или его фрагмент, вызывающее лизис NK клетками клеток мишеней человека, несущих на своей поверхности HLA-E, необязательно конъюгированные с детектируемым маркером. Антитело или его фрагмент специфичны к NKG2A, имеют тяжелую и легкую цепи, каждая из которых содержит 3 CDR, не связывает специфически NKG2C или NKG2E человека и Fc рецептор. Описаны фармацевтическая композиция, способ восстановления NK опосредованного лизиса клеток мишеней, конъюгат, набор и способ детекции, основанные на использовании антитела. Раскрыта композиция для лечения аутоиммунных или воспалительных заболеваний. Использование изобретения может найти применение в стимуляции NK-клеток, приводя к лизису дендритных клеток, которые вносят вклад в патологию аутоиммунных или воспалительных заболеваний, что может найти применение в медицине. 7 н. и 29 з.п. ф-лы, 4 ил., 5 табл., 12 пр.
Текст описания приведен в факсимильном виде.
1. Моноклональное антитело или его фрагмент, вызывающее лизис NK клетками клеток мишеней человека, несущих на своей поверхности HLA-E, необязательно конъюгированное с детектируемым маркером, характеризующееся
а) специфическим связыванием с NKG2A, причем антитело или фрагмент характеризуются тяжелой цепью, содержащей гипервариабельный участок 1 (CDR1), CDR2 и CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи с последовательностью SED ID NQ:2 и легкой цепью, содержащей гипервариабельный участок 1 (CDR1), CDR2 и CDR3 вариабельного участка легкой цепи с последовательностью SED ID NO:6;
б) тем, что существенно не связываются специфически с Fc-рецептором; и
в) тем, что при связывании с NKG2A на NK-клетке человека вызывают лизирование названной NK-клеткой клетки-мишени человека, несущей HLA-E на поверхности клетки-мишени, когда названная клетка-мишень входит в контакт с названной NK-клеткой;
г) отсутствием специфического связывания с NKG2C или NKG2E человека.
2. Моноклональное антитело или его фрагмент по п.1, дополнительно характеризующееся тем, что оно предотвращает ассоциацию NKG2A человека с HLA-E.
3. Моноклональное антитело или его фрагмент по п.1, где указанная клетка-мишень является аутологичной клеткой.
4. Моноклональное антитело или его фрагмент по п.1, где указанная клетка-мишень является клеткой человека, выбранной из дендритной клетки, раковой клетки, клетки, инфицированной вирусом.
5. Моноклональное антитело или его фрагмент по любому из пп.1-4, дополнительно характеризующиеся связыванием с NKG2A из приматов (не-человека).
6. Моноклональное антитело или его фрагмент по п.5, где при связывании с NKG2A на NK-клетке примата (не-человека) названное антитело индуцирует лизис клетки-мишени примата (не-человека), несущей HLA-E на поверхности клетки-мишени, под действием названной NK-клетки, когда названная клетка-мишень входит в контакт с названной NK-клеткой.
7. Моноклональное антитело или его фрагмент по п.1, включающее гипервариабельный участок 1 (CDR1), CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 2 и гипервариабельный участок 1 (CDR1), CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO: 6.
8. Моноклональное антитело или его фрагмент по любому из пп.1-7, где названное антитело включает Fc область мышиного или человеческого IgG1, которая была модифицирована для предотвращения связывания с Fc-рецептором.
9. Моноклональное антитело или его фрагмент по любому из пп.1-8, где названное антитело или его фрагмент являются человеческим, химерным или гуманизированным.
10. Моноклональное антитело или его фрагмент по любому из пп.1-9, где названное антитело включает константную область человеческого IgG4.
11. Моноклональное антитело или его фрагмент по любому из пп.1-10, где в указанных CDR аминокислотные остатки относят к каждому CDR в соответствии с определениями Kabat или системой нумерации Chotia.
12. Моноклональное антитело или его фрагмент по п.10, где названное антитело или его фрагмент получают на основе последовательности нуклеиновой кислоты, включающей SEQ ID NO:3.
13. Моноклональное антитело или его фрагмент по п.10, где названное антитело или его фрагмент получают на основе последовательности нуклеиновой кислоты, включающей SEQ ID NO:7.
14. Фармацевтическая композиция для восстановления лизиса NK-клетками клеток-мишеней, несущих на своей поверхности HLA-E, включающая:
а) эффективное количество моноклоналъного антитела или его фрагмента по любому из пп.1-13; и
б) фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
15. Композиция по п.14, где названная композиция составлена для фармацевтического применения.
16. Композиция по п.15, дополнительно включающая второй терапевтический агент, выбранный из: терапевтического агента, применяемого в лечении рака, включая химиотерапевтическое соединение, гормон, ингибитор ангиогенеза, или апоптотический агент; терапевтического агента, применяемого для лечения инфекционного заболевания, включая антивирусное соединение; терапевтического агента, применяемого в других иммунотерапиях, таких как лечение аутоиммунного заболевания, воспалительных заболеваний и отторжения трансплантата; цитокина; ингибитора цитокина, иммуномодуляторного агента; гемопоэтического дополнительного соединения; фактора роста; агониста активирующего рецептора NK-клетки или антагониста ингибиторного рецептора NK-клетки.
17. Способ восстановления опосредованного NK-клетками лизиса клетки-мишени в популяции, включающей NK-клетку и названную клетку-мишень, где названная NK-клетка характеризуется наличием NKG2A на ее поверхности, и названная клетка-мишень характеризуется присутствием HLA-E на ее поверхности, причем названный способ включает стадию контактирования названной NK-клетки с моноклональным антителом или его фрагментом по любому из пп.1-13.
18. Способ по п.17, где названная NK-клетка является клеткой человека и названная клетка-мишень является клеткой человека, выбранной из дендритной клетки, раковой клетки, инфицированной вирусом клетки.
19. Композиция по п.15 в качестве лекарственного средства.
20. Композиция для лечения аутоиммунных или воспалительных заболеваний, составленная для фармацевтического применения, содержащая моноклональное антитело или его фрагмент, характеризующееся:
а) специфическим связыванием с NKG2A;
б) тем, что существенно не связываются специфически с Fc-рецептором; и
в) тем, что при связывании с NKG2A на NK-клетке человека вызывают лизирование названной NK-клеткой клетки-мишени человека, несущей HLA-E на поверхности клетки-мишени, когда названная клетка-мишень входит в контакт с названной NK-клеткой;
г) отсутствием специфического связывания с NKG2C или NKG2E человека для применения в лечение пациента.
21. Композиция по п.20, представляющая собой композицию по п.14.
22. Композиция по п.20, предназначенная для комбинирования со вторым терапевтическим агентом, выбранным из: иммуносупрессора, кортикостероида, ингибитора TNF, соединения, стимулирующего NCR, ингибитора KIR ингибиторного рецептора, ингибитора TGF-бета-1, ингибитора цитокина, гемопоэтического фактора роста, обезболивающего агента, или противовоспалительного агента, где названный второй терапевтический агент вводят либо как отдельную лекарственную форму, либо как часть названной композиции.
23. Композиция по п.20, где названное аутоиммунное или воспалительное заболевание выбрано из группы, состоящей из аутоиммунной гемолитической анемии, пернициозной анемии, узелкового полиартрита, системной красной волчанки, грануломатоза Вегенера, аутоиммунного гепатита, болезни Бехчета, болезни Крона, первичного биллиарного цирроза, склеродермии, язвенного колита, синдрома Сьегрена, сахарного диабета I типа, увеита, болезни Гравеса, тиреоидита, миокардита, ревматоидной лихорадки, анкилозирующего спондилита, ревматоидного артрита, гломерулоиефрита, саркоидоза, дерматомиозита, миастении гравис, полиомиозита, синдрома Гийена-Барре, множественного склероза, алопеции ареата, пузырчатки/немфигонда, псориаза и витилиго.
24. Композиция по п.15, предназначенная для применения для лечения рака у пациента, где названный рак характеризуется присутствием раковых клеток, экспрессирующих HLA-E на их клеточной поверхности.
25. Композиция по п.24, предназначенная для комбинирования со вторым терапевтическим агентом, выбранным из противоракового агента или противорвотного средства, где названный второй терапевтический агент вводят либо как отдельную лекарственную форму, либо как часть названной композиции.
26. Композиция по п.15 для применения для лечения вирусного заболевания у пациента, где названное вирусное заболевание характеризуется присутствием инфицированной вирусом клетки, экспрессирующей HLA-E на ее клеточной поверхности.
27. Композиция по п.20, предназначенная для комбинирования с противовирусным агентом, где названный противовирусный агент вводят либо как отдельную лекарственную форму, либо как часть названной композиции.
28. Композиция по п.15 для применения для индукции толерантности к антигену у пациента, где указанную композицию применяют в комбинации с антигеном.
29. Композиция по п.28 для применения для лечения аутоиммунного заболевания или аллергии.
30. Композиция по п.15 для применения для улучшения приживаемости гемопоэтических клеток у пациента.
31. Композиция по п.30, предназначенная для применения в комбинации со вторым терапевтическим агентом, выбранным из противоракового агента, или гемопоэтического ростового фактора, где названный второй терапевтический агент вводят либо как отдельную лекарственную форму, либо как часть названной композиции.
32. Композиция по п.30 или 31, где названный пациент страдает лейкемией.
33. Конъюгат для детектирования связывания с NKG2A антитела или другой молекулы, включающий антитело по любому из пп.1-13 и детектируемый маркер.
34. Конъюгат по п.33, где указанный детектируемый маркер выбран из радиоизотопа, флуоресцентного красителя, члена пары «антиген - антитело», отличного от антитела против NKG2A, члена пары «лектин - углевод», авидина, биотина, члена пары «лиганд - рецептор» или члена системы «молекулярно импринтируемый полимер-молекула-отпечаток».
35. Набор для детекции связывания с NKG2A, включающий:
а) конъюгат по п.33; и
б) материал, содержащий NKG2A.
36. Способ детекции in vitro связывания антитела с NKG2A, включающий стадии:
а) контактирования конъюгата в соответствии с пунктом 33 с материалом, содержащим NKG2A;
б) количественного определения количества детектируемого маркера, связанного с названным материалом, включающим NKG2A;
в) контактирования конъюгата по п.33 и названного антитела с названным материалом, содержащим NKG2A;
г) количественного определения количества детектируемого маркера, связанного с названным материалом, содержащим NKG2A, в присутствии названного антитела;
д) сравнение количества детектируемого материала, определенного количественно на стадии б), с количеством, определенным количественно на стадии в), для определения того, связывается ли названное антитело с материалом, содержащим NKG2A.
