Двухфазная питательная среда для тонкослойного культивирования helicobacter pylori и способ его осуществления


 


Владельцы патента RU 2518304:

Федеральное Бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (RU)

Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано в медицине. Способ предусматривает предварительный посев исследуемого материала на Колумбия агар с добавлением 5% крови барана. Термостатируют в микроаэрофильных условиях в СО2 инкубаторе при 37°С в течение 3-5 дней при повышенной влажности. Производят отбор колоний и пересевают их на чашки Петри с шоколадным агаром и термостатируют в микроаэрофильных условиях в СО2 инкубаторе при 37°С в течение 3-5 дней при повышенной влажности. По завершении стадии термостатирования чашки Петри с шоколадным агаром заливают сверху жидкой питательной средой на основе бульона Шедлера, обогащенного 10% сывороткой крупного рогатого скота с последующим термостатированием их в СО2 инкубаторе при 37°С в течение 72 часов. 2 н. и 2 з.п. ф-лы.

 

Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано в медицине.

Открытие H.pylori в 1982 году явилось отправной точкой в формировании новой концепции этиологии гастродуоденальных заболеваний. В настоящее время общепринятым фактом является роль Н. pylori в патогенезе хронического гастрита. В 1990 году эти бактерии официально включены в международную классификацию как хеликобактерный гастрит или гастрит, ассоциированный с хеликобактериозом, гастрит типа В. С инфицированием H.pylori ассоциировано около 70-80% случаев гастритов, более 70% случаев язвенной болезни желудка, 90% язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, повышен риск развития рака желудка и B-клеточной лимфомы. В научных докладах последних лет активно обсуждается вопрос о связи H.pylori с внежелудочными проявлениями (заболеваниями кишечника, гепатобилиарной системы, поджелудочной железы), а также поражениями сердечно-сосудистой системы, опорно-двигательного аппарата, кожи и т.д.

Для правильной и своевременной постановки диагноза хеликобактериоза разработано множество методов, сгруппированных с использованием нескольких параметров для классификации. В зависимости от цели, материала, техники исполнения их подразделяют на скрининговые и подтверждающие; инвазивные и неинвазивные; прямые и косвенные. Одним из методов лабораторной диагностики H.pylori-инфекции является бактериологическое исследование - выделение, идентификация, изучение биологических свойств возбудителя. Трудоемкость и сложность выделения культуры H.pylori ограничивают применение этого метода в практике практического здравоохранения, но он остается единственным для фенотипического определения чувствительности штаммов к антибактериальным препаратам.

Для культивирования H.pylori предложены различные питательные среды, обязательными компонентами которых являются базовый агар, ростовые добавки, а для селективных - ингибиторы роста сопутствующей микрофлоры. Большинство базовых агаров удовлетворяют требованиям, предъявляемым для культивирования H.pylori, например колумбийский агар, эритрит агар, сердечно-мозговой агар. H.pylori очень прихотливый микроорганизм, требующий дополнительных факторов роста (витаминов, микроэлементов) [1]. Обязательным компонентом среды должна быть добавка 5-10% крови или сыворотки животных (лошади, барана). Использование крови человека ограничено наличием у большинства взрослого населения защитных антител, способных ингибировать рост H.pylori [2]. При этом эритроциты могут быть лизированы, чтобы ростовые вещества могли быть использованы быстрее, что достигается при применении шоколадного агара. Разработана питательная среда, не содержащая сыворотку и ткани животных -SATFM (serum - animal tissue - free medium), которая может быть использована как для выделения чистой культуры (плотная), так и для транспортировки (полужидкая) с разницей в процентном содержании агара [3]. Н.В.Сафоновой и А.Б.Жебруном (1995) предложена среда, приготовленная на основе эритрит-агара, в которую ех tempore вносят кровь, гемин и селективную добавку [4]. М.М.Меджидовым и коллегами (2000) разработан хеликобактер-агар, содержащий селективную добавку, состоящую из антибактериальных и противогрибковых препаратов, и кровь, вносимые ex tempore [5]. А.Б.Жебрун с коллективом авторов (2002) рекомендуют использовать в качестве основы питательной среды колумбийский агар или сердечно-мозговой агар с добавлением 5-7% лошадиной сыворотки или 5-7% дефибринированной лошадиной крови и 1% раствора изовиталекса [6]. Наиболее близким к заявляемому является способ культивирования H.pylori на шоколадном агаре, приготовленном на основе среды Колумбия агар с добавлением 2,5% донорской крови. Затем к охлажденной до 50°С питательной среде авторы предлагают добавлять 2,5% гемолизированной донорской крови. Способ обеспечивает более быстрое культивирование на более дешевой среде, но не лишен ряда недостатков [7]. Недостатком прототипа на взгляд авторов является использование донорской крови, что может снижать частоту высеваемости из-за наличия в донорской крови антител к H.pylori, оказывающих ингибирующее действие. Особенно остро стоит проблема при получении чистой культуры, когда после пересева изолированных колоний для выделения чистой культуры вырастают единичные колонии, и биологического материала оказывается недостаточно для идентификации и постановки антибиотикограммы.

Недостатком способов культивирования на твердых питательных средах является:

- невысокая эффективность высеваемости хеликобактеров при первичной изоляции,

- при дальнейших пересевах для получения чистых культур штаммы теряются, всхожесть ослабевает и утрачивается,

- скудность роста чистых культур приводит к невозможности определения чувствительности выделенного штамма к антибиотикам и химиопрепаратам.

Проблему накопления культуры можно решить с помощью использования жидких сред. Сходный с твердыми средами состав (основы, ростовые и селективные добавки) используется и в жидких средах, хотя процесс культивирования более трудоемок и в практических лабораториях не нашел широкого применения [8]. Предложены различные основы жидких сред: Brucella - бульон, сердечно-мозговой бульон, соевый бульон с ростовыми добавками (сыворотка, дрожжевой экстракт, циклодекстрин и другие) и антимикробными препаратами (ванкомицин, налидиксовая кислота, амфотери[9; 10]. Предложена среда, имеющая постоянный состав витаминов и микроэлементов без добавления сыворотки - serum - free Ham's F-12 [11]. При росте на жидких питательных средах бактерии имеют типичную извитую форму, подвижны и биохимически активны, полноценны в антигенном отношении [12]. H.pylori растет в микроаэрофильной атмосфере, состоящей из 5% О2, 5-10% СО2, 85-90% N2. Различные системы могут быть использованы для создания микроаэрофильных условий. Среди них - микроаэробный бокс или инкубатор, в котором адекватная атмосфера поддерживается автоматически. Такую атмосферу можно создать в микроанаэростате типа GasPac 100 или GasPac 150 Anaerobic Systems фирмы BBL с использованием газогенераторных пакетов типа СатруРас фирмы BBL или Oxoid, которые начинают продуцировать газовые смеси при добавлении воды, которая также создает необходимую для роста H.pylori влажность. Но при культивировании в жидкой среде сложность может представлять создание и поддержание микроаэрофильных условий. Эта задача может быть решена постоянным контролированием микроаэробной атмосферы в пробирках путем перемешивания на специальных платформах под углом 20° со скоростью вращения 120 оборотов в минуту [13] или культивирования во флаконах с отверстиями для доступа газов, для чего разработаны мини-биореакторы для принудительного введения в атмосферу культивирования углекислого газа через трубки, погруженные во флаконы с жидкой питательной средой [14].

Недостатки способов культивирования на жидких питательных средах:

- сложность создания и поддержания микроаэрофильных условий в жидких питательных средах,

- необходимость использования дополнительного оборудования (шейкеров, вращательных платформ, биореакторов и т.д.) для принудительного введения углекислого газа.

Задачей изобретения является разработка способа тонкослойного культивирования Helicobacter pylori с использованием двухфазной питательной среды, доступного для бактериологических лабораторий, не оснащенных специальным оборудованием. Достигаемый технический результат заключается в отсутствии необходимости использования дополнительного оборудования для поддержания микроаэрофильных условий в жидкой фазе среды, использовании стандартных питательных сред (Колумбия агара и бульона Шедлера) и в том, что происходит накопление чистой культуры H.pylori в количестве, достаточном для морфологической, биохимической идентификации и постановки антибиотикограммы.

Некоторые микроорганизмы с трудом удается выращивать на твердых или жидких питательных средах, но они гораздо более активно растут и размножаются в двухфазных питательных средах, состоящих из комбинации твердой и жидкой фаз. Возможным объяснением может быть то, что подобные питательный среды создают условия роста и размножения, приближенные к естественным, когда часть жизненного цикла микроба требует твердой питательной среды, а другие стадии жизненного цикла проходят в жидкой питательной среде. Это, в частности, свойственно эпителиальным патогенам, к которым относится H.pylori, частично размножающимся к клетках слизистых оболочек, а частично - на поверхности слизистой в просвете органа. При этом состав компонентов жидкой и твердой фазы питательной среды определяется особенностями биологии конкретного микроорганизма.

Так, патентом РФ №2272834 (15) защищена питательная двухфазная среда для выделения одноклеточных микроорганизмов - трихомонад. Патентом РФ №2412991(16) защищена двухфазная питательная среда для культивирования криптоспоридий, а патент РФ №2346052 (17) предлагает двухфазную питательную среду для выделения бруцелл.

Авторы заявляемого изобретения предлагают следующий состав питательной среды. Двухфазная питательная среда состоит из двух фаз: твердой и жидкой. Твердая фаза представляет собой шоколадный агар, приготовленный на основе Колумбия агара с 5% крови барана.

Состав Колумбия агара:

Ингредиенты грамм/лит Р
Биопептон 20,00
Триптический перевар говяжьего сердца 3,00
Крахмал кукурузный 1,00
Натрия хлорид 5,00
Агар-агар 15,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,3±0,2

Приготовление:

Размешать 44,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 50°С и асептично внести стерильную дефибринированную кровь барана (5% от общего объема). Агар слегка подогревают на слабом огне, не доводя до кипения. Тщательно перемешать и разлить среду в стерильные чашки Петри по 14 мл. При приготовлении шоколадного агара следует обратить особое внимание на правильный подогрев: правильно приготовленный агар имеет светло-коричневую окраску схожую с цветом молочного шоколада. При слишком слабом подогреве агар будет иметь кирпично-красный цвет, а при сильном - темно-коричневый.

Преимущества используемой твердой фазы

Колумбия агар отличается разнообразием включенных в рецептуру среды источников белкового питания. Комбинация пептонов обеспечивает на ней быстрый и обильный рост очень прихотливых микроорганизмов. В результате приготовления шоколадного агара из эритроцитов экстрагируются гемин, НАД, и ростовые факторы гемофильными и прихотливыми бактериями, в том числе и H.pylori, используются быстрее.

Жидкая фаза представляет собой бульон Шедлера, обогащенный 10% сывороткой крупного рогатого скота.

Состав бульона Шедлера:

Ингредиенты грамм/лит Р
Гидролизат казеина 5,67
Протеозопептон 5,00
Папаиновый перевар соевой муки 1,00
Дрожжевой экстракт 5,00
Глюкоза 5,83
Натрия хлорид 1,67
Калия гидрофосфат 0,83
Трис (гидроксиметиламинометан) 3,00
L-Цистин 0,40
Гемин 0,01
Конечное значение рН (при 25°С) 7,6±0,2

Приготовление:

Размешать 28,41 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить с частым помешиванием для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить и асептично добавить до 10% от общего объема стерильной сыворотки крупного рогатого скота. Перед розливом среду тщательно перемешать. Избегать перегревания среды или ее окисления на свету, так как это приводит к задержке роста бактерий.

Преимущества используемой жидкой фазы:

Данная среда является прекрасной основой, в которую для выделения прихотливых анаэробных, в том числе и капнофильных бактерий, можно добавлять кровь или другие обогатительные добавки. Комбинация гидролизата казеина, протеозопептона, папаинового перевара соевой муки, дрожжевого экстракта и L-цистина обеспечивает присутствие азотистых питательных веществ, витаминов и других факторов, необходимых для роста микроорганизмов. Глюкоза является источником энергии. Гемин и витамин К стимулируют рост прихотливых микроорганизмов.

Авторы предлагают следующий способ тонкослойного культивирования H.pylori на двухфазной питательной среде.

1 этап. Первичный посев исследуемого материла (биоптаты слизистой оболочки желудка) производят на колумбийский агар с добавлением 5% крови барана. Термостатирование в микроаэрофильных условиях (СО2-инкубаторе) при 37°С в течение 3-5 дней при повышенной влажности.

2 этап. Оценка результатов посева. Выявление подозрительных колоний (мелкие, прозрачные диаметром 1-2 мм сходные с «капельками росы»). Пересев отобранной колонии на шоколадный агар для получения чистой культуры. Инкубирование в микроаэрофильных условиях при 37°С в течение 3-5 дней.

3 этап. Накопление чистой культуры. В случае скудного роста единичные колонии рассеивают петлей по поверхности плотной среды и заливают жидкой питательной средой, приготовленной на основе бульона Шедлера, обогащенным 10% сывороткой крупного рогатого скота. Оптимальное количество жидкой среды, наливаемой в чашку Петри диаметром 90 мм, составляет 3,5 мл (соотношение твердой и жидкой фаз 4:1). Инкубирование в микроаэрофильных условиях 37°С в течение 3 дней.

4 этап. Идентификация выделенной культуры, выросшей в жидкой фазе.

Изучение морфологических свойств. Из культуральной жидкости готовят фиксированные мазки, окрашивают по Граму и препарат «раздавленная» или «висячая капля» для определения подвижности.

Изучение биохимических свойств. Постановка тестов на каталазу, оксидазу, уреазу.

Постановка антибиотикограммы.

Таким образом, заявляемый авторами изобретения способ тонкослойного культивирования Helicobacter pylori предполагает использование преимущества жидкой фазы по сравнению с твердой фазой для накопления культуры, а ее тонкослойное распределение поддерживает микроаэрофильные условия в толще жидкости без дополнительного оборудования.

Литература

1. Jiang X., Doyle M.P. Growth supplements for Helicobacter pylori. // J Clin Microbiol. - 2000. - Vol.38. - P.1984-1987.

2. Westblom T.U., Madan E., Riff B.R. Improved growth of Helicobacter pylori using a liquid medium supplemented with human serum. // Ital. J. Gastroenterol. - 1991. - Vol.29(Suppl. 2). - P.48.

3. Dierikx C.M., Martodihardjo J., Kuipers E.J. et al. Serum and animal tissue free medium for transport and growth of Helicobacter pylori. // Immunol. Med. Microbiol. - 2007. - Vol.50. - P.239-243.

4. Сафонова Н.В., Жебрун А.Б. Гастрит, язвенная болезнь и хеликобактериоз. - Реком. для врачей. - Спб. - 1995.

5. Меджидов М.М., Темирханова З.У., Алиева Х.М. и др. Оценка питательной среды для выделения и культивирования Helicobacter pylori. // Журн. микробиол., эпидемиол., иммунол. - 2000. - №2. - С.25-29.

6. Жебрун А.Б., Александрова В.А., Гончарова Л.Б. др. Диагностика, профилактика и лечение заболеваний, ассоциированных с Helicobacter pylori-инфекцией. (Пособие для врачей). Спб., 2002.

7. Червинец В.М., Червинец Л.Ф. Патент на изобретение РФ №2145975 «Способ культивирования Helicobacter pylori». - 2000.

8. Shahamat M., Mai U.E., Paszko-Kolva С. et al. Evaluation of liquid media for growth of Helicobacter pylori. // J. Clin. Microbiol. - 1991. - Vol.29. - P.2835-2837.

9. Morshed M.G., Karita M., Konishi H. et al. Growth medium containing cyclodextrin and low concentration of horse serum for cultivation of Helicobacter pylori. // Microbiol. Immunol. - 1994. - Vol.38(11). - P.897-900.

10. Murano A., Miyake M., Kato J. et al. Enhancement of the growth of Helicobacter pylori in Brucella broth by hydrogen peroxide. // Microbiol. Immunol. - 1999. - 43(11). - P.1009-15.

11. Testerman T.L., McGee D.J., Mobley H.L.T. Helicobacter pylori growth and urease detection in the chemically defined medium Ham's F-12 nutrient mixture. // J. Clin. Microbiol. - 2001. - Vol.39. - P.3842-3850.

12. Lin Y.L., Lee N., Chan E.C. Determination of optimal liquid medium for enzyme expression by Helicobacter pylori. // J. Clin. Pathol. - 1996. - Vol.49. - P.818-820.

13. Xia H.X, English L., Keane C.T. et al. Enhanced cultivation of Helicobacter pylori in liquid media. // J. Clin. Pathol. - 1993. - Vol.46(8). - P.750-753.

14. Secker D.A., Tompkins D.S., Alderson G. Gas-permeable life cell tissue culture flasks give improved growth of Helicobacter pylori in a liquid medium. // J. Clin. Microbiol. - 1991. - Vol.29. - P.1060-1061.

15. Патент РФ №2272834.

16. Патентом РФ №2412991.

17. Патент РФ №2346052.

1. Двухфазная питательная среда для тонкослойного культивирования Helicobacter pylori, содержащая твердую фазу, представленную шоколадным агаром, изготовленным на основе Колумбия агара с 5% крови барана, и жидкую фазу, представляющую собой бульон Шедлера, обогащенный 10% сывороткой крупного рогатого скота, отличающаяся тем, что соотношение твердой фазы к жидкой составляет 4:1 (14 мл агара и 3,5 мл бульона).

2. Двухфазная питательная среда для тонкослойного культивирования Helicobacter pylori по п.1, отличающаяся тем, что Колумбия агар содержит следующие ингредиенты в г/литр:

Ингредиенты грамм/литр
Биопептон 20,00
Триптический перевар говяжьего сердца 3,00
Крахмал кукурузный 1,00
Натрия хлорид 5,00
Агар-агар 15,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,3±0,2

3. Двухфазная питательная среда для тонкослойного культивирования Helicobacter pylori по п.2, отличающаяся тем, что бульон Шедлера содержит следующие ингредиенты в г/литр:

Ингредиенты грамм/литр
Гидролизат казеина 5,67
Протеозопептон 5,00
Папаиновый перевар соевой муки 1,00
Дрожжевой экстракт 5,00
Глюкоза 5,83
Натрия хлорид 1,67
Калия гидрофосфат 0,83
Трис (гидроксиметиламинометан) 3,00
L-Цистин 0,40
Гемин 0,01
Конечное значение рН (при 25°С) 7,6±0,2

4. Способ тонкослойного культивирования Helicobacter pylori с использованием двухфазной питательной среды по п.1, предусматривающий первичный посев исследуемого материала на Колумбия агар с добавлением 5% крови барана, термостатирование в микроаэрофильных условиях в СО2 инкубаторе при 37°С в течение 3-5 дней при повышенной влажности, пересев отобранных колоний чашки Петри с шоколадным агаром, последующее термостатирование в микроаэрофильных условиях в СО2 инкубаторе при 37°С в течение 3-5 дней при повышенной влажности, отличающийся тем, что после термостатирования чашки Петри с шоколадным агаром заливают сверху жидкой питательной средой на основе бульона Шедлера, обогащенного 10% сывороткой крупного рогатого скота согласно п.1 и окончательно термостатируют их в СО2 инкубаторе при 37°С в течение 72 часов.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области микробиологии и касается тест-системы для дифференциации видов и биотипов бактерий рода Yersinia. Охарактеризованное изобретение состоит из набора питательных сред, содержащих субстраты и реактивы для определения наличия у микроорганизма лизиндекарбоксилазы, орнитиндекарбоксилазы, триптофандезаминазы, уреазы, продукции ацетоина, продукции индола, ферментации мелибиозы, ферментации рамнозы, ферментации сахарозы, ферментации сорбита, липазы, ферментации ксилозы, ферментации мальтозы, ферментации α-метил-D-глюкопиранозид, ферментации салицина, ферментации сорбозы и ферментации раффинозы.

Группа изобретения относится к области биотехнологии. Штамм Bifidobacterium breve MCC 1274 FERM BP-11175 проявляет низкий коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту.
Изобретение относится к биотехнологии, микробиологии и может быть использовано на этапе накопления биомассы штамма продуцента при производстве живой туляремийной вакцины.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к санитарной микробиологии. Предложена питательная среда для выделения бактерий рода Shigella из водных объектов.

Способ предусматривает культивирование при 37±1оС штаммов лактобацилл и бифидобактерий на среде и расфасовку жидкого препарата с учетом необходимой для пациентов суточной дозы.

Изобретение относится к применению пробиотического бактериального штамма для производства пробиотической композиции для снижения нарушений сна и/или улучшения качества сна у людей и животных.
Изобретение относится к биотехнологии. Штамм гриба Stagonospora cirsii Davis ВИЗР 1.42 обладает гербицидной активностью в отношении бодяка полевого и близкородственных ему видов - S.

Изобретение относится к вариантам средства для снижения неприятного запаха изо рта, вариантам композиций на основе указанных средств и вариантам применения указанных средств.
Изобретение относится к биотехнологии и может применяться в молочной промышленности. Пастеризованное молоко охлаждают до заданной температуры и добавляют MnSO4, ZnSO4, KJ, CuSO4, FeSO4 и селексен в заданном соотношении с последующим внесением бифидобактерий.
Настоящее изобретение относится к области микробиологии и касается способа получения RTX-токсина ApxI. Представленный способ осуществляют путем культивирования бактерий Actinobacillus pleuropneumoniae в культуральной среде, которая обеспечивает рост бактерий, причем указанная культуральная среда содержит бороглюконат в концентрации менее 60 ммоль/л для образования в среде комплекса кальций-бороглюконат.

Изобретение относится к микробиологии. Штамм Rhodococcus sp. депонирован в ВКМ под регистрационным номером Ас-2046 Д. Штамм проявляет высокую деструкционную активность в отношении нефтяных углеводородов, входящих в состав нефтешламов, а также в отношении нефти и мазута. Утилизация сырой нефти на 7 сутки культивирования составляет 100%. 1 ил., 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Инкубируют проверяемый вид микроорганизмов рода Salmonella, взятый в конечной концентрации около 1000 клеток/мл, с исследуемым антибактериальным препаратом в известной, ранее установленной для каждого антибактериального препарата концентрации, оптимальной для воздействия на заданный вид микроорганизмов. Инкубирование проводят при температуре 37°C в течение 24-х часов. К образцам добавляют специфичные к проверяемым видам живых микроорганизмов аптамеры, меченные флуоресцентной меткой, в конечной концентрации 100 нМ. Вторично инкубируют в течение 20 минут. Образец исследуют с помощью проточной цитометрии. По графикам, построенным с помощью проточного цитометра с использованием программы, позволяющей выводить в процентном соотношении значения, определяют уровень флуоресценции аптамеров. Определяют долю связавшихся или не связавшихся бактерий с аптамерами, меченными флуоресцентной меткой. Определяют количество в образце живых или неживых микроорганизмов. Способ позволяет с высокой степенью точности определить чувствительность микроорганизмов к антибактериальным препаратам. 2 ил., 1 пр.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при мониторинговых эколого-микробиологических исследованиях контроля качества морской воды для определения численности нефтеокисляющих микроорганизмов. Способ предусматривает приготовление минеральной среды - основы, содержащей NH4NO3, K2HPO4, KH2PO4, MgSO4, CaCl2, FeCl2 - концентрированный раствор, агар и дистиллированную воду в заданном соотношении с последующим добавлением нефтепродукта в заданном количестве, в качестве которого используют флотский мазут. Посев на поверхность питательной среды морской воды и инкубирование посева в течение 3-4 суток позволяет выявить колонии нефтеокисляющих бактерий. Изобретение позволяет повысить точность способа при выявлении нефтеуглеводородокисляющих бактерий при проведении экологических мониторинговых исследований. 2 табл., 3 ил., 5 пр.

Изобретение относится к препарату для младенцев для снижения или предупреждения воспаления у младенца. Препарат для младенцев включает источник белка, обеспечивающий от 1 до 5 г белка на 100 ккал препарата, источник жира или липидов, обеспечивающий от 3 до 7 г жира или липидов на 100 ккал препарата, источник углеводов, обеспечивающий от 8 до 12 г углеводов на 100 ккал препарата, источник длинноцепочечных полиненасыщенных жирных кислот, включающий докозагексановую кислоту. Также препарат включает от 1×104 КОЕ до 1×1010 КОЕ Bifidobacterium longum AH1206 NCIMB 41382 на грамм препарата. Предложены также пробиотическая смесь для детей и способ снижения или предупреждения воспаления у младенца или ребенка с использованием данной смеси. Изобретение обеспечивает индукцию противовоспалительного ответа, позволяет снижать секрецию провоспалительных цитокинов. 3 н. и 11 з.п. ф-лы, 19 ил., 2 табл., 7 пр.

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Предложен штамм бактерий Aeromonas bestiarum - продуцент щелочной рибонуклеазы, обладающий противовирусной активностью и депонированный в коллекции бактерий, бактериофагов и грибов Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» под регистрационным номером B-1270. Штамм обладает высокой продукцией щелочной рибонуклеазы - 921,8 Е/мл и активностью против вирусов гриппа птиц A/H5N1 и человека А/Аichi/2/68 (H3N2). 2 ил., 7 табл., 8 пр.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к микробиологическим средствам борьбы с вредными мышевидными грызунами. Штамм бактерий Salmonella enteritidis var. Issatschenko 32/3, депонированный в Ведомственной коллекции полезных микроорганизмов сельскохозяйственного назначения ГНУ ВНИИСХМ Россельхозакадемии под регистрационным номером RCAM 00149, обладает выраженными патогенными свойствами против мышевидных грызунов.Эффективность биоприманки, полученной на основе штамма бактерий Salmonella enteritidis var. Issatschenko 32/3 и зерна, в зерно-овощехранилищах и теплицах составила по отношению к серой крысе и мыши домовой более 90%. 1 табл.
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано при производстве медико-биологических препаратов. Фармацевтическая композиция содержит бактериофаги, полученные путем культивирования на питательной среде, содержащей глюкозу, натрий хлористый, натрий двузамещенный фосфорнокислый, дрожжевой автолизат жидкий и очищенную воду в заданном соотношении, и высушенные с наполнителем без лиофилизации, в виде таблеток с желудочно-резистентным покрытием. Изобретение позволяет повысить безопасность фармацевтической композиции. 7 пр.
Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен штамм бактерий Rhodococcus aetherivorans ВКМ Ac-2610D. Штамм бактерий отличается ростом на простой органоминеральной среде при высокой нитрилгидратазной активности, достигающей 332 ед/мг при 20°С или 521 ед/мг при 25°С. Нитрилгидратаза штамма бактерий Rhodococcus aetherivorans ВКМ Ac-2610D термостабильна. Также предложен способ культивирования данного штамма. Клетки штамма засевают на скошенный мясопептонный агар и выращивают течение 24-48 ч. Затем биомассу смывают стерильным физиологическим раствором с рН 7.0-7.4. Полученной суспензией засевают первую емкость с питательной средой. Процесс ведут в течение 24-48 ч при 28-30°С, круговом перемешивании со скоростью 140-160 об/мин до достижения величин оптической плотности суспензии 2-16 единиц при 540 нм и величине оптического слоя 5 мм. Полученной суспензией засевают вторую емкость, объем которой в 10-100 раз больше первой емкости. Величину оптической плотности во второй емкости доводят до 0,1-0,3. Культивируют штамм в течение 48-120 ч при 26-31°С, аэрации 0,5-1,0 объем воздуха/объем среды в минуту до достижения величин оптической плотности 36-40 и рН 7,5-7,8. Отделяют полученную биомассу. Также предложен способ получения акриламида. Осуществляют гидратацию акрилонитрила при концентрации акрилонитрила, не превышающей 0,5%. Гидратацию проводят с использованием биомассы штамма бактерий Rhodococcus aetherivorans ВКМ Ac-2610D из расчета порядка 400-500 г по сухой массе штамма на 1 тонну конечного продукта - акриламида с концентрацией 45-49%. Изобретения позволяют получить урожай клеток Rhodococcus aetherivorans ВКМ Ac-2610D 10-18 г/л с активностью фермента нитрилгидратазы 250-332 ед/мг. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 6 пр., 1 табл.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Штамм Bifidobacterium lactis CNCM I-3446 применяют в производстве пробиотической композиции для стимуляции развития начальной бифидогенной кишечной микробиоты у детей, рожденных путем кесарева сечения. Штамм может быть использован в производстве пробиотической композиции для снижения риска последующего развития аллергии, а также для предупреждения или лечения диареи у таких детей. Группа изобретений обеспечивает стимулирование колонизации кишечника детей, рожденных путем кесарева сечения, не только указанным штаммом, но и другими видами. 6 н. и 72 з.п. ф-лы, 6 ил., 4 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и биотехнологии. Штамм Moraxella bovoculi обладает антигенными, вирулентными свойствами и иммуногенной активностью. Депонирован под номером «СХ-Ч6 №-ДЕП» во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве ФГБУ «ВГНКИ». Штамм может найти применение для изготовления диагностикумов и вакцин против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота. Изобретение позволяет изготовлять диагностикумы и вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота. 1 табл., 3 пр.
Наверх