Штамм бактерий, moraxella bovoculi "сх-ч6 n-деп" используемый для изготовления диагностикумов и вакцин против инфекционного кератоконъюктивита крупного рогатого скота


 


Владельцы патента RU 2521651:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") (RU)

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и биотехнологии. Штамм Moraxella bovoculi обладает антигенными, вирулентными свойствами и иммуногенной активностью. Депонирован под номером «СХ-Ч6 №-ДЕП» во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве ФГБУ «ВГНКИ». Штамм может найти применение для изготовления диагностикумов и вакцин против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота. Изобретение позволяет изготовлять диагностикумы и вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота. 1 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и биотехнологии и касается выделения, идентификации и селекции штамма Moraxella bovoculi «СХ-Ч6 №-ДЕП» - возбудителя инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота (ИКК), впервые полученного в РФ, который может быть использован для изготовления диагностикумов и вакцин против этой болезни.

Инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота (ИКК) -острое контагиозное заболевание, характеризующееся слезотечением, светобоязнью, помутнением и изъязвлением роговицы, деформацией глазного яблока в виде кератоглобуса или кератоконуса, частичной или полной потерей зрения пораженного глаза животного. Из литературных источников известно, что заболевание вызывается гемолитическими штаммами бактерий Moraxella bovis (Гаффаров Х.З., Валебная Л.В., Спиридонов Г.Н. Инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота в регионе Среднего Поволжья и Предуралья / Мат. международ. науч.-практ.конф.: Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях. - Воронеж. - 2002. - С.188-191; Карайченцев В.Н., Дунаев Г.В., Русинов А.Ф., Бабенко О.В. Изоляция Moraxella bovis от молодняка крупного рогатого скота при инфекционном кератоконъюнктивите / Ветеринария. - 1992. - №2. - С.26-27; Русинов А.Ф. Инфекционный кератоконъюнктивит у крупного рогатого скота / Информ. бюлл. Укр. акад. аграр. наук. Ин-т эксперим. клинич. вет.медицины, 1995; Arora А.К. Studies on Moraxella bovis isolated from cattle affected with or convalescing from infectious bovine keratoconjunctivitis / Vet. Arhiv. - 1989. - V. 50. - №1. - P. 17-23).

В последние годы установлено, что инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота может быть вызван другими представителями рода Moraxella, в частности бактериями Moraxella bovoculi (Angelos J.A., Spinks P.Q., Ball L.M., George L.W. Moraxella bovoculi sp.nov., isolated from calves with infectious bovine keratoconjunctivitis // Int J Syst Evol Microbiol - 2007 Apr;57 (Pt 4):789-95; Galvao K.N., Angelos J.A., Ulcerative blepharitis and conjunctivitis in adult dairy cows and association with Moraxella bovoculi // Can Vet J.- 2010 Apr;51(4):400-2; Angelos J.A., Lane V.M., Ball L.M., Hess J.F. Recombinant Moraxella bovoculi cytotoxin-ISCOM matrix adjuvanted vaccine to prevent naturally occurring infectious bovine keratoconjunctivitis. / Vet Res Commun. 2010 Mar; 34 (3); Angelos J. A., Ball L.M. Differentiation of Moraxella bovoculi sp.nov. from other coccoid moraxellae by the use of polymerase chain reaction and restriction endonuclease analysis of amplified DNA // J Vet Diagn Invest - 2007 Sep;19 (5):532-(4).

Инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота, вызванный бактериями Moraxella bovoculi, мы наблюдали в 4-х хозяйствах Республики Татарстан (в совхоз-техникуме Чистопольского района; ООО «Девятовское», ООО «Хаерби» Лаишевского района и СХГПС «Енали» Апастовского района).

Целью изобретения является выделение, идентификация и получение штамма «СХ-Ч6 №-ДЕП» бактерии Moraxella bovoculi - одного из возбудителей инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота, выделенного впервые и до настоящего времени не известного в РФ, циркулирующего у крупного рогатого скота и вызывающего инфекционный кератоконъюнктивит.

Штамм «СХ-Ч6 №-ДЕП» бактерии Moraxella bovoculi выделен из конъюнктивального мешка глаза больного с признаками острого кератоконъюнктивита теленка 7-месячного возраста, принадлежащего совхоз-техникуму Чистопольского района Республики Татарстан, путем посева на кровяной мясопептонный агар. Штамм «СХ-Ч6 №-ДЕП» депонирован в ФГБУ «ВГНКИ».

Дата депонирования: 20 марта 2013 г.

Регистрационный номер: штамм Moraxella bovoculi «СХ-Ч6 №-ДЕП» инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (Россия, 123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5, ФГБУ «ВГНКИ»).

Штамм «СХ-Ч6 №-ДЕП» Moraxella bovoculi характеризуется следующими свойствами:

Морфологические признаки. Штамм представляет собой грамотрицательные диплококки с редко встречающимися кокками: диаметр клеток составляет 0,7-1,3 мкм, смежные стороны клеток утолщены, спор не образует.

Культуральные свойства. На кровяном мясопептонном агаре при рН от 7,2 до 7,6 штамм формирует колонии белого цвета диаметром <1 мм, круглые, выпуклые, с ровными краями, влажной поверхностью, имеют зону 3-гемолиза вокруг или под (когда отбирают колонии) каждой колонией. На триптозо-соевом бульоне через 48-72 ч инкубации при 37°С наблюдается скудный рост, который по мере инкубации становится слегка мутноватым, образуется осадок, который при взбалтывании разрушается на грубые частицы. Штамм стойко сохраняет S-форму и не диссоциирует при многократных пересевах на питательных средах.

При определении ферментативных и протеолитических свойств установлено, что штамм не ферментирует сахаров (сахароза, глюкоза, манит, лактоза, сорбит), не образует индол; не разжижает желатину; дает положительную реакцию на оксидазу и отрицательную на пробу с лакмусовым молоком.

Антигенные свойства. Штамм характеризуется полным набором антигенов, типичных для Moraxella. Штамм активно образует эндотоксин, переходящий в анатоксин под действием тепла и формалина. Продуцируемый токсин обладает гемолитическим и некротическим действиями.

Вирулентные свойства. ЛД50 штамма бактерий «СХ-Ч6 №-ДЕП» для белых мышей составляет 5,0×108 микробных клеток/см3. Телята 1-2 - месячного возраста в полевых условиях сравнительно легко заражаются путем введения в конъюнктивальный мешок 24-часовой культуры в дозе 1,0 см3, содержащей не менее 1,0×109 микробных клеток, при наличии естественного или искусственного ультрафиолетового их облучения.

Иммуногенная активность. Инактивированная формалином культура штамма «СХ-Ч6 №-ДЕП» Moraxella bovoculi при подкожном введении индуцирует у телят 2-4-месячного возраста образование специфических антител к бактериям Moraxella bovoculi в сыворотке крови в титрах 1:1280 -1:5120, а также формирование специфического иммунитета.

Хранение штамма. Полученный штамм выращивают при 37°С на мясопептонном кровяном агаре в течение 24 ч, смывают стерильным физиологическим раствором. Суспензию Moraxella bovoculi в концентрации 50 млрд микробных клеток в 1 см3 смешивают защитной средой (5% сахарозы, 1,5% желатины) в соотношении 1:1, расфасовывают в ампулы по 1 см3, высушивают методом сублимации, запаивают ампулы под вакуумом и хранят при 2-4°C.

Пример 1. Штамм «СХ-Ч6 №-ДЕП» Moraxella bovoculi используют для идентификации культур, выделяемых от больных животных с признаками кератоконъюнктивита, в реакции преципитации в агаровом геле (РДП).

Гипериммунную сыворотку к бактериям Moraxella bovoculi получают на кроликах с живой массой 3,0-3,5 кг путем 4-кратного подкожного введения инактивированной культуры штамма «СХ-Ч6 №-ДЕП» Moraxella bovoculi с интервалом 7 дней. Инактивация штамма достигается путем выдерживания суспензии культуры в водяной бане при температуре 56°C в течение одного часа. Антиген для РДП изготовляют из штамма «СХ-Ч6 №-ДЕП» Moraxella bovoculi, выращенного на кровяном мясопептонном агаре при температуре 37°C в течение 24 ч. Снимают выращенные колонии, переносят в холодную дистиллированную воду и ресуспендируют. Концентрация бактерий должна быть в пределах от 6,0×107 до 7,5×108. Полученную суспензию трехкратно замораживают при 60°C и оттаивают при 25°C, центрифугируют для осаждения грубых частиц и надосадочную жидкость используют в качестве антигена в РДП. Реакцию ставят по общепринятой методике. Для идентификации антигена в центральную лунку заливают специфическую сыворотку, а в периферические - испытуемые антигены и антиген, приготовленный из штамма «СХ-Ч6 №-ДЕП» бактерии Moraxella bovoculi.

Пример 2. Штамм «СХ-Ч6 №-ДЕП» бактерий Moraxella bovoculi используется для изготовления антигена, предназначенного для определения специфических антител к бактериям Moraxella bovoculi, - методом иммуноферментного анализа (ИФА). С этой целью растворимый антиген получают путем озвучивания суточной культуры бактерий Moraxella bovoculi на ультразвуковом дезинтеграторе. После дезинтеграции суспензию Moraxella bovoculi центрифугируют при 6 тыс.об/мин. Надосадочную жидкость отсасывают в пробирку и туда добавляют трихлоруксусную кислоту (ТХУ) до конечной концентрации 5%. Смесь центрифугируют, надосадочную жидкость отбрасывают, осадок дважды промывают в 5%-ном растворе ТХУ, затем осадок ресуспендируют в дистиллированной воде и диализируют против водопроводной воды в течение 18 ч, затем лиофилизируют.

Гипериммунную сыворотку получают на телятах 6 - 7-месячного возраста путем 4-кратного подкожного введения инактивированной культуры Moraxella bovoculi с интервалом 7 дней в нарастающих дозах. Постановка ИФА осуществляется по общепринятой методике. При этом в качестве конъюгата используются антитела диагностические против иммуноглобулинов быка, меченные пероксидазой. Учет реакции проводят по показаниям оптической плотности субстратно-индикаторной смеси на спектрофотометре при длине волны 492 нм. Реакцию считают положительной, если оптическая плотность субстратно-индикаторной смеси в лунках, в которых предварительно инкубировали положительную специфическую сыворотку и исследуемые сыворотки, в 2 и более раза превышает оптическую плотность в лунках, в которых предварительно инкубировали отрицательную (контрольную) сыворотку.

Сравнительные данные исследований сывороток крови телят методом ИФА представлены в таблице. Из таблицы видно, что штамм «СХ-Ч6 №-ДЕП» Moraxella bovoculi пригоден для изготовления диагностических препаратов методом ИФА. У больных кератоконъюнктивитом телят выявляются титры антител к Moraxella bovoculi в ИФА в титрах 1:1280 -1:5120.

Пример 3. Штамм «СХ-Ч6 №-ДЕП» бактерии Moraxella bovoculi используется при изготовлении инактивированной вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита. С этой целью штамм выращивают на кровяном мясопептонном агаре в течение 24 ч, выросшие колонии смывают физиологическим раствором, устанавливают концентрацию бактерий 10 млрд м.к. в 1 см3, инактивируют суспензию путем добавления формалина до 0,5%-ной конечной концентрации. Затем к инактивированной суспензии бактерий добавляют гель гидроокиси алюминия до 0,6%-ной концентрации. Вакцину расфасовывают по 100 см3 в стерильные флаконы. Вакцина, изготовленная из штамма «СХ-Ч6 №-ДЕП» Moraxella bovoculi, при двукратном подкожном введении с интервалом 14 дней в дозе 5 см3 индуцирует у телят образование специфических антител в сыворотке крови к Moraxella bovoculi в титрах 1:1280 - 1:2560 в ИФА и формирование напряженного иммунитета продолжительностью до 12 месяцев.

Таким образом, результаты исследований показали, что штамм «СХ-Ч6 №-ДЕП» Moraxella bovoculi можно использовать при изготовлении набора препаратов для диагностики инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота методом ИФА (специфический антиген и гипериммунная сыворотка), а также в качестве вакцинного штамма при изготовлении вакцины против этой болезни.

Таблица
№№ Титр Кэффиц.
проб Состояние теленка антител чувствительности
1 больной кератоконъюнктивитом 1:2560 2,43
2 больной кератоконъюнктивитом 1:1280 2,58
3 больной кератоконъюнктивитом 1: 1280 2,48
4 больной кератоконъюнктивитом 1:5120 2,25
5 больной кератоконъюнктивитом 1:2560 2,21
6 здоровый - -
7 здоровый - -
8 здоровый - -
9 здоровый - -
10 здоровый - -

Штамм бактерий Moraxella bovoculi «СХ-Ч6 №-ДЕП», используемый для изготовления диагностикумов и вакцин против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота, депонированный во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве ФГБУ «ВГНКИ».



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Штамм Bifidobacterium lactis CNCM I-3446 применяют в производстве пробиотической композиции для стимуляции развития начальной бифидогенной кишечной микробиоты у детей, рожденных путем кесарева сечения.
Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен штамм бактерий Rhodococcus aetherivorans ВКМ Ac-2610D.
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано при производстве медико-биологических препаратов. Фармацевтическая композиция содержит бактериофаги, полученные путем культивирования на питательной среде, содержащей глюкозу, натрий хлористый, натрий двузамещенный фосфорнокислый, дрожжевой автолизат жидкий и очищенную воду в заданном соотношении, и высушенные с наполнителем без лиофилизации, в виде таблеток с желудочно-резистентным покрытием.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к микробиологическим средствам борьбы с вредными мышевидными грызунами. Штамм бактерий Salmonella enteritidis var.

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Предложен штамм бактерий Aeromonas bestiarum - продуцент щелочной рибонуклеазы, обладающий противовирусной активностью и депонированный в коллекции бактерий, бактериофагов и грибов Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» под регистрационным номером B-1270.

Изобретение относится к препарату для младенцев для снижения или предупреждения воспаления у младенца. Препарат для младенцев включает источник белка, обеспечивающий от 1 до 5 г белка на 100 ккал препарата, источник жира или липидов, обеспечивающий от 3 до 7 г жира или липидов на 100 ккал препарата, источник углеводов, обеспечивающий от 8 до 12 г углеводов на 100 ккал препарата, источник длинноцепочечных полиненасыщенных жирных кислот, включающий докозагексановую кислоту.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при мониторинговых эколого-микробиологических исследованиях контроля качества морской воды для определения численности нефтеокисляющих микроорганизмов.

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Инкубируют проверяемый вид микроорганизмов рода Salmonella, взятый в конечной концентрации около 1000 клеток/мл, с исследуемым антибактериальным препаратом в известной, ранее установленной для каждого антибактериального препарата концентрации, оптимальной для воздействия на заданный вид микроорганизмов.

Изобретение относится к микробиологии. Штамм Rhodococcus sp.
Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано в медицине. Способ предусматривает предварительный посев исследуемого материала на Колумбия агар с добавлением 5% крови барана.

Группа изобретений относится к области медицины и ветеринарии. Применение RPE (экстракт рибосомного белка) совместно с Th1-активирующим адъювантом для получения лекарственного средства для лечения или профилактики паразитарного заболевания обеспечивает перекрестный иммунитет от различных видов Leishmania.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и касается лечения вирусных заболеваний. Для этого вводят лекарственное средство, содержащее в качестве действующих компонентов активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека и активированную-потенцированную форму антител к CD4 рецептору.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения средства, стимулирующего антигеннезависимую дифференцировку B-лимфоцитов, из сырья животного происхождения.

Группа изобретений раскрывает фармацевтическую композицию и набор, включающие антитела анти-CD20 типа II и ингибитор протеасомы, предназначенные для применения в лечении рака, экспрессирующего CD20.

Изобретение относится к иммунологии, медицине и биотехнологии. Предложен способ стимуляции специфического противоопухолевого иммунного ответа против клеток рака молочной железы с помощью дендритных клеток, трансфецированных полиэпитопной ДНК-конструкцией.

Изобретение относится к области биотехнологии. Способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у животных, которые имеют антитела к PCV2, предусматривает однократное введение эффективного количества антигена PCV2 животным, нуждающимся в таком лечении или профилактическом лечении.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и касается профилактики и лечения инфекционных вирусных заболеваний. Для этого вводят комплексное лекарственное средство, содержащее смесь нескольких компонентов в виде активированных-потенцированных форм антител к растворенному антигену и антигену, связанному с наружной мембраной клеток иммунной системы.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к неврологии, и касается лечения синдрома дефицита внимания. Для этого вводят фармацевтическую композицию, содержащую активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 и в качестве дополнительного - усиливающего компонента активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

Изобретение раскрывает иммуноиндуцирующее средство, включающее в качестве эффективного(ых) ингредиента(ов) по меньшей мере один полипептид, выбранный из следующих полипептидов, где полипептид(ы) обладает(ют) иммуноиндуцирующей активностью/активностями, или в качестве эффективного(ых) ингредиента(ов) рекомбинантный(ые) вектор(а), который(ые) включает(ют) полинуклеотид(ы), кодирующий(ие) полипептид(ы), и способен(ны) к экспрессии полипептида(ов) in vivo, может использоваться для лечения и/или профилактики злокачественной опухоли: (a) полипептид, состоящий по существу не менее чем из 7 последовательных аминокислот в любой из аминокислотных последовательностей с нечетными номерами SEQ ID NO: 3-95, приведенными в списке последовательностей; (b) полипептид, обладающий не менее чем 90% идентичностью последовательности с указанным полипептидом (а) и состоящий по существу не менее чем из 7 аминокислот; и (с) полипептид, включающий указанный полипептид (a) или (b) в качестве своей частичной последовательности.

Предложено: применение средства, увеличивающего всасывание, содержащего сложный эфир жирной гидроксикислоты и полиэтиленгликоля 660 (в частности, Solutol® HS15) в составе фармацевтической композиции в качестве средства для увеличения всасывания терапевтического средства через слизистую оболочку, где терапевтическое средство имеет значение log Р менее чем приблизительно 1 и (a) представляет собой пептид, белок, нуклеиновую кислоту, антиген или вакцину; и/или (b) не является субстратом для Р-гликопротеина (P-Gp).

Изобретение относится к медицине и касается применения антитела, которое связывается с остатками 1-5 или 3-7 А-бета, для уменьшения сосудистого амилоида у пациента, имеющего церебральную амилоидную ангиопатию, причем антитело вводят внутривенно или подкожно. Изобретение обеспечивает очищение сосудов пациента от отложений амилоида. 8 з.п. ф-лы, 2 пр., 6 ил.
Наверх