Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения нокардиоформных актиномицетов

Изобретение относится к санитарной микробиологии и может быть использовано при лабораторных исследованиях. Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения нокардиоформных актиномицетов предусматривает измельчение патологического материала с последующим смешиванием с дезинфекционным средством "Септустин" в концентрации 0,1% в объемном соотношении 1:2 в течение 180 минут при комнатной температуре с последующей двукратной в течение 15 минут отмывкой стерильным физиологическим раствором. 4 табл., 5 пр.

 

Изобретение относится к бактериологическим исследованиям, касается способа обработки патологического материала и может быть использовано для выделения нокардиоформных актиномицетов. Способ основан на предпосевной обработке патологического материала и посеве на питательные среды.

По современной классификации микроорганизмов в группе 22 (нокардиоформные актиномицеты) определены роды Nocardia и Rhodococcus [1].

Роды Nocardia и Rhodococcus (нокардиоформные актиномицеты), также как роды Corynebacteriwn и Mycobacterium, имеют клеточные стенки IV типа, содержащие в составе клеточной стенки миколовые кислоты, общие антигены, обладают кислотоустойчивостью в различной степени и другими общими признаками. Близкий состав и структура химических компонентов обусловливает не менее близкие биологические свойства. Исследованиями по гибридизации ДНК-РНК установлено близкое генетическое родство быстрорастущих микобактерий, нокардий и родококков, а коэффициент SAB M.phlei и R. spp. настолько высок (0,72), что их характеризуют как отдаленно родственные виды.

Результативность бактериологического исследования во многом зависит от предварительной обработки патологического материала.

В практике микробиологических лабораторий в настоящее время для предпосевной обработки патологического материала для выявления микобактерий используют растворы серной (А.Ф. Коржинская, 1926; К.К. Креслинг, 1929; А.Н. Маккавейская, 1956, метод А.П. Аликаевой, 1971), соляной (Ю.А. Юденич, 1928), щавелевой кислот (метод Гона, Левенштейна-Сумиоши), едкого натра (метод флотации О.В. Мартова, 1971), гипохлорита кальция и других растворов [2, 3]. К недостаткам перечисленных способов следует отнести губительное действие кислот и щелочей на нокардиоформные актиномицеты, коринебактерии и слабокислотоустойчивые микобактерии.

Цель изобретения - способ обработки патологического материала для выделения нокардиоформных актиномицетов (нокардий и родококков).

Поставленная цель достигается предпосевной обработкой патологического материала дезинфекционным средством «Септустин».

Дезинфекционное средство «Септустин» (изготовитель ООО «Уралстинол БИО», Россия) рекомендовано для дезинфекции объектов ветеринарного надзора. Данный препарат из группы катионных ПАВ содержит в качестве дезинфицирующего вещества катамин АБ, а также спирт изопропиловый, неионогенное ПАВ, гидрокарбонат натрия и бромфеноловый синий [4], обладает широким спектром действия в отношении возбудителей инфекционных болезней бактериальной (включая туберкулез), вирусной и грибковой этиологии.

Сущность способа заключается в предпосевной обработке патологического материала водным раствором дезинфекционного средства "Септустин" в концентрации 0,1% смешиванием в объемном соотношении 1:2 в течение 180 минут при комнатной температуре с последующей двукратной в течение 15 минут отмывкой стерильным физиологическим раствором.

Пример 1. Воздействие дезинфекционного средства «Септустин» в зависимости от концентрации и экспозиции определяли на культурах микроорганизмов, полученных из ГИСК им. Л.А. Тарасевича и выделенных из патологического материала (Rhodococcus equi №12). Результаты представлены в таблице 1.

Как видно из таблицы 1, 0,1% водный раствор дезинфекционного средства «Септустин» при экспозиции 15 минут оказывал бактерицидное действие на все микроорганизмы, при увеличении экспозиции до 30 минут - на E.coli и Staph. aureus, а при увеличении концентрации до 0,25% и при экспозиции 30 минут - на Rhodococcus equi. Бактерицидное действие дезинфекционного средства «Септустин» на все нокардиоформные актиномицеты отмечено при концентрации 0,25% и экспозиции 60 минут.

Пример 2. Биоматериал (печень, селезенка, легкие, почки, сердце) от белых мышей, зараженных культурой R. equi, измельчали в стерильной ступке стерильными ножницами, кусочки заливали раствором дезинфекционного средства «Септустин» 0,1, и 0,25% концентрации в объемном соотношении 1:2 и оставляли на 15, 30, 60, 120 и 180 минут при комнатной температуре. Затем сливали надосадочную жидкость и промывали стерильным физиологическим раствором дважды в течение 15 минут, хорошо перемешивали и сливали, а кусочки растирали песком стерильным пестиком. Полученную суспензию засевали на питательную среду Левенштейна-Иенсена, посевы инкубировали 15 дней при +37°С. Учет результатов проводили ежедневно. Результаты представлены в таблице 2.

Пример 3. Провели культуральное исследование патологического материала (кусочки органов с характерными для туберкулеза изменениями) от коров с положительной реакцией на ППД-туберкулин для млекопитающих из хозяйства, благополучного по туберкулезу. Патологический материал измельчали в стерильной ступке стерильными ножницами, кусочки заливали раствором дезинфекционного средства «Септустин» 0,1% концентрации в объемном соотношении 1:2 и оставляли на 180 минут при комнатной температуре. Затем сливали надосадочную жидкость и промывали стерильным физиологическим раствором дважды в течение 15 минут, хорошо перемешивали и сливали, а кусочки растирали песком стерильным пестиком. Из полученной суспензии производили посевы на питательную среду Левенштейна-Йенсена и помещали в термостат. На вторые сутки выращивания при температуре +37°С отмечали рост в виде крупных слизистых без поверхностного мицелия беловато-желтых колоний. В мазках при окраске по Цилю-Нильсену выявили некислотоустойчивые микроорганизмы, клетки полиморфные - палочки и кокки, которые идентифицировали методом газожидкостной хроматографии (выраженный пик туберкулостеариновой кислоты, низкомолекулярные эфиры жирных кислот с числом углеродных атомов от 12 до 20 и отсутствие высокомолекулярных миколовых кислот) как родококки.

Пример 4. Провели культуральное исследование патологического материала (лимфатические узлы, печени, легкие) от морских свинок, зараженных Nocardia asteroides. Патологический материал измельчали в стерильной ступке стерильными ножницами, кусочки заливали раствором дезинфекционного средства «Септустин» 0,1, 0,25 и 0,5% концентрации в объемном соотношении 1:2 и оставляли на 30, 60, 120 и 180 минут при комнатной температуре. Затем сливали надосадочную жидкость и промывали стерильным физиологическим раствором дважды в течение 15 минут, хорошо перемешивали и сливали, а кусочки растирали песком стерильным пестиком. Полученную суспензию засевали на питательную среду Левенштейна-Йенсена и инкубировали при +37°С. Учет результатов проводили ежедневно. Первичный рост отмечали через 3-4 дня. Результаты представлены в таблице 3.

Пример 5. Провели культуральное исследование биоматериала (брыжеечные, заглоточные, подчелюстные, лимфатические узлы, печени, легкие) от пяти коров с положительной реакцией на ППД-туберкулин для млекопитающих способом в соответствии с изобретением. При просматривании посевов учитывали выделение культур и чистоту посевов. В качестве контроля выбран метод А.П. Аликаевой. Результаты представлены в таблице 4.

Как видно из таблицы 4, оптимальные показатели (выявляемость нокардиоформных актиномицетов, % пророста) отмечались при предпосевной обработке патологического материала водным раствором дезинфекционного средства «Септустин» 0,1% концентрации с экспозицией 180 минут. При увеличении концентрации и экспозиции нокардиоформные актимециты не выявлялись. При предпосевной обработке по А.П. Аликаевой (1971) нокардиоформные актиномицеты не выявлялись.

Проведенные исследования подтвердили, что обработка патологического материала водным раствором дезинфекционного средства «Септустин» 0,1% концентрации с экспозицией 180 минут сдерживает развитие посторонней микрофлоры (споровых палочковидных форм, плесневых грибков), повышает эффективность очистки, снижает вероятность проростов посторонней микрофлоры, не влияет на интенсивность и характер роста нокардиоформных актиномицетов, что свидетельствует об отсутствии подавляющего действия дезинфекционного средства при заявленных параметрах.

Источники информации

1. Хоулт Д. и др. Определитель бактерий Берджи. 2 тома. - М.: Мир, 1967.

2. Должанский В.М. и др. Современные методы лабораторной диагностики туберкулеза: Метод. рекомендации. - М., 1992.

3. Кассич Ю.Я. Туберкулез животных и меры борьбы с ним. - Киев, 1990.

4. Наставление по применению препарата «Септустин» для дезинфекции объектов ветнадзора. Уралстинол. - БИО. - 2002.

Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения нокардиоформных актиномицетов, включающий воздействие дезинфекционным средством, отличающийся тем, что в качестве дезинфекционного средства используют дезинфекционное средство «Септустин», причем обработку проводят смешиванием водного раствора дезинфекционного средства «Септустин» концентрацией 0,1% и патологического материала в объемном соотношении 1:2 в течение 180 минут при комнатной температуре с последующей двукратной в течение 15 минут отмывкой стерильным физиологическим раствором.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области микробиологии. Штамм бактерий Rhodococcus sp.

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и биотехнологии. Штамм микромицета Trichoderma hamatum обладает антибактериальной активностью в отношении возбудителя сибирской язвы Bacillus anthracis.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при производстве питательных сред для суспензионного культивирования клеток, в частности суспензионного культивирования клеток почки сирийского хомячка.
Изобретение относится к биотехнологии. Штамм гриба Aspergillus niger В-6 является продуцентом лимонной кислоты.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения нанодисперсной добавки для бетона.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологии. Питательная среда содержит дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния гептагидрат, хлорид натрия, сульфат кальция дигидрат, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу, нановермикулит и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологии. Питательная среда содержит дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния гептагидрат, хлорид натрия, сульфат кальция дигидрат, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу, нанобентонит и дистиллированную воду.
Изобретение относится биотехнологии и может быть использовано в микробиологии. Питательная среда содержит дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния гептагидрат, хлорид натрия, сульфат кальция дигидрат, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу, наносапропель и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологии. Питательная среда содержит дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния гептагидрат, хлорид натрия, сульфат кальция дигидрат, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу, наноцеолит и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается штамма Escherichia coli BL21(DE3)Gold/pETmin-CypA - продуцента рекомбинантного циклофилина А человека. Охарактеризованный штамм получен путем трансформации клеток штамма BL21(DE3)Gold плазмидой pETmin-CypA.

Группа изобретений относится к области биомедицины. Предложен набор и способ для приготовления многослойных агарозных блоков на поверхности мини-стекол.
Изобретение относится к области микробиологического анализа воздуха. Предложен способ микробиологического анализа воздуха.

Изобретение относится к области оценки состояния микробиологической обстановки окружающей среды и может найти применение в отраслях АПК, характеризующихся высокой бактериальной обсемененностью, например в животноводческих и птицеводческих помещениях.

Группа изобретений относится к биохимии. Предложен способ получения стандартного образца мутности бактерийных взвесей, стандартный образец мутности бактерийных взвесей, применение стандартного образца мутности бактерийных взвесей, а также набор, содержащий стандартный образец мутности бактерийных взвесей.

Изобретение относится к молекулярной биологии, генной инженерии, медицине и онкологии. Предложен способ детекции стволовых раковых клеток, основанный на инкубации образцов клеток с флуоресциентными красителями и последующей идентификации раковых клеток в ультрафиолетовом свете, где при инкубации образцов клеток, которая проводится с флуоресцентным красителем, ковалентно инкорпорированным во фрагменты двуцепочечной ДНК, обеспечивается интернализация экстраклеточных экзогенных фрагментов двуцепочечной ДНК во внутриклеточное пространство стволовых клеток, входящих в состав образцов клеток, путем проведения инкубации образцов клеток в растворе препарата фрагментированной двуцепочечной ДНК в соотношении 0.5-1 мкг ДНК на 1000000 клеток, находящихся в суспензии или на срезе ткани в течение 60-120 минут, а идентификацию раковых клеток в качестве стволовых осуществляют в ультрафиолетовом свете с длиной волны, соответствующей максимуму поглощения введенного в молекулы фрагментов двуцепочечной ДНК флуорохрома, причем, в качестве фрагментов двуцепочечной ДНК используют фрагменты ДНК Alu повтора человека, энзиматически меченые предшественником, содержащим ковалентно пришитый флуорохромный краситель, или меченые прямым химическим введением флуорохрома.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложена бактериологическая петля для культивирования микроорганизмов.
Изобретение относится к области медицины, а именно к микробиологической лабораторной диагностике инфекционных заболеваний. .

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для выявления трансформированных вариантов коринебактерий и приготовления специфических биопрепаратов.

Изобретение относится к способам исследования микроорганизмов микроскопическими методами, в частности к способам определения общей концентрации (живых и мертвых) микробов подсчетом под микроскопом, и может быть использовано при производстве диагностических и лечебно-профилактических бактерийных препаратов, а также при стандартизации микробных культур в процессе проведения коллекционных работ.

Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано при изучении L-тpaнсфopмировaнных вариантов бактериальных клеток. .

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен способ и устройство для моделирования образования биопленок холерных вибрионов. Устройство включает ёмкость, снабжено пружинообразным приспособлением из мягкой проволоки, закрученной в виде 10 витков, под углом не менее 10-12° к вертикальной оси, диаметром 17 мм. Пружинообразное приспособление имеет два плеча длиной 70 мм для размещения внутри емкости и его удаления из нее, приспособление выполнено с возможностью установки между витками покровных стекол с размером 20×20×0,6 мм. Способ включает создание биопленки на покровных стеклах. Покровные стекла помещают между витками пружинообразного приспособления внутри емкости. Ёмкость заполняют экспериментальной средой, добавляют в емкость суспензию холерных вибрионов и инкубируют при конечной концентрации холерных вибрионов в n×108 КОЕ/мл с доведением до минимального порога чувствительности 0,1 КОЕ/мл при комнатной температуре. Изобретения обеспечивают повышение производительности и безопасности при осуществлении моделирования биопленок холерных вибрионов. 2 н.п. ф-лы, 4 ил., 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к санитарной микробиологии и может быть использовано при лабораторных исследованиях. Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения нокардиоформных актиномицетов предусматривает измельчение патологического материала с последующим смешиванием с дезинфекционным средством Септустин в концентрации 0,1 в объемном соотношении 1:2 в течение 180 минут при комнатной температуре с последующей двукратной в течение 15 минут отмывкой стерильным физиологическим раствором. 4 табл., 5 пр.

Наверх