Питательная среда для суспензионного культивирования клеток млекопитающих


 


Владельцы патента RU 2558253:

ФЕДЕРАЛЬНОЕ КАЗЕННОЕ ПРЕДПРИЯТИЕ " ЩЕЛКОВСКИЙ БИОКОМБИНАТ" (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при производстве питательных сред для суспензионного культивирования клеток, в частности суспензионного культивирования клеток почки сирийского хомячка. Питательная среда содержит натрий хлористый, калий хлористый, магний сернокислый, натрий фосфорнокислый двузамещенный, калий фосфорнокислый однозамещенный, кальций хлористый, натрий двууглекислый, L-аргинин, L-глутамин, L-тирозин, L-триптофан, пантотенат кальция, пиридоксаль HCl, тиамин, мезо-инозит, никотинамид, рибофлавин, фолиевую кислоту, глюкозу, ферментативный гидролизат мышечных белков, ферментативный гидролизат лактальбумина, бензилпенициллина натриевую соль с активностью 0,09×105-1,1×105, канамицина сульфат с активностью 0,09×105-1,1×105, нистатин с активностью от 6×104 до 6,5×104 ЕД/л, холина хлорид, янтарную кислоту и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет повысить качество получаемого продукта. 1 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при производстве питательных сред для суспензионного культивирования клеток, в частности суспензионного культивирования клеток почки сирийского хомячка.

Известна питательная среда для суспензионного культивирования клеток млекопитающих, содержащая натрий хлористый, калий хлористый, магний сернокислый, натрий фосфорнокислый двузамещенный, калий фосфорнокислый однозамещенный, кальций хлористый, натрий двууглекислый, L-аргинин, L-глутамин, L-тирозин, L-триптофан, пантотенат кальция, пиридоксаль HCl, тиамин, мезо-инозит, никотинамид, рибофлавин, фолиевую кислоту, глюкозу, ферментативный гидролизат мышечных белков, ферментативный гидролизат лактальбумина, бензилпенициллина натриевую соль, канамицина сульфат, противогрибковый препарат и дистиллированную воду (Патент РФ №2300563, Питательная среда для суспензионного культивирования клеток млекопитающих, МПК C12N 5/06, Бюл. №16, 2007).

Однако известное техническое решение недостаточно эффективно.

Задачей изобретения является повышение качества целевого продукта за счет увеличения клеток млекопитающих при суспензионном их культивировании.

Поставленная задача решается в питательной среде для суспензионного культивирования клеток млекопитающих, содержащей натрий хлористый, калий хлористый, магний сернокислый, натрий фосфорнокислый двузамещенный, калий фосфорнокислый однозамещенный, кальций хлористый, натрий двууглекислый, L-аргинин, L-глутамин, L-тирозин, L-триптофан, пантотенат кальция, пиридоксаль HCl, тиамин, мезо-инозит, никотинамид, рибофлавин, фолиевую кислоту, глюкозу, ферментативный гидролизат мышечных белков, ферментативный гидролизат лактальбумина, бензилпенициллина натриевую соль, канамицина сульфат, противогрибковый препарат и дистиллированную воду тем, что в качестве противогрибкового препарата содержит нистатин с активностью от 6×104 до 6,5×104 ЕД/л и дополнительно содержит холина хлорид и янтарную кислоту, причем бензилпенициллин натриевая соль используется с активностью 0,09×105-1,1×105, а канамицина сульфат - с активностью 0,09×105-1,1×105, при следующем содержании компонентов, г/л:

Нистатин с активностью от 6×104 до 6,5×104 ЕД/л 0,0098-0,0102
Бензилпенициллина натриевая соль с активностью 0,09×105-1,1×105 0,05-0,07
Канамицина сульфат с активностью 0,09×105-1,1×105 Ед/л 0,14-0,16
Глюкоза 3,5-3,7
Кальций пантотенат 3,2×10-3-3,5×10-3
Калий фосфорнокислый однозамещенный 0,05-0,07
Калий хлористый 0,3-0,5
Натрий фосфорнокислый двузамещенный 0,10-0,20
Кальций хлористый 0,26-0,30
Ферментативный гидролизат лактальбумина 1,15-1,30
Ферментативный гидролизат мышечных белков 1,15-1,30
L-аргинин 0,040-0,044
L-глутамин 0,58-0,60
L-тирозин 0,018-0,022
L-триптофан 0,018-0,022
Магний сернокислый 0,15-0,25
Мезо-инозит 6,4×10-3-7,0×10-3
Натрий двууглекислый 0,30-0,40
Натрий хлористый 7,5-8,5
Никотинамид 3,2×10-3-3,5×10-3
Пиридоксаль HCl 3,2×10-3-3,5×10-3
Рибофлавин 3,2×10-4-3,5×10-4
Тиамин 3,2×10-3-3,5×10-3
Фолиевая кислота 3,2×10-3-3,5×10-3
Холина хлорид 3,2×10-3-3,5×10-3
Кислота янтарная 0,065-0,095
Вода дистиллированная Остальное

Нистатин - противогрибковый препарат полиенового ряда, используется в терапии кандидозов («Механизм действия антибиотиков», под редакцией Г.Ф. Гаузе, изд. «Мир», М., 1969 г., стр.125, 127, 131, 144).

Холина хлорид - гидроокись 2-оксиэтилтриметиламмония, [(СН3)3N+CH2CH2OH]OH, используется для лечения заболеваний печени и при атеросклерозе (В.А. Сергеев «Репродукция и выращивание вирусов животных», изд. «Колос», М., 1976, стр.49, 50, 67).

Кислота янтарная - (бутандиовая кислота, этан-1,2-дикарбоновая кислота) - двухосновная предельная карбоновая кислота, используется для получения пластмасс, смол, лекарственных препаратов (в частности, хинолитина), для синтетических целей, а также в аналитической химии. В пищевой промышленности используется в качестве пищевой добавки Е363 (В.А. Сергеев «Репродукция и выращивание вирусов животных», изд. «Колос», М., 1976, стр.68, 75).

Нами впервые установлено, что использование предлагаемого технического решения в заявляемых режимах позволяет повысить производство клеток млекопитающих при суспензионном их культивировании. Анализ известной литературы свидетельствует о соответствии заявленного технического решения критерию «новизна».

Сравнение заявленного способа с известными показывает, что они для специалиста не следуют явным образом из уровня техники, что свидетельствует о соответствии заявленного технического решения критерию «изобретательский уровень».

Заявленное техническое решение является промышленно применимым, т.к. в настоящее время используется на ряде экспериментальных установках.

Изобретение иллюстрируется на следующих примерах.

Пример 1. Получают составы 1-4 согласно прописи таблицы.

Растворение компонентов питательной среды ведут в дистиллированной воде, имеющей температуру 35-40°C, при непрерывном перемешивании. В начале растворяют антибиотики и навески солей поочередно (хлористый натрий, хлористый калий, кальций пантотенат, калий фосфорнокислый однозамещенный, натрий фосфорнокислый двузамещенный до полного растворения предыдущей навески, далее вносят навеску глюкозы). Дополнительно к механическому перемешиванию осуществляют перемешивание сжатым воздухом, т.е. барботированием в течение 10-15 минут. После растворения навесок убирают барботирование. В глюкозосолевой раствор осторожно, тонкой струйкой при механическом перемешивании вносят хлористый кальций в виде 40%-ного раствора и вновь барботируют. Из указанного в таблице количества гидролизата мышечных белков ферментативного сухого и гидролизата лактальбумина ферментативного готовят 10-12%-ный раствор и вносят его в полученный глюкозосолевой раствор, и растворяют в течение 10-15 минут перемешиванием и барботированием.

Отдельно растворяют аминокислоты. Растворение навесок проводят последовательно согласно прописи питательной среды в таблице. L-тирозин растворяют отдельно в небольшом количестве дистиллированной воды при нагревании до кипения с добавлением по каплям концентрированной соляной кислоты до полного просветления раствора.

Все витамины последовательно растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды комнатной температуры. При этом каждую последующую навеску растворяют только после полного растворения предыдущей. Рибофлавин и фолиевую кислоту растворяют отдельно в небольшом количестве дистиллированной воды комнатной температуры с добавлением по каплям 20-25%-ного раствора NaOH до полного растворения навесок. Сначала растворяют рибофлавин, затем фолиевую кислоту, при растворении которой необходимо вновь по каплям вносить 20-25%-ный раствор NaOH до полного просветления раствора.

В глюкозосолевой раствор вносят растворы аминокислот, витаминов, сыворотку, натрий двууглекислый и перемешивают. После внесения в среду всех необходимых компонентов добавляют янтарную кислоту и дистиллированную воду до необходимого объема, перемешивают, стерилизуют фильтрацией и вносят в реактор для культивирования клеток.

Питательные среды (составы 1-4) обеспечивали накопление клеток, при суспензионном культивировании перевиваемой линии ВНК-21 до (3,9-4,2)·106 кл./см3 в сравнении с известным техническим решением, где максимальное накопление клеток составило 3,5·106 кл./см3.

Таким образом заявленное техническое решение позволяет повысить выход культуры клеток млекопитающих на 11-20%.

Питательная среда для суспензионного культивирования клеток млекопитающих, содержащая натрий хлористый, калий хлористый, магний сернокислый, натрий фосфорнокислый двузамещенный, калий фосфорнокислый однозамещенный, кальций хлористый, натрий двууглекислый, L-аргинин, L-глутамин, L-тирозин, L-триптофан, пантотенат кальция, пиридоксаль HCl, тиамин, мезо-инозит, никотинамид, рибофлавин, фолиевую кислоту, глюкозу, ферментативный гидролизат мышечных белков, ферментативный гидролизат лактальбумина, бензилпенициллина натриевую соль, канамицина сульфат, противогрибковый препарат и дистиллированную воду отличающаяся тем, что в качестве противогрибкового препарата содержит нистатин с активностью от 6×104 до 6,5×104 ЕД/л и дополнительно содержит холина хлорид и янтарную кислоту, причем бензилпенициллин натриевая соль используется с активностью 0,09×105-1,1×105, а канамицин сульфат - с активностью 0,09×105-1,1×105, при следующем содержании компонентов, г/л:

Нистатин с активностью от 6×104 до 6,5×104 ЕД/л 0,0098-0,0102
Бензилпенициллина натриевая соль с активностью 0,09×105 0,05-0,07 1,1×105
Канамицина сульфат с активностью 0,09×105-1,1×105 Ед/л 0,14-0,16
Глюкоза 3,5-3,7
Кальций пантотенат 3,2×10-3-3,5×10-3
Калий фосфорнокислый однозамещенный 0,05-0,07
Калий хлористый 0,3-0,5
Натрий фосфорнокислый двузамещенный 0,10-0,20
Кальций хлористый 0,26-0,30
Ферментативный гидролизат лактальбумина 1,15-1,30
Ферментативный гидролизат мышечных белков 1,15-1,30
L-аргинин 0,040-0,044
L-глутамин 0,58-0,60
L-тирозин 0,018-0,022
L-триптофан 0,018-0,022
Магний сернокислый 0,15-0,25
Мезо-инозит 6,4×10-3-7,0×10-3
Натрий двууглекислый 0,30-0,40
Натрий хлористый 7,5-8,5
Никотинамид 3,2×10-3-3,5×10-3
Пиридоксаль HCl 3,2×10-3-3,5×10-3
Рибофлавин 3,2×10-4-3,5×10-4
Тиамин 3,2×10-3-3,5×10-3
Фолиевая кислота 3,2×10-3-3,5×10-3
Холина хлорид 3,2×10-3-3,5×10-3
Кислота янтарная 0,065-0,095
Вода дистиллированная Остальное



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к биотехнологии. Штамм гриба Aspergillus niger В-6 является продуцентом лимонной кислоты.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения нанодисперсной добавки для бетона.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологии. Питательная среда содержит дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния гептагидрат, хлорид натрия, сульфат кальция дигидрат, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу, нановермикулит и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологии. Питательная среда содержит дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния гептагидрат, хлорид натрия, сульфат кальция дигидрат, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу, нанобентонит и дистиллированную воду.
Изобретение относится биотехнологии и может быть использовано в микробиологии. Питательная среда содержит дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния гептагидрат, хлорид натрия, сульфат кальция дигидрат, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу, наносапропель и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологии. Питательная среда содержит дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния гептагидрат, хлорид натрия, сульфат кальция дигидрат, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу, наноцеолит и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается штамма Escherichia coli BL21(DE3)Gold/pETmin-CypA - продуцента рекомбинантного циклофилина А человека. Охарактеризованный штамм получен путем трансформации клеток штамма BL21(DE3)Gold плазмидой pETmin-CypA.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Aspergillus oryzae 12-84, обладающий высоким уровнем синтеза комплекса протеиназ и пептидаз, нуклеаз, хитиназы, β-глюканазы, маннаназы и α-амилазы, депонирован в ГНУ ВНИИСХМ РОССЕЛЬХОЗАКАДЕМИИ под регистрационным номером Aspergillus oryzae RCAM01134.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм зеленой микроводоросли Acutodesmus obliquus Syko-A Ch-055-12, обладающий способностью снижать содержание загрязняющих веществ в сточной воде, депонирован в Коллекции Микроводорослей ИФР РАН (IPPAS) под регистрационным номером IPPAS S-2016.

Изобретения относятся к области медицинской микробиологии и касаются способа дифференциации токсигенных генетически измененных штаммов V.cholerae биовара Эль Тор и тест-системы.

Изобретение относится к области биотехнологии. Описано применение специфических молекул-конъюгатов, которые являются транспортерами карго-молекул, для транспортировки представляющей интерес субстанции в лейкоциты.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу получения экзосом из крови. Кровь разделяют на плазму и клеточную фракцию.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантной продукции белков человека, и может быть использовано в производстве химерных антител к фактору некроза опухоли человека.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ культивирования эпителиальных стволовых клеток или выделенных фрагментов ткани, содержащих указанные эпителиальные стволовые клетки, включающий обеспечение внеклеточного матрикса, инкубирование эпителиальной стволовой клетки или выделенного фрагмента ткани, содержащего указанные эпителиальные стволовые клетки, с внеклеточным матриксом, культивирование эпителиальной стволовой клетки или выделенного фрагмента ткани в присутствии клеточной культуральной среды, содержащей базальную среду для клеток животного или человека, в которую добавлены ингибитор морфогенетического белка кости (BMP) и 5- 500 нг/мл митогенного фактора роста, а также клеточная культуральная среда, ее применение, способ культивирования трехмерного органоида, способ его получения, трехмерный органоид и его применение.

Изобретение относится к биотехнологии. Раскрыт способ выращивания эмбриональных стволовых клеток человека.

Изобретение относится к биотехнологии и медицине. Предложен способ дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток фиброзированных легких в фибробластные клетки, характеризующийся тем, что из правой доли фиброзированных легких выделяют клетки с фенотипом мезенхимальных стволовых клеток (CD44+, CD73+, CD90+, CD106+, CD31-, CD34-, CD45-), способные самообновляться in vitro в течение 60 дней, затем при добавлении в культуру мезенхимальных стволовых клеток фактора роста фибробластов 2 мкг/мл получают фибробластные клетки.
Изобретение относится к области биотехнологии. ВНК-21/13-13 - перевиваемая монослойно-суспензионная сублиния клеток почки новорожденного сирийского хомячка задепонированна в Российской коллекции клеточных культур (РКК) в специализированной коллекции перевиваемых соматических клеточных культур сельскохозяйственных и промысловых животных при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии им.

Настоящее изобретение касается способа получения популяции клеток, экспрессирующих маркеры плюрипотентности и маркеры, характерные для линии сформированной эндодермы.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована в лабораторной диагностике как тест-система и способ определения антивирусной активности интерферона альфа (ИФН-α) в сыворотке крови человека.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной хирургии, и может быть использовано для лечения инфекционного перитонита в эксперименте. Для этого крысам внутривенно вводят суспензию аллогенных мезенхимальных стволовых клеток из расчета 1,5×106 на 100 г массы животного в 2 мл физиологического раствора.

Изобретение относится к биотехнологии и медицине. Предложен способ дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток фиброзированных легких в фибробластные клетки, характеризующийся тем, что из правой доли фиброзированных легких выделяют клетки с фенотипом мезенхимальных стволовых клеток (CD44+, CD73+, CD90+, CD106+, CD31-, CD34-, CD45-), способные самообновляться in vitro в течение 60 дней, затем при добавлении в культуру мезенхимальных стволовых клеток фактора роста фибробластов 2 мкг/мл получают фибробластные клетки.
Наверх