Клеточная линия рака почки человека ibgvat r 27


 


Владельцы патента RU 2573938:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биологии гена Российской академии наук (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии. Полученная новая клеточная линия рака почки человека IBGVAT R 27 обладает стабильными культуральными и морфологическими характеристиками. Линия клеток может использоваться, например, для создания противоопухолевых вакцин (цельноклеточных или генноинженерных), тестирования активности различных фармацевтических препаратов, создания диагностических наборов и тест-систем для разработки новых лекарственных средств. Клеточная линия депонирована во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) под регистрационным номером Н-152. 1 пр.

 

Область техники настоящего изобретения

Изобретение относится к области медицинской биотехнологии, в частности к получению клеточных линий, используемых для клеточных технологий, среди которых создание противоопухолевых вакцин, тестирование активности различных фармацевтических препаратов, разработка диагностических наборов, а также тест-систем для разработки новых лекарственных средств.

Предшествующий уровень техники настоящего изобретения

В структуре заболеваемости злокачественными заболеваниями в РФ в 2012 году на долю рака почки приходилось около 4% [1]. По статистике приблизительно треть пациентов с раком почки на момент постановки диагноза уже имеют отдаленные метастазы, а среди остальных пациентов приблизительно у половины эти метастазы скорее всего разовьются [2, 3]. К сожалению, метастатический рак почки высоко рефрактерен к традиционным схемам химиотерапии [3], что делает весьма актуальным поиск дополнительных и/или альтернативных методов лечения.

В последние годы много исследований посвящено возможности использования различных иммунологических подходов к терапии онкологических патологий. В основе всех этих подходов лежит идея использования и/или усиления естественных иммунных процессов для борьбы с опухолью. С этой целью исследуются или уже применяются для лечения различные цитокины (например, интерферон-альфа, интерлейкин-6 и др.) [3], моноклональные антитела к опухолевым антигенам для непосредственного блокирования жизнедеятельности опухолевых клеток или направленной доставки к ним противоопухолевых препаратов [4-6]. Кроме того, к иммунотерапевтическим методам лечения относятся аутологичные или аллогенные вакцины [7, 8], принцип действия которых основан на индукции противоопухолевого иммунитета.

Центральным событием в процессе Т-клеточной иммунной реакции против опухолевых клеток является стимуляция распознавания Т-клеточными рецепторами антигенных детерминант, избирательно экспрессированных на опухолевых клетках. Опухолевые антигены перед их презентацией, как правило, подвергаются процессингу в контексте молекул гистосовместимости на поверхности клеток [9]. Известно несколько групп антигенов, специфических для опухолевых клеток, например раково/тестикулярные антигены, дифференцировочные антигены и др. Экспрессия таких опухолевых маркеров играет одну из ключевых ролей в индукции противоопухолевого иммунитета.

Основная сложность при использовании иммунотерапии для лечения онкологических патологий заключается в ее недостаточной эффективности, часто связанной с существованием механизма ускользания опухоли от иммунологического надзора. Это может быть следствием экспрессии на опухолевых клетках опухолевых антигенов [10, 11] или повышением содержания в организме клеток с ингибиторными свойствами [12]. К последним относятся, в частности, регуляторные клетки (Трег), которые важны для предотвращения чрезмерного активационного ответа на чужеродные воздействия во избежание аутореактивности. Снижение содержания таких клеток часто ассоциировано с аутоиммунными заболеваниями [13, 14], и в таких случаях иммунотерапия может быть направлена на восстановление в организме их количества [15, 16]. В то же время при многих онкологических заболеваниях содержание Трег повышено, они могут формировать толерантность организма к опухолевым клеткам и в таких случаях терапия может быть направлена на снижение их содержания [17, 18].

Вакцинотерапия как способ лечения опухоли направлена на активацию противоопухолевого иммунитета в ответ на дополнительное введение в организм опухолевых антигенов. Особое внимание здесь уделяется цельноклеточным вакцинами, представляющим собой инактивированные облучением аллогенные или аутологичные опухолевые клетки.

Аутологичные/сингенные цельные опухолевые клетки заключают в себе практически все антигены, экспрессированные опухолью хозяина, что снижает риск появления аллергических реакций на чужеродные неопухольспецифичные антигены, а также снижает риск контаминации патогенными вирусами и внутриклеточными паразитами. Показана эффективность такой вакцины в качестве адъювантной терапии для лечения карциномы почки [19].

Разнообразие спектра опухолевых антигенов, включенных в состав противоопухолевой вакцины, позволяет с наибольшей эффективностью индуцировать противоопухолевый иммунитет. Такого разнообразия можно добиться путем правильного подбора клеточных линий для разработки противоопухолевых вакцин. Вакцины, состоящие из нескольких клеточных линий (поливалентные вакцины), содержат широкий спектр опухолевых антигенов и используются как аллогенные. Например, поливалентная вакцина для терапии меланомы [7] состоит из трех аллогенных меланомных клеточных линий с высокой экспрессией поверхностных иммуногенных глико-, липопротеинов и ганглиозидов. Клинические испытания такой вакцины показали, что развитие иммунного ответа как клеточного, так и гуморального типа на эти антигены коррелировало с повышением выживаемости пациентов. Небольшое количество исследований, связанных с использованием аллогенных вакцин для терапии рака почки, позволяет предполагать их потенциальную эффективность для лечения данной патологии [20, 21].

Задачей настоящего изобретения является получение новой опухолевой клеточной линии рака почки человека, для которой потенциально возможно использование в создании противоопухолевых вакцин.

Технический результат, получаемый при использовании изобретения, выражается в расширении арсенала клеточных линий, используемых для создания противоопухолевых вакцин (цельноклеточных или генноинженерных), что дает возможность повысить эффективность лечения и увеличения продолжительности жизни при лечении злокачественных новообразований. Кроме того, полученная новая клеточная линия может использоваться для тестирования активности различных фармацевтических препаратов, создания диагностических наборов и тест-систем для разработки новых лекарственных средств.

Поставленная задача решается тем, что получена новая клеточная линия IBGVAT R 27 из опухолевого образца рака почки человека.

Полученная клеточная линия обладает стабильными культуральными и морфологическими характеристиками. Хранится в коллекции клеточных культур во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером Н-152.

Родословная клеточной линии IBGVAT R 27

Линия получена из первичной опухоли пациента с диагнозом рак почки. Материал получен путем удаления первичной опухоли при оперативном вмешательстве (нефроэктомии).

Получение клеточной линии IBGVAT R 27

Опухолевая ткань получена хирургическим путем при нефроэктомии. Полученную суспензию клеток засевали во флаконы и культивировали в течение длительного времени. Стабильно растущая клеточная линия была получена на 15 пассаже.

Морфологические признаки клеточной линии IBGVAT R 27

IBGVAT R 27 представлена фибробластоподобными клетками, образующими тяжи.

На окрашенных препаратах клеточные элементы веретеновидной формы с обильной слабоэозинофильной гомогенной цитоплазмой. Ядра правильной формы, минимально овоидные, хроматин мелокодисперсный, распределен в ядре равномерно. Немногочисленные клетки содержат два и, реже, более ядра. Фигуры митозов редки. Клетки формируют шториформные пласты без боковых контактов.

Культуральные свойства IBGVAT R 27

Клеточная линия IBGVAT R 27 культивируется в ростовой среде DME/F12 с добавлением 10% телячьей эмбриональной сыворотки, 100 ед./мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. В культуральные флаконы объемом 25 см в 7 мл среды засевают 1*105 клеток. Культивирование проводят в CO2-инкубаторе при 37°C в атмосфере 5% CO2. При субкультивировании клетки снимаются с использованием стандартных растворов 0,25% трипсина и 0,02% раствора Версена в соотношении 1:1.

Условия криоконсервапии

Для длительного хранения клетки консервируют путем замораживания в жидком азоте. Клетки ресуспендируют в среде для замораживания, состоящей из 80% ростовой среды, 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 10% DMSO. Для хранения замороженного материала используют жидкий азот (температура -196°C). Размораживание быстрое, при 37°C. Клетки разводят в 10 мл ростовой среды и осаждают центрифугированием, осадок ресуспендируют в 5-7 мл ростовой среды и переносят в культуральный флакон 25 см2. Жизнеспособность клеток оценивают по включению трипанового синего. Жизнеспособность клеток IBGVAT R 27 после размораживания составляет 80-90%.

Контаминация

При длительном наблюдении бактерии и грибы в культуре не обнаружены. Тест на микоплазму отрицателен.

Кариологическая характеристика IBGVAT R 27

46, Х0, +der(7)t(1;7)(q21; p22), +iso(8q),t(9;10)(p11;p11), -14, -15, der(21)t(15;21),+20 [15]

Примеры использования клеточной линии IBGVAT R 27

Пример 1. Культивирование клеточной линии IBGVAT R27

Фрагмент опухолевой ткани, полученной при нефроэктомии, освобождали от окружающих тканей и помещали в транспортировочный контейнер со стерильной ростовой средой, состоящей из питательной среды DME/F12, содержащей 2,5 мМ L-глутамина, с добавлением 10% телячьей эмбриональной сыворотки (ТЭС) и антибиотиков (пенициллин 100 ед./мл и стрептомицин 100 мкг/мл). Опухолевую ткань доставляли в лабораторию в течение одних суток после забора материала.

Образец опухолевой ткани асептически отделяли от соединительной и жировой тканей, а также удаляли некротизированные области. Фрагмент опухоли механически измельчали в ростовой среде на фрагменты величиной 2-3 мм3, после чего ткань диссоциировали смесью ферментов (ДНКаза и коллагеназа I типа) в течение 1-1,5 часов при 37°C. Образовавшуюся клеточную суспензию фильтровали через клеточное сито, центрифугировали в течение 5 мин при 250g, клетки отмывали один раз в бессывороточной среде DME/F12. Осадок клеток ресуспендировали в питательной среде из расчета 2*105 клеток/мл, по 5 мл полученной суспензии помещали в культуральные флаконы 25 см2. Клетки культивировали в питательной среде DME/F12, содержащей 2,5 мМ L-глутамина, с добавлением 15% ТЭС, антибиотиков (пенициллин 100 ед./мл и стрептомицин 100 мкг/мл), а также комплекса витаминов и аминокислот. После 15 пассажа была получена стабильно растущая клеточная линия.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Злокачественные новообразования в России в 2012 году (заболеваемость и смертность), ed. А.Д. Каприн, В.В. Старинский, and Г.В. Петрова. 2014, Москва: ФГБУ «МНИОИ им. П.А. Герцена» Минздрава России.

2. Stewart, S.L., et al., Cancer mortality surveillance-United States, 1990-2000. MMWR Surveill Summ, 2004. 53(3): p. 1-108.

3. Passalacqua, R., et al., Immunotherapy options in metastatic renal cell cancer: where we are arid where we are going. Expert Rev Anticancer Ther, 2006. 6(10): p. 1459-72.

4. Jubb, A.M. and A.L. Harris, Biomarkers to predict the clinical efficacy of bevacizumab in cancer. Lancet Oncol, 2010. 11(12): p. 1172-83.

5. Escudier, В., et al., Bevacizumab plus interferon alfa-2a for treatment of metastatic renal cell carcinoma: a randomised, double-blind phase III trial. Lancet, 2007. 370(9605): p. 2103-11.

6. Тиллиб С.В., et al., Наноантитела для детекции и блокирования биологической активности фактора роста эндотелия сосудов А165 человека. Биохимия, 2012. 77(6): р. 809-817.

7. Morton, D.L., et al., Polyvalent melanoma vaccine improves survival of patients with metastatic melanoma. Ann N Y Acad Sci, 1993. 690: p. 120-34.

8. Larin, S.S., et al., Immunotherapy with autologous tumor cells engineered to secrete Tag7/PGRP, an innate immunity recognition molecule. J Gene Med, 2004. 6(7): p. 798-808.

9. Бережной A.E., et al., Молекулярные механизмы взаимодействия опухоли и иммунной системы. Вопросы онкологии, 2008. 54(6): р. 669-683.

10. Бережной А.Е., et al., Индукция экспрессии молекулы HLA-E на поверхности опухолевых клеток интерфероном-гамма приводит к защите опухолевых клеток от цитотоксического действия лимфоцитов. Вопросы онкологии, 2009. 55(2): р. 224-229.

11. Бережной А.Е., et al., Анализ экспрессии молекул HLA-E в клетках меланомы человека. Российский биотерапевтический журнал, 2006. 5(3): р. 66-71.

12. Закеева И.Р., et al., Ингибиторные рецепторы лимфоцитов и их роль в противоопухолевом иммунитете. Вопросы онкологии, 2007. 53(2): р. 140-149.

13. Brusko, T.M., A.L. Putnam, and J.A. Bluestone, Human regulatory T cells: role in autoimmune disease and therapeutic opportunities. Immunol Rev, 2008. 223: p. 371-90.

14. Lyssuk, E.Y., et al., Reduced number and function of CD4+CD25highFoxP3+ regulatory T cells in patients with systemic lupus erythematosus. Adv Exp Med Biol, 2007. 601: p. 113-9.

15. Fisson, S., et al., Therapeutic potential of self-antigen-specific CD4+CD25+ regulatory T cells selected in vitro from a polyclonal repertoire. Eur J Immunol, 2006. 36(4): p. 817-27.

16. Быковская C.H. и Е.Ю. Лысюк. Способ обогащения регуляторных CD4+CD25+FOXP3+T-клеток человека ex vivo. Патент на изобретение №2437933, 2011

17. de Rezende, L.C., et al., Regulatory T cell as a target for cancer therapy. Arch Immunol Ther Exp (Warsz), 2010. 58(3): p. 179-90.

18. Dannull, J., et al., Enhancement of vaccine-mediated antitumor immunity in cancer patients after depletion of regulatory T cells. J Clin Invest, 2005. 115(12): p. 3623-33.

19. Jocham, D., et al., Adjuvant autologous renal tumour cell vaccine and risk of tumour progression in patients with renal-cell carcinoma after radical nephrectomy: phase III, randomised controlled trial. Lancet, 2004. 363(9409): p. 594-9.

20. Kugler, A., et al., Autologous and allogenic hybrid cell vaccine in patients with metastatic renal cell carcinoma. Br J Urol, 1998. 82(4): p. 487-93.

21. Hu, Z., et al., Anti-tumor effects of fusion vaccine prepared by renal cell carcinoma 786-O cell line and peripheral blood dendritic cells of healthy volunteers in vitro and in human immune reconstituted SCID mice. Cell Immunol, 2010. 262(2): p. 112-9.

Клеточная линия рака почки человека IBGVAT R 27, используемая для тестирования противоопухолевых препаратов, хранится во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером Н-152.



 

Похожие патенты:

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для рекомбинантной экспрессии иммуномодуляторных белков. Конструируют вектор, содержащий полинуклеотид, кодирующий генный переключатель, при этом указанный полинуклеотид содержит (1) по меньшей мере одну последовательность фактора транскрипции, которая функционально связана с промотором, при этом указанная по меньшей мере одна последовательность фактора транскрипции кодирует лиганд-зависимый фактор транскрипции, и (2) полинуклеотид, кодирующий полипептид IL-12 и один или более иммуномодуляторных полипептидов, выбранных из IL-2, IL-7, IL-15, IL-18, IL-21, GM-CSF, CCL3 (MIP-1a), CCL5 (RANTES), CCL7 (MCP3), XCL1 (лимфотактин), CCL19 (MIP-3b), CXCL9 (MIG), CXCL10 (IP-10), CXCL12 (SDF-1), CCL21 (6Ckine) или TNF-альфа.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложены стволовые клетки, полученные культивированием моноцитов человека в присутствии (i) M-CSF с концентрацией от 5 до 100 нг/мл и (ii) по меньшей мере одного представителя, выбранного из группы, состоящей из ганглиозида с концентрацией от 1 до 100 мкг/мл и растворимого в воде растительного экстракта, экстрагированного методом экстракции Folch, с концентрацией от 0,1 до 100 мкг/мл, посредством этого дедифференцируя моноциты, где экспрессия гена CSCR4 указанных стволовых клеток более чем в три или четыре раза больше по сравнению с экспрессией стволовыми клетками, полученными путем культивирования моноцитов человека в присутствии M-CSF и IL-3, и экспрессия гена CSCR4 указанных стволовых клеток более чем в два или три раза больше по сравнению с экспрессией мезенхимальными стволовыми клетками, полученными из костного мозга, для лечения заболеваний, связанных с клеточными повреждениями, повреждениями тканей или органов.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу криоконсервации клеток животных. Способ основан на применении коллагенового клеточного носителя, имеющего особый состав, а также специфическую толщину и соответствующие механические свойства, которые сохраняются после размораживания.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной онкологии, и касается создания подкожных ксенографтов меланомы кожи человека для доклинического изучения противоопухолевых таргетных средств.

Представленная группа изобретений относится к области биотехнологии и касается способов сбора функциональных клеток (варианты). Охарактеризованные решения заключаются в имплантации имплантируемой медицинской емкости под кожу на срок не более двух недель, где популяция клеток мобилизована в емкость с помощью любого из белков HMGB1, HMGB2, HMGB3, S100A8, S100A9 или гиалуроновой кислоты или смеси любых двух или более из указанных.

Изобретение относится к биотехнологии, регенеративной медицине и может быть использовано в цитологии, гистологии, трансплантологии, микробиологии, биомедицинских исследованиях.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к выделенному пептиду, который имеет индуцибельность цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL), а также к его применению. Предложенный пептид может использоваться в противораковой иммунотерапии, более конкретно, в противораковых вакцинах.

Изобретение относится к области молекулярной биологии. Предложено применение терапевтически эффективного количества плацентарных стволовых клеток в получении фармацевтической композиции для использования в лечении индивидуума, имеющего заболевание, расстройство или патологическое состояние легких, причем терапевтически эффективное количество представляет собой количество, достаточное для того, чтобы вызвать детектируемое улучшение одного или нескольких симптомов указанного заболевания, расстройства или патологического состояния; где указанное заболевание, расстройство или патологическое состояние легкого представляет собой легочный саркоидоз, астму, бронхит или острый респираторный дистресс-синдром, и при этом плацентарные стволовые клетки являются CD10+, CD34-, CD105+ и CD200+, что определяется с помощью проточной цитометрии.

Изобретение относится к медицине. Для получения культуры клеток ретинального пигментного эпителия (РПЭ) взрослого донора-трупа производят удаление из глазного яблока донора-трупа роговично-склерального диска.

Изобретение относится к области молекулярной биологии. Предложен способ получения постоянной линии клеток-амниоцитов человека, включающий трансфекцию зародышевых клеток-амниоцитов человека молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую продукты генов аденовирусов Е1А и Е1В, причем указанную последовательность нуклеиновой кислоты получают из серотипа 5 аденовируса человека, и последующую трансфекцию постоянной линии клеток-амниоцитов человека, полученной на первом этапе, молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую большой SV40 Т-антиген.
Изобретение относится к области биотехнологии. Полученная новая клеточная линия рака почки человека IBGVAT R 6 обладает стабильными культуральными и морфологическими характеристиками. Линия клеток может использоваться, например, для создания противоопухолевых вакцин (цельноклеточных или генноинженерных), тестирования активности различных фармацевтических препаратов, создания диагностических наборов и тест-систем для разработки новых лекарственных средств. Клеточная линия депонирована во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) под регистрационным номером Н-151. 1 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложена биодобавка в питательную среду для культивирования клеток животных и репродукции на них вирусов, представляющая собой экстракт из кабачков и мышц щуки. Указанный экстракт получают экстрагированием измельченных гомогенизатором тканей кабачков и мышц щуки раствором Хэнкса в соотношении 1:3 при температуре 1-2°С в течение 24 ч, центрифугированием и сбором супернатантов. Осуществляют замораживание супернатантов при температуре -20°С в течение 5-7 суток, оттаивание при температуре 4-20°С, очистку. Смешивают полученные экстракты растительного и животного происхождения в соотношении 1:1 и стерилизуют фильтрацией. Полученный экстракт характеризуется следующими показателями: оптической плотностью 0,081±0,004 ед. опт. пл., рН 7,26±0,04, содержанием общего белка 9,1±0,04 г/л, свободного гемоглобина 0 г/л, общих липидов 0,15±0,07 г/л, общего холестерина 0,02±0,01 ммоль/л. Изобретение обеспечивает повышение роста клеток животных и репродукции на них вирусов. 6 табл., 5 пр.

Предложенное изобретение относится к области биотехнологии, а именно к вирусоподобной частице (VLP) для применения в вакцинах или антигенных композициях для лечения или профилактики инфекции вируса бешенства (RV), а также способам их получения и применения. Вирусоподобная частица содержит один или несколько гликопротеинов (G-белков) RV, где G-белки находятся в форме мицеллы и формируют триммер и где указанная мицелла содержит детергент нонилфенол этоксилат 9 (NP-9). Предложенное изобретение позволяет с высокой эффективностью лечить или профилактировать инфекции вируса бешенства. 5 н. и 16 з.п. ф-лы, 6 ил., 2 табл., 5 пр.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения нагруженных антигеном, активированных дендритных клеток (DC) для применения в иммунотерапии, включающий нагрузку по меньшей мере одним антигеном неактивированных DC; активацию неактивированных DC IFN-γ и липополисахаридом (LPS) для образования активированных DC; криосохранение активированных DC и размораживание активированных DC; где степень извлечения и жизнеспособность активированных DC после размораживания выше или равна приблизительно 70%, и где размороженные активированные DC продуцируют эффективное количество по меньшей мере одного цитокина для создания Т-клеточного ответа. Также рассмотрена криосохраненная композиция, содержащая DC, и способ вызова иммунного ответа у млекопитающего, включающий введение композиции по изобретению. Данное изобретение может найти дальнейшее применение в производстве лекарственных средств на основе DC. 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 8 ил., 4 пр.

Настоящее изобретение относится к способу получения панкреатических гормонпродуцирующих клеток (варианты). Представленный способ включает культивирование человеческих индуцированных плюрипотентных стволовых (iPS) клеток в среде, содержащей (+)-(R)-транс-4-(1-аминоэтил)-N-(4-пиридил)циклогексанкарбоксамид дигидрохлорид; далее культивирование полученных клеток в среде, содержащей (i) 6-[[2-[[4-(2,4-дихлорфенил)-5-(4-метил-1Н-имидазол-2-ил)-2-пиримидинил]амино]этил]амино]никотинонитрил и/или (ii) (2′Z,3′Е)-6-броминдирубин-3′-оксим; далее культивирование полученных клеток в среде, содержащей (i) 6-[[2-[[4-(2,4-дихлорфенил)-5-(4-метил-1Н-имидазол-2-ил)-2-пиримидинил]амино]этил]амино]никотинонитрил и/или (ii) (2′Z,3′E)-6-броминдирубин-3′-оксим и активин; далее образование клеточной массы из полученных клеток и культивирование клеточной массы в суспензионном состоянии в среде; далее культивирование полученных клеток в среде, содержащей ретиноевую кислоту, дорсоморфин, 4-[4-(1,3-бензодиоксол-5-ил)-5-(2-придинил)-1Н-имидазол-2-ил]-бензамид и основной фактор роста фибробластов; далее культивирование полученных клеток. При осуществлении заявленного изобретения не используется питающая клетка, а среда не содержит сыворотку. Изобретение может быть использовано в клеточной терапии при лечении сахарного диабета. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 8 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения клеток дефинитивной эндодермы, включающий культивирование стволовых клеток, полученных из партеногенетических клеток в присутствии трихостатина A в условиях отсутствия активина А, где TSA изменяет эпигенетический статус клетки, последующее культивирование стволовых клеток в отсутствие TSA, с получением таким образом клеток дефинитивной эндодермы, где TSA присутствует в концентрации 100 нМ-100 мкМ и где культивирование в присутствии TSA проводят в течение 24-72 часов и культивирование в отсутствие TSA проводят в течение 6-72 часов. 8 з.п. ф-лы, 4 табл., 3 ил., 2 пр.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и может быть использована для повышения реперфузии у пациента, имеющего заболевание периферических сосудов. Для этого применяют местно фармацевтическую композицию, содержащую фибриновый клей и выделенную однородную популяцию клеток, полученных из ткани пуповины человека, в количестве, эффективном для лечения заболевания, причем ткань пуповины по существу свободна от крови. Указанная выделенная однородная популяция клеток способна к самообновлению и размножению в культуре, имеет потенциал для дифференцирования и не экспрессирует CD117 и/или теломеразу. Использование данных изобретений позволяет повысить реперфузию у пациента, имеющего заболевание периферических сосудов путем местного использования клеток ткани пуповины. 2 н. и 32 з.п. ф-лы, 7 пр., 13 ил., 7 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к биотехнологии, и может быть использовано для получения миобластов из слизистой оболочки полости рта человека. Для этого проводят биопсию слизистой оболочки полости рта человека и обработку биоптата, предусматривающую отмывку, измельчение, ферментативное расщепление ткани десны протеолитическими ферментами. Далее культивируют выделенные из дезагрегированной ткани фибробластоподобные клетки на подходящей среде для получения культуры миобластов. Проводят иммунофенотипическое тестирование культуры миобластов на иммунофенотип и исключение вирусной и бактериальной контаминации. Использование данного способа позволяет получить культуру миобластов из легкодоступного источника - слизистой оболочки полости рта человека. 1 з.п. ф-лы, 1 пр., 2 ил.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ идентификации антитела, которое специфически связывается с интересующим антигеном на клеточной поверхности, предусматривающий иммунизацию животного вектором экспрессии, кодирующим антиген клеточной поверхности; приведение в контакт клеток, содержащих на своей поверхности антитела и выделенных из животного, подвергнутого иммунизации, причем антитела связаны с первой сортируемой меткой, с клетками, экспрессирующими антиген, связанный со второй сортируемой меткой; определение специфического связывания с использованием клеточного сортера по наличию первой и второй сортируемой метки в клеточном комплексе; а также идентификацию участков, определяющих комплементарность с антигеном (CDR), у идентифицированного антитела и прививку CDR на каркасную область акцепторного антитела. Данное изобретение предполагает скрининг антител, специфичных в отношении мембраносвязанных антигенов, что может найти дальнейшее применение в разработке терапевтических и диагностических средств. 3 з.п. ф-лы, 8 ил., 5 табл., 5 пр.

Предложен способ получения рекомбинантного полипептида. Способ включает культивирование клеток CHO в среде с общим содержанием аминокислот от около 40 до примерно 100 мМ при условиях, включающих в себя, по крайней мере, один температурный сдвиг и, по крайней мере, один сдвиг pH, и экспрессирование рекомбинантного полипептида. При этом выращивание клеток осуществляют при температуре от 33°C до 38°C в течение, по крайней мере, 3 дней, с последующим изменением температуры до 30°C-37°C. Выращивание клеток осуществляют при pH 6,8-7,5, по крайней мере, 2 дня, и pH с последующим изменением значений рН до 6,0-7,1. Причем клетки поддерживают при 30°C-37°C в течение, по крайней мере, еще 2 дней, а при рН 6,0-7,1 - по крайней мере, 1 день. Изобретение обеспечивает уменьшение гибели клеток, увеличение выхода целевого продукта и улучшения его качества. 13 з.п. ф-лы, 9 ил., 3 табл., 3 пр.
Наверх