Применение липополисахарида фототрофной бактерии rhodobacter capsulatus pg в качестве фактора, усиливающего дифференцирующую активность 1α,25-дигидроксивитамина d3



Применение липополисахарида фототрофной бактерии rhodobacter capsulatus pg в качестве фактора, усиливающего дифференцирующую активность 1α,25-дигидроксивитамина d3
Применение липополисахарида фототрофной бактерии rhodobacter capsulatus pg в качестве фактора, усиливающего дифференцирующую активность 1α,25-дигидроксивитамина d3
Применение липополисахарида фототрофной бактерии rhodobacter capsulatus pg в качестве фактора, усиливающего дифференцирующую активность 1α,25-дигидроксивитамина d3

Владельцы патента RU 2642309:

ФАНО России Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт фундаментальных проблем биологии Российской академии наук (ИФПБ РАН) (RU)
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к микробиологии, биотехнологии, фармакологии и медицине. Предложено применение физиологического липополисахарида, продуцируемого штаммом фототрофной бактерии Rhodobacter capsulatus ВКМ ИБФМ РАН B-2381Д, в качестве нетоксичного фактора, усиливающего дифференцирующую активность 1α,25-дигидроксивитамина D3 при дифференцировке моноцитоподобных клеток в моноциты. Изобретение может быть использовано для дальнейшей дифференцировки промоноцитов и моноцитов в клинической и экспериментальной медицине и при создании лекарственных препаратов, в частности, для онкологии. 2 ил., 1 табл.

 

Изобретение относится к микробиологии, биотехнологии, фармакологии и медицине и может быть использовано для дальнейшей дифференцировки промоноцитов и моноцитов в клинической и экспериментальной медицине.

В качестве модельных систем для исследований механизмов дифференциации широко используются промоноцитарные клеточные линии лейкемии человека (U937 и ТНР-1). Дифференциация характеризуется изменением различных клеточных параметров клеток по сравнению с соответствующим недифференцированным фенотипом. Такие изменения касаются морфологии, метаболических процессов и роста клеток. Клетки U937 и ТНР-1 представляют собой различные этапы развития моноцитов [Tsuchiya S., Yamabe М., Yamaguchi Y., Kobayashi Y., Konno Т., Tada K. Establishment and characterization of a human acute monocytic leukemia cell line (THP-1). Int. J. Cancer. 1980. V. 26. №2. P. 171-176].

Существуют различные агенты, способные индуцировать дифференциацию клеток этих линий в зрелые моноциты. Такие агенты, как диметилсульфоксид (ДМСО) [Nakamura Т., Kharbanda S., Spriggs D., Kufe D. Effect of dexamethasone of monocytic differentiation in human U937 cells by dimethylsulfoxide. J. Cell Physiol. 1990. V. 142. P. 261-267], ретиноевая кислота [Hyodoh F. Effects of Retinoic Acid on the Differentiation of THP-1 Cell Lines Containing Aneuploid or Diploid Chromosomes. Cell structure and function. 1987. №12. P. 225-242; Olsson I.L. and Breitman T.R. Induction of differentiation of the human histiocytic lymphoma cell line U937 by retinoic acid and cyclic adenosine 3',5'-monophosphate-inducing agents. Cancer Res. 1982. V. 42. P. 3924-3927], витамин D3 [Olsson I.L., Gullberg U., Ivhed I., Nilsson K. Induction of differentiation of the human histiocytic lymphoma cell line U937 by 1α,25-dihydroxycholecalciferol. Cancer Res. 1983. V. 43. P. 5862-5867], цитокины [Harris P.E., Ralph P., Litcofsky P., Moore M.A.S. Distinct activities of interferon, lymphokine and cytokine differentiation-inducing factors acting on the human monoblastic leukemia cell line U937. Cancer Res. 1985. V. 45. P. 9-13; Testa U., Ferbus D., Gabbianelli M., Pascucci В., Boccoli G., Louache F., Thang M.N. 1988 Effect of endogenous and exogenous interferons on the differentiation of human monocyte cell line U937. Cancer Res. 1988. V. 48. P. 82-88] и сложные форболовые эфиры, в частности 12-O-тетрадеканоилфорбол-13-ацетат (TPA) [Hass R., Bartels Н., Topley М., Hadam М., Kohler L., Goppelt-Strube M., Resh K. TPA-induced differentiation and adhesion of U937 cells: changes in ultrastructure, cytoskeletal organization and expression of cell surface antigens. Eur. J. Cell Biol. 1989. V. 48. P. 282-293], могут способствовать дифференциации незрелых моноцитов в моноциты/макрофаги.

Условием дифференциации в зрелые макрофаги является рост адгезии к поверхности культуральных плашек и, как следствие, резкое изменение формы клетки. Недифференцированные U937 и ТНР-1 клетки имеют округлую форму и растут в суспензии. Оба типа клеток имеют небольшую цитоплазму и крупное ядро. После дифференциации с ТРА большинство клеток прикрепляются к культуральным плашкам. Для ТНР-1 клеток характерно образование агрегатов за счет развития межклеточных псевдоподий [Panzarini Е., Ramires Р.А., Miccoli М.А., Tenuzzo В., Scordari A., Dini L. Differentiation of THP-1 and U937 cells in presence of synthetic hydrogels. Caryologia. 2006. V. 59. №4. P. 395-402].

CD14, первоначально описанный как маркер дифференцировки моноцитов, представляет собой гликопротеин массой 55 кДа. Исследования показали, что CD14 вовлекается в опосредование ответов на некоторые продукты бактериальной мембраны, особенно на липополисахариды. CD14 не обнаруживается на поверхности моноцитов-предшественников и резко возрастает во время их дифференцировки в моноциты. Таким образом, поверхностная экспрессия CD14 является отличной моделью для изучения механизмов миелоидного созревания клеток [Schwende Н., Fitzke Е., Ambs P., Dieter P. Differences in the state of differentiation of THP-1 cells induced by phorbol ester and 1α,25-dihydroxyvitamin D3. J. Leukocyte Biol. 1996. V. 59. V. 555].

CR3 (β2-интегрин, CD11b) - еще один классический маркер моноцитарной дифференциации, участвующий в клеточной адгезии, и также функционирующий как рецептор комплемента. Рецептор CD11b представляет собой гликопротеин (масса 160 кДа), который связывается нековалентно с β2-субъединицей партнера CD18. Комплекс CD11b/CD18 экспрессируется на зрелых миелоидных клетках и широко используется в качестве раннего маркера дифференцировки моноцитов [Hmama Z., Nandan D., Sly L., Knutson K.L., Herrera-Velit P., Reiner N.E. 1999. 1α,25-Dihydroxyvitamin D3-induced myeloid cell differentiation is regulated by a vitamin D receptor-phosphatidylinositol 3-kinase signaling complex. J. Exp. Med. V. 190. P. 1583-1594].

1α,25-дигидроксивитамин D3 (VD3) является физиологическим агентом и лигандом суперсемейства ядерных рецепторов. Легко проникая через клеточную и ядерную мембраны, рецепторы такого типа воздействуют непосредственно на гены, играя роль факторов транскрипции, контролирующих экспрессию генов.

Плейотропные эффекты VD3 опосредуются, главным образом, через внутриклеточный рецептор витамина D (VDR). VDR является членом надсемейства ядерных стероидов и рецепторов ретиноевой кислоты. Таким образом, он функционирует как лиганд-зависимый фактор транскрипции, регулирующий активацию генов-мишеней витамина D. На молекулярном уровне VDR активизирует свои гены-мишени, взаимодействуя со специфическими последовательностями ДНК, существующими в качестве элементов витамин-D-реагирования (VDR), называемыми "genomicaction" [Hmama Z., Nandan D., Sly L., Knutson K.L., Herrera-Velit P., Reiner N.E. 1999. 1α,25-Dihydroxyvitamin D3-induced myeloid cell differentiation is regulated by a vitamin D receptor-phosphatidylinositol 3-kinase signaling complex. J. Exp. Med. V. 190. P. 1583-1594].

В попытках определения молекулярных механизмов регулирования клеточных ответов на VD3 рассматривалась возможность существования альтернативных путей передачи сигналов к классической программе действия генома. Действительно, в течение последнего десятилетия экспериментальные данные для "негеномной" передачи сигналов имеют концепцию эксклюзивного VDR-опосредованного геномного действия. Например, VD3 стимулирует быстрое образование вторичных мессенджеров, в том числе керамидов, цАМФ, инозитов, высвобождение катионов кальция и активирует различные протеинкиназы, включая протеинкиназу С, Raf, митоген-активированный белок (МАР-киназу) и Src-семейство киназ. Тем не менее, физиологическое значение негеномной передачи сигналов само по себе или относительно VDR-опосредованного геномного действия до сих пор неясно. Кроме того, не известно, взаимодействует ли VD3 с классическим VDR для негеномной передачи сигналов или существует система альтернативных рецепторов [Nishizuka Y. Protein kinase С and lipid signaling for sustained cellular responses. FASEB. J. 1995. V. 9. P. 484-496].

Обработка с помощью VD3 увеличивает поверхностную экспрессию CD11b и CD14 на HL-60, U937 и ТНР-1 клетках [Hmama Z., Nandan D., Sly L., Knutson K.L., Herrera-Velit P., Reiner N.E. 1999. 1α,25-Dihydroxyvitamin D3-induced myeloid cell differentiation is regulated by a vitamin D receptor-phosphatidylinositol 3-kinase signaling complex. J. Exp. Med. V. 190. P. 1583-1594].

Из литературных данных известно, что эндотоксины (токсичные липополисахариды) усиливают дифференцирующую активность ряда агентов. Эндотоксин-содержащие бактериальные вакцины проявляют терапевтическую активность у пациентов с острой миебластной лейкемией и узловой бластомой [Kempin S., Cirrincione C., Straus D.S., et al. 1981. Improved Remission Rate and Duration in Nodular Non-Hodgkin's Lymphoma (NNHL) with the Use of Mixed Bacterial Vaccine (MBV). Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. V. 22. P. 514]. Эндотоксины могут вызывать дифференциацию лейкемических клеток in vitro, индуцируя в этих клетках продукцию эндогенных факторов дифференцировки [Falk A., Sachs L. Clonal regulation of the induction of macrophage- and granulocyte-inducing proteins for normal and leukemic myeloid cells. Int. J. Cancer. 1980. V. 26. P. 595-601]. Предполагается, что эндотоксины индуцируют в крови раковых больных наработку GM-DF (дифференцирующий фактор GM), который совместно с соответствующими витаминами дифференцируют лейкозные клетки. Добавление сыворотки этих больных в культуральную среду индуцирует дифференцировку клеток мышей Balb/c с миеломоноцитарной лейкемией WEHI-3 [Moore M.A.S., Gabrilove J., Sheridan A.P. Therapeutic significance of serum factors inhibiting proliferation and inducing differentiation of myeloid leukemic cells. Blood Cells. 1983. V. 9. P. 125-137].

Относительно недавно получены доказательства, что эндотоксины дифференцируют остеокласты. Показано, что следы эндотоксина на титановых частицах ортопедических имплантантов индуцируют у пациентов дифференциацию остеокластов и наработку провоспалительных цитокинов, вызывая усиленное разрушение костной ткани [Yanming В., VanDeMotter R.R., Ragab А.А., Goldberg V.M., Anderson J.M., Greenfield E.M. Titanium Particles Stimulate Bone Resorption by Inducing Differentiation of Murine Osteoclasts. J. Bone Joint. Surg. Am. 2001. V. 83. P. 501-501].

Задача изобретения - физиологическое, практически не токсичное средство для дополнительной дифференцировки моноцитоподобных клеток, дифференцированных 1α,25-дигидроксивитамином D3.

Поставленная задача решается нетоксичным липополисахаридом из фототрофной бактерии Rhodobacter capsulatus PG.

Данный штамм R. capsulatus PG депонирован Всероссийской коллекцией микроорганизмов ИБФМ РАН [Свидетельство о депонировании штамма Rhodobacter capsulatus PG. Регистрационный номер ВКМ В-2381 Д, 21.12.2005].

Ранее известно использование штамма R. capsulatus PG в качестве продуцента липополисахарида, антагониста эндотоксинов [Прохоренко И.Р., Грачев С.В., Зубова С.В. Штамм Rhodobacter capsulatus PG - продуцент липополисахарида, антагониста эндотоксинов. Патент на изобретение RU 2392309 С1, 24.11.2008], а также средства для дифференцировки моноцитоподобных клеток [Прохоренко И.Р., Грачев С.В., Зубова С.В., Кабанов Д.С. Средство для дифференцировки моноцитоподобных клеток. Заявка на изобретение RU 2014138171, 22.09.2014].

Нетоксичный ЛПС R. capsulatus PG исследовался в качестве дополнительного фактора при дифференцировке 1α,25-дигидроксивитамином D3 клеток моноцитарной линии ТНР-1 в моноциты и макрофаги. Дифференцирующую активность ЛПС исследовали по экспрессии и соотношению поверхностных рецепторов (CD11b и CD14), а также по изменению фагоцитарной способности ТНР-1 клеток.

1. Исследование влияния ЛПС R. capsulatus PG в концентрации 500 нг/мл на изменение уровня и соотношения поверхностных рецепторов (TLR4, CD11b и CD14) ТНР-1 клеток, дифференцированных 1α,25-дигидроксивитамином D3.

Объектом исследования служила моноцитарная линия клеток ТНР-1 из коллекции ATCC®TIB™ 202 (США). Клетки ТНР-1 культивировали в среде RPMI 1640 (Sigma), содержащей 2 ммоль/л L-глутамина, 100 Ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, (L-Glutamin-penicillin-streptomycin solution, Sigma) и 10% инактивированной бычьей сыворотки (Hyclon) во флаконах для культивирования объемом 25 см2, 50 мл (Orange Scientific) в СО2-инкубаторе (Jouan, Франция) при температуре 37°С и 5% CO2. Жизнеспособность, определяемая по окрашиванию клеток трипановым синим, составляла в среднем 94%.

Для дифференциации ТНР-1 клеток 106 кл/мл в среде RPMI 1640 с добавлением антибиотиков и 10% сыворотки инкубировали с 1α,25-дигидроксивитамином D3 в концентрации 10-7 М в течение 72-х часов в CO2-инкубаторе при температуре 37°С и 5% CO2. Жизнеспособность, определяемая по окрашиванию клеток трипановым синим, составляла в среднем 92%.

К суспензии клеток ТНР-1, дифференцированных 1α,25-дигидроксивитамином D3, в среде RPMI 1640 (106 кл/мл) с 10% сывороткой без антибиотиков добавляли водный раствор ЛПС R. capsulatus PG в конечной концентрации 500 нг/мл и инкубировали 24 ч в CO2-инкубаторе при температуре 37°С и 5% СО2. Жизнеспособность, определяемая по окрашиванию клеток трипановым синим, составляла в среднем 96%.

В работе использовали антитела к CD14- и CD11b-рецепторам, меченые флуоресцентной меткой: Alexa Fluor 488 anti-human CD14 (Clone HCD14), Alexa Fluor 488 anti-human CD11b (Clone ICRF44) (BioLegend).

После инкубации клеток с ЛПС R. capsulatus PG в конечной концентрации 500 нг/мл в течение 24 ч в CO2-инкубаторе при температуре 37°C и 5% CO2, ТНР-1 клетки отделяли от среды культивирования центрифугированием и ресуспендировали в буфере для окрашивания (Cell Staining Buffer, BioLegend) в расчете 105-106 клеток в 100 мкл буфера.

Для исключения неспецифического связывания антител с исследуемыми рецепторами в каждый образец добавляли по 5 мкл блокирующего буфера для Fc-рецепторов (Human Tru Stain FcX™, BioLegend) и инкубировали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем в образцы добавляли по 5 мкл раствора соответствующих антител и инкубировали в течение 30 мин при 4°C. Далее 2 раза отмывали Cell Staining Buffer (по 2 мл), ресуспендировали в 400 мкл этого же буфера и переносили в пробирку для цитофлуориметрии.

Анализ образцов проводили с помощью проточного цитофлуориметра EPICS XL-MCL (Beckman Coulter, США). Уровень поверхностной рецепции ТНР-1 клеток оценивали по величине средней интенсивности флуоресценции (MnIX) образца. В каждом образце просчитывалось 6000 клеток.

Фиг. 1. Изменение уровня CD14 рецептора на поверхности ТНР-1 клеток, дифференцированных 1α,25-дигидроксивитамином D3, после инкубации с ЛПС R. capsulatus PG, n=7.

Анализ результатов таблицы 1 и фиг. 1 показывает, что ЛПС R. capsulatus PG заметно усиливает экспрессию CD11b- и CD14-рецепторов на поверхности ТНР-1 клеток, предварительно дифференцированных 1α,25-дигидроксивитамином D3, что свидетельствует о дополнительной дифференцировке ТНР-1 клеток под влиянием ЛПС R. capsulatus PG.

2. Исследование влияния ЛПС R. capsulatus PG в концентрации 500 нг/мл на изменение фагоцитарной активности ТНР-1 клеток, дифференцированных 1α,25-дигидроксивитамином D3.

Для определения фагоцитарной активности ТНР-1 клеток разной степени дифференцировки использовали BODIPY FL conjugate Escherichia coli (K-12 strain) BioParticles (Invitrogen), ресуспендированных в фосфатно-солевом буфере (ФСБ) pH 7,4 (конечная концентрация 20 мг/мл) с добавлением 2 мМ азида натрия и с содержанием клеток 6×109 кл/мл.

Для опсонизации BODIPY FL conjugate Е. coli BioParticles смешивали равные объемы суспензии BioParticles и опсонизирующего реагента (Е. coli BioParticles opsonizing reagent, Invitrogen) и инкубировали при 37°C в течение 1 ч. Проводили отмывку 2-3 раза с помощью ФСБ без азида натрия. Осаждение BioParticles проводили центрифугированием при 800-1500 g в течение 15-20 мин.

К ТНР-1 клеткам (106 кл/100 мл среды RPMI 1640 с 10% сывороткой без антибиотиков) разной степени дифференцировки добавляли по 1 мкл опсонизированных BioParticles (6×106 клеток). Соотношение клетки : бактерии - 1:6. Образцы инкубировали при 37°C в течение 30 мин. Клетки осаждали центрифугированием при 300 g в течение 5 мин при 4°C.

Для гашения внешней флюоресценции в каждый образец добавляли по 100 мкл охлажденного раствора трипанового синего (Trypan blue, Invitrogen, 1 ml, 1,25 mg/ml in citrate-balanced salt solution, pH 4,4) и инкубировали в течение 1 мин при комнатной температуре. Клетки дважды отмывали 2 мл охлажденного Cell Staining Buffer (BioLegend) и осаждали центрифугированием при 300 g в течение 5 мин при 4°C. Осадок ресуспендировали в 400 мкл Cell Staining Buffer.

Анализ образцов проводили на проточном цитофлуориметре EPICS XL-MCL (Beckman Coulter, США). Фагоцитарную активность клеток оценивали по средней величине интенсивности флуоресценции (MnI X). Результаты представлены на фиг. 2.

Фиг. 2. Фагоцитарная активность ТНР-1 клеток разной степени дифференцировки, n=9.

Полученные данные показывают, что ЛПС R. capsulatus PG снижает фагоцитарную активность ТНР-1 клеток, дифференцированных 1α,25-дигидроксивитамином D3, что свидетельствует об изменении направленности дифференцировки ТНР-1 клеток в сторону моноцитов.

На основании полученных результатов по изменению экспрессии CD11b- и CD14-рецепторов на поверхности ТНР-1 клеток, предварительно дифференцированных 1α,25-дигидроксивитамином D3, под воздействием нетоксичного ЛПС R. capsulatus PG, а также по изменению фагоцитарной активности этих клеток, следует вывод, что нетоксичный ЛПС R. capsulatus PG может выступать в качестве нетоксичного фактора, усиливающего дифференцирующую активность 1α,25-дигидроксивитамина D3, при дифференцировке моноцитоподобных клеток по моноцитарному типу.

Предложенное свойство может найти применение при создании лекарственных препаратов, в частности, для онкологии.

Применение липополисахарида, продуцируемого штаммом фототрофной бактерии Rhodobacter capsulatus PG, депонированным в ВКМ ИБФМ РАН под номером В-2381 Д, в качестве нетоксичного фактора, усиливающего дифференцирующую активность 1α,25-дигидроксивитамина D3 при дифференцировке моноцитоподобных клеток в моноциты.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биохимии. Предложен иммобилизованный биокатализатор для получения бактериальной целлюлозы.

Группа изобретений относится к биотехнологии, в частности к усовершенствованному способу изготовления альгинатного гидрогеля с применением липазы, субстрата, гидролизуемого липазой, альгината и карбоната, высвобождающего двухвалентные катионы.
Изобретение относится к области химии биополимеров. Описан способ получения низкомолекулярного хитозана и олигомеров хитозана методом химической деполимеризации, включающий гидролиз хитозана в присутствии кислоты с последующими фильтрацией, фракционированием, очисткой и сушкой продуктов, отличающийся тем, что гидролиз хитозана проводят 2,5-12,5% разбавленной азотной кислотой при температуре 70°С с последующим разделением гидролизата на две фракции - осадок низкомолекулярного хитозана и маточный раствор, далее из маточного раствора при добавлении изопропилового спирта и охлаждении осаждают олигомеры хитозана, затем оба продукта промывают изопропиловым спиртом и высушивают на воздухе, окончательно продукты деполимеризации хитозана перерастворяют в воде и высушивают лиофильно.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены способ получения капсульного полисахарида Neisseria meningitidis серогруппы X, его конъюгат с белком-носителем и иммуногенная композиция на основе конъюгата для приготовления вакцин против менингита.

Изобретение относится к области биотехнологии. Штамм Haemophilus influenzae SPB тип b, обладающий высокоактивной продуктивностью капсульного полисахарида полирибозилрибитолфосфата, депонирован в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ - Оболенск» под номером В-7884.

Настоящее изобретение относится к способу переработки лигноцеллюлозы и может быть использовано в химической промышленности. Предложенный способ включает подготовку лигноцеллюлозной биомассы, которая содержит первую твердую фракцию, содержащую целлюлозу и лигнин, первую жидкую фракцию; отделение указанной первой твердой фракции от указанной первой жидкой фракции; смешивание указанной первой твердой фракции с водой с образованием суспензии; где указанная суспензия имеет рН от рН 3,0 до рН 4,5; повышение указанного рН указанной суспензии на величину от 0,5 единицы рН до 5,0 единиц рН, чтобы получить суспензию со скорректированным рН; где указанная суспензия со скорректированным рН имеет рН от рН 5,0 до рН 8,0; необязательно, предварительное нагревание указанной суспензии со скорректированным рН до температуры, которая ниже критической точки воды; приведение указанной суспензии со скорректированным рН в контакт с текучим веществом для второй реакции, содержащим сверхкритическое или близкое к сверхкритическому текучее вещество, с получением реакционной смеси, которая содержит вторую твердую фракцию, содержащую лигнин; и вторую жидкую фракцию, содержащую растворимый С6-сахарид, выбранный из группы, состоящей из целлоолигосахаридов, глюкозы, галактозы, маннозы, фруктозы и их смесей; где указанное сверхкритическое или близкое к критическому текучее вещество содержит воду и, необязательно, СО2 при температуре, равной 300°С или выше, и давлении, по меньшей мере достаточно высоком для того, чтобы гарантировать, что все текучее вещество для второй реакции находится в жидкой фазе или сверхкритической фазе; и где указанное приведение указанной суспензии со скорректированным рН в контакт с указанным текучим веществом для второй реакции имеет длительность больше чем 2 секунды; необязательно, снижение температуры указанной реакционной смеси до температуры ниже 280°С; и необязательно, гидролиз указанной второй жидкой фракции с образованием С6-сахарида, выбранного из группы, состоящей из С6-олигосахарида, имеющего звенья с меньшей степенью полимеризации, глюкозы, галактозы, маннозы, фруктозы и их смесей.

Настоящее изобретение относится к способу гидролиза лигноцеллюлозы и может быть использовано в химической промышленности. Предложенный способ включает предоставление фракционированной лигноцеллюлозной биомассы, содержащей фракцию твердых веществ, содержащую необязательно нерастворимый С5-олигосахарид, целлюлозу и лигнин, и первую жидкую фракцию при первой температуре не более 240°С, содержащую растворимые C5-сахариды, выбранные из C5-олигосахаридов, ксилозы, арабинозы, ликсозы, рибозы и их смесей; контактирование указанной первой жидкой фракции с твердым кислотным катализатором с образованием второй жидкой фракции при температуре не более 240°С; где указанная вторая температура меньше, чем указанная первая температура; где указанное контактирование сдвигает молекулярно-массовое распределение указанных растворимых C5-сахаридов к меньшей средней молекулярной массе; необязательно гидролиз указанной второй жидкой фракции с использованием кислоты или фермента с получением C5-сахаридов, выбранных из C5-олигосахаридов, содержащих меньше мономерных звеньев, ксилозы, арабинозы, ликсозы, рибозы и их смесей; где указанную фракционированную лигноцеллюлозную биомассу получают приведением указанной целлюлозной биомассы в контакт с первой реакционной жидкостью, содержащей горячую воду под давлением и необязательно диоксид углерода; где указанная первая реакционная жидкость дополнительно содержит кислоту, где указанная лигноцеллюлозная биомасса содержит древесину мягких пород; где указанная первая реакционная жидкость находится при температуре менее 100°С под давлением, достаточным для поддержания указываемой первой реакционной жидкости в жидкой форме.

Настоящее изобретение относится к способам переработки лигноцеллюлозной биомассы. Предложенный способ включает подачу лигноцеллюлозной биомассы, включающей первую твердую фракцию целлюлозы и лигнина и первую жидкую фракцию; необязательно, разделение указанных твердой и жидкой фракций; смешение указанной твердой фракции с водой с образованием пульпы с предварительным нагреванием пульпы до 210°С-240°С при 225-250 бар; контактирование указанной пульпы со второй реакционной жидкостью с образованием второй реакционной смеси, включающей вторую твердую фракцию лигнина и вторую жидкую фракцию растворимого С6 сахарида, выбранного из С6 моносахаридов, С6 олигосахаридов и их смесей; где указанная вторая реакционная жидкость включает сверхкритическую воду и, необязательно, диоксид углерода и находится при температуре, по меньшей мере, 374,2°С и давлении, достаточном для поддержания указанной второй реакционной жидкости в сверхкритическом состоянии; понижение температуры указанной пульпы ниже 140°С; необязательно кислотный гидролиз указанной второй жидкой фракции с образованием композиции, включающей С6 сахарид, выбранный из С6 олигосахарида, имеющего меньшее число элементарных звеньев, глюкозы, галактозы, маннозы, фруктозы и их смесей.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения капсульного полисахарида с пневмококковым серотипом.

Предложен бактериальный макромолекулярный комплекс для профилактики или лечения воспалительного ревматизма и остеоартрита. Комплекс продуцирован штаммом бактерий Bifidobacterium longum CNCM I-3994.

Предложен способ получения продуктов ферментации из богатой углеводами паренхимной ткани растения. Способ включает обеспечение богатой углеводами паренхимной ткани растения, содержащей апопласт, при температуре сельскохозяйственной культуры от 5 до 40°С.
Изобретение относится к области косметологии и дерматологии и представляет собой способ получения композиции для использования в качестве дерматологического наполнителя в косметических и медицинских применениях в форме геля, включающей сшитый первый полимер, необязательно второй полимер, который может быть сшитым или несшитым, и воду, причем первый и второй полимеры выбирают из полисахарида, а способ включает по меньшей мере стадии (i), (ii) и (iv) и необязательно стадию (iii), где стадия (i) заключается в сшивание смеси, включающей в себя первый полимер и воду, стадия (ii) в завершение сшивания после сшивания на стадии (i), стадия (iii) необязательное смешивание продукта, полученного на стадии (ii), со вторым полимером, стадия (iv) заключается в диализе продукта, полученного на стадии (ii) или на стадии (iii), где стадия диализа (iv) включает стадии (iv.1)-(iv.3)(iv.1) экструдирование продукта, полученного на стадии (ii) или (iii), через первое сито и последующее экструдирование экструдированного через первое сито продукта через второе сито, в котором размер отверстий второго сита меньше, чем размер отверстий первого сита; или экструдирование продукта, полученного на стадии (ii) или (iii), через первое сито и последующее экструдирование экструдированного через первое сито продукта через второе сито, и последующее экструдирование экструдированного через второе сито продукта через третье сито, в котором размер отверстий второго сита меньше, чем размер отверстий первого сита, а размер отверстий третьего сита меньше, чем размер отверстий второго сита, где стадия (iv.2) представляет собой заполнение мембраны диализа продуктом, полученным на стадии (iv.1), стадия (iv.3) - обработку заполненной мембраны, полученной на стадии (iv.2), раствором для диализа.

Изобретение относится к производству формованного продукта из поперечно-сшитой гиалуроновой кислоты. Способ предусматривает получение субстрата гиалуроновой кислоты, растворенной в первой жидкой среде, которая представляет собой водный раствор, без какого-либо сшивания, осаждение субстрата гиалуроновой кислоты, подвергая его воздействию второй жидкой среды, содержащей один или более первых водорастворимых органических растворителей в количестве, обеспечивающем условия осаждения гиалуроновой кислоты без какого-либо сшивания.

Настоящее изобретение относится к способу получения гидрофобизированной гиалуроновой кислоты (формула I). Причем R представляет собой H+ или Na+ и R1 представляет собой H или -С(=O)CxHy или -C(=O)CH=CH-het, где x представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 17, и y представляет собой целое число в диапазоне от 11 до 35, и CxHy представляет собой неразветвленную или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную C5-C17 цепь, и het представляет собой гетероциклическую или гетероароматическую группу с произвольным содержанием атомов N, S или О, по меньшей мере с одной повторяющейся единицей, содержащей одну или несколько R1 -С(=O)CxHy или -C(=O)CH=CH-het групп, и где n находится в диапазоне от 12 до 4000.

Изобретение относится к способу получения производного полисахарида, включающий: (а) приведение по меньшей мере одного полисахарида, характеризующегося показателем кристалличности (CI), составляющим по меньшей мере 20%, измеряемым методом XRD, в контакт с по меньшей мере одним соединением при температуре не более 70°С; и (b) последующее приведение продукта, получаемого на стадии (а), в контакт с по меньшей мере одним ароматическим изоцианатом, причем ароматический изоцианат представляет собой полиизоцианат, выбранный из группы, содержащей: метилендифенилдиизоцианат, представленный в форме его 2,4'-, 2,2'- и 4,4'-изомеров, а также их смесей, смеси метилендифенилдиизоцианатов и их олигомеров, или их производные, имеющие уретановые, изоциануратные, аллофонатные, биуретные, уретониминные, уретдионные и/или иминооксадиазиндионные группы, а также их смеси с получением производного полисахарида, показатель кристалличности которого составляет по меньшей мере 50% от соответствующей величины по меньшей мере одного полисахарида.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности. Способ получения аргинин производного сульфатированного арабиногалактана включает взаимодействие кислой формы сульфата арабиногалактана в растворе бутанола с аргинином, растворенным в 70%-ном этаноле, при рН 8 реакционного раствора.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены способ получения капсульного полисахарида Neisseria meningitidis серогруппы X, его конъюгат с белком-носителем и иммуногенная композиция на основе конъюгата для приготовления вакцин против менингита.

Изобретение относится к пищевой и медицинской промышленности. Согласно предложенному способу экстракцию арабиногалактана проводят в течение 30-40 мин в ультразвуковой установке с частотой 27-42 кГц при температуре 20-30°C с гидромодулем 1.3-7 к сухой массе сырья, затем экстракт фильтруют, диспергируют методом ультразвукового распыления и концентрируют в приемнике до концентрации сухого вещества в пределах 20-40%.

Изобретение относится к богатой полисахаридами композиции, содержащей бета-глюкан, хитин и хитозан, извлеченные из клеточной стенки Saccharomyces cerevisiae из биомассы, представляющей собой побочный продукт процесса пивоварения.
Изобретение относится к пищевой промышленности. Способ получения водорастворимых олигосахаридов из опилок древесины лиственных пород деревьев включает экстрагирование олигосахаридов при температуре 170°С, отделение фильтрованием от опилок и центрифугирование.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и предназначено для консервативного лечения миомы матки. Комплексное консервативное лечение миомы матки осуществляют в два этапа: проводят предгормональную подготовку и назначают гормональные препараты.
© Патентный поиск, поиск патентов на изобретения - FindPatent.RU 2012-2024
Политика конфиденциальности 2016-11-09 2018-01-29T06:52:54
Наверх