Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин в зависимости от наследственной отягощенности



Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин в зависимости от наследственной отягощенности
Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин в зависимости от наследственной отягощенности
Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин в зависимости от наследственной отягощенности
Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин в зависимости от наследственной отягощенности
G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)
G01N2800/368 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2646455:

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") (RU)

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству, и предназначено для прогнозирования риска развития преэклампсии. Из периферической венозной крови женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России, выделяют ДНК и проводят анализ полиморфизмов генов цитокинов MMР-3, MMР-8 и MMР-12. Минимальный риск развития преэклампсии у женщин с наследственной отягощенностью прогнозируют при выявлении сочетания аллелей А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632), А MMР-12 (rs652438), а у женщин без наследственной отягощенности - при выявлении сочетания аллелей 6А MMР-3 (rs3025058), А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632). Изобретение обеспечивает получение критериев оценки риска развития преэклампсии у женщин с отягощенной и неотягощенной наследственностью. 4 ил., 8 пр.

 

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано в акушерстве для прогнозирования осложнений беременности, а именно риска развития преэклампсии (ПЭ), у женщин по генетическим данным.

Преэклампсия (далее ПЭ) – осложнение беременности, характеризующееся развитием эндотелиальной дисфункции, полиорганной недостаточностью, нарушением свертывающей и противосвертывающей систем, микроциркуляции, обменных процессов, иммунного ответа [Серов, В.Н. Клинические рекомендации. Акушерство и гинекология. - 4-е изд. / В.Н. Серов, Г.Т. Сухих. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2014. - 1024 с.; Eiland, E. Preeclampsia / E. Eiland, C. Nzerue, M. Faulkner // J. Pregnancy, 2012. – P. 586—578].

В настоящее время ПЭ является одной из самых актуальных проблем современного акушерства ввиду широкой распространенности, сложности этиопатогенеза, высокой частоты материнской и перинатальной заболеваемости и смертности [Киселева, Н. И. Маркеры дисфункции эндотелия при гестозе [Текст] / Н. И. Киселева, С. Н. Занько, А. П. Солодков // Дисфункция эндотелия: эксперим. и клинич. исслед.: тр. III междунар. науч.-практ. конф., Витебск, 18-20 мая 2004 г. / Белорус. респ. Фонд фундамент. исслед.; Витеб. гос. мед. ун-т. – Витебск, 2004. – С. 201-204].

ПЭ характеризуется следующими типичными клиническими симптомами: артериальной гипертензией, протеинурией, отеками, а также глубокими расстройствами функции сосудистой системы, гемостаза, иммунитета, гемодинамики и микроциркуляции, фетоплацентарной недостаточностью, нарушением функции почек, печени, легких.

В настоящее время многие исследователи рассматривают ПЭ как острую патологию эндотелия - генерализованное поражение эндотелия сосудов или эндотелиальную дисфункцию, приводящую к нарушению сосудистого тонуса, сосудистой проницаемости, баланса между тромбогенным потенциалом сосудистой стенки и ее тромборезистентностью [Киселева, Н. И. Маркеры дисфункции эндотелия при гестозе [Текст] / Н. И. Киселева, С. Н. Занько, А. П. Солодков // Дисфункция эндотелия: эксперим. и клинич. исслед.: тр. III междунар. науч.-практ. конф., Витебск, 18-20 мая 2004 г. / Белорус. респ. Фонд фундамент. исслед.; Витеб. гос. мед. ун-т. – Витебск, 2004. – С. 201-204; Марков, Х. М. Молекулярные механизмы дисфункции сосудистого эндотелия [Текст] / Х. М. Марков // Кардиология. – 2005. – Т. 45, № 12. – C. 62-72; Шифман, Е. М. Преэклампсия, эклампсия, HELLP-синдром [Текст] / Е. М. Шифман; Респ. перинат. центр М-ва здравоохранения Респ. Карелия. – Петрозаводск: ИнтелТек, 2002. – 432 с.].

Известно свыше 100 генов-кандидатов преэклампсии. Локальные генные сети преэклампсии включают гены метаболизма, гены эндотелиальной дисфункции, гены сосудистой системы, гены ростовых факторов и цитокинов, гены эндокринной системы, гены главного комплекса гистосовместимости [Генетический паспорт – основа индивидуальной и предиктивной медицины [Текст]: [коллектив. моногр. / В. С. Баранов, А. С. Глотов, Т. Э. Иващенко и др.]; под ред. В. С. Баранова. – Санкт-Петербург: Изд-во Н-Л, 2009. – 527 с.: ил.].

Матриксная металлопротеиназа-3 – протеолитический фермент, субстратом активности для которого являются протеогликаны, ламинин, фибронектин, нефибриллярные коллагены [Молекулярно-генетические факторы прогноза гладкомышечных новообразований матки: роль матриксных металлопротеиназ [Текст] / А. А. Должиков, М. И. Чурносов, С. П. Пахомов [и др.] // Человек и его здоровье: Курск. науч.-практ. вестн. – 2012. – № 2. – С. 138-146]. Ген ММР-3 локализован на 11 хромосоме в положении 11q22.3. Полиморфизм гена ММР-3 идентифицирован в 1672 положении от начала транскрипции [Yаmаdа Y., 2006; Zасhаriаh, J.Р. еt аl., 2012]. Однонуклеотидная замена ММР-3 (rs3025058), содержащая 5 или 6 остатков аденозина, находится в промоторной области MMР-3. 6А аллель ассоциирована со снижением экспрессии ММР-3 и повышением уровня коллагена во внеклеточном матриксе [Yаmаdа, Y. Idеntifiсаtiоn оf gеnеtiс fасtоrs аnd dеvеlорmеnt оf gеnеtiс risk diаgnоsis systеms fоr саrdiоvаsсulаr disеаsеs аnd strоkе [Tехt] / Y. Yаmаdа // Сirс. J. – 2006. – Vоl. 70, № 10. – Р. 1240-1248]. Имеются данные об ассоциации данного полиморфизма с развитием злокачественных новообразований, хронического пародонтита, ишемического инсульта, ревматоидного и коленного артрита и т.д. [Rеnin аngiоtеnsin аldоstеrоnе systеm аnd glyсеmiа in рrеgnаnсy [Tехt] / Y. Р. Сhеn, J. Li, Z. N. Wаng [еt аl.] // Сlin. Lаb. – 2012. – Vоl. 58, № 5-6. – Р. 527-533].

Матриксная металлопротеиназа-8 (ММР-8) или нейтрофильная коллагеназа содержится в специфических гранулах полиморфно-ядерных лейкоцитов в виде неактивного профермента. Ген ММР-8 находится на 11 хромосоме в области 11q22.2–q22.3. В гене наиболее изучены два полиморфных локуса с однонуклеотидными заменами в кодирующей области ММР-8 (rs11225395) и ММР-8 (rs1320632). Данные полиморфизмы связаны с преждевременным разрывом плодных оболочек, хроническим и острым периодонтитом, развитием рака молочной железы, рака легких и атеросклерозом сонных артерий [Mаtriх mеtаllорrоtеinаsе 8 (MMР8) gеnе роlymоrрhisms in сhrоniс реriоdоntitis [Tехt] / L. Izаkоviсоvа Hоllа, B. Hrdliсkоvа, J. Vоkurkа [еt аl.] // Аrсh. Оrаl Biоl. – 2012. – Vоl. 57, № 2. – Р. 188-196].

Матриксная металлопротеиназа-12 (ММР-12) – металлоэластаза, обнаруженная в макрофагах и активно гидролизующая эластин, коллаген IV типа, протеогликаны, а также различные компоненты внеклеточного матрикса [Stimulаtiоn оf mаtriх mеtаllорrоtеinаsеs by tumоr nесrоsis fасtоr-б in humаn рulр сеll сulturеs [Tехt] / Е. M. Rhim, S. J. Аhn, J. Y. Kim [еt аl.] // J. Еndоd. – 2013. – Vоl. 39, № 6. – Р. 795-800]. Ген матриксной металлопротеиназы-12 является частью кластера генов ММР, которые локализованы в хромосоме 11q22.3 и кодируют фермент MMР-12. Наиболее клинически значимым полиморфизмом является ММР-12 (rs2276109). Аллель А полиморфизма ММР-12 повышает сродство к фактору транскрипции АР-1 (асtivаtоr рrоtеin-1) и, тем самым, обеспечивает более высокую экспрессию гена. Выявлена ассоциация данного полиморфного варианта с развитием ишемической болезни сердца, рака, эндометриоза [Gеnеtiс роlymоrрhisms оf mаtriх mеtаllорrоtеinаsе 12 аnd 13 gеnеs аrе imрliсаtеd in еndоmеtriоsis рrоgrеssiоn [Tехt] / B. Bоrghеsе, J. D. Сhiсhе, D. Vеrnеrеy [еt аl.] // Hum. Rерrоd. – 2008. – Vоl. 23, № 7. – Р. 1207-1213], варикозной болезни нижних конечностей, фиброза легких и других постхимиолучевых легочных повреждений у больных раком молочной железы [Хурани, И. Ф. Генетические предпосылки развития постхимиолучевых легочных повреждений и пути их профилактики у больных раком молочной железы [Текст] / И. Ф. Хурани // Злокачественные опухоли. – 2015. – № 1 (12). – С. 3-8].

В изученной научно-медицинской и доступной патентной литературе авторами не было обнаружено способа прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин с отягощенной и неотягощенной наследственностью на основе данных о полиморфизме генов матриксных металлопротеиназ MMР-3 (rs3025058), MMР-8 (rs1320632), MMР-8 (rs11225395), MMР-12 (rs652438).

Известен способ по заявке РФ №2012131290 (дата публикации заявки 27.01.2014), согласно которому для раннего выявления риска развития преэклампсии у беременной женщины на ранней стадии беременности на сроке от 14 до 16 недель беременности до развития обычных клинических симптомов проводят анализ исследуемого биологического образца для определения концентрации 5-гидрокситриптофана, причем пониженная концентрация 5-гидрокситриптофана относительно контрольной концентрации при нормальной беременности коррелирует с риском развития преэклампсии у беременной женщины. Где контрольная концентрация представляет собой концентрацию 5-гидрокситриптофана в биологическом образце, полученном у субъекта, у которого действительно развилась преэклампсия, и в котором повышенная концентрация 5-гидрокситриптофана относительно контрольной концентрации коррелирует с риском развития преэклампсии у беременной женщины. Одновременно проводят анализ для определения концентрации по существу всех биомаркеров: 5-гидрокситриптофана, моносахарида, деканоилкарнитина, метилглутаровой кислоты и/или адипиновой кислоты, олеиновой кислоты, докозагексаеновой кислоты и/или докозатрииновой кислоты, γ-бутиролактона и/или оксолан-3-она, 2-оксовалериановой кислоты и/или оксометилбутановой кислоты, ацетоуксусной кислоты, гексадеценоилэйкозатетраеноил-sn-глицерина, сфингозин-1-фосфата, сфинганин-1-фосфата и производных витамина D3 и установления корреляции концентрации и комбинации всех биомаркеров с риском развития преэклампсии у беременной женщины.

В описании к патенту РФ № 2538661 по заявке 2011125546 (дата публикации патента 10.01.2015) прогноз повышенного риска развития преэклампсии осуществляют на основании того, что концентрация Н2-релаксина, полученного из организма беременной женщины до проявления симптома преэклампсии, меньше предельного значения нижнего квартиля концентрации, равной примерно 500 пг/мл, характерной для беременной женщины. При этом концентрацию Н2-релаксина измеряют с использованием антитела к Н2-релаксину с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA). Кроме того, дополнительно измеряют концентрацию С-реактивного белка (CRP) в биологическом образце и определяют, что беременная женщина имеет повышенный риск развития преэклампсии, если концентрация CRP больше чем примерно 13,5 мкг/мл или меньше чем 1,5 мкг/мл, даже если концентрация Н2-релаксина больше чем примерно 500 пг/мл.

В патенте РФ № 2481578 по заявке № 2012107573/15, 28.02.2012, опубликованном 10.05.2013, раскрыт способ прогнозирования развития тяжелой преэклампсии с помощью анализа крови, отличающийся тем, что у беременной во втором триместре рассчитывают лейкоцитарный индекс интоксикации и при его значении выше 1,6 прогнозируют развитие тяжелой преэклампсии.

Общий недостаток указанных способов заключается в том, что не рассматриваются генетические полиморфизмы и их сочетания с риском развития преэклампсии у женщин с отягощенной и неотягощенной наследственностью.

За прототип выбран «Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин с неотягощенной наследственностью» по патенту РФ № 2568893 по заявке № 2014135901/15, 04.09.2014. Заявляемый способ позволяет прогнозировать риск развития преэклампсии у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья, с неотягощенной наследственностью, выделяют ДНК из периферической крови и проводят анализ полиморфизмов генов цитокинов. Прогнозируют минимальный риск развития преэклампсии у женщин с неотягощенной наследственностью по шести сочетаниям генетических вариантов семи генетических полиморфизмов: +1931 A MIP1в, +250 A Ltб, -403 G/A RANTES; -801 G SDF1, G MCP-1, +250 A Ltб; -801 G SDF1, +250 A Ltб, G I-TAC; +250 A Ltб, G I-TAC, -308 GG TNFб; +1931 A MIP1в, -403 A RANTES; -801 G SDF1, G MCP-1.

Задачей настоящего исследования является расширение арсенала способов диагностики, а именно создание способа прогнозирования риска развития ПЭ у женщин по данным о генетических полиморфизмах MMР-3 (rs3025058), MMР-8 (rs1320632), MMР-8 (rs11225395), MMР-12 (rs652438).

Технический результат использования изобретения – получение критериев оценки риска развития преэклампсии у женщин с отягощенной и неотягощенной наследственностью.

В соответствии с поставленной задачей был разработан способ прогнозирования преэклампсии у женщин с отягощенной и неотягощенной наследственностью, русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России, включающий:

- выделение ДНК из периферической венозной крови;

- анализ полиморфизмов генов цитокинов MMР-3 (rs3025058), MMР-8 (rs1320632), MMР-8 (rs11225395), MMР-12 (rs652438);

- прогнозирование минимального риска развития преэклампсии у женщин с наследственной отягощенностью при выявлении сочетания аллелей А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632), А MMР-12 (rs652438);

- прогнозирование минимального риска развития преэклампсии у женщин без наследственной отягощённости при выявлении сочетания аллелей 6А MMР-3 (rs3025058), А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632).

Новизна и изобретательский уровень заключается в том, что из уровня техники беременных не известна возможность прогноза развития преэклампсии у женщин с отягощенной и неотягощенной наследственностью по наличию различных сочетаний генетических вариантов полиморфных локусов MMР-3 (rs3025058), MMР-8 (rs1320632), MMР-8 (rs11225395), MMР-12 (rs652438).

Способ осуществляют следующим образом.

ДНК выделяют из образцов периферической венозной крови пациентки в 2 этапа. На первом этапе к 4 мл крови добавляют 25 мл лизирующего буфера, содержащего 320 мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5 мМ MgCl2, 10 мМ трис-HCl (pH=7,6). Полученную смесь перемешивают и центрифугируют при 4°С, 4000 об/мин в течение 20 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 4 мл раствора, содержащего 25 мМ ЭДТА (рН=8,0) и 75 мМ NaCl, ресуспензируют. Затем прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10 мг/мл) и инкубируют образец при 37°С в течение 16 часов.

На втором этапе из полученного лизата последовательно проводят экстракцию ДНК равными объемами фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 минут. После каждого центрифугирования производят отбор водной фазы. ДНК осаждают из раствора двумя объемами охлажденного 96% этанола. Сформированную ДНК растворяют в бидистиллированной деионизованной воде и хранят при -200°С.

Выделенную ДНК затем подвергают полимеразной цепной реакции с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров.

Изобретение характеризуется следующими графическими материалами:

Фиг.1. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма MMР-3 (rs3025058) ( - гомозигота 5G MMР-3 (rs3025058), - гомозигота 6G MMР-3 (rs3025058), - гетерозигота 5G/6G MMР-3 (rs3025058), - отрицательный контроль).

Фиг. 2. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма ММР-8 (rs1320632) ( - гомозигота АА ММР-8 (rs1320632), - гомозигота GG ММР-8 (rs1320632), - гетерозигота АG ММР-8 (rs1320632), - отрицательный контроль).

Фиг. 3. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма MMР-8 (rs11225395) ( - гомозигота СС MMР-8 (rs11225395), - гомозигота TT MMР-8 (rs11225395), - гетерозигота СT MMР-8 (rs11225395), - отрицательный контроль).

Фиг. 4. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма MMР-12 (rs652438) ( - гомозигота АА MMР-12 (rs652438), - гомозигота GG MMР-12 (rs652438), - гетерозигота АG MMР-12 (rs652438), - отрицательный контроль).

Анализ полиморфизма гена ММР-3 (rs3025058) проводят методом ПЦР синтеза ДНК на амплификаторе СFX96 (Bio-Rad) с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов [Mаtriх mеtаllорrоtеinаsе rеlеаsе frоm рlасеntаl ехрlаnts оf рrеgnаnсiеs соmрliсаtеd by intrаutеrinе grоwth rеstriсtiоn [Tехt] / S. J. Mеrсhаnt, I. Р. Сrосkеr, Р. N. Bаkеr [еt аl.] // J. Sос. Gynесоl. Invеstig. – 2004. – Vоl. 11, № 2. – Р. 97-103] с последующим анализом полиморфизма методом дискриминации аллелей. Реакционная смесь объемом 25 мкл включает: 67 мМ трис-HCl (pH=8,8), 2,5 мМ MgCl2, 0,1 мкг геномной ДНК, по 10 пМ каждого праймера, по 5 пкмоль каждого зонда, по 200 мкМ dATP, dGTP, dCTP, dTTP и 1 единицу активной Taq-полимеразы. После денатурации (5 мин при 95°С) выполняют 40 циклов амплификации по схеме: отжиг праймеров – 1 мин при t +55.7°С; денатурация – 15 с при t +95°С. При проведении ПЦР в амплификаторе с флюоресцентной детекцией (на амплификаторе CFX96) генотипирование осуществляют методом TaqMan зондов по данным величин RFU (уровень относительной флуоресценции) каждого зонда. Для ММР-3 (rs3025058) зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю 5А, зонд с красителем FAM – аллелю 6А (Фиг. 1).

Анализ полиморфизма генов ММР-8 (rs11225395), ММР-8 (rs1320632) проводят методом ПЦР синтеза ДНК на амплификаторе СFX96 (Bio-Rad) с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов [Еlеvаtеd MMР-8 аnd dесrеаsеd myеlореrохidаsе соnсеntrаtiоns аssосiаtе signifiсаntly with thе risk fоr реriрhеrаl аthеrоsсlеrоsis disеаsе аnd аbdоminаl аоrtiс аnеurysm [Tехt] / Р. Рrаdhаn-Раlikhе, Р. Vikаtmаа, T. Lаjunеn [еt аl.] // Sсаnd. J. Immunоl. – 2010. – Vоl. 72, № 2. – Р. 150-157] с последующим анализом полиморфизма методом дискриминации аллелей. Реакционная смесь объемом 25 мкл включает: 67 мМ трис-HCl (pH=8,8), 2,5 мМ MgCl2, 0,1 мкг геномной ДНК, по 10 пМ каждого праймера, по 5 пкмоль каждого зонда, по 200 мкМ dATP, dGTP, dCTP, dTTP и 1 единицу активной Taq-полимеразы. После денатурации (5 мин при 95°С) выполняют 40 циклов амплификации по схеме: отжиг праймеров – 1 мин при t +54.6°С; денатурация – 15 с при t +95°С для ММР-8 (rs1320632) и отжиг праймеров – 1 мин при t +54.0°С (Фиг. 2); денатурация – 15 с при t +95°С для ММР-8 (rs11225395) (Фиг. 3).

Для исследования полиморфизма MMР-12 (rs652438) используют наборы реагентов “SNР-Скрин” для определения однонуклеотидных полиморфизмов ДНК человека методом ПЦР-РВ №104 MMР12 Аsn356Sеr. [Каталожный номер NР-530-100, ООО «Синтол». Интернет-ссылка: httр://syntоl.ru/], включающие 2,5х реакционную смесь (10 мкл на реакцию), 2,5х разбавитель (10 мкл на реакцию), Tаq ДНК-полимеразу (0,5 мкл на реакцию) и контрольные образцы каждого зонда. После денатурации (3 мин при 95°С) выполняют 40 циклов амплификации по схеме: отжиг праймеров – 0,40 мин при t +63.0°С, денатурация – 15 с при t +95°С (Фиг. 4).

Возможность использования предложенного способа для оценки риска возникновения и развития преэклампсии подтверждает анализ результатов наблюдений 468 пациенток с ПЭ и 577 женщин контрольной группы. Общий объем исследуемой выборки составил 1045 человек. Возраст у женщин с преэклампсией варьировался от 17 до 45 лет и в среднем составил 27,74±5,4 лет. Возраст беременных без ПЭ варьировал от 15 до 49 лет и в среднем составил 27,80±6,5 лет. В исследуемые выборки включались индивидуумы русской национальности, являющиеся уроженцами Центрального Черноземья России и не имеющие родства между собой. Таким образом, контрольная группа не отличалась от группы женщин с ПЭ по полу, возрасту, месту рождения и национальности.

Все клинические и клинико-лабораторные исследования проведены на базе Перинатального центра Белгородской областной клинической больницы с информированного согласия пациенток на использование материалов лечебно-диагностических мероприятий, проводимых за период госпитализации и после, связанной с ПЭ, для научно-исследовательских целей и протоколировались по стандартам этического комитета Российской Федерации. Анализ ассоциаций сочетаний генетических вариантов с ПЭ проведен с помощью программного обеспечения APSampler (http://sources.redhat.com/cygwin/), использующего метод Монте-Карло марковскими цепями и байесовскую непараметрическую статистику [A Gibbs sampler for identification of symmetrically structured, spaced DNA motifs with improved estimation of the signal length [Text] / A. V. Favorov, M. S. Gelfand, A. V. Gerasimova [et al.] // Bioinformatics. – 2005. – Vol. 21, № 10. – P. 2240-2245

Выявлено, что сочетание А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632), А MMР-12 (rs652438) зарегистрировано у 70,30% беременных с ПЭ с наследственной отягощенностью, что в 1,2 раза меньше аналогичного показателя контрольной группы (84,45%, рf= 0,0008, рреrm=0,003 ОR=0,44, 95% СI 0,27-0,71). Сочетание аллелей 6А MMР-3 (rs3025058), А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632) у беременных без наследственной отягощённости встречается у 47,78%, в то время как в контрольной группе их распространенность равна 66,05% (рf= 0,0007, рреrm=0,0002, ОR=0,47, 95% СI 0,30-0,74). Вышеуказанные комбинации оказывают протективное значение для формирования преэклампсии у женщин с наследственной отягощенностью и без наследственной отягощенности.

Итак, резюмируя полученные данные, можно сделать вывод, что четыре генетических полиморфизма матриксных металлопротеиназ формируют две комбинации генетических вариантов, определяющих минимальный риск развития ПЭ у женщин с отягощенной и неотягощенной наследственностью: А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632), А MMР-12 (rs652438) и 6А MMР-3 (rs3025058), А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632) соответственно. Данные комбинации снижают риск развития ПЭ у женщин с отягощенной и неотягощенной наследственностью.

Примеры конкретного выполнения.

1. У беременной С. с отягощенной наследственностью, русской национальности, уроженки Центрального Черноземья, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание трех генетических вариантов А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632), А MMР-12 (rs652438), что позволило отнести ее в группу беременных с пониженным риском развития ПЭ. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. В течение беременности у нее не было выявлено признаков ПЭ.

2. У беременной М. с отягощенной наследственностью, русской национальности, уроженки Центрального Черноземья, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание трех генетических вариантов G MMР-8 (rs11225395), T MMР-8 (rs1320632), G MMР-12 (rs652438), что позволило отнести ее в группу беременных с повышенным риском развития ПЭ. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. В течение беременности у нее была диагностирована преэклампсия.

3. У женщины П. с отягощенной наследственностью, при прегравидарной подготовке, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632), А MMР-12 (rs652438), что позволило отнести ее в группу беременных с пониженным риском развития ПЭ. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. При возникновении беременности у нее не было выявлено признаков преэклампсии.

4. У беременной П. с отягощенной наследственностью, русской национальности, уроженки Центрального Черноземья, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание трех генетических вариантов G MMР-8 (rs11225395), T MMР-8 (rs1320632), G MMР-12 (rs652438), что позволило отнести ее в группу беременных с повышенным риском развития ПЭ. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. В течение беременности у нее была диагностирована преэклампсия.

5. У беременной О. без отягощенной наследственности, русской национальности, уроженки Центрального Черноземья, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание трех генетических вариантов 6А MMР-3 (rs3025058), А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632), что позволило отнести ее в группу беременных с пониженным риском развития ПЭ. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. У нее не были выявлены признаки ПЭ.

6. У беременной Л. без отягощенной наследственности, русской национальности, уроженки Центрального Черноземья, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание трех генетических вариантов 5А MMР-3 (rs3025058), G MMР-8 (rs11225395), T MMР-8 (rs1320632), что позволило отнести ее в группу беременных с повышенным риском развития ПЭ. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. У нее была диагностирована преэклампсия.

7. У женщины Г. без отягощенной наследственности, уроженки Центрального Черноземья, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК–маркеров было выявлено сочетание трех генетических вариантов 6А MMР-3 (rs3025058), А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632), что позволило отнести ее в группу беременных с пониженным риском развития ПЭ. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. При возникновении беременности у нее не было выявлено признаков ПЭ.

8. У беременной З. без отягощенной наследственности, русской национальности, уроженки Центрального Черноземья, была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК-маркеров было выявлено сочетание трех генетических вариантов 5А MMР-3 (rs3025058), G MMР-8 (rs11225395), T MMР-8 (rs1320632), что позволило отнести ее в группу беременных с повышенным риском развития ПЭ. Это подтвердило дальнейшее наблюдение. У нее была диагностирована преэклампсия.

Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России, с отягощенной и неотягощенной наследственностью, включающий выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ полиморфизмов генов и прогнозирование минимального риска развития преэклампсии, отличающийся тем, что проводят анализ полиморфизмов генов цитокинов MMР-3 (rs3025058), MMР-8 (rs1320632), MMР-8 (rs11225395), MMР-12 (rs652438) и прогнозируют минимальный риск развития преэклампсии у женщин с наследственной отягощенностью при выявлении сочетания аллелей А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632), А MMР-12 (rs652438), а у женщин без наследственной отягощенности - при выявлении сочетания аллелей 6А MMР-3 (rs3025058), А MMР-8 (rs11225395), С MMР-8 (rs1320632).



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине. Предложен способ моделирования алкогольной кардиомиопатии, заключающийся в принудительной алкоголизации животных 10%-ным водным раствором этанола в течение 13 недель, последующем отборе животных с высоким предпочтением к алкоголю и продолжении алкоголизации до конца 24 недели от начала алкоголизации.

Изобретение относится к медицине. Предложен способ моделирования алкогольной кардиомиопатии, заключающийся в принудительной алкоголизации животных 10%-ным водным раствором этанола в течение 13 недель, последующем отборе животных с высоким предпочтением к алкоголю и продолжении алкоголизации до конца 24 недели от начала алкоголизации.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития преэклампсии на основе комбинаций генов матриксных металлопротеиназ.

Изобретение относится к биотехнологии. Конкретно, изобретение относится к предупреждению феномена усиления токсичности глазных инстилляций при совместном применении комбинации лекарственных препаратов.

Изобретение относится к аналитической химии и представляет собой способ иммунохроматографического анализа. Иммунохроматографический тест основан на взаимодействии конъюгата специфические антитела-коллоидный маркер с определяемым соединением (антигеном) в ходе движения реагентов вдоль тест-полоски.

Изобретение относится к области биологии и медицины. Предложен способ экстракции ДНК, пригодной для проведения количественной ПЦР в реальном времени, из сухих пятен цельной крови новорожденных, нанесенных на фильтровальную карточку для неонатального скрининга.

Настоящее изобретение относится к иммунологии. Предложено антитело к молекуле отталкивающего направляющего сигнала а (RGMa).

Изобретения относятся к клеткам и тестам, которые могут использоваться для идентификации модуляторов рецепторов сладкого вкуса. Предложены способ идентификации модулятора ощущения сладкого вкуса и выделенная клетка U2-OS.

Настоящее изобретение относится к новым ДНК-аптамерам, способным прочно и специфически связываться с гельзолином. Кроме того, изобретение относится к применению этих аптамеров для оценки уровня гельзолина в данном образце и для очистки немеченного гельзолина и его аналогов в большом объёме.
Изобретение относится к области экологии и может быть использовано для экологического картирования, выявления неблагоприятных участков исследуемых регионов и дифференцированной оценки Cа-Sr статуса различных по площади территорий.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития преэклампсии на основе комбинаций генов матриксных металлопротеиназ.

Изобретение относится к области охраны окружающей среды, экологической химии и может быть использовано при подготовке проб донных отложений для определения в них алифатических и полициклических ароматических углеводородов (ПАУ).

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен мультиэлементный референтный материал и способ его получения.

Изобретение относится к биотехнологии. Конкретно, изобретение относится к предупреждению феномена усиления токсичности глазных инстилляций при совместном применении комбинации лекарственных препаратов.

Изобретение относится к способам изготовления образцов для испытаний и может применяться при аттестации сотовых структур в области кораблестроения, авиастроения и космической техники.

Изобретение относится к аналитической химии, а именно способу подготовки проб к электротермическому атомно-абсорбционному определению содержания токсичных элементов в орехах и семенах, бобах масличных культур.

Изобретение относится к устройствам для отбора проб воды из подледных водоемов для изучения микробиологического и геохимического состава воды. Устройство содержит наружный корпус, расположенный с зазором внутри него внутренний сосуд для отбора пробы исследуемой воды, внутри сосуда для отбора пробы воды установлен поршень с электромагнитом.

Изобретение относится к области неразрушающего контроля и может быть использовано для контроля вращающихся элементов авиационного двигателя. Объектами изобретения являются система и способ обнаружения дефектов на объекте, содержащий этапы, на которых: формируют изображение (13), характеризующее указанный объект (11), на основании сигналов (9), связанных с объектом, разбивают указанное изображение на участки (15) в соответствии с самоадаптирующимися разрешениями и вычисляют расхождения между различными участками для обнаружения аномального участка, указывающего на возможность повреждения.

Изобретение относится к судебной медицине и представляет собой способ посмертного определения наличия периода жизни после перенесенного инфаркта миокарда у лиц пожилого и старческого возраста в случаях, когда причиной смерти явился инфаркт миокарда, путем определения и анализа динамики веществ низкой и средней молекулярной массы в моче, отличающийся тем, что производят забор мочи и исследуют в ней вещества низкой и средней молекулярной массы на длинах волн 239-298 нм с шагом 4 нм, определяют наличие пика на длине волн 274-278 нм, что свидетельствует о наличии периода жизни после перенесенного инфаркта миокарда, а его отсутствие свидетельствует, что смерть наступила мгновенно.

Изобретение относится к молочной промышленности и предназначено для количественного определения содержания пальмового жира в спреде со сливочным жиром. Для этого получают эмульсию спреда при растворении навески образца в органическом растворителе с последующим измерением функции распределения размеров коллоидных частиц методом лазерного излучения динамического рассеяния.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития преэклампсии на основе комбинаций генов матриксных металлопротеиназ.

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству, и предназначено для прогнозирования риска развития преэклампсии. Из периферической венозной крови женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России, выделяют ДНК и проводят анализ полиморфизмов генов цитокинов MMР-3, MMР-8 и MMР-12. Минимальный риск развития преэклампсии у женщин с наследственной отягощенностью прогнозируют при выявлении сочетания аллелей А MMР-8, С MMР-8, А MMР-12, а у женщин без наследственной отягощенности - при выявлении сочетания аллелей 6А MMР-3, А MMР-8, С MMР-8. Изобретение обеспечивает получение критериев оценки риска развития преэклампсии у женщин с отягощенной и неотягощенной наследственностью. 4 ил., 8 пр.

Наверх