Штамм "волгоградский" вируса нодулярного дерматита крупного рогатого скота для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов

Изобретение относится к вирусологии и ветеринарии. Предложен штамм вируса нодулярного дерматита крупного рогатого скота «Волгоградский» семейства Poxviridae, род Capripoxvirus, выделенный из патологического материала от больных коров из Волгоградской области и депонированный в Государственной коллекции микроорганизмов Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под №3161. Предложенный штамм может быть использован для проведения вирусологических, молекулярно-генетических и мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов. 1 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к штаммам вируса нодулярного дерматита крупного рогатого скота, и может быть использовано в научно-исследовательских институтах и диагностических центрах в качестве референс-штамма при проведении вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов.

Согласно принятой классификации вирус нодулярного дерматита крупного рогатого скота относится к роду Capripoxvirus семейства Poxviridae [3].

Нодулярный дерматит крупного рогатого скота (далее - нодулярный дерматит КРС) - это болезнь крупного рогатого скота, характеризующаяся лихорадкой, поражением лимфатической системы, отеками подкожной клетчатки и внутренних органов, образованием кожных узлов (бугров), поражением глаз и слизистых оболочек дыхательного и пищеварительного трактов [1, 2].

Нодулярный дерматит КРС относят к особо опасным болезням животных, способным вызывать эпизоотии и наносить значительный экономический ущерб. В соответствии с новой классификацией он включен в список болезней МЭБ, подлежащих обязательному уведомлению (нотификации), в категорию «Болезни и инфекции крупного рогатого скота» [4, 5, 6].

Целью данного изобретения является получение нового штамма вируса нодулярного дерматита КРС, обладающего стабильными культуральными и антигенными свойствами для использования в качестве референс-штамма при проведении вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований и изготовления диагностических и вакцинных препаратов.

Поставленная цель достигается путем выделения вируса из патологического материала (струпья) от больных коров из Волгоградской области. Вирус выделили с использованием культур клеток.

Штамм является новым, ранее не известным, выделенным на территории РФ и обозначен как штамм «Волгоградский».

Штамм депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии под №3161.

Штамм «Волгоградский» характеризуется следующими признаками и свойствами:

1) морфологические свойства. При электронно-микроскопических исследованиях в вируссодержащем материале обнаружены вирусные частицы размером 300×250×200 нм, морфологически тождественные представителям рода Capripoxvirus семейства Poxviridae.

2) культуральные свойства. Штамм «Волгоградский» размножается в перевиваемой культуре клеток почки теленка (MDBK). Репродукция вируса сопровождается цитопатическим действием, приводящим к полной деструкции монослоя на 3-4 сут культивирования.

3) инфекционная активность. Обладает среднего уровня инфекционной активностью, накапливается в культуре клеток MDBK в титрах 5,0-5,5 lg ТЦД50/см3.

4) способ выращивания. Штамм культивируют в монослое перевиваемой культуры клеток MDBK. При оптимальных условиях максимальное накопление достигается через 72-96 ч культивирования. В качестве поддерживающей среды используют среду Игла-МЭМ с 2% фетальной телячьей сыворотки.

5) Иммуногенные свойства. Вызывает образование вируснейтрализующих антител.

6) Гемаглютинирующие свойства: не обладает.

7) Патогенность для человека: не патогенен.

8) Патогенные свойства. Штамм патогенен для крупного рогатого скота всех пород и возрастных групп. При экспериментальном заражении взрослых коров вызывает повышение температуры тела (41°-41,5) и потерю веса, а также характерные оспенные поражения на коже. При отсутствии осложнений выздоровление наступает на 30-40 сут. У молодняка наблюдается более тяжелое течение.

9) Контагиозность. Штамм контагиозен для крупного рогатого скота. Интактные животные заболевают нодулярным дерматитом при совместном содержании с инфицироваными животными.

10) Трансмиссивность. Штамм передается кровососущими насекомыми (оводы, слепни, мокрецы).

11) Контаминация бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами. Штамм не контаминирован бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами.

12) Способ и срок хранения, периодичность пассажей. Штамм хранят при минус 40°С и «освежают» пассированием в культуре клеток MDBK. Периодичность освежения штамма один раз в 10 лет.

Сущность изобретения поясняется следующими примерами.

Пример 1. Изучение биологических свойств штамма «Волгоградский»

Примечание: доверительный интервал - 95%.

Как видно из Таблицы 1, штамм «Волгоградский», как нативный, так и лиофилизированный, стабилен при длительном пассировании в культуре клеток MDBK. Множественность заражения 0,05-0,005 ТЦД50/кл. Стабильность штамма обеспечивает возможность использования вирусного материала для конструирования инактивированных вакцин и диагностических препаратов.

Пример 2. Использование вируса нодулярного дерматита КРС, штамм «Волгоградский», для приготовления инактивированной вакцины против нодулярного дерматита КРС.

Для получения производственного вируса отбирали 1-2-дневную культуру клеток MDBK с полным равномерным монослоем, выращенную на культуральных пластиковых одноразовых матрасах с посадочной площадью 225 см3. Из матрасов удаляли ростовую среду и в каждый вносили по 100 мл поддерживающей питательной среды. Затем вносили вирус, множественность заражения при этом составляла 0,05-0,005 ТЦД50/кл. Матрасы с инфицированной культурой помещали в термостат. Выращивание вируса проводили при температуре (37,0±0,5)°С в течение 72-96 ч до проявления характерных цитопатических изменений и поражении 90-100% клеточного монослоя. Затем вирусную суспензию сливали, объединяли и хранили при температуре (-20,0±4,0)°С. Для приготовления инактивированной вакцины использовали вирус с активностью 5,0-5,5 lg ТЦД50/см3. Биологическую активность вируса определяли титрованием на монослойной культуре клеток MDBK. Инактивацию вируса проводили (3-пропиолактоном в разведении 1:4000, поддерживая рН раствора в пределах 7,0-7,4. Вирус инактивировали при комнатной температуре (21±4)°С в течение 2 ч на магнитной мешалке, а затем при 2-6°С в течение ночи (12-14 ч). Полноту инактивации вируса в полуфабрикате проверяли путем проведения 3 пассажей инактивированного вируса в культуре клеток ТК. Для этого в 3 матраса с посадочной площадью 25 см3 с монослоем 1-2-суточной культуры клеток MDBK вносили по 1 см3 вируса в разведении 1:10, выдерживали 20 мин при температуре (37,0±0,5)°С, затем монослой отмывали питательной средой, в матрасы заливали поддерживающую среду и инкубировали в течение 5 сут. Для проведения пассажей испытуемую культуру клеток кратковременно замораживали-оттаивали, содержимое матрасов в разведении 1:10 переносили в 2-дневную культуру клеток MDBK с полным равномерным монослоем и инкубировали еще 5 днй. Полноту инактивации оценивали по отсутствию ЦПД в культуре клеток MDBK на третьем пассаже вируса. К инактивированной суспензии вируса добавляли 6%-ный раствор гидроокиси алюминия (ГОА) до конечной концентрации 5-10 мг/мл, тщательно перемешивали и оставляли при температуре (2-6)°С для адсорбции вирусного антигена. Через 24 ч осторожно, не взбалтывая, декантировали 1/3 часть надосадка, доливали инактивированную вирусную суспензию до первоначального объема, тщательно перемешивали и выдерживали еще 24 ч. Приготовленная таким образом вакцина представляла собой суспензию бледно-розового цвета с белым осадком.

Проверку иммуногенных свойств вакцины осуществляли на телятах. До иммунизации и через 21 день после вакцинации от животных отбирали кровь и исследовали сыворотку на наличие вируснейтрализующих (ВН) антител в реакции нейтрализации (РН). РН проводили по стандартной методике со 100-300 ТЦД50 вируса микрометодом в планшетах (разведение сывороток с 1:2 до 1:256) с использованием культуры клеток MDBK. Вакцина вызывала образование ВН-антител у испытуемых животных в титрах 1:8-1:16.

Пример 3. Приготовление культурального специфического антигена вируса нодулярного дерматита КРС штамм «Волгоградский».

Монослойную культуру клеток MDBK, выращенную в матрасах с посадочной площадью 225 см3, заражали вирусом нодулярного дерматита штамм «Волгоградский» с множественностью заражения 0,05 ТЦД50/кл. Вирус культивировали при (37,0±0,5)°С, поддерживая рН среды в пределах 7,0-7,4 в течение 24-48 ч до появления 30% ЦПД. Культуральную жидкость удаляли и монослой отмывали двукратно ФБР. Клетки снимали с пластика механически. Отделившиеся клетки собирали в небольшом количестве физиологического раствора, осаждали центрифугированием при 2000 об/мин в течение 10 мин. Затем клетки лизировали добавлением дистиллированной воды в объеме, равном 1/100 исходного объема вируссодержащей жидкости. Полученный материал дважды замораживали-оттаивали и обрабатывали ультразвуком 2 раза по 12 мкм в течение 1 мин с интервалом 1 мин. Суспензию с клеточным дебрисом снова замораживали-оттаивали и удаляли клеточный детрит центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин.

Полученный осветленный лизат инактивировали β-пропиолактоном. С этой целью в 50 мл надосадка лизированных клеток, содержащего антиген вируса нодулярного дерматита, вносили 0,04 мл β-пропиолактона и выдерживали 18 ч при (4,0±2,0)°С. Полноту инактивации антигена проверяли в 3 последовательных пассажах в чувствительной культуре клеток MDBK. Полученный антиген не содержал остаточной инфекционности и обладал активностью в реакции диффузионной преципитации 1:2-1:4.

Источники информации

1. Гуненков В.В. Заразный узелковый дерматит крупного рогатого скота [Текст] / В.В. Гуненков // Сборник науч. тр. ВГНКИ. - М., 2005. - Т. 66. - С. 46-54.

2. Инфекционная патология животных [Текст]; под ред. А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьева, Е.А. Непоклонова, Е.С. Воронина. - М.: Академкнига, 2006. - Т. 1. - С. 782-786.

3. Кодекс здоровья наземных животных МЭБ. Т. 1. Гл. 1.2. Критерии включения болезней, инфекций и инфестаций в список МЭБ. - 23 изд. - Paris, 2014. - С. 5.

4. Нодулярный дерматит крупного рогатого скота в Республике Северная Осетия-Алания / В.Н. Герасимов, А.В. Луницин, Н.И. Сальников, А.Е. Гогин, Н.А. Еремеев, Д.В. Колбасов // Ветеринария. - 2016. - №4. - С. 11-14.

5. Clinico-histopathological findings and PCR based diagnosis of lumpy skin disease in the Sultanate of Oman [Текст] / M. Body, K. P. Singh, M. H. Hussain [et al.] // Pakistan Veterinary J. - 2012. - Vol. 32. - P. 1-5.

6. Lumpy skin disease (LSD) in a large dairy herd in Israel, July 2006 [Текст] / J. Brenner, M. Haimovitz, E. Oron [et al.].// Isr. Vet. Med. J. - 2006. - Vol. 61. - P. 73-77.

Штамм «Волгоградский» вируса нодулярного дерматита крупного рогатого скота семейства Poxviridae род Capripoxvirus, депонированный в Государственной коллекции микроорганизмов Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под №3161 для проведения вирусологических, молекулярно-генетических и мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов.



 

Похожие патенты:

Настоящее изобретение относится к вирусологии и медицине. Предложен штамм вируса гриппа A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8, типа А, подтипа Н5, семейства Orthomyxoviridae, рода Influenzavirus, полученный в течение последовательного пассирования в 10-суточных эмбрионах СПФ-кур и депонированный в коллекцию штаммов микроорганизмов ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» под регистрационным номером штамм ВГП A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 (диагностический).

Настоящее изобретение относится к вирусологии и ветеринарии. Предложен штамм вируса инфекционной анемии цыплят «МЕ-77», выделенный из печени клинически больных цыплят-бройлеров из промышленного птицеводческого хозяйства ООО «Торгово-птицеводческая компания «Балтптицепром» (г.

Изобретение относится к областям медицинской вирусологии, биотехнологии и микробиологии и касается онколитического штамма вируса болезни Ньюкасла, способного селективно лизировать новообразования млекопитающих.

Настоящее изобретение относится к вирусологии и медицине. Предложен штамм А/Япония/ГК/6:2/2014 RA-36 (H2N2), Influenzavirus А, подтип H2N2, полученный методом классической генетической реассортации штамма-донора A/HongKong/1/68/162/35(H3N2) и эпидемического вируса A/Japan/305/1957 (H2N2) и депонированный в Государственную коллекцию вирусов ФГБУ «ФНИЦЭМ им.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложена композиция антибактериальная для продления срока годности охлажденной рыбы и снижения риска возникновения инфекций, передаваемых пищевым путем.

Настоящее изобретение относится к агробиотехнологии. Предложен набор синтетических олигонуклеотидов для выявления вируса крапчатости винограда (Grapevine fleck virus) с использованием метода полимеразной цепной реакции.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к аттенуированному штамму вируса зеленой крапчатой мозаики огурца. Изобретение позволяет эффективно защищать растения огурца от патогенных штаммов вируса зеленой крапчатой мозаики огурца.

Группа изобретений относится к биотехнологии и медицине. Предложены химерная вирусоподобная частица (VLP) папилломавируса человека (HPV), способ ее получения и извлечения, способы профилактики или лечения инфекции HPV или рака шейки матк, и индукции иммунного ответа у пациента, включающие введение предложенной HPV VLP, а также применение предложенной HPV VLP в указанных способах и в получении лекарственных средств для осуществления указанных способов.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается нового штамма вируса ящура Aphtae epizooticae типа А сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus.

Настоящее изобретение относится к способу получения и очистки ортопоксвируса. Предложенный способ включает следующие этапы: приготовление культуры пакующих клеток; инфицирование культуры пакующих клеток ортопоксвирусом; культивирование инфицированных пакующих клеток до получения потомства ортопоксвируса; инкубация в присутствии одной или более нуклеаз до разрушения нуклеиновых кислот; выделение ортопоксвирусов из супернатанта культуры и/или пакующих клеток; добавление моновалентных солей в концентрации от 200 до 300 мМ в условиях, подходящих для ингибирования активности нуклеазы и для предотвращения адсорбции указанных ортопоксвирусов к анионообменному адсорбенту; осуществление контакта полученной смеси с анионообменным адсорбентом в условиях, подходящих для захвата нуклеиновых кислот.

Группа изобретений относится к фармацевтическим композициям, содержащим иммунизирующее количество инактивированного вируса ньюкаслской болезни и адъювант. Способ вакцинации кур или индеек против ньюкаслской болезни характеризуется тем, что он включает стадию проведения первичной вакцинации указанных кур или индеек вакциной, содержащей иммуногенное количество инактивированного вируса ньюкаслской болезни и адъювант типа «вода в масле», и стадию проведения бустерной вакцинации спустя 2-12 недель после указанной первичной вакцинации указанных кур или индеек вакциной, содержащей иммуногенное количество инактивированного вируса ньюкаслской болезни и адъювант типа «вода в масле».
Изобретение относится к медицинской вирусологии и микробиологии. Способ оценки противооспенной активности лечебно-профилактических препаратов включает введение в организм модельных животных контрольной и испытуемой групп по заданной схеме суспензии исследуемого противовирусного препарата.

Группа изобретений относится к области ветеринарии и предназначена для вакцинации птиц путем глазного введения. Заявленная композиция содержит один или более живых ослабленных вирусов и хитозан.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Новый штамм «КЭМ-7» вируса оспы кур получен путем многократных пассажей материнского вируса на развивающихся эмбрионах кур.

Изобретение относится к области биотехнологии, вирусологии и медицины. .

Изобретение относится к таким иммуногенным и вакцинным композициям, которые пригодны для использования у различных животных (мишеневых или хозяев) видов, восприимчивых к заболеванию, вызванному BTV, включая, но не ограничиваясь, млекопитающих, рептилий, птиц, в особенности людей, парных млекопитающих или животных, таких как, но не ограничиваясь, собак, кошек, лошадей, млекопитающих из зоопарков или животных, таких как морские млекопитающие, напр., тюлени, кошки, лошади, зоопарковые рептилии, такие как змеи, крокодилы, аллигаторы, и птичьи виды.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии. .

Изобретение относится к области медицины и касается применения вируса миксомы для терапевтического лечения рака. .

Настоящее изобретение относится к вирусологии и ветеринарии. Предложен штамм “Калмыкия-16” вируса оспы овец семейства Poxviridae рода Capripoxvirus, выделенный от больной овцы во время эпизоотии болезни в Республике Калмыкия и депонированный в Государственной коллекции микроорганизмов Государственного научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под номером 3160. Предложенный штамм может быть применен в качестве референс-штамма при проведении вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовлении вакцин и диагностических препаратов. 1 ил., 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к вирусологии и ветеринарии. Предложен штамм вируса нодулярного дерматита крупного рогатого скота «Волгоградский» семейства Poxviridae, род Capripoxvirus, выделенный из патологического материала от больных коров из Волгоградской области и депонированный в Государственной коллекции микроорганизмов Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под №3161. Предложенный штамм может быть использован для проведения вирусологических, молекулярно-генетических и мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов. 1 табл., 3 пр.

Наверх