Плазмида, обеспечивающая экспрессию щелочной сериновой протеиназы, содержащая ген, экспрессирующий щелочную сериновую протеиназу семейства s1 из streptomyces avermitilis vkm ac-1301, штамм e. coli m15 (prep4, pqe30-a2.1) - продуцент данной протеиназы

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложена плазмидная ДНК pQE30-A2.1, обеспечивающая экспрессию щелочной сериновой протеиназы, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую рекомбинантную щелочную сериновую протеиназу семейства S1 из Streptomyces avermitilis VKM Ac-1301. Предложен штамм E. coli M15 (pRep4, pQE30-A2.1) - продуцент щелочной сериновой протеиназы семейства S1, полученный путем трансформации штамма E. coli М15 (pRep4) указанной плазмидой. Группа изобретений позволяет получать ранее неохарактеризованную протеиназу из Streptomyces avermitilis VKM Ac-1301 с молекулярной массой 44,92 кДа, которая в дальнейшем может быть использована в составе моющих средств. 2 н.п. ф-лы, 1 ил., 1 пр.

 

Бактериальные протеиназы – это ферменты, катализирующие гидролиз пептидных связей в белках и пептидах. Микробные протеиназы составляют одну из важных групп промышленно и коммерчески получаемых ферментов, объемы продаж которых составляют примерно 2/3 всех продаж ферментов. Динамика роста количества патентов на получение протеиназ является наиболее высокой среди промышленно значимых ферментов.

В качестве источника генетического материала, кодирующего ранее неохарактеризованную протеиназу семейства S1 (далее по тексту белок A2.1), был выбран штамм Streptomyces avermitilis - VKM Ас-1301, относящийся к порядку Actinomycetales.

Для получения искомого гена была проведена амплификация с использованием ДНК-зависимой ДНК-полимеразы Q5 и праймерами:

А2.1_F_wSP_BamHI: TATATGGATCCGCCATCGAGCCGCCC

А2.1_R_HindIII: TATATAAGCTTTCAGAGACGCTGCCACA

При амплификации искомого гена последовательность, кодирующая сигнальный пептид, была исключена. Полученный ПЦР-продукт был обработан эндонуклеазами рестрикции BamHI и HindIII и клонирован в экспрессионный вектор pQE30 (pREP4). Лигазную смесь трансформировали в компетентные клетки Е. coli M15 (pREP4), отдельные клоны трансформантов E. coli анализировались на наличие вставки с помощью ПЦР с ДНК–зависимой ДНК–полимеразой Q5, с праймерами к плазмиде. Клоны со вставкой пересевали на ночную культуру для последующего выделения плазмидной ДНК pQE30 (pREP4, pQE30-A2.1). Анализ клонируемой последовательности ДНК проводился методом секвенирования. Нуклеотидная последовательность гена, кодирующего рекомбинантный белок, представлена в перечне последовательностей SEQ ID NO: 1, а карта полученной плазмидной ДНК представлена на фиг. 1.

Полученный экспрессионный штамм E. coli M15 (pRep4, pQE30-A2.1) позволяет получить протеиназу А2.1 молекулярной массой 44,92 кДа, pH оптимум 8 (при гидролизе 2% денатурированного гемоглобина) и 10–11 (при гидролизе 2% казеина), температурный оптимум 60°С. Показано, что активность протеиназы А2.1 не ингибируется полностью в присутствии SDS и незначительно изменяется в присутствии Triton X–100, Twin 20. Полученные результаты являются предпосылкой для возможного применения данной протеиназы в составе моющих средств.

1. Плазмидная ДНК pQE30-A2.1, схема которой представлена на фиг.1, обеспечивающая экспрессию щелочной сериновой протеиназы, содержащая нуклеотидную последовательность (SEQ ID NO: 1), кодирующую рекомбинантную щелочную сериновую протеиназу семейства S1 из Streptomyces avermitilis VKM Ac-1301.

2. Штамм E. coli M15 (pRep4, pQE30-A2.1) - продуцент щелочной сериновой протеиназы семейства S1, полученный путем трансформации штамма E. coli М15 (pRep4) плазмидой pQE30-A2.1 по п.1.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к микроорганизму Escherichia sp., продуцирующему О-сукцинилгомосерин, и способу получения О-сукцинилгомосерина. Предложен микроорганизм Escherichia sp., содержащий полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 29.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложена рекомбинантная бактерия для получения ацетона, которая содержит ген, кодирующий фосфокетолазу, в которой инактивирован путь Эмбдена-Мейерхофа-Парнаса путем удаления генов, кодирующих фосфофруктокиназу, и в которой инактивирована окислительная ветвь пентозафосфатного пути в результате удаления генов, кодирующих глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен способ получения ребаудиозида М.

Группа изобретений относится к вариантам дрожжевой клетки рода сахаромицетов, способной к размножению в аэробных условиях на субстрате, содержащем по меньшей мере один C5-сахар, и применению такой клетки.

Группа изобретений относится к биотехнологии, в частности к способу получения сесквитерпенового спирта, в том числе α-синенсола, β-синенсола, α-санталола, β-санталола, α-транс-бергамотола, эпи-β-санталола, ланцелола или их смеси.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, в частности к новым вариантам глюкозооксидазы из Aspergillus niger с улучшенными свойствами, а именно термостабильностью и собственной глюкозооксидазной активностью.

Изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к получению микробных продуцентов, и может быть использовано для получения микробного масла. Сконструирована жирообразующая клетка дрожжей, способная к конверсии источника углерода в жирную кислоту, производное жирной кислоты и/или триацилглицерин.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложено применение полипептида с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1 в качестве гомосеринсукцинилтрансферазы или кодирующего его полинуклеотида, имеющего нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2 или 3, для получения О-сукцинилгомосерина.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложено применение полипептида с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1 в качестве гомосеринсукцинилтрансферазы или кодирующего его полинуклеотида, имеющего нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2 или 3, для получения О-сукцинилгомосерина.

Изобретение относится к биохимии. Предложен способ получения мультиспецифической связывающей молекулы, содержащей по меньшей мере две связывающих группировки, такой как антитело, где способ включает культивирование клетки, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую растворимую сортазу А из S.

Изобретение относится к области биохимии. Описана группа изобретений, включающая полинуклеотид, кодирующий нейротоксический полипептид BoNT/E, вектор для экспрессии вышеуказанного полинуклеотида, клетку-хозяина для экспрессии полинуклеотида, нейротоксический полипептид BoNT/E, способ получения нейротоксического полипептида BoNT/E, способ получения лекарственного средства.

Группа изобретений относится к способам и композициям для предотвращения, контроля и разрушения бактериальных биопленок с использованием лизина, имеющего способность к лизису стафилококковых и стрептококковых бактерий, включая резистентные к лекарственным средствам.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложено применение варианта субтилизина 309, имеющего 80% идентичность по сравнению с аминокислотной последовательностью исходного субтилизина и содержащего замены 9R, 15T, 68A, 245R, 218D, а также композиции, содержащей указанный вариант субтилизина, для удаления пятен от вареных яиц на твердой поверхности.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к саморасщепляющемуся химерному белку для очистки целевого белка, нуклеиновой кислоте, его кодирующей, а также к вектору и клетке-хозяину, содержащим вышеуказанную нуклеиновую кислоту.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к полинуклеотиду, который кодирует полипептидный клостридиальный нейротоксин, а также к векторам и клеткам-хозяевам, содержащим указанный полинуклеотид.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к выделенному варианту сериновой протеазы, содержащему, по меньшей мере, от пяти до восьми аминокислотных замен в положениях, выбранных из группы, состоящей из положений 12, 14, 15, 16, 24, 35, 36, 39, 49, 54, 61, 63, 64, 65, 67, 69, 75, 76, 78, 79, 81, 86, 92, 93, 99, 109, 112, 121, 123, 125, 127, 143, 159, 179, 181, 184, 189, где заменяющая аминокислота в указанном положении выбрана из группы, состоящей из F, G, L, V, I, S, A, Y, K, W, M, P, N, Q, T, E, H, R, C, N и D, где указанные замены сделаны в положениях, эквивалентных положениям в протеазе Cellulomonas 69 В4, а также к молекуле нуклеиновой кислоты, ее кодирующей.

Изобретение относится к области биохимии и молекулярной биологии прокариотической клетки и касается способа получения положительно заряженных белковых фракций с ингибирующей в отношении трипсина активностью в растущей популяции Escherichia coli.

Изобретение относится к области биотехнологии. .

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой новую сериновую протеазу, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична последовательности протеазы 1AG3 Streptomyces дикого типа.

Изобретение относится к области биохимии, генной инженерии и биотехнологии, в частности к способу получения белка с помощью микроорганизма. Настоящий способ включает введение экспрессионной конструкции в микроорганизм, которая содержит промотор и нуклеиновую кислоту, кодирующую белок, и экспрессию белка в микроорганизме.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложена плазмидная ДНК pQE30-A2.1, обеспечивающая экспрессию щелочной сериновой протеиназы, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую рекомбинантную щелочную сериновую протеиназу семейства S1 из Streptomyces avermitilis VKM Ac-1301. Предложен штамм E. coli M15 - продуцент щелочной сериновой протеиназы семейства S1, полученный путем трансформации штамма E. coli М15 указанной плазмидой. Группа изобретений позволяет получать ранее неохарактеризованную протеиназу из Streptomyces avermitilis VKM Ac-1301 с молекулярной массой 44,92 кДа, которая в дальнейшем может быть использована в составе моющих средств. 2 н.п. ф-лы, 1 ил., 1 пр.

Наверх