Сшитая гиалуроновая кислота, способ ее получения и применение в эстетической сфере

Группа изобретений относится к области эстетической косметологии, в частности, к способу получения биосовместимого сшитого биополимера, представляющего собой гиалуроновую кислоту, поперечно сшитую с использованием мочевины в качестве перекрестносшивающего агента, согласно которому: а) растворяют гиалуроновую кислоту или ее соль в воде или в физиологическом растворе; b) растворяют мочевину в водном растворе кислоты; c) смешивают растворы со стадий а) и b) с получением раствора, имеющего рН от 3 до 6,8, для обеспечения поперечного сшивания гиалуроновой кислоты. Кроме того, предложены варианты применения полученного биополимера в качестве кожного наполнителя для увеличения объема ткани с целью улучшения эстетического вида анатомической особенности субъекта или с целью оказания помощи по предотвращению старения, а также предложены биополимерный наполнитель и косметический способ увеличения объема ткани у субъекта, использующие указанный биополимер. Группа изобретений обеспечивает получение биополимера, совместимого с кожной тканью и обладающего надлежащими свойствами наполнения для использования его в качестве кожного наполнителя. 5 н. и 10 з.п. ф-лы, 10 ил., 5 пр.

 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к применению сшитой гиалуроновой кислоты в эстетической сфере и к способу ее получения.

В частности, настоящее изобретение относится к сфере дерматологических наполнителей и биологически совместимых полимерных материалов, подходящих для применения в эстетических нехирургических методиках на теле человека.

Уровень техники

Гиалуроновая кислота представляет собой несульфатный гликозаминогликан, который является линейным полисахаридом, состоящим из мономерных звеньев D-глюкуроновой кислоты и D-N-ацетилглюкозамина.

Вначале гиалуроновую кислоту экстрагировали, а после этого очищали от петушиного гребня или пуповины определенных млекопитающих. При применении данных методик получали полимер, имеющий переменную молекулярную массу в диапазоне от 1 до 6 миллионов дальтонов. В настоящее время гиалуроновую кислоту получают микробиологически в результате бактериальной ферментации при применении бактериальных штаммов, выбранных подходящим для применения образом. Средняя молекулярная масса полимера, полученного при применении микробиологических методик, может находиться в диапазоне от тысяч до миллионов дальтонов. Вязкость водного раствора гиалуроновой кислоты увеличивается при увеличении ее молекулярной массы и концентрации согласно определению увеличения характеристик упругости.

Гиалуроновая кислота, в частности, в солевой форме с натриевым противоионом, является растворимой в воде и находящейся в естественных условиях в области экстрацеллюлярного матрикса и в различных тканях организма человека, таких как эпителиальная, соединительная, нервная ткань, и, кроме того, она присутствует в синовиальной и межсуставной жидкостях.

В области эпителия гиалуроновая кислота имеет несколько функций, например, она вносит свой вклад в его гидратацию, в организацию экстрацеллюлярного матрикса, также принимает участие в механизмах регенерации эпидермальной ткани и кожной и соединительной тканей и, кроме того, имеет функцию материала наполнителя.

Однако уровень гиалуроновой кислоты, присутствующей в различных слоях кожи, с течением времени уменьшается вследствие процесса естественного старения организма. На данный процесс могут оказывать негативное воздействие также и внешние факторы, такие как воздействие ультрафиолетового излучения солнца и загрязняющих веществ и в общем случае веществ, обладающих окислительной активностью.

Уменьшение количества гиалуроновой кислоты и ее солей в коже приводит к ускорению старения кожи. Несмотря на определение старения кожи множеством факторов, в число которых входят образ жизни, рацион питания, потребление алкоголя и табака, важное значение имеет воздействие, оказываемое на кожу атмосферными факторами. Старение кожи обычно проявляется через атрофию кожи, ее сухость и потерю ею упругости и начало появления морщин и шероховатости.

В некоторых случаях старение кожи определяет образование небольших структурных нарушений, создание дефектов или размягчение тканей, в особенности в области кожи и лица.

Одна из методик, направленных на устранение данных эстетических недостатков, предлагает применение кожных наполнителей – продуктов на полимерной основе. Их применение в косметически-дерматологической сфере направлено на замещение или восполнение потери полимеров, естественным образом присутствующих в эндогенной матрице, или на восстановление баланса функции тех полимеров матрицы кожной ткани, которые все еще являются неповрежденными.

В числе материалов наполнителей, широко использующихся в эстетической сфере, на протяжении длительного времени было известно применение коллагена, а в последнее время гиалуроновой кислоты.

В общем случае данные наполнители на полимерной основе применяют при применении подкожных имплантата или инъекции.

Для данных типов применения рецептуры кожных полимерных наполнителей в общем случае составляют в форме, подходящей для применения при подкожном инъецировании в областях, в которых необходимо получить эффект наполнения или структурирования.

Первоначально гиалуроновая кислота, использующаяся в качестве кожного наполнителя, состояла из встречающегося в природе полимера, который обычно имеет несшитую форму.

Однако встречающаяся в природе гиалуроновая кислота несмотря на наличие преимущества в виде наличия высокой совместимости с тканями тела человека, демонстрации высокого сродства с водой и осуществления функции сильного увлажнения не обладает надлежащими биомеханическими свойствами. По этой причине она не осуществляет надлежащей функции структурирования и только в минимальной степени проявляет эффект, требуемый для основных областей применения в эстетической сфере. Собственно говоря, как это было установлено, высокая растворимость гиалуроновой кислоты определяет ее быстрое выведение из организма. В случае инъецирования гиалуроновой кислоты в кожные ткани имеет место быстрое ее разложение в живом организме под действием как гиалуронидаз (ферментативное разложение), так и свободных радикалов (химическое разложение), присутствующих в тканях тела человека. Данный процесс разложения стимулирует использование частых применений гиалуроновой кислоты для сохранения постоянного эффекта увлажнения и структурирования.

В целях преодоления данных недостатков были получены новые дерматологические наполнители на основе сшитой гиалуроновой кислоты, предлагаемые при большей консистенции в сопоставлении с гиалуроновой кислотой, встречающейся в природе. Данные сшитые полимеры имеют тенденцию к более продолжительному сохранению в области имплантирования и, следовательно, определяют улучшение качеств наполнения в кожных тканях.

Полимеры на основе сшитой гиалуроновой кислоты получают при применении способов, которые делают возможным получение ковалентных или ионных связей, которые создают аккуратную сетку из цепей гиалуроновой кислоты.

В зависимости от целей после этого может быть получена сшитая гиалуроновая кислота при различных степенях сшивания. Например, для медицинских областей применения, таких как в офтальмологической хирургии, используют сшитые линейные полимеры, в то время как для получения структурных имплантатов используют разветвленную гиалуроновую кислоту.

Обычными примерами сшивателей, в настоящее время использующихся для выработки сшитой гиалуроновой кислоты, являются дивинилсульфон (ДВС), 1,4-бутандиолдиглицидиловый простой эфир, растворимые в воде карбодиимиды и сшиватели, содержащие несколько аминовых групп.

Однако, как это было установлено, данные сшиватели не обладают надлежащей биосовместимостью с тканями организма, таким образом, при имплантировании в кожу они могут определить возникновение неблагоприятных реакций или определенной клеточной токсичности.

Следовательно, все еще существует потребность в предложении новых сшитых полимеров, подходящих для применения в качестве дерматологических наполнителей, которые обладают высокой биосовместимостью с кожными тканями.

Поэтому одна из целей настоящего изобретения заключается в предложении сшитого полимера, имплантируемого или инъецируемого в области кожи, подвергнутых

негативному воздействию признаков старения кожи, который как является совместимым с кожной тканью, так и обладает надлежащими свойствами наполнения. Еще одна цель изобретения заключается в предложении биосовместимого инъецируемого сшитого полимера, которому свойственны варианты применения в качестве материала реструктуризации и наполнения в эстетической сфере.

Сущность изобретения

Таким образом, в объеме настоящего изобретения предлагаются сшитый биополимер, высокосовместимый с кожной тканью, способы его получения и применения в эстетической сфере, относящейся к косметическому или медицинскому типу.

Настоящее изобретение имеет своим происхождением обнаружение способа получения гиалуроновой кислоты в сшитой форме при применении избранного биосовместимого сшивателя и обнаружение высоких биосовместимости и стойкости к ферментативному или химическому разложению у полимера, сшитого при применении мочевины.

С учетом вышеупомянутых целей настоящее изобретение в первом аспекте относится к сшитому биополимеру, совместимому с тканями организма человека, на основе гиалуроновой кислоты, сшитой при применении мочевины.

Обычно сшитый биополимер изобретения является инъецируемым или имплантируемым в ткани организма человека, такие как, например, кожа.

Обычно сшитый биополимер изобретения представляет собой сшитую макромолекулярную матрицу, которая является высокобиосовместимой и/или физиологически приемлемой.

В соответствии со вторым аспектом настоящее изобретение предлагает способ получения сшитого биополимера, включающий сшивание гиалуроновой кислоты и мочевины. Обычно реакция сшивания способа изобретения имеет место при кислотном катализе.

В определенных вариантах осуществления гиалуроновую кислоту и мочевину сшивают в условиях проведения реакции, где оба вещества являются первоначально растворимыми в водном растворе.

В соответствии с третьим аспектом настоящее изобретение предлагает сшитый биополимер, совместимый с тканями организма человека, на основе гиалуроновой кислоты, сшитой при применении мочевины, и предназначенный для применения в эстетической сфере, такой как, например, в областях применения в сфере эстетической медицины.

В определенных вариантах осуществления сшитый биополимер на основе гиалуроновой кислоты, сшитой при применении мочевины, предназначен для наружного применения, например, в результате нанесения на кожу, в косметически эффективном количестве.

В некоторых вариантах осуществления биосовместимый сшитый биополимер на основе гиалуроновой кислоты, сшитой при применении мочевины, инъецируют или имплантируют в ткань организма человека в количестве, подходящем для применения при определении эстетического эффекта.

В одном аспекте настоящее изобретение предлагает способ увеличения объема ткани у пациента, включающий инъецирование или имплантирование в ткань пациента сшитого биополимера, имеющего в своей основе гиалуроновую кислоту, сшитую при применении мочевины, или состоящего по существу из нее.

В определенных вариантах осуществления тканью является мягкая ткань тела человека.

В определенных вариантах осуществления способ увеличения объема ткани предназначен для оказания помощи по предотвращению появления мелких морщин, неглубоких морщин, складок или глубоких морщин, связанных со старением лица пациента.

Краткое описание чертежей

Настоящее изобретение будет подробно описываться ниже и при обращении к фигурам, где:

Фигура 1 иллюстрирует кривые текучести, относящиеся к зависимости напряжения сдвига – напряжения сдвига τ – от скорости сдвига γ^• для сшитого биополимера гиалуроновая кислота-мочевина (примеры 1 и 3).

Фигура 2 демонстрирует кривые текучести (анализ с разверткой по амплитуде), относящиеся к зависимости вязкости, выраженной в мПа, от скорости сдвига в соответствии с примером 3;

Фигура 3 демонстрирует кривую текучести, относящуюся к зависимости вязкости η от скорости сдвига γ^• для стерилизованного биополимера из примера 4;

Фигура 4 демонстрирует рисунок зависимости модуля упругости (накопления), модуля вязкости (потерь) для полимера от определенных значений относительной деформации: анализ определяет то, что модуль упругости (и, следовательно, характеристики упругости) превалирует над просто модулем вязкости.

Фигура 5 демонстрирует кривую текучести, относящуюся к зависимости напряжения сдвига – напряжения сдвига τ – от скорости сдвига γ^• в соответствии с примером 4. Фигура 6 иллюстрирует график при развертке по частоте для продукта, рассматриваемого в примере 4.

Фигура 7 иллюстрирует кривые, относящиеся к зависимости вязкости η от скорости сдвига γ^• для лиофилизованного биополимера из примера 5;

Фигура 8 демонстрирует кривую текучести, относящуюся к зависимости напряжения сдвига – напряжения сдвига τ – от скорости сдвига γ^• для лиофилизованного биополимера из примера 5.

Фигура 9 иллюстрирует график при развертке по амплитуде для лиофилизованного продукта из примера 5.

Фигура 10 иллюстрирует график при развертке по частоте для лиофилизованного продукта из примера 5.

Подробное описание изобретения

Как это установил заявитель, при применении в качестве сшивателя вещества, физиологически доступного в теле человека, получают биополимер на основе сшитой гиалуроновой кислоты, который является высокосовместимым с тканями организма человека.

В соответствии с одним аспектом изобретения предлагается биосовместимый сшитый биополимер, предназначенный для применения в целях увеличения объема ткани или в качестве кожного наполнителя для улучшения эстетического внешнего вида анатомической особенности отдельного лица, где упомянутый биополимер имеет в своей основе гиалуроновую кислоту, сшитую при применении мочевины.

В соответствии с одним дополнительным аспектом настоящее изобретение предлагает биополимерный наполнитель для увеличения объема мягкой ткани, включающий гиалуроновую кислоту, сшитую при применении мочевины, и его применение в качестве кожного наполнителя для оказания помощи по предотвращению старения, в особенности старения лица.

В некоторых вариантах осуществления сшитый биополимер на основе гиалуроновой кислоты, сшитой при применении мочевины, имеет молекулярную массу, заключенную в диапазоне от 100 000 до 20 000 000 дальтонов, от 500 000 до 10 000 000 дальтонов, от 1 000 000 до 6 000 000 дальтонов, обычно от 2 000 000 до 4 000 000 дальтонов.

Обычно гиалуроновая кислота, из которой производится сшитый биополимер изобретения, представляет собой полисахарид, состоящий по существу из чередующихся звеньев глюкуроновой кислоты и N-ацетилглюкозамина, способный удерживать воду и противостоящий воздействию гидростатических напряжений.

В определенных вариантах осуществления исходная глюкуроновая кислота является неиммуногенной и демонстрирует преимущество в виде наличия физиологической приемлемости и совместимости с тканями тела человека.

Сшиватель, использующийся для получения сшитого биополимера изобретения, имеет в своей основе мочевину (карбамид) – органическое соединение, содержащее две аминовые функциональности (-NH₂), соединенные вместе с карбонильной функциональной группой (С=О). Мочевина играет ключевую роль в азотистом обмене веществ у многих млекопитающих, представляя собой основное азотсодержащее соединение, встречающееся в моче таких млекопитающих, и имеет вид, подобный виду вещества, не имеющего запаха и цвета, растворимого в воде и по существу нетоксичного. Мочевина, кроме того, характеризуется высокой растворимостью в водной среде вследствие способности образовывать водородные связи с водой.

Сшитый биополимер изобретения может быть получен в результате сшивания гиалуроновой кислоты или ее соли при применении мочевины, предпочтительно в кислотной среде.

Таким образом, в соответствии со вторым аспектом изобретения предлагается способ получения биополимера на основе гиалуроновой кислоты, сшитой при применении мочевины, включающий стадию полимеризации гиалуроновой кислоты или ее соли при применении мочевины в кислотных условиях.

В определенных условиях окружающей среды гиалуроновая кислота и мочевина могут быть объединены в жидкости на водной основе, где оба компонента являются растворимыми. После этого при растворении в жидкости на водной основе как гиалуроновой кислоты и ее солей, так и мочевины они могут быть сшиты с образованием биополимера изобретения.

Жидкости, подходящие для применения в способе изобретения, включают воду и физиологический раствор.

В общем случае способ изобретения предлагает стадию растворения, где гиалуроновую кислоту или ее соль растворяют в жидкости, обычно воде.

В некоторых вариантах осуществления по окончании стадии растворения гиалуроновая кислота в растворе присутствует в количестве в диапазоне от 2 мг/мл до 120 мг/мл, от 5 до 25 мг/мл, обычно от 7 до 20 мг/мл.

В объеме изобретения термин соль гиалуроновой кислоты обозначает любую растворимую в воде соль гиалуроновой кислоты, такую как, например, натриевая, калиевая или кальциевая соль.

В объеме изобретения термин «биополимер» обозначает физиологически

приемлемый полимер, то есть, совместимый с тканями организма человека.

В определенных вариантах осуществления исходная гиалуроновая кислота или ее соль имеют молекулярную массу, описанную прежде для биополимера на основе гиалуроновой кислоты, сшитой при применении мочевины, полученного по окончании процесса сшивания.

Способ изобретения, кроме того, включает стадию растворения мочевины в водном растворе, предпочтительно при кислотном значении рН, например, в диапазоне от 3 до 6,8, обычно от 3,5 до 4.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления мочевина в кислотном водном растворе присутствует с концентрацией в диапазоне от 1 до 100 мг/мл, от 3 до 50 мг/мл, обычно от 5 до 25 мг/мл.

На одной последующей стадии способа раствор на основе гиалуроновой кислоты и раствор, которым обычно является кислотный раствор на основе мочевины, располагают в контакте для образования смеси в целях получения биополимера, сшитого при применении связи, относящейся к амидному типу. В соответствии с определенными вариантами осуществления полученную смесь перемешивают для получения биополимера на основе гиалуроновой кислоты, сшитой при применении мочевины.

Обычно условия проведения реакции способа изобретения, такие как, например, концентрация двух компонентов, значение рН раствора, могут быть подстроены для предотвращения образования комплексов, которые осаждаются из раствора и предотвращают или замедляют сшивание.

Например, массовое соотношение между гиалуроновой кислотой или ее солью и мочевиной в водном растворе или в смеси реакции сшивания может находиться в диапазоне от 0,3 до 10, от 0,8 до 5, от 1 до 3.

В некоторых вариантах осуществления полученная смесь характеризуется значением рН в диапазоне от 3 до 6,8, предпочтительно от 3,5 до 4. В некоторых вариантах осуществления для получения кислотного значения рН раствора добавляют кислотный раствор, такой как, например, водный раствор HCl. Концентрация HCl в водном растворе кислоты, в котором растворена мочевина, предпочтительно составляет от 20 до 30% масс. Необязательно в случае демонстрации смесью значения рН за пределами диапазона 3,5-4 может быть добавлен регулятор значения рН, такой как раствор кислоты, например, HCl, или основания, например, NaOH.

В некоторых вариантах осуществления в целях подстраивания значения рН в диапазоне 3,5-4 может быть добавлен буфер, такой как, например, уксусная кислота и ацетат натрия. Как это также обнаружил заявитель, при проведении реакции при кислотном значении рН в диапазоне от 3,5 до 4 добиваются сшивания гиалуроновой кислоты с неожиданно высокой скоростью.

В некоторых вариантах осуществления смесь термостатируется, например, при 35(+/-2)°С в течение 20-24 часов и впоследствии подвергается набуханию для исключения избытка мочевины, присутствующей в растворе.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления значение рН полученного продукта находится в диапазоне от 5,5 до 7,5, обычно от 5,5 до 6,8. В случае непопадания значения рН в пределы диапазона 5,5-7,5 он может быть подстроен в результате добавления раствора NaOH при 0,2 моль/л одной или несколькими порциями вплоть до его попадания в пределы желательного диапазона.

В определенных вариантах осуществления по окончании реакции сшивания полученный биосовместимый сшитый биополимер измельчают до получения частиц или гомогенизируют в результате перепускания через сито, характеризующееся подходящим для применения размером пор, например, в диапазоне от 5 до 150 микронов или от 40 до 80 микронов, для получения гидрогеля или инъецируемой суспензии.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления биополимер, вновь полученный в результате проведения реакции полимеризации, имеет форму гидрогеля.

В некоторых вариантах осуществления биосовместимый сшитый биополимер на основе гиалуроновой кислоты, сшитой при применении мочевины, полученный при применении способа изобретения, стерилизуют или лиофилизуют.

Биосовместимый сшитый биополимер на основе гиалуроновой кислоты, сшитой при применении мочевины, демонстрирует область применения как в косметической сфере, например, в качестве наполнителя для предотвращения появления морщин или шероховатости кожи, так и в эстетической медицинской сфере, например, в качестве дерматологического наполнителя или для изготовления подкожных имплантатов. Сшитый биополимер изобретения также является подходящим для применения при восстановлении тканей организма человека, которые были удалены после проведения хирургической операции, таким образом, как, например, в случае хирургического удаления ткани молочной железы или липосакции.

В соответствии с одним аспектом изобретения предлагается способ оказания косметической или эстетической или медицинской помощи для улучшения эстетического внешнего вида анатомической особенности области тела отдельного лица, при этом упомянутый способ включает нанесение, инъецирование или имплантирование на ткани биополимера, полученного из гиалуроновой кислоты, сшитой при применении мочевины. В определенных вариантах осуществления способом является нехирургический способ оказания помощи.

Улучшение эстетического внешнего вида анатомической особенности отдельного лица включает улучшение любого типа эстетического качества, в том числе внешнего вида, тактильного ощущения, в частности, у кожи любого участка тела, такого как, например, лицо, губы, окологлазная область, молочные железы, ягодицы.

В определенных аспектах биополимер, состоящий по существу из гиалуроновой кислоты, сшитой при применении мочевины, и предназначенный для применения в случае оказания помощи при старении лица, предлагается в особенности при оказании помощи по предотвращению появления мелких морщин, неглубоких морщин, складок или глубоких морщин, связанных со старением лица, где биополимер наносят или инъецируют на мягкой ткани тела человека. В определенных вариантах осуществления биополимер изобретения наносят на кожу или предпочтительно инъецируют или имплантируют в эпидерму, дерму или гиподерму.

Способ изобретения включает имплантирование или инъецирование косметически эффективного количества биосовместимого сшитого биополимера, описанного выше в настоящем документе, в ткань тела человека для улучшения эстетического качества анатомической особенности.

В определенных вариантах осуществления тканью тела человека является мягкая ткань.

В некоторых вариантах осуществления биополимер, инъецированный или имплантированный в ткань тела человека, имеет форму гидрогеля или суспензии.

Настоящее изобретение теперь должно быть описано при обращении к следующим далее примерам, которые предлагаются для целей иллюстрирования и не должны предназначаться для исполнения роли ограничения объема настоящего изобретения.

ПРИМЕР 1

Способ получения гиалуроновой кислоты, сшитой при применении мочевины, изобретения.

8 г гиалуроната натрия растворяют в 72 г физиологического раствора. Отдельно получают раствор, растворяя 4 г мочевины в 16 г раствора HCl при 0,2 моль/л.

Два полученных раствора перемешивают вплоть до гомогенности конечного раствора; измеряют значение рН, которое должно находиться в диапазоне от 3,5 до 4.

Продукт термостатируют при 35(+/- 2)°С в течение 20-24 часов, после этого избыток мочевины удаляют; сразу после очистки измеряли значение рН полученного продукта, которое заключалось в диапазоне от 5,5 до 7,5.

В случае непопадания значения рН в пределы диапазона 5,5-7,5 его будут подстраивать в результате добавления раствора NaOH при 0,2 моль/л вплоть до его попадания в пределы желательного диапазона.

ПРИМЕР 2

Сравнительный пример получения гиалуроновой кислоты, сшитой при применении мочевины.

Осуществляли ту же самую методику сшивания из примера 1 при основном катализе, использующем раствор NaOH при 0,2 моль/л.

8 г гиалуроната натрия растворяют в 72 г физиологического раствора. Отдельно получают раствор, растворяя 4 г мочевины в 16 г раствора NaOH при 0,2 моль/л. Два полученных раствора перемешивают вплоть до гомогенности конечного раствора. Продукт, термостатированный при 35(+/- 2)°С в течение 20-24 часов, не сшивается, а вместо этого гидролизуется, что приводит к разрушению молекул гиалуроновой кислоты, в результате чего продукт утрачивает свои вязкоупругие свойства.

ПРИМЕР 3

Физико-химические свойства гиалуроновой кислоты, сшитой при применении мочевины и полученной при применении способа из примера 1.

Характеристики

Полученный продукт, подвергали следующим далее испытаниям.

• Реологический анализ продукта

• Определение вязкости η

• Определение модуля накопления G’ и модуля потерь G’’

• Испытание на прочность при стерилизации

• Испытание на прочность при лиофилизации

Осуществляемые реологические анализы проводили в соответствии со следующими далее режимами:

1. Анализ зависимости вязкости η и напряжения сдвига τ от скорости сдвига γ^• при следующих далее параметрах: прямая кривая в 400 сек, состоящая из 50 точек Х 8 сек при скорости сдвига γ^• в диапазоне от 1 до 50 1/сек; постоянное растяжение в 120 сек, состоящее из 12 точек Х 10 сек при скорости сдвига γ^•, постоянной при 50 1/сек; обратная кривая в 400 сек, состоящая из 50 точек Х 8 сек при скорости сдвига γ^• в диапазоне от 50 до 1 1/сек.

2. Анализ с разверткой по амплитуде при следующих далее параметрах: 21 точка при частоте отсчета, установленной прибором, – угловая частота ω, постоянная при 10 рад/сек, при относительной деформации γ, переменной в диапазоне от 0,001 до 100 %.

3. Анализ с разверткой по частоте при следующих далее параметрах: 16 точек при

частоте отсчета, установленной прибором, – относительная деформация γ, постоянная при 0,7 %, при угловой частоте ω, переменной в диапазоне от 0,1 до 100 рад/сек.

Первые анализы проводили в отношении нестерилизованного продукта, из чего следует выявление вязкоупругого поведения при наличии площади гистерезиса. Вместо этого анализ вязкости (фигура 1) демонстрирует то, что полученный продукт является гомогенным, и степень сшивания является однородной внутри продукта при отсутствии комков или агрегатов, как макроскопических, так и микроскопических.

В отношении того же самого образца проводили анализ с разверткой по амплитуде, который, как это продемонстрировано на фигуре 2, демонстрирует то, что превалирует характеристика упругости, при этом данное положение подчеркивается более высокими значениями G’ и отсутствием точки пересечения между кривыми для G’ и G’’.

ПРИМЕР 4

Продукт из примера 1 подвергали терминальной стерилизации при применении автоклава в течение 20 минут при 121°С, после обработки он выглядит менее вязким в сопоставлении с исходным продуктом, но сохраняет некоторые реологические характеристики, которые демонстрируют еще раз то, что превалирует характеристика упругости в сопоставлении с характеристикой рассеивания. Также на графиках, проиллюстрированных на прилагаемой фигуре 4 и относящихся к продукту, подвергнутому стерилизации, продемонстрированы наличие площади гистерезиса и более высокое значение модуля G’ в сопоставлении со значением G’’.

График кривой текучести, относящейся к скорости сдвига γ^•, проиллюстрированный на фигуре 5, вместо этого демонстрирует превосходную гомогенность продукта и то, что продукт способен возвращаться к первоначальному статусу даже при воздействии высоких скоростей сдвига γ^•.

С другой стороны, анализ с разверткой по частоте, проиллюстрированный на фигуре 6, демонстрирует то, что у продукта уменьшается его полная вязкость |η*| при увеличении угловой частоты ω, что предполагается для вязкоупругого продукта; также необходимо отметить то, что пересечение G’-G’’ имеет место только при очень высоких значениях угловой частоты ω, еще раз демонстрируя то, что стерильный продукт не утрачивает своих упругих свойств.

ПРИМЕР 5

Продукт из примера 1 также является стойким к лиофилизации, собственно говоря, методика исключения воды и последующей регидратации делает возможным получение продукта, демонстрирующего характеристики, подобные тому, что имеет место для продукта, не подвергнутого лиофилизации.

Анализ, проиллюстрированный на фигурах 7 и 8, демонстрирует то, что лиофилизованный продукт все еще характеризуется очень высокими значениями вязкости, демонстрируя способность продукта не разлагаться при лиофилизации. С другой стороны, в отношении напряжения сдвига можно видеть то, что продукт во всей своей целостности остается гомогенным, но имеются области, где степень сшивания является слегка пониженной.

Графики при развертке по амплитуде и развертке по частоте, приведенные на фигурах 9 и 10 в отношении лиофилизованного продукта из примера 1, демонстрируют то, что продукт не подвергается существенному ухудшению качества в его совокупной структуре, но, как это упоминалось выше в настоящем документе, имеет место легкое понижение степени сшивания.

Продукт, кроме того, выглядит легко размазываемым и профилируемым в различных формах в зависимости от целевого варианта применения. Форма, в которой продукт профилируют, сохраняется в процессе лиофилизации, который, как это описывалось прежде, является недеструктивным и способным сохранять основные характеристики тех же самых продуктов.

1. Способ получения биосовместимого сшитого биополимера, который представляет собой гиалуроновую кислоту, поперечно сшитую с использованием мочевины в качестве перекрестносшивающего агента, включающий стадии:

а) растворения гиалуроновой кислоты или ее соли в воде или в физиологическом растворе;

b) растворения мочевины в водном растворе кислоты;

c) смешивания растворов, полученных на стадиях а) и b), с получением раствора, имеющего рН в диапазоне от 3 до 6,8, для обеспечения поперечного сшивания гиалуроновой кислоты.

2. Способ по п.1, где pH раствора, полученного на стадии с), находится в диапазоне от 3,5 до 4.

3. Способ по п.1, где водный раствор кислоты, в котором растворена мочевина на стадии b), содержит в качестве кислоты HCl, предпочтительно в концентрации от 20 до 30 мас.%.

4. Способ по п.2, где водный раствор кислоты, в котором растворена мочевина на стадии b), содержит в качестве кислоты HCl, предпочтительно в концентрации от 20 до 30 мас.%.

5. Способ по любому из пп.1-4, где соль гиалуроновой кислоты представляет собой натриевую или кальциевую соль.

6. Применение биосовместимого сшитого биополимера, полученного способом по любому из пп.1-5, в качестве кожного наполнителя для увеличения объема ткани для улучшения эстетического вида анатомической особенности субъекта.

7. Применение по п.6, где биополимер имеет молекулярную массу в диапазоне от 100000 до 20000000 Дальтон или от 2000000 до 4000000 Дальтон.

8. Применение по п.6 или 7, где биополимер находится в форме гидрогеля или частиц.

9. Применение по п.6 или 7, где биополимер инъецируют или имплантируют в мягкую ткань тела человека.

10. Применение по п.6, где биополимер вводят в виде имплантата или путем подкожной инъекции в мягкую ткань тела человека для оказания помощи по предотвращению старения, особенно старения лица.

11. Биополимерный наполнитель для увеличения объема мягких тканей, предназначенный для применения в качестве кожного наполнителя для оказания помощи по предотвращению старения, включающий биосовместимый сшитый биополимер, полученный способом по любому из пп.1-5.

12. Биополимерный наполнитель по п.11, который предназначен для применения в качестве кожного наполнителя для оказания помощи по предотвращению старения лица.

13. Косметический способ увеличения объема ткани у субъекта, включающий инъецирование в кожу субъекта биосовместимого сшитого биополимера, полученного способом по любому из пп.1-5.

14. Способ по п.13, который предназначен для предотвращения появления мелких морщин, неглубоких морщин, складок или глубоких морщин, связанных со старением лица субъекта.

15. Применение биосовместимого сшитого биополимера, полученного способом по любому из пп.1-5, в качестве кожного наполнителя для увеличения объема ткани для оказания помощи по предотвращению старения.