Способ уменьшения выраженности немоторных симптомов у пациентов, страдающих болезнью паркинсона

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, гастроэнтерологии и микробиологии, и касается уменьшения выраженности немоторных симптомов у больных болезнью Паркинсона (БП). Для этого осуществляют коррекцию микробиоценоза кишечника путем введения аутопробиотика c cодержанием Enterococcus faecium не менее 10⁸ KОЕ на 1 мл. Аутопробиотик вводят перорально по 50 мл 2 раза в день, курсом не менее 20 дней. Это обеспечивает эффективную коррекцию немоторных симптомов БП, в частности улучшение моторики кишечника и его эвакуаторной способности без побочных эффектов, за счет отсутствия конфликта с иммунной системой, а также с другими представителями собственной микробиоты пациента. 2 пр., 3 табл., 5 ил.

 

Изобретение относится к клинической медицине и микробиологии, а именно к неврологии и гастроэнтерологии и может быть использовано для улучшения качества жизни неврологических больных, совершенствования стратегии и тактики повышения эффективности оказания медицинской помощи населению.

В настоящее время болезнь Паркинсона (БП) признана мультисистемным заболеванием: кроме центральной нервной системы нейродегенеративный процесс захватывает мейсснерово и ауэрбахово сплетения энтеральной нервной системы, дистальные симпатические «терминалии» надпочечников, слюнных желез, миокарда, тазового сплетения, и другие структуры периферической вегетативной нервной системы. БП является одним из наиболее распространенных и тяжелых нейродегенеративных заболеваний человека с хроническим прогрессирующим течением, сопровождающимся дегенерацией дофаминэргических нигростриарных нейронов и нарушением функции базальных ганглиев. Двигательные и недвигательные симптомы БП обусловлены общими патогенетическими механизмами: патологическим накоплением белка α-синуклеина, эксайтотоксичностью, окислительным стрессом и нейровоспалением [Mosley R.L., Hutter-Saunders J.A., Stone D.K. Inflammation and adaptive immunity in Parkinson's disease. Cold Spring Harb. Perspect. Med. 2012; 2(1): 81-93.].

В работе H. Braak есть данные о выявлении агрегатов α-синуклеина в клетках мейсснерова и ауэрбахова сплетений в латентном досимптомном периоде БП. По-видимому, вовлечение парасимпатических нейронов подслизистого слоя кишечника является наиболее ранним событием в развитии болезни, что указывает на роль экзогенных алиментарных (инфекционных и токсических) факторов. Так была сформулирована алиментарная концепция развития БП, предполагающая, что при нарушении барьерной функции кишечника патологический агент может проникать в ЦНС по волокнам блуждающего нерва, поражая его дорсальное ядро и другие нейроны каудального ствола [Hawkes СН, Del Tredici K, Braak Н. Parkinson's disease: a dual-hit hypothesis. Neuropathol Appl Neurobiol. 2007; 33:599-614].

Первичное поражение ЖКТ за много лет до развития моторных симптомов подтверждено как клинически, так и патоморфологически. Известно, что наиболее частые вегетативные нарушения (запоры, расстройства мочеиспускания и эректильная дисфункция) могут предшествовать развитию БП (за 2-24 года, в среднем за 18 лет), а по данным исследования HAAS риск развития БП у лиц, имеющих меньше одного перистальтического движения кишечника в день, в 2,7-4,1 раза выше по сравнению с людьми с более активной перистальтикой [Abbott R.D., Petrovich H., White LR, Masaki KH, Tanner CM, Curb JD, Grandinetti A, Blanchette PL, Popper JS, Ross GW. Frequency of bowel movements and the future risk of Parkinsons disease // J. neurol. - 2001. - Aug. №57 (3). - P. 456-462.].

Наиболее частыми проявлениями вегетативной дисфункции при БП являются ортостатическая гипотензия, желудочно-кишечные расстройства, расстройства мочеиспускания, гиперсаливация, нарушение симпатической иннервации кожи [Kim J.S., Sung H.Y. Gastrointestinal Autonomic Dysfunction in Patients with Parkinson's Disease. Journal of movement disorders, 2015, 8 (2), 76-82]. Встречаемость тех или иных вегетативных нарушений у пациентов с БП составляет от 70,6% до 96%, а по данным некоторых авторов до 100% [Zhang ТМ, Yu SY, Guo P, Du Y, Hu Y, Piao YS, Zuo LJ, Lian TH, Wang RD, Yu QJ, Jin Z, Zhang W. Nonmotor symptoms in patients with Parkinson disease: A crosssectional observational study. Medicine (Baltimore). 2016 Dec; 95(50):e5400.]. Дисфункция ЖКТ при БП включает в себя запоры, гипотрофию, стоматологические проблемы, дисфагию, нарушение опорожнения желудка, затруднение дефекации, каломазание, инфекции, вызванные Helicobacter pylori, и кишечный дисбактериоз. Наиболее часто встречается синдром констипации - у 28-61% пациентов [Poewe W. Non-motor symptoms in Parkinson's disease. Eur. J, Neurol. 2008; 15 (Suppl. 1): 14-20]. У всех пациентов с БП отмечается замедление кишечной перистальтики, причем увеличение времени транзита пищи по толстой кишке наблюдалось также у пациентов с БП, которые не предъявляли жалоб на запоры [Kupsky W.J., Grimes М.М., Sweeting J., Bertsch R., Cote L.J. Parkinson's disease and megacolon: concentric hyaline inclusions (Lewy bodies) in enteric ganglion cells. Neurology. 1987; 37:1253-1255.].

Количественный и качественный состав микробиоты кишечника при БП изменен, отмечается увеличение содержания представителей семейства Enterobacteriaceae, уменьшение количества Faecalibacterium prausnitzii, лактобацилл и превотелл [Scheperjans F., Aho V., Pereira P.A., Koskinen K., Paulin L., Pekkonen E. et al. Gut microbiota are related to Parkinson's disease and clinical phenotype. Mov. Disord. 2015; 30(3): 350-8.] Есть данные о транслокации кишечной палочки в слизистую оболочку толстой кишки [Niehaus I., Lange J.H. Endotoxin: Is it an environmental factor]. Имеются данные о способности бактерий, относящихся к семейству Lactobacillaceae, модулировать активность нейронов энтеральной нервной системы и афферентную передачу сигнала через блуждающий нерв, что может изменять внутриклеточную секрецию α-синуклеина [Paillusson S., Clairembault Т., Biraud М., Neunlist М., Derkinderen P. Activity-dependent secretion of alpha-synuclein by enteric neurons. J. Neurochem. 2013; 125(4): 512-7.]. Бактерии рода Prevotella не только расщепляют широкий спектр растительных полисахаридов и муциновых гликопротеинов в кишечной стенке, но также взаимодействуют с иммунной системой [Scher J.U., Sczesnak A., Longman R.S., Segata N., Ubeda С., Bielski С. et al. Expansion of intestinal Prevotella copri correlates with enhanced susceptibility to arthritis. Elife. 2013: e01202.]. У людей с повышенным содержанием Prevotella в сыворотке крови отмечен более высокий уровень нейроактивных короткоцепочечных жирных кислот, а также тиамина и фолата.

Таким образом, сокращение популяции превотелл способно приводить к уменьшению количества указанных соединений у больного БП. Низкий уровень Prevotellaceae является индикатором снижения синтеза муцина, что ведет к увеличению кишечной проницаемости [Wright D.P., Rosendale D.I., Robertson A.M. Prevotella enzymes involved in mucin oligosaccharide degradation and evidence for a small operon of genes expressed during growth on mucin. FEMS Microbiol. Lett. 2000; 190(1): 73-9.], которое, в свою очередь, может приводить к локальным и системным воздействиям бактериальных эндотоксинов, способным вызвать повышение экспрессии α-синуклеина в кишечнике. Значимым в патогенезе болезни является опосредованное системное влияние микробиоты на нейровоспаление через иммунную систему и систему кровообращения. Связанное с изменением микробиоценоза кишечника воспаление может способствовать формированию α-синуклеиновых включений, в последующем периферически индуцированное воспаление, иммуносупрессивные и аутоиммунные процессы приводят к поражению дофаминергических нейронов. Таким образом, поддержка микробного баланса и функций микробиоты у пациентов с БП является важной составляющей успешного лечения с БП.

Двигательные расстройства при рассматриваемом заболевании, необходимость частого приема лекарственных средств, ограничение повседневной активности приводят к ухудшению качества жизни пациентов. Для болезни Паркинсона характерны также вегетативные и психические расстройства, которые приводят к стойкому ограничению всех аспектов нормальной жизни человека. Наличие моторных (постуральная неустойчивость, тремор покоя и ригидность) и немоторных симптомов при БП оказывают крайне неблагоприятное влияние на качество жизни пациентов [Мороз М.Д., Байда А.Г. Оценка качества жизни пациентов с болезнью Паркинсона и вторичным паркинсонизмом // Молодой ученый. - 2016, №8. - С. 411-415. - URL https://moluch.ru/archive/112/28584/ (дата обращения: 17.12.2019].

Оценка временной и причинно-следственной связи между изменениями кишечной микробиоты и развитием патологии нервной и иммунной систем при БП является актуальным направлением исследований современной медико-биологической науки. Взаимосвязь нарушений в микробиоценозе кишечника и роли дисбиоза в поддержании патологического процесса послужили основанием для применения пробиотической терапии в комплексном лечении пациентов с БП, направленном прежде всего на улучшение качество жизни пациента, при данном неизлечимом заболевании.

Так, в нескольких клинических исследованиях было показано, что регулярное употребление кисломолочного напитка, содержащего пробиотические микроорганизмы способно существенно уменьшать выраженность запоров у пациентов при БП [Cassani Е., Privitera G., Pezzoli G., Pusani С., Madio С., Iorio L. et al. Use of probiotics for the treatment of constipation in Parkinson's disease patients. Minerva Gastroenterol. Dietol. 2011; 57(2): 117-21.]. [M. Barichella, C. Pacchetti, C. Bolliri et al. Probiotics and prebiotic fiber for constipation associated with Parkinson disease. Neurology Sep 2016, 87 (12) 1274-1280].

Было показано, что улучшение моторики кишечника у пациентов с БП приводит к улучшению абсорбции препаратов, назначаемых пациентам, в том числе для лечения БП и облегчения симптомов [Danique L.M. Radder, Nienke M.de Vries, Niels P. Riksen, Sarah J. Diamond, Ditza Gross, Daniel R. Gold, John Heesakkers, Emily Henderson, Adrianus L.A.J. Hommel, Herma H. Lennaerts, Jane Busch, Ray E. Dorsey, John Andrejack, Bastiaan R. Bloem. (2019) Multidisciplinary care for people with Parkinson's disease: the new kids on the block!. Expert Review of Neurotherapeutics 19:2, pages 145-157.]

В другом исследовании, проведенном Tamtaji О. с соавторами было показано достоверное улучшение моторной функции кишечника, снижение клинических показателей воспаления и оксидативного стресса у пациентов с БП, принимавших мультиштаммовый пробиотик по сравнению с группой плацебо [Tamtaji OR, Taghizadeh М, Daneshvar Kakhaki R, Kouchaki E, Bahmani F, Borzabadi S, Oryan S, Mafi A, Asemi Z. Clinical and metabolic response to probiotic administration in people with Parkinson's disease: A randomized, double-blind, placebo-controlled trial. Clinical Nutrition. -2019. - Vol. 38. - pp. 1031-1035.]

Многочисленные исследования указывают на нейропротективную активность антибиотикотерапии миноциклином пациентов при БП, один из механизмов которой - это возможность влиять на баланс кишечной микробиоты путем уменьшения соотношения Firmicutes/Bacteroidetes [Parashar A., Udayabanu М. Gut microbiota: Implications in Parkinson's disease. Parkinsonism Relat. Disord. 2017; 38: 1-7. doi: 10.1016/j.parkreldis.2017.02.002.].

Известен способ отбора средств, которые влияют на нарушения моторики кишечника и боль и бактериальные штаммы Lactobacillus gasseri LG345A (DSM 27123) и Lactobacillus gasseri LG621A (DSM 27126), отобранные с помощью предложенного способа [Патент РФ 2701348. Способ отбора средств, которые влияют на нарушения моторики кишечника и боль / Коннолли Имонн, Кунце Вольфганг, Биненшток Джон; заявитель и патентообладатель БИОГАЙА АБ (SE). - №2015112102; заявл. 03.09.2013; опубл. 26.09.2019, Бюл. №27. - 21 С.]

Наиболее близким к заявляемому способу является способ лечения нейродегенеративных заболеваний, к которым относится болезнь Паркинсона, согласно которому, наряду с базисной терапией, используют пробиотический штамм Enterococcus faecium L3 [Патент RU 2642246. Применение пробиотического штамма микроорганизма Enterococcus faecium L-3 для лечения нейродегенеративных заболеваний / Абдурасулова И.Н., Тарасова Е.А., Ермоленко Е.И., Мацулевич А.В., Суворов А.Н. - №2014154366; заявл. 30.12.2014; опубл. 24.01.2018, Бюл. №3.]

Задачей настоящего изобретения является создание способа улучшения качества жизни больных, страдающих болезнью Паркинсона, путем коррекции основных немоторных симптомов заболевания, а именно, нарушений дефекации, проявляющихся в констипации, каломазании и видоизменении формы кала.

Сущность изобретения состоит в том, что у пациента, который в течение не менее 10 дней не принимал антибиотики, пробиотические продукты и препараты, осуществляют взятие фекалий в количестве не менее 1 мл, из них выделяют клоны индигенных штаммов Enterococcus faecium, используя плотную питательную среду, содержащую азид натрия и краситель кристаллический фиолетовый, затем по характеру окраски осуществляют отбор колоний, получают чистые культуры путем пересева трех колоний розового цвета с бордовым центром на три сектора чашки Петри с такой же средой, после чего инкубируют в термостате в аэробных условиях при t=37°C, проверяют на отсутствие генов патогенности при помощи ПЦР, отбирают клоны, лишенные факторов патогенности, которыми заквашивают соевый гидролизат в объеме не менее 10 мл на литр, затем выбирают ту из заквасок, которая раньше других изменила структуру гидролизата, и используют ее для приготовления двух литров индивидуального аутопробиотического продукта с содержанием не менее 10⁸ КОЕ на 1 мл, который вводят пациенту перорально по 50 мл 2 раза в день курсом не менее 20 дней.

Существенным преимуществом предлагаемого метода является то, что при использовании индигенных бактерий, выделенных индивидуально из организма и вводимых повторно для коррекции дисбиотических состояний, отсутствует конфликт с иммунной системой и с другими представителями собственной микробиоты пациента. Способ получения аутопробиотика на основе Enterococcus faecium, представителя индигенной микрофлоры кишечника-хозяина, был защищен патентом RU №2460778.

Техническим результатом данного изобретения является повышение эффективности лечения болезни Паркинсона за счет уменьшения проявлений немоторных симптомов, улучшения моторики кишечника, его эвакуаторной способности и восстановления состава микробиоценоза кишечника.

Пример 1.

Для изучения эффективности заявленного изобретения было проведено слепое рандомизированное сравнительное клиническое исследование.

Обследовано 40 пациентов с болезнью Паркинсона (56-77 лет). Пациенты с болезнью Паркинсона получали базовую терапию основного заболевания. Они были разделены на две группы. Одна из групп «Пробиотик» (20 человек: 9 женщин, 11 мужчин 66,63±10,1 лет) получала пробиотик в виде закваски на основе E. faecium L3. Больные из второй группы «Аутопробиотик» (20 человек: 16 женщин, 4 мужчины 63,84±8,78 лет) получала 10 дней аутопробиотик в виде закваски на основе индигенных штаммов собственной микробиоты.

Всем пациентам проводили неврологическое обследование с оценкой выраженности двигательных расстройств по шкале оценки стадии БП Хен и Яра. У всех пациентов оценивалась также выраженность недвигательных проявлений болезни с помощью диагностических шкал: госпитальной шкалы тревоги, госпитальной шкалы депрессии (ГШД), гериатрической шкалы депрессии (ГРШД). Также использовали опросник воспринимаемого дефицита PDQ-20 - опросник воспринимаемого дефицита, состоящий из 20 вопросов, направленных на выявление когнитивных изменений у пациентов, унифицированной рейтинговой шкалы оценки БП (UPDRS), 2й части, шкалы немоторных симптомов при БП (PD NMS), Бристольской шкалы кала, Шкалы для оценки нарушений функции ЖКТ у пациентов с БП, кроме того пациенты вели дневник самочувствия, в котором указывали частоту дефекации, свойства стула и описывали субъективные ощущения. Подробное клиническое обследование проводилось до, во время (для исключения возникновения побочных эффектов) и после терапии пробиотиком /аутопробитиком.

В группе пациентов, получавших аутопробиотик и пробиотик, наблюдалось уменьшение выраженности вегетативных проявлений болезни: укорочение интервала между дефекациями (у 100%), уменьшение общей слабости (у 75%), уменьшение или исчезновение тошноты после приема пищи (у 90%), уменьшение дискомфорта в животе после приема пищи (у 85%).

Изменения в шкале немоторных симптомов до и после введения пробиотика и аутопробиотика представлены на фиг. 1. При сравнении шкалы немоторных состояний отмечена тенденция к их исчезновению (табл. 1.).

Средние значения частоты дефекаций до и после введения пробиотика и аутопробиотика представлены на рисунке 2. Выявлена тенденция к увеличению количества дефекаций, которое практически у всех пациентов было снижено.

На фиг. 2 показано количество дефекаций в неделю до и после введения пробиотика и аутопробиотика. р<0,05 (при сравнении группы больных до и после введения аутопробиотика и пробиотика).

В группе пациентов, получавших аутопробиотик, наблюдали уменьшение выраженности немоторных симптомов (фиг. 3, табл. 3). Также отмечали улучшение показателей по Бристольской шкале пациентов после курса пробиотической и аутопробиотической терапии (Рис. 3).

На фиг. 3 показаны Изменения в Бристольской шкале кала до и после введения пробиотика и аутопробиотика. р<0,05 (при сравнении группы больных до и после введения аутопробиотика и пробиотика).

Далее приведены результаты оценки количества отдельных представителей микробиоценоза кишечника здоровых волонтеров и пациентов с БП (до и после введения пробиотика и аутопробиотика) при помощи бактериологического метода (фиг. 4). В результате исследования было выявлено увеличение количества энтерококков на фоне введения пробиотических и индигенных энтерококков, снижение количества протея до и после введения аутопробиотика.

На фиг. 4. показано содержание маркерных бактерий до и после введения аутопробиотика и пробиотика (бактериологическое исследование). р<0,05 (при сравнении группы больных до и после введения аутопробиотика).

Далее приведены результаты оценки количества отдельных представителей микробиоценоза кишечника здоровых волонтеров и пациентов с БП (до и после введения пробиотика и аутопробиотика) при помощи ПЦР-РВ (фиг. 5). В результате исследования было выявлено статистически достоверное увеличение количества энтерококков на фоне введения пробиотических и индигенных энтерококков, тенденции к увеличению количества протея на фоне введения пробиотика, и его уменьшения после воздействия аутопробиотика, уменьшения или элиминация Clostridium difficile и C. perfringens в группах, получавших пробиотик и аутопробиотик.

На фиг. 5. показано содержание маркерных бактерий до и после введения аутопробиотика и пробиотика (ПЦР-РВ). р<0,05 (при сравнении группы больных до и после введения аутопробиотика).

Пример 2. Коррекция немоторных симптомов при помощи аутопробиотика

Пациентка К., 69 лет. Консультация 1. Жалобы на: изменение почерка, трудности при инициации движений, сутулость, скованность, замедленность, запоры, периодические ноющие боли в шейном, грудном и поясничном отделах позвоночника, ограничение подвижности в шее, запоры, каломазание. Считает себя больной с лета 2018 года, когда стала отмечать скованность, медлительность, значительное усиление недержания мочи. С марта 2019 года появилось изменение почерка и нарушение мелкой моторики, обратилась к неврологу по месту жительства, со слов пациентки, предположили диагноз Болезнь Паркинсона. 24.06.2019 консультирована неврологом, установлен диагноз ЦВБ, ДЭП II, Болезнь Паркинсона, рекомендована консультация паркинсонолога. 25.06.2019 консультирована неврологом, поставлен диагноз Болезнь Паркинсона, акинетико-ригидная форма, 2,5 стадия по шкале Хен и Яра, с преимущественно правосторонней симптоматикой. В апреле 2019 года проходила стационарное лечение с диагнозом «Хронический колит с запорами, хронический комбинированный геморрой II ст.» 28.06.2019 госпитализирована по экстренным показаниям с анамнестическим кровотечением, рекомендовано амбулаторное лечение.

Неврологический статус

Состояние удовлетворительное. Сознание ясное, контактна. Мнестически сохранна. Эмоциональный фон стабильный. Движения глазных яблок в полном объеме. Глазные щели D=S. Нистагма нет, диплопию не предъявляет. Гипомимия легкая. Язык по средней линии. Рефлексы орального автоматизма: не вызываются. Дисфагии нет. Дизартрии нет. Дисфония легкая. Сила мышц конечностей полная, D=S. Тонус мышц повышен по экстрапирамидному типу, D>S. Рефлексы с конечностей средней живости, D=S. Пробы на брадикинезию положительны, D>S. Постурально-кинетического тремора нет. КП - удовлетворительно. В позе Ромберга устойчива. Проба Тевенара положительная (4 шага). Ширина, высота шага снижены. Менингеальной симптоматики не выявлено. Функции тазовых органов контролирует.

Нейропсихологическое тестирование до применения аутопробиотика

Шкала тревоги Шихана=8; госпитальная шкала тревоги и депрессии=1/8; гериатрическая шкала депрессии=3; бристольская шкала кала=6; немоторные симптомы=9; PDQ-20=2; частота дефекаций в неделю=3.

После консультации назначено использование аутопробиотика помимо основной терапии.

Для выделения аутопробиотических энтерококков из фекалий пациентки, доставленных в течение двух часов после отбора материала, к 1 г материала добавляли 9 мл стерильного фосфатного буфера (физиологический раствор хлорида натрия с добавлением фосфатов натрия двух и однозамещенных, смешанных в пропорции, необходимой для создания рН 7,4). Часть проб фекалий замораживали и хранили при -20°С для анализа состава микробиоты при помощи ПЦР-РВ и метагеномного анализа (16SpРНК).

Суспензию фекалий в разведении 1:10 высевали в количестве 100 мкл на селективную агаризованную питательную среду для энтерококков, содержащую азид натрия (НИЦФ, Санкт-Петербург). Культивировали в течение 24-48 часов при температуре 37°С. На среде с азидом натрия отбирали три типичные по морфологии колонии Е. faecium розового цвета с бордовым центром и переносили на новую чашку Петри с плотной азидной средой с целью накопления чистых культур, засеянных отдельно на три сектора чашки. Культивировали в течение 24 часов при 37°С. Чистые культуры направляли на генетический анализ. Определяли видовую принадлежность при помощи ПЦР с использованием праймеров, высокоспецифичных к определенным видам энтерококков, и наличие или отсутствие факторов патогенности не менее чем по пяти генам патогенности. Детекцию результатов ПЦР осуществляли с помощью горизонтального электрофореза в 1% агарозном геле.

Для подготовки аутопробиотиков отобрали один бактериальный клон, относящийся к интересующим видам микроорганизмов (E. faecium), не содержащий ни одного из генов патогенности.

Получение безмолочной закваски на основе отобранных штаммов E. faecium. производили следующим образом. Отдельную колонию выбранной идентифицированной чистой культуры микроорганизма высевали на 10 мл 5% бульона из соевых белковых изолятов (стерилизованное автоклавированием при 120°С в течение 20 мин) и инкубировали в течение 24-48 час при 37°С. Затем, полученные 10 мл закваски использовали как посевной материал для получения большего объема закваски. Для этого засевали 10 мл закваски на 1 литр прогретого при 37°С стерильного 5% бульона из соевых белковых изолятов. После получения закваски продукт хранили до использования в холодильнике при 4°С не более 3 дней, после чего закваску передали пациентке. Для сохранения полученных штаммов готовый продукт разливали по двум пробиркам и отправляли на хранение при -75°С до года, для возможного повторного изготовления аутопробиотика.

Консультация 2.

Нейропсихологическое тестирование после применения аутопробиотика

Шкала тревоги Шихана=6; госпитальная шкала тревоги и депрессии=0/5; гериатрическая шкала депрессии=2; бристольская шкала кала=5; немоторные симптомы: 5; PDQ-20=4; частота дефекаций в неделю=5.

После 20 дней приема препарата были повторно отобраны фекалии пациентки. Исследование фекалий пациентки до и после перорального приема аутопробиотика на фоне базовой терапии при помощи ПЦР-РВ и метагеномного анализа показало, что у больной снижалось представительство превотелл, увеличивалась популяция полезных бактерий лахноспир, руминококков и стрептококков (таблицы 2 и 3). В основном увеличивалось количество энтерококков, которые при метагеномном анализе не распознаются как отдельное семейство при сопоставлении состава стрептококков (таблица 3). Принципиально важным было снижение условно-патогенных бактерий Bacteroides fragilis и увеличение содержания фекалибактерий.

Таким образом, у пациентки была отмечена положительная динамика по шкалам оценки тревоги, депрессии, уменьшилась выраженность немоторных проявлений болезни Паркинсона, увеличилась частота стула, кал стал более оформленным, также пациентка сообщила о прекращении каломазания. Все эти изменения происходили на фоне восстановления состава микробиоценоза кишечника.

Особенно важно, что происходило с уменьшением превотелл, увеличение содержание которых трактуется как отрицательное звено в патогенезе БП, и увеличение фекалибактерий, относящихся к бутиратпродуцирующим бактериям, усиливающим моторику и стимулирующим продукцию слизи, защищающей слизистую оболочку.

Заключение

Проведенные исследования позволяют рассматривать аутопробиотики на основе E. faecium как эффективный препарат, способствующий повышению качества жизни пациентов за счет уменьшения немоторных симптомов (общей слабости, тошноты и дискомфорта после приема пищи), улучшения моторики кишечника, его эвакуаторной способности, восстановления состава микробиоценоза кишечника.

Способ уменьшения выраженности немоторных симптомов у пациентов, страдающих болезнью Паркинсона, путем коррекции микробиоценоза кишечника, заключающийся в том, что у пациента, который в течение не менее 10 дней не принимал антибиотики, пробиотические продукты и препараты, осуществляют взятие фекалий в количестве не менее 1 мл, из них выделяют клоны индигенных штаммов Enterococcus faecium, используя плотную питательную среду, содержащую азид натрия и краситель кристаллический фиолетовый, затем по характеру окраски осуществляют отбор колоний, получают чистые культуры путем пересева трех колоний розового цвета с бордовым центром на три сектора чашки Петри с такой же средой, после чего инкубируют в термостате в аэробных условиях при t=37°C, проверяют на отсутствие генов патогенности при помощи ПЦР, отбирают клоны, лишенные факторов патогенности, которыми заквашивают соевый гидролизат в объеме не менее 10 мл на литр, затем выбирают ту из заквасок, которая раньше других изменила структуру гидролизата, и используют ее для приготовления двух литров индивидуального аутопробиотического продукта с содержанием не менее 10⁸ КОЕ на 1 мл, который вводят пациенту перорально по 50 мл 2 раза в день курсом не менее 20 дней.