Способ получения вакцины оспенной инактивированной эмбриональной сухой в таблетированной форме для орального применения

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для получения вакцины оспенной инактивированной. Способ получения вакцины

оспенной инактивированной эмбриональной сухой в таблетированной форме для орального применения на основе гетерогенного штамма Б-51 включает культивирование вируса вакцины на хорион-аллантоисных оболочках 12-13-суточных куриных эмбрионов, сублимационное высушивание биомассы, добавление необходимого количества вспомогательных компонентов, прессование полуфабриката в таблетку заданной массы. При этом культивированный вирус иммобилизуют путем последовательного растворения в 2%-ном по массе натрия фосфате фосфорнокислом двузамещенном и 1%-ном по массе кальции хлористом с образованием фосфаткальциевого геля, используемого для капсулирования вириона, с дальнейшей инактивацией одной массовой доли сухой биомассы двумя массовыми долями 96%-ного этилового спирта в течение минимум 1 часа, с последующей отгонкой этилового спирта из реактора. Использование данного способа позволяет обеспечить полную инактивацию живого вируса вакцины при сохранении белков оболочки вируса, отвечающих за иммуногенность вакцины. 1 табл.

 

Изобретение относится к области биотехнологии, получению вакцинных препаратов, в частности к разработке способа получения вакцины оспенной инактивированной эмбриональной сухой в таблетированной форме для орального применения.

Изобретение может быть использовано для создания грундиммунитета при первичной иммунизации в двухэтапном методе иммунизации людей против натуральной оспы и оспы животных, патогенных для человека.

В настоящее время, после отмены оспопрививания во всем мире существует реальная опасность возникновения эпидемической ситуации в результате внутрилабораторного заражения патогенными для человека ортопоксвирусами, совершения биотеррористических актов, либо в случаях возникновения природных очагов инфекций.

Известен способ получения инактивированной сухой оспенной вакцины «ОспаВир» [(19) RU (11) 2259214 (13) С1(21), (22) 20041025, 71/13 28.01.2004, (51) МПК⁷ A61K 39/285, A61K 39/275, A61K 39/12 (73)] Федеральное государственное унитарное предприятие «Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам» «Микроген» Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU) (прототип).

Способ получения вакцины «ОспаВир» включает ряд трудоемких, продолжительных по времени стадий: в качестве вакцинного штамма используют штамм Л-ИВП, субстратом накопления вируса является кожа теленка, что усложняет технологию производства данного, препарата в соответствии с правилами GMP, поскольку существует необходимость в очистке соскоба вируссодержащего материала от посторонней микрофлоры. Вируссодержащую жидкость инактивируют гамма-излучением Со⁶⁰, что предусматривает наличие специального оборудования. Продолжительность стадии инактивации составляет не менее 18 часов. Время подготовки теленка к инфицированию составляет 30 суток, время выращивания вируса составляет 80-96 часов. Вакцина «ОспаВир» вводится подкожно, что сопряжено с появлением местных реакций.

Целью настоящего изобретения является разработка способа получения вакцины оспенной инактивированной эмбриональной сухой в таблетированной форме для орального применения.

Сущность настоящего изобретения состоит в том, что способ получения вакцины оспенной инактивированной эмбриональной сухой в таблетированной форме включает следующие технологические стадии: культивирование вируса вакцины, иммобилизацию вируса, его инактивацию, сублимационное высушивание биомассы, добавление вспомогательных компонентов, прессование полуфабриката в таблетку.

Технический результат предлагаемого изобретения выражается в том, что соблюдение указанных технологических стадий обеспечивает полную инактивацию живого вируса вакцины при сохранении белков оболочки вируса, отвечающих за иммуногенность вакцины.

Указанный технический результат достигается за счет того, что накопленный в хорион-аллантоисных оболочках 12-13 суточных куриных эмбрионов вирус вакцины гетерогенного штамма Б-51 иммобилизуют фосфаткальциевым гелем для сохранения поверхностных белков оболочки вируса; инактивируют вируссодержащий материал после сублимационного высущивания 96% этиловым спиртом из расчета 1 г сухого вируссодержащего материала на 2 г этилового спирта, с экспозицией не менее часа, с последующей отгонкой этилового спирта; добавляют к полученной биомассе для получения таблетированной формы вакцины аэросил марки AM-1-300, сахарозу, кальция стеарат и ванилин, с последующей прессовкой таблеточной массы.

В одной таблетке массой 0,25 г содержатся следующие компоненты, процент по массе:

инактивированная биомасса вируса вакцины	81,8
аэросил марки AM-1-300	6,0
сахароза	10,0
кальция стеарат	2,0
ванилин	0,2

Новизна предлагаемого изобретения заключается в том, что культивированный вирус иммобилизуют фосфаткальциевым гелем, инкативации подвергается сухой биоматериал, а в качестве инактиванта используют 96% этиловый спирт.

Изобретательский уровень предложенного технического решения заключается в том, что из уровня техники явным образом следует, что использование в качестве инактиванта 96% этилового спирта для сухого вируссодержащего материала иммобилизированного фосфаткальциевым гелем обеспечивает полную инактивацию вируса с сохранением его антигенных свойств.

Промышленная применимость заключается в возможности использования для реализации заявленного способа получения вакцины оспенной инактивированной эмбриональной сухой в таблетированной форме типового биотехнологического оборудования и доступных материалов в микробиологической и фармацевтической промышленности Российской Федерации.

Предложенное техническое решение может быть использовано для получения вакцины оспенной инактивированной эмбриональной сухой в таблетированной форме, которое обеспечит безвредность и эффективную иммуногенность препарата против ортопоксвирусов, патогенных для человека, что значительно улучшит средства профилактики населения и воинских контингентов РФ.

Пример выполнения

По разработанной технологии приготовлены экспериментально-производственные серии вакцины оспенной инактивированной эмбриональной сухой в таблетированной форме для орального применения.

Приготовление включает следующие технологические стадии:

1. Получение иммобилизованного жидкого вируссодержащего материала.

Для получения вируссодержащей суспензии 12-13 суточные куриные эмбрионы инфицируют рабочим разведением посевной серии вакцинного штамма Б-51. Инфицированные куриные эмбрионы инкубируют при температуре (35,5-36,5)°С и относительной влажности воздуха (50-60)% в течение (48-52) ч. Затем куриные эмбрионы вскрывают и извлекают инфицированные хорион-аллантоисные оболочки, которые помещают в измельчитель и обрабатывают в течение 1,5 мин при 14000 об/мин. После измельчения в суспензию хорион-аллантоисных оболочек куриных эмбрионов последовательно вводят 2% натрий фосфорнокислый двузамещенный (Na₂HPO₄⋅12H₂O) и 1% кальций хлористый (CaCl₂) безводный по массе. В результате реакции замещения образуется фосфаткальциевый гель (CaHPO₄⋅nH₂O), который иммобилизирует вирус вакцины в суспензии.

2. Сублимационное высушивание иммобилизированной вируссодержащей суспензии.

Сушильную установку включают на режим замораживания до минус 40°С. Показатели процесса высушивания на момент достижения температуры материала:

- температура конденсатора-вымораживателя - минус (75-80)°С;

- вакуум в сублиматоре - (2-5) mTorr.

По окончании высушивания проводят девакуумирование установки. Затем поддоны с сухим материалом извлекают и измельчают.

3. Получение инактивированного 96% этиловым спиртом сухого иммобилизированного биоматериала.

Сухой биоматериал полностью смачивают 96% этиловым спиртом из расчета на 1 г сухого вируссодержащего материала 2 г спирта. Смесь выдерживают при комнатной температуре не менее 1 часа. Затем удаляют остатки спирта под вакуумом.

4. Приготовление таблеток.

В состав наполнителя таблеток входят: сахароза, стеарат кальция, ванилин, аэросил. Навески компонентов наполнителя таблеток засыпают в смеситель-измельчитель и перемешивают в течение (5,0±1,5) мин. После чего таблеточную массу взвешивают и таблетируют, засыпая в бункер пресса. Из бункера таблеточная масса самотеком поступает в питатель. Включают пресс и прессуют таблетки. Качество таблеток подлежит контролю. Контролируются следующие показатели качества: внешний вид, однородность массы (отклонение от средней массы), распадаемость в воде, потеря в массе при высушивании, специфическая безопасность (полнота инактивации вируса), микробиологическая чистота, токсичность, иммуногенность.

В таблице 1 представлены характеристики получения вакцин оспенной инактивированной эмбриональной сухой в таблетированной форме для орального применения и «ОспаВир» (прототип) в сравнении.

Таким образом, представленные результаты свидетельствуют о создании экспериментального образца защитного препарата - таблетированной эмбриональной сухой инактивированной оспенной вакцины для орального применения «ТЭОВин». Вакцина может быть рекомендована для использования в двухэтапном методе иммунизации против натуральной оспы и оспы животных, патогенных для человека при первом этапе вакцинации.

Способ получения вакцины оспенной инактивированной эмбриональной сухой в таблетированной форме для орального применения на основе гетерогенного штамма Б-51, включающий культивирование вируса вакцины на хорион-аллантоисных оболочках 12-13-суточных куриных эмбрионов, сублимационное высушивание биомассы, добавление необходимого количества вспомогательных компонентов, прессование полуфабриката в таблетку заданной массы, отличающийся тем, что культивированный вирус иммобилизуют путем последовательного растворения в 2%-ном по массе натрия фосфате фосфорнокислом двузамещенном и 1%-ном по массе кальции хлористом с образованием фосфаткальциевого геля, используемого для капсулирования вириона, с дальнейшей инактивацией одной массовой доли сухой биомассы двумя массовыми долями 96%-ного этилового спирта в течение минимум 1 часа, с последующей отгонкой этилового спирта из реактора.