Способ прогнозирования рецидивирования серозной карциномы яичников

Изобретение относится к области медицины, в частности к молекулярной онкологии, и предназначено для прогнозирования рецидивирования серозной карциномы яичников. Проводят анализ экспрессии микро-РНК в образце трепан-биопсии яичника, включающий внесение экзогенного контроля и выделение тотальной РНК, обратную транскрипцию с последующей амплификацией в режиме реального времени, при этом используют праймеры для hsa-miR-150-5p, hsa-miR-140-3р, hsa-miR-221-3р. Анализируют полученные данные и вычисляют прогностический коэффициент RS по формуле: RS = (1,96 * экспрессия hsa-miR-140-3р) + (-2,7 * экспрессия hsa-miR-150-5p) + (2,13 * экспрессия hsa-miR-221-3р). При значениях RS ≥ 13 прогнозируют риск развития рецидива заболевания в течение первых шести месяцев после завершения лечения. Изобретение обеспечивает создание нового, эффективного, специфичного способа прогнозирования безрецидивной выживаемости больных серозной карциномой яичников. 3 з.п. ф-лы, 3 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к молекулярной онкологии, и может найти применение для прогнозирования рецидива у больных раком яичников.

Рак яичников (РЯ) является седьмым по распространенности злокачественным новообразованием у женщин в развитых странах, вторым по распространенности гинекологическим раком (9,4/100 000), но самое главное, ведущей причиной смертности от рака у женщин (5,1/100 000). 90% всех случаев опухолей яичников составляет эпителиальный рак яичников. Это агрессивная форма РЯ с 5-летней общей выживаемостью менее 50% (см. Chien J., Neums L., Powell A.F.L.A., et al. Genetic Evidence for Early Peritoneal Spreading in Pelvic High-Grade Serous Cancer. Front Oncol. 2018;8:58). Средний возраст постановки первичного диагноза составляет от 55 до 65 лет, при этом пожизненный риск развития рака яичников составляет 1,5%. Основными факторами риска РЯ являются возраст и наличие семейного анамнеза РЯ и/или молочной железы (см. Torre L.A., Trabert В., DeSantis С.Е., et al. Ovarian cancer statistics, 2018. CA Cancer J Clin. 2018; 68(4):284-296).

Летальность РЯ обусловлена аберрантным ростом клеток и перитонеальным диссеминированным метастазированием (см. Zhang L.Y., Chen Y., Jia J., Zhu X., He Y., Wu L.M. MiR-27a promotes EMT in ovarian cancer through active Wnt/β-catenin signalling by targeting FOXO1. Cancer Biomark. 2019; 24(1):31-42). Поскольку заболевание протекает бессимптомно на ранних стадиях, большинство случаев, как правило, выявляется на поздней стадии и, таким образом, серьезно влияет на выживаемость пациентов (см. James N.E., Chichester С, Ribeiro J.R. Beyond the Biomarker: Understanding the Diverse Roles of Human Epididymis Protein 4 in the Pathogenesis of Epithelial Ovarian Cancer. Front Oncol. 2018; 8:124).

Несмотря на большой прогресс в химиотерапии и хирургическом лечении этого заболевания, у большинства пациентов все еще развивается рецидив или метастазирование, а 5-летняя выживаемость пациентов, у которых диагностируется перитонеальное метастазирование, составляет около 30%, инвазия и метастазирование РЯ на ранней стадии являются ведущими причинами его высокой смертности и плохого прогноза (см. Zhang Y., Zhao F.J., Chen L.L., et al. MiR-373 targeting of the Rab22a oncogene suppresses tumor invasion and metastasis in ovarian cancer. Oncotarget. 2014; 5(23):12291-12303).

В последнее время было достигнуто согласие в отношении того, что различные микроРНК (миРНК) экспрессируются аномальным образом в опухолевой клетке и функционируют в качестве онкогенов или генов-супрессоров при РЯ, и поэтому являются потенциальными мишенями для диагностики и лечения опухолей (см. Nagaraj А.В., Joseph P., DiFeo A.. miRNAs as prognostic and therapeutic tools in epithelial ovarian cancer. Biomark Med. 2015; 9(3):241-257).

Из патентных источников известен «Способ определения продолжительности безрецидивного периода при серозном раке яичников» (см. Патент на изобретение RU №2613302 С1, опубл. 15.03.2017, Бюл. №8). Для этого во время проведения больным раком яичников операции полного объема в гомогенате ткани опухоли определяют уровень НЕ4, и при его значении от 4768 пМ/г до 5674 пМ/г сырой ткани прогнозируют продолжительность безрецидивного периода 6 и более месяцев, а при его значении от 7995 пМ/г до 9339 пМ/г сырой ткани прогнозируют продолжительность безрецидивного периода менее 6 месяцев. Способ позволяет оценить биологическую активность первичной опухоли яичника, индивидуальный прогноз заболевания и тактику дальнейшего ведения пациенток при возможности многократного воспроизведения в лечебных учреждениях онкологического профиля, располагающих биохимическими лабораториями. Недостатками известного способа является возможность проведения предлагаемого анализа только после оперативного вмешательства.

Так же известен «Способ для прогнозирования метастазирования рака яичников на основе группы генов микроРНК» (см. Патент RU №2666911 А, опубл. 24.05.2018, Бюл. №15) путем выявления метилирования по крайней мере трех маркеров из пяти и отличается тем, что маркерами системы являются гены: miR-137, miR-193a, miR-1258, miR-203 и miR-127. Заявляемый способ позволяет выявить рак яичников и прогнозировать его метастазирование с высокой клинической чувствительностью и специфичностью. Недостатками известного способа является возможность проведения предлагаемого анализа только после оперативного вмешательства.

Известен «Способ прогнозирования исхода распространенного рака яичников после адъювантной химиотерапии по схеме АР» (см. Патент RU №2699561 С1, опубл. 06.09.2019 Бюл. №25), который может быть использован для прогнозирования исхода распространенного рака яичников после адъюватной химиотерапии по схеме АР (цисплатин 75 мг/м2 + доксорубицин 50 мг/м2). Для этого проводят одномоментное определение уровней матричной РНК (мРНК) эндотелиального фактора роста A (Vascular endothelial growth factor (VEGF-A)) и кросс- комплементирующих генов эксцизионной репарации (ERCC - excision repair cross complementing (ERCC1)). Определение уровней матричной РНК проводят в опухолевой ткани первичной больной, полученной интраоперационно, с последующим расчетом интегрального показателя I по предложенной формуле, и при значении I<2 прогноз считается положительным с вероятностью 81%, а при значении I>2 прогноз считается неблагоприятным в 75% случаев. Однако, изобретение обеспечивает прогнозирование исхода рака яичников только после адъювантной химиотерапии по схеме АР для индивидуализации тактики и улучшения результатов лечения больных.

Известен «Способ прогнозирования длительности безрецидивного интервала после завершения первичного лечения больных раком яичников» (см. Патент RU №2018111101, опубл.: 10.01.2019 Бюл. №1), который может быть использован при раке яичников для улучшения результатов лечения путем увеличения количества курсов или изменения тактики адъювантной химиотерапии при неблагоприятных значениях маркеров. По совокупности результатов оценки уровней опухолеассоциированных маркеров прогнозируют длительность безрецидивного интервала, и если: у пациенток моложе 40 лет концентрация СА125 выше 35 ед/мл и/или концентрация НЕ4 выше 70 пмоль/л; у пациенток в возрасте 40-50 концентрация СА125 выше 35 ед/мл и/или концентрация НЕ4 выше 100 пмоль/л; у пациенток старше 50 лет концентрация СА125 выше 35 ед/мл и/или концентрация НЕ4 выше 120 пмоль/л, то время безрецидивного течения после окончания первичного лечения не превысит одного года. Недостатком способа является определение безрецидивного периода только после окончания первичного лечения заболевания.

Известен способ «Количественной оценки hsa-miR-16-5p, hsa-miR-425-5р, hsa-miR-17-5p, hsa-miR-20a-5p, hsa-miR-101-Зр, hsa-miR-30d-5p и hsa-miR-93-5p в плазме периферической крови женщин как способ неинвазивной диагностики серозных пограничных цистаденом и цистаденокарценом яичника» (см. Патент RU №2688189 С9, опубл. 20.05.2019, Бюл. №14). Предложена количественная оценка hsa-miR-16-5р, hsa-miR-425-5p, hsa-miR-17-5р, hsa-miR-20a-5p, hsa-miR-101-3р, hsa-miR-30d-5p и hsa-miR-93-5p в плазме периферической крови женщин. Методом количественной ПНР в реальном времени в образце плазмы крови женщины определяют уровень экспрессии семи микроРНК (hsa-miR-16-5р, hsa-miR-425-5p, hsa-miR-17-5р, hsa-miR-20a-5p, hsamiR-101-Зр, hsa-miR-30d-5p и hsa-miR-93-5p) с предпочтительным использованием стандартных ДНК для последующего расчета оценочного параметра (ОП) при построении модели PLS-DA. При значении 0<ОП<4,5 делают заключение о высокой вероятности наличия серозной опухоли яичников у женщины (серозных пограничных цистаденом и серозных цистаденокарцином высокой степени злокачественности). При значении -1,8<ОП<0 делают заключение о высокой вероятности отсутствия серозной опухоли яичников. Изобретение обеспечивает дифференциальную диагностику серозных опухолей яичников с высокой точностью и диагностической значимостью, однако не связано с прогнозированием рака яичников.

Определяющими отличиями заявляемого способа, по сравнению с вышеописанными, являются:

- метод основан на оценке относительной экспрессии экспериментально подобранной сигнатуры микроРНК: hsa-miR-150-5р, hsa-miR-140-3р, hsa-miR-221-3р;

- определение уровня относительной экспрессии микроРНК в образцах трепан-биопсии яичников проводят методом RT-PCR с использованием экзогенной референсной микроРНК cel-miR-39-5p (экзогенный контроль) с известной последовательностью, не характерной для человека, которая вносится перед проведением анализа в стандартном количестве во все образцы для нормализации эффективности выделения и обратной транскрипции (использование данного подхода повышает воспроизводимость и достоверность получаемых данных);

- заключение о прогнозировании периода безрецидивной выживаемости пациентов с раком яичником делают на основании тестирования образцов трепан-биопсии яичников;

- получение комплементарной ДНК реализуется при помощи poly(A)-RT технологии с использованием универсального RT-праймера.

Техническим результатом заявляемого изобретения является создание нового, эффективного, специфичного способа прогнозирования безрецидивной выживаемости больных серозной карциномой яичников.

Технический результат достигается тем, что проводят анализ экспрессии микро-РНК в образце трепан-биопсии яичников, включающий внесение экзогенного контроля и выделение тотальной РНК, обратную транскрипцию с последующей амплификацией в режиме реального времени, при этом используют высокоспецифичные праймеры для hsa-miR-150-5р, hsa-miR-140-3р, hsa-miR-221-3р, анализируют полученные данные и вычисляют прогностический коэффициент RS (risk score), используя значения относительной экспрессии hsa-miR-150-5р, hsa-miR-140-3р, hsa-miR-221-3р: RS = (1,96 * экспрессия hsa-miR-140-3р)+(-2,7 * экспрессия hsa-miR-150-5р) + (2,13 * экспрессия hsa-miR-221-3р), и при значениях RS≥13 прогнозируют безрецидивный период течения заболевания в течение 6 месяцев после окончания лечения.

Способ основан на патогенетическом факторе канцерогенеза -аберрантной экспрессии микроРНК, ассоциированных с инициацией и развитием злокачественного процесса, что приводит к прогрессированию опухоли.

Заявленный способ включает следующие этапы: гомогенизация биоптата, внесение экзогенного контроля, выделение тотальной РНК; проведение обратной транскрипции для наработки комплементарной ДНК (кДНК), RT-PCR полученной кДНК в присутствии специфичных праймеров; обработку данных для оценки изменения относительной экспрессии в образце.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Полученный образец трепан-биопсии гомогенизируют в Trizol LS® (Life Technologies, Пейсли, Великобритания) с добавлением 0,2 М уксусной кислоты для предотвращения контаминации с ДНК. В смесь объемом 200 мкл вносят 3.5 мкл экзогенного контроля (начальная концентрация 1*10⁸ копий/мкл). Выделение тотальной РНК из ткани проводят подходящим методом экстракции. Выделенную РНК подвергают обратной транскрипции. Обратная транскрипция микроРНК проводится одновременно с полиаденилированием РНК, с использованием универсального RT-праймера (см. таблица 1).

Анализируемые последовательности генетических локусов амплифицируют в 20 мкл PCR-смеси, содержащей 1х PCR-буфер, 1х EvaGreen, 0.25 mM dNTPs, 2 мМ MgCl2, 1 ед. акт. Taq-DNАполимеразы, по 0,5 мкМ прямого и обратного праймеров. Программа амплификации: 95°С - 5 минут, затем 40 циклов (60°С - 60 секунд и 95°С - 15 сек.). Последовательности PCR-праймеров подобраны с использованием баз данных MirBase (http://www.mirbase.org/) приведены в таблице 1. Постановку RT-PCR каждого образца проводят в трех повторах.

Для оценки риска прогрессирования рассчитывают прогностический коэффициент RS по формуле: RS = (1,96 * экспрессия hsa-miR-140-3р) + (-2,7 * экспрессия hsa-miR-150-5р) + (2,13 * экспрессия hsa-miR-221-3р)

При коэффициенте ≥13 больную относят в группу повышенного риска (OR=1,5, р=0,0002).

Предлагаемый способ был апробирован на 30 больных в возрасте от 25 до 76 лет, проходивших лечение на базе ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России. На основании длительности безрецидивного периода течения заболевания больные были разделены на две группы: группа 1 (12 человек) с безрецидивной формой заболевания, группа 2 (18 человек) с агрессивной быстропрогрессирующей формой заболевания.

В целях оценки потенциальной значимости выбранных маркеров была рассчитана их чувствительность и специфичность, которые составили 92% и 98%, соответственно.

Работоспособность способа прогнозирования рецидивирования серозной карциномы яичников иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1.

Больная К., 64 года госпитализирована в отделение онкогинекологии ФГБУ НМИЦ онкологии в июне 2019 года с жалобами на боли внизу живота, увеличение живота в размерах, выраженную слабость, одышку при физической нагрузке.

Анамнез заболевания: считает себя больной с мая 2019 года, когда находилась на лечении в дневном стационаре ЦРБ г. Ставрополь по поводу болей в правой ноге. 14.05.2019 отметила появление одышки, слабость. Выполнена рентгенограмма ОГК от 01.06.2019: справа от переднего отрезка 4 ребра, слева от переднего отрезка 6 р. интенсивное гомогенное затемнение с косой верхней границей. Справа купол диафрагмы не дифференцируется. Корень справа не просматривается, слева структурный.

Средостение по средней линии. Аорта без особенностей.

03.06.2019 выполнен торакоцентез, эвакуировано около 2 л жидкости, ц/а плевральной жидкости: элементы рака из железистого эпителия.

КТ СКТ ОГК от 04.06.19: справа определяется участок консолидации легочной ткани, спаянный с м/долевой плеврой, в котором прослеживаются частично просветы субсегментарных ветвей В8. Слева в S8 участок плевропневмофиброза. Органы средостения без особенностей. В плевральных полостях наличие жидкости, больше справа. ФБС от 05.06.2019: дистония трахеи, главных бронхов 1 степени. Двусторонний диффузный атрофический бронхит. УЗИ брюшной полости от 05.06.2019: умеренное увеличение размеров печени, диффузные изменения ее паренхимы. Асцит.

КТ органов брюшной полости от 06.06.2019: КТ данных за объемный процесс в печени, поджелудочной железе, селезенке не выявлено. Признаки канцероматоза брюшины. Двусторонний гидроторакс, небольшие синусовые кисты почек. МРТ органов малого таза от 08.06.2019: MP- признаки канцероматоза брюшины с наличием единичного узла в малом тазу. Значительное количество свободной жидкости в полости таза, брюшной полости. Анализ крови на онкомаркеры СА-125-216,3, Не-4 больше 1500 пмоль/л, индекс ROMA 96,9% от 14.06.2019 г.

14.06.2019 выполнены: лапароцентез (эвакуировано 3 л асцитической жидкости), трепан-биопсия яичника. УЗИ ОМТ, ОБП от 17.06.2020, заключение: асцит, объемные новообразования в малом тазу четко не определяются. Асцит. Диффузные изменения паренхимы печени (по типу жирового гепатоза), поджелудочной железы. Кисты почечного синуса с двух сторон. Диффузные изменения паренхимы щитовидной железы.

Объективный статус: общее состояние средней степени тяжести. Сознание ясное. АД 125/80 мм. рт.ст. Т=36,6 0 С.Кожные покровы бледные, сухие. Лимфоузлы, доступные пальпации, не увеличены. Живот увеличен за счет асцита, напряжен, безболезненный. Умеренно выраженное варикозное расширение подкожных вен нижних конечностей. С-м раздражения брюшины отрицательный. Одышка при ходьбе, в покое нет. Справа дыхание везикулярное, хрипов нет, ясный легочной звук. Слева - дыхание выслушивается до 6 ребра, ниже 6 ребра тупой перкуторный звук, дыхание не выслушивается.

Физиологические отправления: стул нормальный, диурез - олигурия. Моча светло-желтого цвета. Периферических отеков нет. Рост = 160 см, вес = 89 кг. ППТ = 1,99 м².

Status genitalis: наружные половые органы без видимой патологии. Шейка матки эрозирована вокруг наружного зева, цилиндрической формы. Матка с придатками четко не пальпируются из-за напряженного асцита. Паховые лимфоузлы не увеличены. При осмотре через прямую кишку: на уровне, достижимом пальцем, патологии не выявлено. На перчатке следы кала.

Лабораторные данные: общий анализ крови от 01.06.2020: гемоглобин - 136 г/л, эритроциты - 4,36*1012/л., лейкоциты - 6,84*109/л., тромбоциты - 278*109/л., палочкоядерные - 4%, сегментоядерные - 63%, эозинофилы - 4%, моноциты - 7%, лимфоциты 22%. Биохимический анализ крови от 01.06.2019 г: общий билирубин 13,2 моль/л, креатинин - 78 ммоль/л, глюкоза - 4,7 моль/л, общий белок - 53,7 г/л.

После проведенного обследования выставлен диагноз: рак яичников T3cNxM1, полисерозит, (мтс в плевру, канцероматоз брюшины) гр. 2.

Пациентке выполнено исследование относительной экспрессии микроРНК hsa-miR- 150-5р, hsa-miR-140-3р, hsa-miR-221-3р в биоптате яичника (см. таблица 2).

risk score = (1,96*7,5)+(-2,7*6,74)+(2,13*8,17)=13,9

Риск прогрессирования рака яичников определен как высокий (risk score > 13).

Учитывая местно-распространенный процесс: асцит, плеврит консилиумом врачей НМИЦ онкологии рекомендовано начать лечение с проведения курсов неоадъювантной химиотерапии по схеме: паклитаксел 175 мг/м2 в/в в 1-ый день, карбоплатин АИС 6 в/в в 1-ый день 21-дневного курса. С июня 2019 года проведено 3 курса неоадьювантной полихимиотерапии (НАПХТ), хирургическое лечение в объеме оптимальной циторедукции: субтотальной гистерэктомии с придатками, экстирпации большого сальника, аппендэктомии. В послеоперационном периоде проведено 6 курсов АПХТ.

Морфологическое исследование послеоперационного материала - в яичниках комплексы желез аденокарциномы с дистрофическими изменениями. Выраженный фиброз стромы яичников. Гиалиноз белых тел и стенок сосудов. Выраженный ответ на проведенное неоадъювантное химиотерапевтическое лечение. В маточных трубах- атрофия слизистой оболочки, склероз подслизистого слоя. Гипопластичный эндометрий. В миометрии- лейомиомы. В жировой клетчатке сальника на фоне фиброзной ткани одиночные фрагменты раковых желез с дистроффическими изменениями. Большое количество псаммомных тел. Метастазы серозной карциномы высокой степени злокачественности. В аппендиксе метастазы одиночных раковых желез, большое количество псаммомных тел. Метастазы в серозу аппендикса.

Лечение закончила в январе 2020 года. Через 4 месяца после окончания лечения при контрольном обследовании выявлено прогрессирование заболевания: асцит, гидроторакс, канцероматоз брюшины. Выставлен диагноз: рак яичников pT3cNoM1, St IVв, полисерозит, (мтс в плевру, канцероматоз брюшины), состояние после комбинированного лечения 2019-2020 годы, платинорезистентная форма, прогрессирование заболевания: гидроторакс, асцит, канцероматоз брюшины, гр. 2.

В связи с рецидивом, консилиумом врачей НМИЦ онкологии рекомендовано проведение курсов ПХТ 2 линии.

Пример 2.

Больная Ш., 41 год госпитализирована в отделение онкогинекологии ФГБУ НМИЦ онкологии в июле 2018 года с жалобами на боли внизу живота, увеличение живота в размерах, чувство дискомфорта в эпигастрии после приема пищи.

Анамнез заболевания: считает себя больной в середины мая 2018 года, когда появились боли внизу живота, стала отмечать увеличение живота в размерах, чувство дискомфорта в эпигастрии после приема пищи. Обратилась к гинекологу по месту жительства в г. Зверево, выполнено УЗИ ОМТ от 22.05.18, заключение: асцит, аденомиоз, структурные изменения обоих яичников. УЗИ ОБП и почек от 22.05.2018, заключение: диффузные изменения в печени, жировой гепатоз, диффузные изменения ПЖЖ, асцит, микролитиаз справа.

Выполнена ФГДС от 28.05.2018 г: катаральный эзофагит, гиперемированная эрозивная гастропатия, ФКС от 30.05.2018: сигмоидит, внутренний геморрой. Выполнена трепан-биопсия образования яичника 29.06.2018 г: г/а - серозная карцинома яичника high grade. Анализ крови на онкомаркеры Са-125- 1767 Ед/мл, Не-4- 1211.2 пмоль/л, индекс ROMA-99,5%.

Рентгенограмма ОГК от 10.06.18: рентггенологически правосторонний гидроторакс. В условиях КДО НМИЦ онкологии повторно выполнено УЗИ ОМТ и БП от 10.06.2018, заключение: асцит, диффузные изменения паренхимы печени и поджелудочной железы. Уплотнение стенки желчного пузыря. Умеренно выраженные признаки аденомиоза. Придатки четко не визуализируются.

Объективный статус: общее состояние средней степени тяжести. Сознание ясное. АД 125/80 мм. рт.ст. Т=36,6 0 С.Кожные покровы бледные, сухие. Лимфоузлы, доступные пальпации, не увеличены. Живот мягкий, незначительно увеличен, безболезненный при пальпации. При физикальном исследовании данных за наличие свободной жидкости в брюшной полости и в малом тазу нет. С-м раздражения брюшины отрицательный. Варикозного расширения подкожных вен нижних конечностей не выявлено. Слева дыхание везикулярное, хрипов нет, ясный легочной звук. Справа - дыхание выслушивается до 5 ребра, ниже 5 ребра тупой перкуторный звук, дыхание не выслушивается. Физиологические отправления: стул нормальный, диурез - адекватный водной нагрузке. Моча светло-желтого цвета. Периферических отеков нет.

Рост = 170 см, вес = 65 кг. ППТ = 1,75 м2.

Status genitalis: наружные половые органы без видимой патологии. В зеркалах: шейка матки маленькая, наличие единичных ретенционных кист. При вагинальном исследовании матка нормальных размеров, плотная, подвижная, в заднем своде мтс образование до 2 см. В проекции придатков матки объемные образования не исследуются. Паховые лимфоузлы не увеличены. При осмотре через прямую кишку: на уровне, достижимом пальцем, патологии не выявлено. На перчатке следы кала.

Лабораторные данные: ЭКГ от 11.06.2018 - синусовый ритм, ЧСС 87 в мин, ирригоскопия от 10.06.2018 г: убедительных данных за t-r кишечника не выявлено. Ц/а мазков с шейки матки от 11.06.2018 г: АК не обнаружены. Общий анализ крови от 11.06.2018 г: гемоглобин - 124 г/л, эритроциты - 3,94*1012/л., лейкоциты - 8,0*109/л., тромбоциты - 353*109/л., палочкоядерные - 3%, сегментоядерные - 71%, эозинофилы - 4%, моноциты - 6%), лимфоциты 20%). Биохимический анализ крови от 11.06.2019 г: общий билирубин 23,2 моль/л, креатинин - 83,1 ммоль/л, глюкоза - 5,6 моль/л, общий белок - 63,7 г/л

После проведенного обследования выставлен диагноз: рак яичников T3cNxM1, гр.2, полисерозит (гидроторакс, асцит).

Пациентке выполнено исследование относительной экспрессии микроРНК hsa-miR-150-5р, hsa-miR-140-3р, hsa-miR-221-3р в биоптате яичника (табл. 3).

risk score = (1,96*7,32)+(-2,7*8,62)+(2,13*6,91)=5,8

Риск прогрессирования рака яичников определен как низкий (risk score < 13).

Учитывая местно-распространенный процесс: асцит, гидроторакс-консилиумом врачей НМИЦ онкологии решено начать лечение с курсов неоадъювантной химиотерапии по схеме карбоплатин + паклитаксел. С июля 2018 года проведено 3 курса НАПХТ. В августе 2018 года выполнено хирургическое лечение в объеме оптимальной циторедуктивной операции: субтотальной гистерэктомии с придатками, экстирпации большого сальника.

В послеоперационном периоде проведено 6 курсов АГТХТ. Лечение закончила в декабре 2018 года.

Морфологическое исследование послеоперационного материала - в яичниках комплексы желез аденокарциномы. В опухоли - обширные очаги некроза (G3). В маточных трубах - атрофия слизистой оболочки, склероз подслизистого слоя, в жировой клетчатке сальника - обширные метастазы карциномы вышеописанного строения. В опухоли признаки терапевтического патоморфоза 2 степени.

При контрольном обследовании в сентябре 2020 года по данным СРКТ органов грудной клетки и МРТ брюшной полости и малого таза: данных за рецидив и прогрессирование не выявлено. Анализ крови на онкомаркеры Са-125 и Не-4 в норме.

Диагноз: рак яичников, St IV (pT3cN0M1), полисерозит, (гидроторакс, асцит), состояние после 3 курсов НАПХТ, хирургического лечения, 6 курсов АПХТ, кл.гр.2. Клиническая ремиссия. Рекомендовано динамическое наблюдение у онколога по месту жительства.

Анализ представленных клинических случаев свидетельствует о возможности определения продолжительности безрецидивного интервала заболевания с использованием оценки экспрессии микроРНК hsa-miR-150-5р, hsa-miR-140-3р, hsa-miR-221-3р относительно экзогенного контроля cel-miR-39-5р.

Предлагаемым способом было осуществлено определение продолжительности безрецидивного периода заболевания у 30 больных, результаты молекулярно-генетических исследований в дальнейшем подтверждены данными из анамнеза и дополнительных инструментальных обследований пациенток.

«Способ прогнозирования рецидивирования серозной карциномы яичников» позволяет прогнозировать риск развития рецидива заболевания в течение первых шести месяцев после завершения лечения.

Заявляемый способ является экономически оправданным для диагностики и дает возможность формирования тактики лечения еще в дооперационном периоде пациента; обладает высокой чувствительностью (98%) и специфичностью (92%), его осуществление возможно малоинвазивным способом с использованием трепан-биопсии яичника, реализация способа на базе стандартной ПЦР-лаборатории занимает менее 8 часов.

--->

Перечень последовательностей

<110> Verenikina, Ekaterina; Natsional'nyy meditsinskiy issledovatel'skiy tsentr onkologii

<120> A method for predicting recurrence of serous ovarian carcinoma

<160> 1

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 1

GCAGTCTCCCAACCCTTGTA 20

<110> Verenikina, Ekaterina; Natsional'nyy meditsinskiy issledovatel'skiy tsentr onkologii

<120> A method for predicting recurrence of serous ovarian carcinoma

<160> 1

<210> 2

<211> 27

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 1

GTCCAGTTTTTTTTTTTTTTTCACTGG 27

<110> Verenikina, Ekaterina; Natsional'nyy meditsinskiy issledovatel'skiy tsentr onkologii

<120> A method for predicting recurrence of serous ovarian carcinoma

<160> 1

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 1

CGCAGTACCACAGGGTAGA 19

<110> Verenikina, Ekaterina; Natsional'nyy meditsinskiy issledovatel'skiy tsentr onkologii

<120> A method for predicting recurrence of serous ovarian carcinoma

<160> 1

<210> 4

<211> 26

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 1

CCAGTTTTTTTTTTTTTTTCCGTGGT 26

<110> Verenikina, Ekaterina; Natsional'nyy meditsinskiy issledovatel'skiy tsentr onkologii

<120> A method for predicting recurrence of serous ovarian carcinoma

<160> 1

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 1

CGCAGAGCTACATTGTCTGC 20

<110> Verenikina, Ekaterina; Natsional'nyy meditsinskiy issledovatel'skiy tsentr onkologii

<120> A method for predicting recurrence of serous ovarian carcinoma

<160> 1

<210> 6

<211> 28

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 1

TCCAGTTTTTTTTTTTTTTTGAAACCCA 28

<110> Verenikina, Ekaterina; Natsional'nyy meditsinskiy issledovatel'skiy tsentr onkologii

<120> A method for predicting recurrence of serous ovarian carcinoma

<160> 1

<210> 7

<211> 26

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 1

CAGGTCCAGTTTTTTTTTTTTTTTVN 26

<---

1. Способ прогнозирования рецидивирования серозной карциномы яичников, заключающийся в том, что проводят анализ экспрессии микро-РНК в образце трепан-биопсии яичника, включающий внесение экзогенного контроля и выделение тотальной РНК, обратную транскрипцию с последующей амплификацией в режиме реального времени, при этом используют праймеры для hsa-miR-150-5p, hsa-miR-140-3р, hsa-miR-221-3р, анализируют полученные данные и вычисляют прогностический коэффициент RS по формуле: RS = (1,96 * экспрессия hsa-miR-140-3р) + (-2,7 * экспрессия hsa-miR-150-5p) + (2,13 * экспрессия hsa-miR-221-3р), где 1,96, -2,7, 2,13 - коэффициенты, и при значениях RS ≥ 13 прогнозируют риск развития рецидива заболевания в течение первых шести месяцев после завершения лечения.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для оценки экспрессии hsa-miR-150-5p используют праймеры: seq id 1 и seq id 2.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для оценки экспрессии hsa-miR-140-3р используют праймеры: seq id 3 и seq id 4.

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для оценки экспрессии hsa-miR-221-3р используют праймеры: seq id 5 и seq id 6.