Оптимизированная питательная среда для укоренения побегов винограда в культуре in vitro, сорт "августин"

Авторы патента:

Батукаев Абдулмалик Абдулхамидович (RU)

A01G31/00 - Гидропоника, выращивание растений в питательной среде без почвы (A01G 33/00 имеет преимущество)

Владельцы патента RU 2751114:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Чеченский государственный университет" (RU)

Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой питательную среду для укоренения побегов винограда in vitro, содержащую агар-агар, сахарозу, азотнокислый калий, азотнокислый аммоний, сернокислый магний, хлористый кальций, фосфорнокислый калий, мезоинозит, йодистый калий, борную кислоту, сернокислый цинк, сернокислый марганец, сернокислую медь, хлористый никель, никотиновую кислоту, пиридоксин, тиамин, сернокислое железо, трилон, уголь активированный, воду. Изобретение позволяет повысить количество и качество укорененных побегов и преодолеть сортовую специфику виноградного растения на этапе укоренения. 2 табл.

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к биотехнологии, и может быть использовано в питомниководстве при получении оздоровленного посадочного материала при помощи методов клонального микроразмножения.

Известны питательные среды различного минерального состава, предназначенные для укоренения ягодных и плодовых растений in vitro (Алексеенко Л.В. Подбор питательных сред для клонального микроразмножения нейтральнодневных и ремонтантных сортов земляники / Алексеенко Л.В., Высоцкий В.А / Плодоводство и ягодоводство России: Сб. науч. работ / ВСТИСП. - М., 1997. - Т. IV. - С.77-82, Шипунова А.А. Подбор минеральной основы питательных сред для клонального микроразмножения жимолости в производственных условиях. / Шипунова А.А., Высоцкий В.А./ Плодоводство и ягодоводство России: Сб. науч. работ / ВСТИСП. - М, 2001. Т. VII. С.158-163).

Наиболее часто для укоренения побегов, полученных в культуре in vitro, исследователи используют половину макро- и микросолей по прописи, разработанной Мурасиге и Скуга (MS ¹/₂), (Murashige Т., Skoog F.A revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures // Physiol. Plant. - 1962. - vol. 5, 95 - P. 473-497).

Для наиболее эффективного ее применения исследователи практически всегда оптимизируют ее состав, изменяя гормональный фон или вводя различные добавки в виде аминокислот, витаминов, препаратов нового поколения (Белошапкина О.О. Использование биопрепаратов при клональном микроразмножении земляники / Белошапкина О.О., Жаркова И. В.// Докл. ТСХА. - 2001. - №273, ч. 2. - С.284-289). Значительно реже исследователи изменяют минеральный состав и, как правило, незначительно.

При этом следует отметить, что минеральный состав среды Мурасиге и Скуга (МС) плохо подходит для укоренения побегов, полученных in vitro, так как среда разрабатывалась для культивирования каллусов и каллусных клеток и учитывает, прежде всего, условия для их развития. Соотношение и концентрации макроэлементов в среде неоптимальные относительно потребности в них микрорастений винограда, что в процессе культивирования приводит к дисбалансу минеральных солей, сдвигу рН питательной среды и как следствие ухудшает параметры развития микрорастений винограда.

Наиболее часто применяемая среда для укоренения (MS ¹/₂) содержит следующие компоненты мг/л: NH₄NO₃ - 825; KNO₃ - 950; KН₂РO₄ - 85; MgSO₄*7H₂O - 185 мг/л, СаСl₂ - 220; FeSO₄*7H₂O - 13,4-13,8; Na₂ ЭДТА 2Н₂O - 18,5-18,9; Н₃ВO₃ - 3,0-3,2; MnSO₄*4H₂O - 11,0-11,4; ZnSO₄*7H₂O - 4,1-4,5; KJ - 0,40-0,44; Na₂MoO₄ - 0,11-0,15; CuSO₄*5H₂O - 0,011-0,015; CoCI₂⋅6H₂O - 0,011-0,015; миоинозит - 40-60; тиамин, пиридоксин, никотиновая кислота по 0,2-0,3; аскорбиновая кислота 0,4-0,6; ИМК - 0,5-1,5; сахароза - 14000-16000; агар - 6000-8000; остальное бидистиллированная вода до 1 л; рН - 5,5-5,9.

Наиболее близким к предлагаемому решению является питательная среда - Н2, разработанная для укоренения побегов винограда, полученных на этапе пролиферации (Голодрига П.Я. Методические рекомендации по клональному микроразмножению винограда / ВНИИВиПП «Магарач» (П.Я. Голодрига, В.А. Зленко, Л.А. Чекмарев), ИФР АН СССР (Р.Г. Бутенко), ИФР АН УССР (Б.А. Левенко), и др. - Ялта: Издательская группа ВНИИ ВиПП «Магарач», 1986 - 56 с).

Недостатками данной среды для укоренения являются высокое содержание хлора, несбалансированность элементов по магнию и фосфору, а также низкое содержание хелата железа и микроэлементов (1/4 прописи МС), что при укоренении побегов негативно сказывается на регенерации корней и последующем развитии побегов и листьев. Кроме того, несбалансированное содержание макроэлементов часто провоцирует рост каллусной ткани и преждевременное старение эксплантов.

Задача, на решение которой направлено изобретение, является повышение количества и качества укорененных побегов и преодоление сортовой специфики виноградного растения на этапе укоренения.

Задача, на решение которой направлено изобретение, решается оптимизацией концентрации и соотношением макросолей, входящих в состав питательной среды: NH₄NO₃ уменьшается до 825 мг/л; KNO₃ - 950 мг/л; уровень содержания фосфора в среде уменьшается в два раза, MgSO₄⋅7H₂O - 220 мг/л, СаСl₂×2Н₂О - хлористый кальций также в два раза 220 мг/л.

Таким образом предлагаемая оптимизированная питательная среда предоставляет из себя следующий состав: Таблица 1.

Пример осуществления способа:

В питательную среду вносят следующие компоненты (концентрации в мг): при следующем соотношении компонентов, мг/л:

Агар-агар	7000
Сахароза	15000
KNО₃ - азотнокислый калий	950
NH₄NО₃ - азотнокислый аммоний	825
MgSО₄×7H₂О - сернокислый магний	185
CaCl₂×2Н₂О - хлористый кальций	220
КН₂РО₄ - фосфорнокислый калий	85
Мезоинозит	100
KI - йодистый калий	0,42
Н₃ВО₃ - борная кислота	3,1
ZnSО₄×2H₂О - сернокислый цинк	4,3
MnSО₄×4H₂О - сернокислый марганец	1,1
CuSО₄×5H₂О - сернокислая медь	0,025
NiCl₂ - хлористый никель	0,025
Никотиновая кислота	1
Пиридоксин В₆	1
Тиамин В₁	1
FeSО₄×7H₂О - сернокислое железо	27,8
Трилон БNa₂ЭДТА×2Н₂O	37,2
Уголь активированный	5000
рН среды	6,6

В начале объем раствора доводят до 0,5 л, устанавливают рН 6,4-6,6 и добавляют 0,5 л воды с агаром, предварительно нагретой до кипения, для полного расплавления и растворения агара. Питательную среду разливают по сосудам и автоклавируют при давлении 0,7-1,0 атм. (температура 119-121°С) в течение 20-25 мин. После остывания среды осуществляют высадку срезанных с этапа пролиферации побегов.

Испытание оптимизированной прописи питательной среды показало эффективность ее применения в сорте «Августин» учувствовавшего в испытании. Влияние разработанной питательной среды, для укоренения срезанных с пролиферации побегов, на их рост и развитие через 70 дней, представлено в табл. 2.

Как видно, из представленных данных в варианте, где для укоренения побегов примененяли разработанную пропись питательной среды, укореняемость микропобегов была лучше, стабильно улучшалось их развитие, а также снижалось число отбракованных эксплантов из-за некроза или отсутствия развития.

Таким образом, установлено, что соотношение макросолей, входящих в состав питательной среды: NH₄NO₃ уменьшенное до 825 мг/л KNO₃ - 950 мг/л; уровень содержания фосфора в среде уменьшенное в два раза, MgSO₄⋅7H₂O - 220 мг/л, СаСI₂×2Н₂O - хлористый кальций также в два раза 220 мг/л. заметно повышает процессы регенерации и развития микрорастений на этапе укоренения побегов.

Использование предложенной оптимизированной питательной среды для укоренения микропобегов винограда в условиях in vitro обеспечивает по сравнению с существующей следующие преимущества:

1. Повышает количество укоренных побегов винограда in vitro, срезанных с этапа пролиферации, и соответственно выход укорененных микрорастений в среднем на 20,0-30,0%. Соответственно снижает количество отбракованных эксплантов из-за некроза и отсутствия развития.

2. Заметно улучшает развитие микрорастений винограда, ростовые процессы при этом ускоряются минимум в два раза.

3. В разработанной питательной среде для достижения значительного положительного эффекта предусмотрено использование стандартных и общепринятых (в клональном микроразмножении растений) компонентов и не требуется дополнительно применение редких или малоизученных физиологически активных веществ.

Изобретение позволяет повысить количество и качество укорененных побегов.

Питательная среда для укоренения побегов винограда in vitro, содержащая агар-агар, сахарозу, азотнокислый калий, азотнокислый аммоний, сернокислый магний, хлористый кальций, фосфорнокислый калий, мезоинозит, йодистый калий, борную кислоту, сернокислый цинк, сернокислый марганец, сернокислую медь, хлористый никель, никотиновую кислоту, пиридоксин, тиамин, сернокислое железо, трилон, уголь активированный, воду, при следующем содержании исходных компонентов, мг/л:

Агар-агар	7000
Сахароза	15000
KNО₃ - азотнокислый калий	950
NH₄NО₃ - азотнокислый аммоний	825
MgSО₄×7H₂О - сернокислый магний	185
CaCl₂×2Н₂О - хлористый кальций	220
КН₂РО₄ - фосфорнокислый калий	85
Мезоинозит	100
KI - йодистый калий	0,42
Н₃ВО₃ - борная кислота	3,1
ZnSО₄×2H₂О - сернокислый цинк	4,3
MnSО₄×4H₂О - сернокислый марганец	1,1
CuSО₄×5H₂О - сернокислая медь	0,025
NiCl₂ - хлористый никель	0,025
Никотиновая кислота	1
Пиридоксин В₆	1
Тиамин В₁	1
FeSО₄×7H₂О - сернокислое железо	27,8
Трилон БNa₂ЭДТА×2Н₂O	37,2
Уголь активированный	5000
рН среды	6,6,

при этом объем раствора доводят до 0,5 л, устанавливают рН 6,4-6,6 и добавляют 0,5 л воды с агаром, предварительно нагретой до кипения.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения подвойного материала (ВСВ-1, ВСЛ-1 и ВСЛ-2) в условиях in vitro, черенкование пробирочных растений и высадку одноузловых черенков на агаризованную питательную среду, содержащую макро- и микроэлементы и витамины на основе прописи питательной среды, Fe-хелат, агар-агар, сахарозу, при этом в питательную среду добавляют высокую концентрацию солей (Хелат - Fe 50 мг/л и Са(Cl)2 1000 мг/л) и для растительной активности растения пересаживают на питательную среду содержанием 1 мг 6 БАЛ и 08 мг/л глицина, при этом концентрация микросолей: ZnSO4*7H2O - 4.3 мг/л и Н3ВО3 - 3.1 мг/л., источник кальция тоже изменен в форме (от CaCl2*2H2O на Ca(NO3)2*4H2O), пересадку проводят через 3 недели, при размножении особое внимание уделяют стекловидности или сверховодненности тканей, при этом оптимальные условия культивирования ВСВ-1, ВСЛ-1 и ВСЛ-2 являются: температура 22-26 градусов, освещенность 2500-5000 лк, при 16-ти часовом фотопериоде.

Оптимизированная питательная среда для укоренения побегов винограда в культуре in vitro, сорт "надежда азос" // 2746067

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой питательную среду для укоренения побегов винограда in vitro, содержащую агар-агар, сахарозу, азотнокислый калий, азотнокислый аммоний, сернокислый магний, хлористый кальций, фосфорнокислый калий, мезоинозит, йодистый калий, борную кислоту, сернокислый цинк, сернокислый марганец, сернокислую медь, хлористый никель, никотиновую кислоту, пиридоксин, тиамин, сернокислое железо, трилон, уголь активированный, воду.

Дренажный элемент для растений и его применение // 2745930

Изобретение относится к текстильному дренажному элементу для предотвращения застойного увлажнения растений, а также к его применению в садовых хозяйствах. Текстильный дренажный элемент осуществлен плоскостным, содержит по меньшей мере один первый текстильный слой для приема по меньшей мере одной емкости с растением или субстрата растения, а также по меньшей мере один второй текстильный слой для улучшенного отведения жидкости, который располагается напротив первого текстильного слоя.

Способ активации проращивания семян нуга в закрытой агробиотехносистеме // 2742609

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к растениеводству. Способ активации проращивания семян нуга заключается в том, что в закрытой агробиотехносистеме, начиная от посева семян, проводят освещение светодиодами при интенсивности генерируемых фотонов в 265 мкмоль/м2с и количественной характеристикой светового потока по составляющим его длинам волн: ультрафиолет 380 нм - 1,5%, синий 440 нм - 23,8%, зеленый 520-530 нм - 6%, красный 640 нм - 61,5%, дальний красный 740 нм - 7,2%.

Установка для проращивания зерна // 2741111

Установка для проращивания зерна относится к сельскому хозяйству и пищевой промышленности и предназначена для механизации процесса проращивания зерна на витаминный корм для животных и птиц. Установка для проращивания зерна состоит из емкости для воды, которая посредством насоса и трубопровода соединена с ванной, каркаса из основания и боковых опор, на которых выполнена ванна с барботером на ее дне, над которой установлены лампы искусственного освещения, емкости для проращивания зерна, трубчатого электронагревателя, датчика температуры.

Способ повышения продуктивности и качества салатных культур // 2741107

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Способ повышения продуктивности и качества салатных культур при выращивании в закрытой системе фитотрона включает использование в качестве регулятора роста кремнийорганического соединения, при этом в закрытой системе фитотрона в процессе вегетации на 14-й день после посева семян в условиях гидропонной культуры применяют однократно для некорневой обработки водный раствор 1-этоксисилатрана в концентрации 0,5–50,0 мг на 1 литр воды.

Способ повышения антиоксидантной активности проростков редиса // 2739077

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности растениеводству, и может найти применение в селекции при отборе перспективных генотипов растений, отзывчивых на искусственное светодиодное освещение, с использованием агробиотехносистем, в агробиофотонике и в технологиях получения пророщенного редиса и его микрозелени для здорового питания.

Способ совместного выращивания объектов аквабиокультуры и растений // 2738382

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к совместному выращиванию объектов аквабиокультуры: рыбы, беспозвоночных и растительных культур на аквапонике. Способ предусматривает сначала подачу воды в бассейн с осетровыми рыбами, затем в бассейн с сомовыми рыбами, далее воду перемещают в отстойник для осаждения органических отходов, затем вода поступает в аквапонную установку для выращивания растений, потом в емкости для культивирования ракообразных, затем в емкость для выращиванию моллюсков, далее на очистку последовательно в механический фильтр и биологический фильтр и снова в бассейны для рыб.

Способ выращивания салата листового в замкнутых агробиотехносистемах // 2737783

Изобретение относится к области сельского хозяйства и может найти применение при выращивании овощных культур в замкнутых агробиотехносистемах типа фитотронов и синерготронов. Способ выращивания салата листового включает однократную некорневую подкормку комплексным препаратом крезацин с 1-этоксисилатраном.

Способ выращивания растениеводческой продукции в вертикально ориентированных тепличных комплексах // 2735220

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Способ выращивания в теплицах вертикального типа растениеводческой продукции, размещенной по несколько штук в щелях на колоннах роста, которые представляют собой полые трубы со сквозной щелью сверху до низу и заполненные субстратом для выращивания, причем щели на колоннах роста сориентированы в сторону источника света, в условиях искусственного освещения растений LED-светильниками (фитолампами) при непрерывном принудительном орошении сверху колонн роста питательным раствором, с дальнейшим дренажом питательного раствора и возвратом его на рецикл в растворный узел, причем после растворного узла перед распределением по колоннам роста питательный раствор дополнительно проходит кавитационное устройство при температуре от 15 до 80°С, причем кратность прохождения питательного раствора через кавитационное устройство составляет от 1 до 15 раз, удельная передаваемая при кавитации обрабатываемому раствору мощность составляет от 0,0005 до 0,015 кВт⋅ч/л раствора, внешние поверхности колонн роста со стороны вертикальных щелей выполнены со светоотражающим покрытием, и вплотную за задней поверхностью колонн роста установлены светоотражающие экраны.

Установка для аэропонного выращивания растений in vitro // 2752427

Изобретение относится к области сельского хозяйства и биотехнологии, в частности, к оборудованию для бессубстрактного выращивания растений методом аэропоники, и может быть использовано для круглогодичного выращивания растений и производства мини-клубней в контролируемых условиях и на ограниченных площадях. Аэропонная установка для выращивания растений и получения мини-клубней содержит культивационное помещение с размещенными в нем системой искусственного освещения, узлом полива с баком и насосом высокого давления, пластиковыми трубопроводами, соединенными с узлом полива, вегетационными емкостями. Последние установлены симметрично в два яруса на несущей конструкции. В верхней части вегетационной емкости имеются технологические отверстия для введения пластиковых труб внутрь вегетационной емкости. На нижней поверхности каждой вегетационной емкости установлен сливной коллектор для сбора и слива питательного раствора в бак узла полива. Аэропонная установка снабжена соединенным с узлом полива и системой искусственного освещения автоматическим блоком управления установкой. Блок управления выполнен на базе платы Arduino с возможностью обеспечения включения искусственного освещения на 16 часов и выключения на 8 часов искусственного освещения, обеспечения орошения корневой системы растений за счет мелкодисперсного распыления питательного раствора в корневой зоне растений с помощью форсунок. Каждая форсунка выполнена с возмоностью обеспечения размера капель от 5-30 до 10-50 микрон в зависимости от фазы роста растений и обеспечением периодической подачи распыляемого питательного раствора со скоростью подачи 0,25-0,75 л/сек во всем объеме каждой вегетационной емкости в заданные периоды времени: 30 секунд распыление, 20 минут отсутствие распыления - аэрация. При этом пластиковые трубы имеют разборные форсунки, выполненные с возможностью регулировки размера распыляемого питательного раствора. Поверхности каждой форсунки покрыты антикоррозионным покрытием нитрида титана для исключения коррозионного воздействия питательного раствора на элементы конструкции форсунки. Каждая вегетационная емкость оборудована крышкой - посадочной плоскостью, имеющей отверстие для посадки растения с эластичными вставками и с возможностью ее открывания и извлечения из емкости созревших мини-клубней. Изобретение обеспечивает достижение технического результата, заключающегося в повышении урожайности за счет улучшения минерального питания растений, при одновременном удобстве обслуживания за счет автоматизации процессов работы аэропонной установки. 1 з.п. ф-лы.