Поливалетные и полиспецифичные gitr-связывающие слитые белки

Группа изобретений относится к медицине и касается выделенного полипептида, который связывается с глюкокортикоид-индуцированным TNFR-родственным белком (GITR), включающего по меньшей мере один GITR-связывающий домен (GITR-BD), содержащего аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. Группа изобретений также касается выделенной нуклеиновой кислоты, кодирующей указанный полипептид; фармацевтической композиции, содержащей указанный полипептид, для лечения злокачественного новообразования у пациента. Группа изобретений обеспечивает лечение злокачественного новообразования у пациента. 4 н. и 17 з.п. ф-лы, 1 табл., 10 пр., 15 ил.

 

РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

По этой заявке испрашивается приоритет временной заявки на патент США № 62/195822, поданной 23 июля 2015 года, содержание которой включено в настоящее описание с помощью ссылки в полном объеме.

ВКЛЮЧЕНИЕ СПИСКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

Содержимое текстового файла с именем «INHI022001WO_ST25.txt», который был создан 22 июля 2016 года и имеет размер 209 КБ, включено в настоящее описание с помощью ссылки в полном объеме.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Это раскрыти в целом относится к молекулам, которые специфично захватывают глюкокортикоид-индуцированный TNFR-родственный белок (GITR), член суперсемейства TNF-рецепторов (TNFRSF). Более конкретно, изобретение относится к поливалентным и/или полиспецифичным молекулам, которые связываются по меньшей мере с GITR.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Суперсемейство рецепторов фактора некроза опухолей состоит из нескольких структурно родственных рецепторов клеточной поверхности. Активация мультимерными лигандами является общей особенностью многих из этих рецепторов. Многие члены TNFRSF обладают терапевтической пользой при многочисленных патологиях, если они активированы должным образом. Важно отметить, что для того, чтобы должным образом выступать в роли агонистов этому семейству рецепторов часто требуется кластеризация более высокого порядка, и обычные двухвалентные антитела для этого не идеальны. Следовательно, существует терапевтическая потребность в более мощных агонистических молекулах TNFRSF.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Раскрытие относится к поливалентным слитым полипептидам, связывающим суперсемейство рецепторов TNF (TNFRSF), которые связываются по меньшей мере с глюкокортикоид-индуцированным TNFR-родственным белком (GITR, также известным как член 18 суперсемейства рецепторов фактора некроза опухолей (TNFRSF18) и/или индуцируемый активацией рецептор семейства TNFR (AITR)). Эти молекулы, которые связываются по меньшей мере с GITR, называются в настоящем описании «молекулы с направленным воздействием на GITR» или «слитые конструкты с направленным воздействием на GITR», или «белки с направленным воздействием на GITR», или «слитые полипептиды с направленным воздействием на GITR», или «слитые белки с направленным воздействием на GITR». В некоторых вариантах осуществления, молекула с направленным воздействием на GITR, представляет собой поливалентную молекулу, например, поливалентный слитый белок с направленным воздействием на GITR. В некоторых вариантах осуществления, молекула с направленным воздействием на GITR, представляет собой полиспецифичную молекулу, например полиспецифичный слитый белок с направленным воздействием на GITR. В некоторых вариантах осуществления, молекула с направленным воздействием на GITR, представляет собой поливалентную и полиспецифичную молекулу, например поливалентный и полиспецифичный слитый белок с направленным воздействием на GITR. Используемый в настоящем описании термин «слитый белок» или «слитый полипептид» или «слитый белок с направленным воздействием на GITR» или «слитый полипептид с направленным воздействием на GITR», если только специально не обозначено иное, относится к любому воплощению слитого белка по изобретению, включая, но не ограничиваясь ими, поливалентные слитые белки, полиспецифичные слитые белки или поливалентные и полиспецифичные слитые белки.

Эти молекулы с направленным воздействием на GTRR включают по меньшей мере один домен, который связывается с GITR, называемый в настоящем описании как «GITR-связывающий домен» (GITR-BD). Эти GITR-BD включают полипептидную последовательность, которая специфично связывается с GITR. В некоторых вариантах осуществления, GITR-BD включают полипептидную последовательность, которая относится к антителу или фрагменту антитела или получена из них, включая, например, scFv, Fabs, однодоменные антитела (sdAb), V_NAR или VHH. В некоторых вариантах осуществления, GITR-BD включает человеческое или гуманизированное sdAb.

Молекулы с направленным воздействием на GTRR по изобретению преодолевают проблемы и ограничения стандартных антител, которые направленно воздействуют на члены суперсемейства TNF-рецепторов (TNFRSF), включая GITR. Было показано, что стандартные антитела с направленным воздействием на членов TNFRSF требуют экзогенного перекрестного связывания для достижения достаточной агонистической активности, о чем свидетельствует необходимость Fc-гамма рецептора (FcγR) для активности антител по отношению к DR4, DR5, GITR и OX40 (Ichikawa et al. 2001 al Nat. Med., 7, 954-960, Li et al., 2008 Drug Drug Res., 69, 69-82; Pukac et al., 2005 Br. J. Cancer 92, 1430-1441; Yanda et al., 2008 Ann. Oncol. 19, 1060-1067; Yang et al 2007 Cancer Lett. 251:146-157; Bulliard et al 2013 JEM 210(9): 1685; Bulliard et al 2014 Immunol and Cell Biol 92: 475-480). В дополнение к перекрестному связыванию через FcγR было продемонстрировано, что другие экзогенные агенты, включая добавление олигомерных лигандов или антителосвязывающих компонентов (например, протеина А и вторичных антител), усиливают кластеризацию антител против TNFRSF и передачу сигналов дальше по сигнальному пути. Например, добавление DR5-лиганда TRAIL усиливало способность антител против DR5 индуцировать апоптоз (Graves et al., 2014 Cancer Cell 26: 177-189). Эти данные свидетельствуют о необходимости более существенной кластеризации TNFRSF, чем димеризация.

Настоящее раскрытие относится к выделенным полипептидам, которые специфично связываются с GITR. В некоторых вариантах осуществления, выделенный полипептид получают из антител или фрагментов антител, включая scFv, Fabs, однодоменные антитела (sdAb), V_NAR или VHH. В некоторых вариантах осуществления, выделенный полипептид представляет собой человеческое или гуманизированное sdAb. Фрагменты sdAb могут быть получены из VHH, V_NAR, сконструированных доменов VH или VK. VHH могут быть получены из верблюжьих антител, содержащих только тяжелую цепь. V_NAR могут быть получены из антител хрящевых рыб, содержащих только тяжелую цепь. Были реализованы различные методы получения мономерных sdAbs из стандартных гетеродимерных VH- и VK-доменов, включая конструкцию интерфейса и выбор конкретных семейств зародышевых линий. В других вариантах осуществления, выделенные полипептиды получают из каркасных белков, не являющихся антителами, например, но не ограничиваясь ими, сконструированные белки с анкириновыми повторами (дарпины), авимеры, антикалин/липокалины, центирины и финомеры.

В некоторых вариантах осуществления, выделенный полипептид включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, выделенный полипептид включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62. В некоторых вариантах осуществления, выделенный полипептид включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80.

В некоторых вариантах осуществления, выделенный полипептид включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, выделенный полипептид включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62. В некоторых вариантах осуществления, выделенный полипептид включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80.

В некоторых вариантах осуществления, выделенный полипептид содержит область 1, определяющую комплементарность (CDR1), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148, и 149; область 2, определяющую комплементарность (CDR2), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и область 3, определяющую комплементарность (CDR3), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146 и 150.

Настоящее раскрытие также относится к поливалентным TNFRSF-связывающим слитым белкам, которые содержат два или более связывающих домена TNFRSF (TBD), где по меньшей мере один TBD связывается с GITR, который называют в настоящем описании GITR-связывающим доменом (GITR-BD). В некоторых вариантах осуществления, слитые белки по настоящему изобретению полезны при лечении новообразований. В некоторых вариантах осуществления, слитые белки по настоящему изобретению связываются с членом TNFRS, экспрессированным на опухолевой клетке, например, по меньшей мере, с GITR.

В некоторых вариантах осуществления, GITR-BD по настоящему изобретению получают из антител или фрагментов антител, включающих scFv, Fabs, однодоменные антитела (sdAb), V_NAR или VHH. В некоторых вариантах осуществления, GITR-BD являются человеческими или гуманизированными sdAb. Фрагменты sdAb могут быть получены из VHH, V_NAR, сконструированных доменов VH или VK. VHH могут быть получены из верблюжьих антител, содержащих только тяжелую цепь. V_NAR могут быть получены из антител хрящевых рыб, содержащих только тяжелую цепь. Были реализованы различные методы получения мономерных sdAb из стандартных гетеродимерных доменов VH и VK, включая конструкцию интерфейса и выбор конкретных семейств зародышевых линий. В других вариантах осуществления, GITR-BD получают из каркасных белков, не являющихся антителами, например, но не ограничиваясь ими, из сконструированных белков с анкириновыми повторами (дарпины), авимеров, антикалина/липокалинов, центиринов и финомеров.

Как правило, поливалентные слитые белки по настоящему изобретению включают по меньшей мере два или более GITR-BD, функционально связанных через линкерный полипептид. Использование фрагментов sdAb в качестве специфичных последовательностей GITR-BD в поливалентных слитых белках по настоящему изобретению имеет преимущество в предотвращении проблемы ошибочного спаривания тяжелая цепь:легкая цепь, характерной для многих подходов с использованием би/полиспецифичных антител. Кроме того, поливалентные слитые белки по настоящему изобретению избегают использования длинных линкеров, которые требуются для многих биспецифичных антител.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит два или более различных GITR-BD. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более различных GITR-BD. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более различных GITR-BD. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более различных GITR-BD. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более различных GITR-BD.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит несколько копий GITR-BD. Например, в некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере две копии GITR-BD. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере три копии GITR-BD. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере четыре копии GITR-BD. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере пять копий GITR-BD. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере шесть копий GITR-BD. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, который содержат аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копии GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, которые содержат аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копии GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, который содержат аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копии GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит область 1, определяющую комплементарность (CDR1), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; область 2, определяющую комплементарность (CDR2), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и область 3, определяющую комплементарность (CDR3), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146 и 150. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, который содержат CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146, и 150. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146, и 150. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146, и 150. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146, и 150. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146, и 150.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копии GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, который содержат аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, которые содержат аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, которые содержат аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4.

В некоторых вариантах осуществления поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит, по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6.

В некоторых вариантах осуществления поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептида Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит область 1, определяющую комплементарность (CDR1), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; область 2, определяющую комплементарность (CDR2), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и область 3, определяющую комплементарность (CDR3), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146 и 150, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит две или более копий GITR-BD, которые содержат CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146, и 150, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит три или более копий GITR-BD, который содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146, и 150, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит четыре или более копий GITR-BD, который содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146, и 150, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит пять или более копий GITR-BD, который содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146, и 150, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит шесть или более копий GITR-BD, который содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146, и 150, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 81-105. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 81-93. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 94-105.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 81-105. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 81-93. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 94-105.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 81. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 82. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 83. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 84. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 85. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 86. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 87. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 89. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 91. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 93. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 95. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 99. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 100. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 101. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 102. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок с направленным воздействием на GITR является четырехвалентным. Используемая в настоящем описании четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR относится к двум копиям слитого белка с направленным воздействием на GITR, который включает два GITR-BD. Например, в некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR по изобретению включает две копии слитого белка с направленным воздействием на GITR, имеющего следующую структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR по изобретению включает две копии слитого белка, связывающего GITR, имеющего следующую структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc, где GITR-BD представляет собой последовательность выделенного полипептида, который связывается с GITR. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR по изобретению включает две копии слитого белка, связывающего GITR, имеющего следующую структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc, где GITR-BD - последовательность sdAb, которая связывается с GITR. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR по изобретению включает две копии слитого белка, связывающего GITR, имеющего следующую структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc, где GITR-BD представляет собой последовательность гуманизированного или полностью человеческого sdAb, которая связывается с GITR. В некоторых вариантах осуществления, GITR-BD содержит область 1, определяющую комплементарность (CDR1), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; область 2, определяющую комплементарность (CDR2), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и область 3, определяющую комплементарность (CDR3), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146 и 150. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит две копии аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 81-93.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок с направленным воздействием на GITR является шестивалентным. Используемая в настоящем описании шестивалентная молекула с направленным воздействием на GITR относится к двум копиям слитого белка с направленным воздействием на GITR, который включает три GITR-BD. Например, в некоторых вариантах осуществления, шестивалентная молекула с направленным воздействием на GITR по изобретению включает две копии слитого белка с направленным воздействием на GITR, имеющего следующую структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc. В некоторых вариантах осуществления, шестивалентная молекула с направленным воздействием на GITR по изобретению включает две копии слитого белка с направленным воздействием на GITR и имеет следующую структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc, где GITR-BD представляет собой выделенную полипептидную последовательность, которая связывается с GITR. В некоторых вариантах осуществления, шестивалентная молекула с направленным воздействием на GITR по изобретению включает две копии слитого белка с направленным воздействием на GITR и имеет следующую структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc, где GITR-BD представляет собой последовательностью sdAb, которая связывается с GITR. В некоторых вариантах осуществления, шестивалентная молекула с направленным воздействием на GITR по изобретению включает две копии слитого белка с направленным воздействием на GITR и имеет следующую структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc, где GITR-BD представляет собой гуманизированную или полностью человеческую последовательность sdAb. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 94-105.

Поливалентные слитые белки по настоящему изобретению способны к повышенной кластеризации членов TNFRSF по сравнению с двухвалентными антителами без перекрестного связывания. Повышенная кластеризация членов TNFRSF, опосредуемая поливалентными слитыми белками по настоящему изобретению, индуцирует повышенную TNFRSF-зависимую сигнализацию по сравнению с двухвалентными антителами без перекрестного связывания. В большинстве воплощений поливалентный слитый белок будет включать более двух GITR-BD, например, три, четыре, пять или шесть. В этих вариантах осуществления, взаимодействие антигена, отличного от TNFRSF, способно обеспечить дополнительную функцию перекрестного связывания, а активация TNFRSF достигается только с одним или двумя TBD.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок также включает один или более GITR-BD и один или более дополнительных связывающих доменов, которые связываются с мишенью, отличной от GITR. В некоторых вариантах осуществления, поливалентный полиспецифичный слитый белок также включает один или более GITR-BD и один или более дополнительных связывающих доменов, направленных на антиген, отличный от члена TNFRSF. В любом из этих воплощений поливалентный полиспецифичный слитый белок может также включать один или более дополнительных связывающих доменов, направленных на член TNFRSF, которые обозначаются в настоящем описании как TNFRSF-связывающие домены (TBD). В любом из этих воплощений взаимодействие антигена, отличного от TNFRSF, способно обеспечить дополнительную функцию перекрестного связывания, а активация TNFRSF достигается только с одним или двумя GITR-BD, или только с одним или двумя GITR-BD и TBD.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный полиспецифичный слитый белок также включает один или более дополнительных связывающих доменов, направленных на член TNFRSF, которые обозначаются в настоящем описании как TNFRSF-связывающие домены (TBD). В этих вариантах осуществления, поливалентный полиспецифичный слитый белок связывается по меньшей мере с двумя различными антигенами. В некоторых вариантах осуществления, все TBD поливалентного полиспецифичного слитого белка распознают один и тот же эпитоп у данного члена TNFRSF. Например, поливалентные, полиспецифичные слитые белки по настоящему изобретению могут включать 2, 3, 4, 5 или 6 TBD с идентичной специфичностью к данному члену TNFRSF. В других вариантах осуществления, поливалентный полиспецифичный слитый белок включает TBD, которые распознают различные эпитопы на данном члене TNFRSF. Например, поливалентные полиспецифичные слитые белки по настоящему изобретению могут включать 2, 3, 4, 5 или 6 TBD с отдельной специфичностью распознавания по отношению к различным эпитопам на GITR, CD40 или CD137. В этих вариантах осуществления поливалентные полиспецифичные слитые белки по настоящему изобретению содержат множество TBD, которые направлены на отдельные области конкретного члена TNFRSF. В некоторых вариантах осуществления, TBD могут распознавать различные эпитопы на одном и том же члене TNFRSF или распознавать эпитопы на отдельных членах TNFRSF. Например, в настоящем изобретении предлагаются поливалентные полиспецифичные слитые белки, включающие TBD, которые связываются с GITR и OX40.

В других вариантах осуществления, слитый белок по настоящему изобретению представляет собой полиспецифичный слитый белок, который связывает GITR и второй член TNFRSF, экспрессируемый на неопухолевой клетке, такой как, например, но не ограничиваясь ими, OX40, CD27, HVEM, CD40, бета-рецептор лимфотоксина (LTBR), рецептор A2 эктодисплазина (ED2R), рецептор A эктодисплазина (EDAR), TweakR, BCMA, BAFFR, DR3, DR6 или CD137. В некоторых вариантах осуществления, полиспецифичный слитый белок также является поливалентным. В некоторых вариантах осуществления, полиспецифичный слитый белок является биспецифичным. В этих вариантах осуществления, полиспецифичные слитые белки по настоящему изобретению модулируют иммунные клетки, приводя к повышенной деструкции опухоли. В других вариантах осуществления, полиспецифичные слитые белки по настоящему изобретению полезны при лечении воспалительных состояний. В этих вариантах осуществления, полиспецифичные слитые белки по настоящему изобретению модулируют иммунные клетки, приводя к ослаблению воспалительного поражения. Например, выступающий в качестве специфического агониста TNFR2 может усиливать пролиферацию Treg, приводя к подавлению иммунитета.

В некоторых вариантах осуществления, полиспецифичный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, полиспецифичный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62. В некоторых вариантах осуществления, полиспецифичный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80.

В некоторых вариантах осуществления, полиспецифичный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, полиспецифичный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62. В некоторых вариантах осуществления, полиспецифичный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80.

В некоторых вариантах осуществления, полиспецифичный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит область 1, определяющую комплементарность (CDR1), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; область 2, определяющую комплементарность (CDR2), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и область 3, определяющую комплементарность (CDR3), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146 и 150.

В некоторых вариантах осуществления, полиспецифичный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, полиспецифичный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, полиспецифичный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6.

В некоторых вариантах осуществления, полиспецифичный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, полиспецифичный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6. В некоторых вариантах осуществления, полиспецифичный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6.

В некоторых вариантах осуществления, полиспецифичный слитый белок содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит область 1, определяющую комплементарность (CDR1), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; область 2, определяющую комплементарность (CDR2), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и область 3, определяющую комплементарность (CDR3), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146 и 150, и по меньшей мере один полипептид Fc-области иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-6.

Полиспецифичные слитые белки по настоящему изобретению способны к повышенной кластеризации членов TNFRSF по сравнению с двухвалентными антителами без перекрестного связывания. Повышенная кластеризация членов TNFRSF, опосредованная полиспецифичными слитыми белками по настоящему изобретению, индуцирует повышенную TNFRSF-зависимую сигнализацию по сравнению с двухвалентными антителами без перекрестного связывания. В большинстве воплощений, полиспецифичный слитый белок будет включать более 2 TBD, например три, четыре, пять или шесть. В некоторых вариантах осуществления, полиспецифичный слитый белок будет включать TBD и связывающий домен, направленный на антиген, отличный от члена TNFRSF. В этих вариантах осуществления, взаимодействие антигена, отличного от TNFRSF, способно обеспечить дополнительную функцию перекрестного связывания, а активация TNFRSF достигается только одним или двумя TBD. В этих вариантах осуществления, полиспецифичный слитый белок является полиспецифичным, связывающим два отдельных антигена.

В некоторых вариантах осуществления, TBD по настоящему изобретению получают из антител или фрагментов антител, включая scFv, Fabs, однодоменные антитела (sdAb), V_NAR или VHH. В некоторых вариантах осуществления, TBD являются человеческими или гуманизированными sdAb. Фрагменты sdAb могут быть получены из VHH, V_NAR, сконструированных доменов VH или VK. VHH могут быть получены из верблюжьих антител, содержащих только тяжелую цепь. V_NAR могут быть получены из антител хрящевых рыб, содержащих только тяжелую цепь антител. Были реализованы различные методы для получения мономерных sdAb из стандартных гетеродимерных доменов VH и VK, включая разработку интерфейса и выбор конкретных семейств зародышевых линий. В других вариантах осуществления, TDB получают из каркасных белков, не являющихся антителами, как например, но не ограничиваясь ими, сконструированные белки с анкириновыми повторами (дарпины), авимеры, антикалин/липокалины, центирины и финомеры.

Как правило, полиспецифичные слитые белки по настоящему изобретению состоят по меньшей мере из двух или более TBD, функционально связанных через линкерный полипептид. Использование фрагментов sdAb в качестве специфичного TBD в полиспецифичном слитом конструкте по настоящему изобретению имеет преимущество благодаря предотвращению проблемы ошибочного спаривания тяжелая цепь:легкая цепь, характерной для многих подходов, основанных на би-/полиспецифичныих антителах. Кроме того, полиспецифичные слитые белки по настоящему изобретению избегают использования длинных линкеров, которые требуются для многих биспецифичных антител.

В некоторых вариантах осуществления, все TBD полиспецифичного слитого белка распознают один и тот же эпитоп у данного члена TNFRSF. Например, полиспецифичные слитые белки по настоящему изобретению могут включать 2, 3, 4, 5 или 6 TBD с одинаковой специфичностью к GITR. В других вариантах осуществления, полиспецифичный слитый белок включает TBD, которые распознают различные эпитопы на данном члене TNFRSF. Например, полиспецифичные слитые белки по настоящему изобретению могут включать 2, 3, 4, 5 или 6 TBD с отдельной специфичностью распознавания по отношению к различным эпитопам на GITR, CD40 или CD137. В этих вариантах осуществления, полиспецифичные слитые белки по настоящему изобретению содержат множество TBD, которые направлены на отдельные области конкретного члена TNFRSF. В некоторых вариантах осуществления, TBD могут распознавать различные эпитопы на одном и том же члене TNFRSF или распознавать эпитопы на отдельных членах TNFRSF. Например, в настоящем изобретении предлагаются полиспецифичные слитые белки, включающие TBD, которые связываются с GITR и OX40.

В некоторых вариантах осуществления, слитый белок по настоящему изобретению, например, поливалентный и/или полиспецифичный слитый белок состоит из одного полипептида. В других вариантах осуществления, слитый белок по настоящему изобретению состоит из более чем одного полипептида. Например, домен гетеродимеризации включен в слитый белок, так что конструкт представляет собой асимметричный слитый белок. Например, если Fc-область иммуноглобулина включена в слитый белок, то CH3-домен можно использовать в качестве домена гомодимеризации, или область интерфейса димера CH3 может быть подвергнута мутации для обеспечения гетеродимеризации.

В некоторых вариантах осуществления, слитый белок содержит TBD и/или GITR-BD на противоположных концах слитого белка. Например, в некоторых вариантах осуществления, TBD и/или GITR-BD расположены как на аминоконцевой (N-концевой) части слитого белка, так и на карбоксиконцевой (С-концевой) части слитого белка. В других вариантах осуществления, все TBD и/или GITR-BD находятся на одном конце слитого белка. Например, TBD и/или GITR-BD находятся либо на аминоконцевой, либо на карбоксиконцевой части слитого белка.

В некоторых вариантах осуществления, слитый белок содержит Fc-область иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления, Fc-область иммуноглобулина представляет собой изотип IgG, выбранный из группы, состоящей из изотипа IgG1, изотипа IgG2, изотипа IgG3 и подкласса IgG4.

В некоторых вариантах осуществления, Fc-область иммуноглобулина или его иммунологически активный фрагмент относится к изотипу IgG. Например, Fc-область иммуноглобулина слитого белка относится к изотипу IgG1 человека, и имеет аминокислотную последовательность:

PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK (SEQ ID NO:1)

В некоторых вариантах осуществления, Fc-область иммуноглобулина или его иммунологически активный фрагмент содержит полипептидную последовательность IgG1 человека, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91% 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1.

В некоторых вариантах осуществления, Fc-область человеческого IgG1 модифицируют по аминокислоте Asn297 (обведена в рамку, нумерация Kabat) для предотвращения гликозилирование слитого белка, например Asn297Ala (N297A) или Asn297Asp (N297D). В некоторых вариантах осуществления, Fc-область слитого белка модифицируют по аминокислоте Leu235 (обведена в рамку, нумерация Kabat) для изменения взаимодействий Fc-рецептора, например Leu235Glu (L235E) или Leu235Ala (L235A). В некоторых вариантах осуществления, Fc-область слитого белка модифицируют по аминокислоте Leu234 (обведена в рамку, нумерация Kabat) для изменения взаимодействий Fc-рецептора, например Leu234Ala (L234A). В некоторых вариантах осуществления, Fc-область слитого белка модифицируют по аминокислоте Leu234 (обведена в рамку, нумерация Kabat) для изменения взаимодействий Fc-рецептора, например Leu235Glu (L235E). В некоторых вариантах осуществления, Fc-область слитого белка изменяют как по аминокислоте 234, так и по 235, например Leu234Ala и Leu235Ala (L234A/L235A) или Leu234Val и Leu235Ala (L234V/L235A). В некоторых вариантах осуществления, Fc-область слитого белка изменяют по Gly235 для снижения связывания Fc-рецептора. Например, где Gly235 удаляют из слитого белка. В некоторых вариантах осуществления, Fc-область человеческого IgG1 модифицируют по аминокислоте Gly236 для повышения взаимодействия с CD32A, например Gly236Ala (G236A). В некоторых вариантах осуществления, Fc-область IgG1 человека не содержит Lys447 (индекс EU Kabat et al 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest).

В некоторых вариантах осуществления, Fc-область слитого белка изменяют по одному или более из следующих положений для снижения связывания Fc-рецептора: Leu 234 (L234), Leu235 (L235), Asp265 (D265), Asp270 (D270), Ser298 (S298), Asn297 (N297), Asn325 (N325) или Ala327 (A327). Например, Leu 234Ala (L234A), Leu235Ala (L235A), Asp265Asn (D265N), Asp270Asn (D270N), Ser298Asn (S298N), Asn297Ala (N297A), Asn325Glu (N325E) или Ala327Ser (A327S). В предпочтительных вариантах осуществления, модификации в Fc-области уменьшают связывание с Fc-гамма-рецепторами, хотя они оказывают минимальное влияние на связывание с неонатальным Fc-рецептором (FcRn).

В некоторых вариантах осуществления, Fc-область слитого белка лишена аминокислоты в одном или более из следующих положений для снижения связывания Fc-рецептора: Glu233 (E233), Leu234 (L234) или Leu235 (L235). В этих вариантах осуществления, Fc-делеция этих трех аминокислот уменьшает связывание белка комплемента C1q. Эти модифицированные полипептиды Fc-области обозначаются в настоящем описании как полипептиды «Fc-делеции».

PAPGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSRDELTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGK (SEQ ID NO: 2)

В некоторых вариантах осуществления, Fc-область иммуноглобулина или его иммунологически активный фрагмент содержит полипептидную последовательность IgG1 человека, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91% 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2.

В некоторых вариантах осуществления, Fc-область иммуноглобулина или иммунологически активный фрагмент слитого белка относится к изотипу IgG2 человека, и имеет аминокислотную последовательность:

PAPPVAGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTF RVVSVLTVVH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA PIEKTISKTK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDISVE WESNGQPENN YKTTPPMLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK (SEQ ID NO: 3)

В некоторых вариантах осуществления, слитый белок или его иммунологически активный фрагмент содержит полипептидную последовательность IgG2 человека, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3.

В некоторых вариантах осуществления, Fc-область IgG2 человека модифицируют по аминокислоте Asn297 (обведена в рамку, для предотвращения гликозилирование антитела, например, Asn297Ala (N297A) или Asn297Asp (N297D). В некоторых вариантах осуществления, Fc-область IgG2 человека лишена Lys447 (индекс EU Kabat et al., 1991 of Sequences of Proteins Immunological Interest).

В некоторых вариантах осуществления, Fc-область иммуноглобулина или иммунологически активный фрагмент слитого белка относится к изотипу IgG3 человека и имеет аминокислотную последовательность:

PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVQFKWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST FRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKT KGQPREPQVY TLPPSREEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESSGQPEN NYNTTPPMLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNIFSCSVMH EALHNRFTQK SLSLSPGK (SEQ ID NO: 4)

В некоторых вариантах осуществления, антитело или его иммунологически активный фрагмент содержит полипептидную последовательность IgG3 человека, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4.

В некоторых вариантах осуществления, Fc-область человеческого IgG3 модифицируют по аминокислоте Asn297 (обведено в рамку, нумерация Kabat), чтобы предотвратить гликозилирование антитела, например Asn297Ala (N297A) или Asn297Asp (N297D). В некоторых вариантах осуществления, Fc-область человеческого IgG3 модифицируют по аминокислоте 435, для увеличения периода полужизни, например Arg435His (R435H). В некоторых вариантах осуществления, Fc-область человеческого IgG3 лишена Lys447 (индекс EU Kabat et al 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest).

В некоторых вариантах осуществления, Fc-область иммуноглобулина или иммунологически активный фрагмент слитого белка относится к изотипу IgG4 человека, и имеет аминокислотную последовательность:

PAPEFLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSQE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQFNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKGLP SSIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSQEEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSR LTVDKSRWQE GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSLGK (SEQ ID NO: 5)

В некоторых вариантах осуществления, антитело или его иммунологически активный фрагмент содержит полипептидную последовательность IgG4 человека, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 5.

В некоторых вариантах осуществления, Fc-область иммуноглобулина или иммунологически активный фрагмент слитого белка относится к изотипу IgG4 человека, и имеет аминокислотную последовательность:

PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSQE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQFNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKGLP SSIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSQEEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSR LTVDKSRWQE GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSLGK (SEQ ID NO: 6)

В некоторых вариантах осуществления, антитело или его иммунологически активный фрагмент содержит полипептидную последовательность IgG4 человека, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6.

В других вариантах осуществления, Fc-область человеческого IgG4 модифицируют по аминокислоте 235 для изменения взаимодействий Fc-рецептора, например Leu235Glu (L235E). В некоторых вариантах осуществления, Fc-область человеческого IgG4 модифицируют по аминокислоте Asn297 (нумерация Kabat) для предотвращения гликозилирования антитела, например Asn297Ala (N297A) или Asn297Asp (N297D). В некоторых вариантах осуществления, Fc-область человеческого IgG4 лишена Lys447 (индекс EU Kabat et al., 1991 of Sequences of Proteins Immunological Interest).

В некоторых вариантах осуществления, Fc-область человеческого IgG модифицируют для повышения связывания FcRn. Примерами Fc-мутаций, которые повышают связывание с FcRn, являются Met252Tyr, Ser254Thr, Thr256Glu (M252Y, S254T, T256E, соответственно) (нумерация Kabat, Dall'Acqua et al 2006, J. Biol Chem, том 281 (33) 23514-23524), Met428Leu и Asn434Ser (M428L, N434S) (Zalevsky et al 2010 Nature Biotech, том 28 (2) 157-159) или Met252Ile, Thr256Asp, Met428Leu (M252I, T256D, M428L, соответственно) (индекс EU Kabat et al 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest).

В некоторых вариантах осуществления, где слитый белок по изобретению включает Fc-полипептид, он подвергнут мутации или модифицирован. В этих вариантах осуществления, подвергнутый мутации или модифицированный Fc-полипептид включает следующие мутации: Met252Tyr и Met428Leu (M252Y, M428L) с использованием системы нумерации Kabat.

В некоторых вариантах осуществления, Fc-область человеческого IgG модифицируют для изменения антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) и/или комплементзависимой цитотоксичности (CDC), например аминокислотные модификации, описанные в Natsume et al., 2008 Cancer Res, 68 (10): 3863-72; Idusogie et al., 2001 J Immunol, 166 (4): 2571-5; Moore et al., 2010 mAb, 2 (2): 181-189; Lazar et al., 2006 PNAS, 103 (11): 4005-4010, Shields et al., 2001 JBC, 276 (9): 6591-6604; Stavenhagen et al., 2007 Cancer Res, 67 (18): 8882-8890; Stavenhagen et al., 2008 Advan. Enzyme Regul., 48: 152-164; Alegre et al, 1992 J Immunol, 148: 3461-3468; Reviewed in Kaneko and Niwa, 2011 Biodrugs, 25(1):1-11. Примеры мутаций, которые повышают ADCC, включают модификацию в Ser239 и Ile332, например Ser239Asp и Ile332Glu (S239D, I332E). Примеры мутаций, которые повышают CDC, включают модификации в Lys326 и Glu333. В некоторых вариантах осуществления, Fc-область модифицируют в одном или в обоих из этих положениях, например Lys326Ala и/или Glu333Ala (K326A и E333A) с использованием системы нумерации Kabat.

В некоторых вариантах осуществления, Fc-область человеческого IgG модифицируют для индуцирования гетеродимеризации. Например, наличие аминокислотной модификации внутри CH3-домене в Thr366, который при замене на более объемную аминокислоту, например, Try (T366W), может предпочтительно спариваться со вторым CH3-доменом, имеющим аминокислотные модификации до менее объемной аминокислоты в положениях Thr366, Leu368 и Tyr407, например Ser, Ala и Val, соответственно (T366S/L368A/Y407V). Гетеродимеризация посредством модификаций CH3 может быть дополнительно стабилизирована путем введения дисульфидной связи, например, путем изменения Ser354 на Cys (S354C) и Y349 на Cys (Y349C) на противоположных CH3-доменах (см. Carter, 2001 Journal of Immunological Methods, 248: 7-15).

В некоторых вариантах осуществления, Fc-область человеческого IgG модифицируют для предотвращения димеризации. В этих вариантах осуществления, слитые белки по настоящему изобретению являются мономерными. Например, модификация остатка Thr366 на заряженный остаток, например Thr366Lys, Thr366Arg, Thr366Asp или Thr366Glu (T366K, T366R, T366D или T366E, соответственно), предотвращает димеризацию CH3-CH3.

В некоторых вариантах осуществления, Fc-область слитого белка изменяется в одном или нескольких из следующих положений для снижения связывания Fc-рецептора: Leu 234 (L234), Leu235 (L235), Asp265 (D265), Asp270 (D270), Ser298 (S298), Asn297 (N297), Asn325 (N325) или Ala327 (A327). Например, Leu 234Ala (L234A), Leu235Ala (L235A), Asp265Asn (D265N), Asp270Asn (D270N), Ser298Asn (S298N), Asn297Ala (N297A), Asn325Glu (N325E) или Ala327Ser (A327S). В предпочтительных вариантах осуществления, модификации в Fc-области уменьшают связывание с Fc-гамма-рецепторами, хотя они оказывают минимальное влияние на связывание с неонатальным Fc-рецептором (FcRn).

В некоторых вариантах осуществления, слитый белок содержит полипептид, полученный из шарнирной области иммуноглобулина. Шарнирная область может быть выбрана из любого из подклассов человеческого IgG. Например, слитый белок может содержать модифицированный шарнир IgG1, имеющий последовательность EPKSSDKTHTCPPC (SEQ ID NO: 7), где Cys220, который образует дисульфид с C-концевым цистеином легкой цепи, подвергают мутации до серина, например Cys220Ser (C220S). В других вариантах осуществления, слитый белок содержит укороченный шарнир, имеющий последовательность DKTHTCPPC (SEQ ID NO: 8).

В некоторых вариантах осуществления, слитый белок содержит модифицированный шарнир из IgG4, который модифицирован для предотвращения или уменьшения обмена цепей, например Ser228Pro (S228P), имеющего последовательность ESKYGPPCPPC (SEQ ID NO: 9). В некоторых вариантах осуществления, слитый белок содержит линкерные полипептиды. В других вариантах осуществления, слитый белок содержит линкерные и шарнирные полипептиды.

В некоторых вариантах осуществления, слитые белки по настоящему изобретению не содержат или имеют меньшее содержание фукозы, присоединенной к N-связанной гликановой цепи по N297. Существует множество способов предотвращения фукозилирования, включая, но не ограничиваясь ими, продуцирование в FUT8-дефицитной клеточной линии; добавление ингибиторов к среде для культивирования клеток млекопитающих, например кастаноспермина; и метаболическое конструирование продуцирующей клеточной линии.

В некоторых вариантах осуществления, TBD сконструирован для устранения распознавания уже существующими антителами, имеющимися у людей. В некоторых вариантах осуществления, однодоменные антитела по настоящему изобретению модифицируют мутацией в положении Leu11, например Leu11Glu (L11E) или Leu11Lys (L11K). В других вариантах осуществления, однодоменные антитела по настоящему изобретению модифицируют путем замен в карбоксиконцевой области, например, концевая последовательность состоит из GQGTLVTVKPGG (SEQ ID NO: 10) или GQGTLVTVEPGG (SEQ ID NO: 11) или их модификации. В некоторых вариантах осуществления, однодоменные антитела по настоящему изобретению модифицируют мутацией в положении 11 и путем замен в карбоксиконцевой области.

В некоторых вариантах осуществления, TBD и/или GITR-BD слитых белков по настоящему изобретению функционально связаны посредством аминокислотных линкеров. В некоторых вариантах осуществления, эти линкеры состоят преимущественно из аминокислот Глицин и Серин, обозначенных в настоящем описании как GS-линкеры. GS-линкеры слитых белков по настоящему изобретению могут иметь разную длину, например, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 аминокислот в длину.

В некоторых вариантах осуществления, GS-линкер содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из GGSGGS, то есть (GGS)₂ (SEQ ID NO: 12); GGSGGSGGS, т. е. (GGS)₃ (SEQ ID NO: 13); GGSGGSGGSGGS, то есть (GGS)₄ (SEQ ID NO: 14); и GGSGGSGGSGGSGGS, то есть (GGS)₅ (SEQ ID NO: 15).

В некоторых вариантах осуществления, линкер представляет собой гибкий линкер, содержащий остатки глицина, например, в качестве неограничивающего примера: GG, GGG, GGGG (SEQ ID NO: 16), GGGGG (SEQ ID NO: 17) и GGGGGG (SEQ ID NO: 18).

В некоторых вариантах осуществления, слитый белок с направленным воздействием на GITR включает комбинацию GS-линкера и глицинового линкера.

Краткое описание чертежей

Фигура 1А представляет собой схематическое изображение иллюстративных поливалентных слитых белков по настоящему изобретению.

Фигуры 2A, 2B и 2C представляют собой серию графиков, демонстрирующих связывание слитых белков с направленным воздействием на GITR с GITR, экспрессированным на клетках CHO, по данным проточной цитометрии. В качестве контроля для этих исследований использовали антитело TRX-518 против GITR.

Фигуры 3A, 3B и 3C представляют собой серию графиков, демонстрирующих способность слитых белков с направленным воздействием на GITR блокировать взаимодействие между GITRL и GITR. В данном случае для оценки блокирующей способности использовали анализ проточной цитометрии с использованием GITR-экспрессирующих клеток CHO и рекомбинантного GITRL. В качестве контроля этих исследований использовали антитело против GITR, TRX-518.

Фигуры 4A, 4B, 4C, 4D и 4E представляют собой серию графиков, изображающих связывание молекул с направленным воздействием на GITR по изобретению, которые обозначены как hzC06v1.1, hzC06v1.2, hzC06v1.3, hzC06v1.4, hzC06v2.1, hzC06v2.2, hzC06v2.3, hzC06v2.4, hzC06v3, hzC06v3. 1, hzC06v3. 2, hzC06v3. 3, hzC06v3. 4, hzC06v3. 5, hzC06v3.6, hzC06v3.7, hzC06v3.8, hzC06v3.9, hzC06v3.10, hzC06v3.11 и hzC06v3.12, с человеческим GITR и GITR яванской макаки («cyno GITR»), экспрессированными на поверхности клеток СНО по измерениям проточной цитометрией.

Фигуры 5A, 5B, 5C, 5D и 5E представляют собой серию графиков, изображающих связывание молекул направленного воздействия на GITR по изобретению, которые обозначены как hzC04v4.1, hzC04v4.1.2, hzC04v4.2, hzC04v4.2.2, hzC04v5, hzC04v1.2.1, hzC04v5.1, hzC04v5.2, hzC04v5.3, hzC04v5.4, hzC04v5.5, hzC04v5.6, hzC04v5.7, hzC04v5.8, hzC04v5.9, hzC04v5.10, hzC04v5.11 и hzC04v5.12, для человеческого GITR и GITR яванской макаки («cyno GITR»), экспрессированных на поверхности клеток СНО по измерениям проточной цитометрией.

Фигура 6 представляет собой схематическое изображение четырехвалентных анти-GITR молекул, которые сконструированы с двумя тандемными копиями однодоменной вариабельной области (sdAb), слитой с Fc-доменом человеческого IgG1. Химерные молекулы сконструированы с Fc-доменами, полученными из мышиного IgG2a.

Фигура 7 представляет собой график, изображающий связывание анти-GITR молекулы, описанной в настоящем описании как четырехвалентный hzC06-hIgG1, с первичными Т-клетками человека. Четырехвалентный hzC06-hIgG1 сконструирован с двумя копиями GITR-связывающей молекулы SEQ ID NO: 93, которая, в свою очередь, сконструирована с двумя тандемными копиями однодоменной вариабельной области (sdAb) SEQ ID NO: 59, слитой с Fc-доменом человеческого IgG1 SEQ ID NO: 1.

Фигуры 8А и 8В представляют собой серии графиков, изображающих способность четырехвалентных молекул с направленным воздействием на GITR по изобретению активировать сигнализацию NF-kB в репортерных клеточных линиях, экспрессирующих GITR.

Фигуры 9А, 9В и 9С представляют собой серию графиков, изображающих, что обработка четырехвалентной молекулой с направленным воздействием на GITR по изобретению значительно снижала опухолевый рост CT26 независимо от дня введения.

Фигура 10 представляет собой серию графиков, изображающих дозозависимое подавление опухолевого роста CT26 с помощью четырехвалентной молекулы с направленным воздействием на GITR по изобретения.

Фигура 11 представляет собой серию графиков, изображающих дозозависимое подавление опухолевого роста MC38 с помощью четырехвалентной молекулы с направленным воздействием на GITR по изобретению.

Фигуры 12А, 12В и 12С представляют собой серию графиков, изображающих влияние функции Fc на ингибирование опухолевого роста CT26.

Фигуры 13A, 13B и 13C представляют собой серию графиков, изображающих, что обработка четырехвалентной молекулой с направленным воздействием на GITR имела последующую устойчивость к повторному антигенному стимулу опухолями CT26.

Фигуры 14А, 14В и 14С представляют собой серию графиков, изображающих, что обработка четырехвалентной молекулой с направленным воздействием на GITR по изобретению значительно уменьшала встречаемость Treg и изменяла отношение Treg к эффекторным T-клеткам в микроокружении опухоли.

Фигуры 15А и 15В представляют собой серию графиков, изображающих, что обработка четырехвалентной молекулой с направленным воздействием на GITR по изобретению значительно индуцировала активацию и пролиферацию CD8 Т-клеток.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

В изобретении предлагаются молекулы, которые специфично связываются с глюкокортикоид-индуцированным TNFR-родственным белком (GITR), членом суперсемейства TNF-рецепторов (TNFRSF). Более конкретно, настоящее изобретение относится к поливалентным молекулам, которые связываются по меньшей мере с GITR. Эти поливалентные TNFRSF-связывающие слитые белки содержат два или более TNFRSF-связывающих домена (TBD), где по меньшей мере один TBD связывается с GITR, и обозначается в настоящем описании как «GITR-связывающий домен» (GITR-BD).

GITR является членом TNFRSF и конститутивно экспрессируется на CD4+/CD25+/Foxop3+ регуляторных Т-клетках (Treg) в опухоли и положительно регулируется в других популяциях Т-клеток после активации. Предполагается, что он играет доминирующую роль в Treg-опосредованной иммунологической аутотолерантности. Было показано, что агонисты GITR ослабляют суппрессорную активность Treg и в мышиных моделях улучшают уничтожение опухолей эффекторными Т-клетками. Поэтому функциональный агонист GITR обладает огромным потенциалом противоопухолевой иммунотерапии.

В некоторых вариантах осуществления, слитые белки по настоящему изобретению включают по меньшей мере один GITR-BD. В некоторых вариантах осуществления, слитый белок представляет собой поливалентный слитый белок. В некоторых вариантах осуществления, слитый белок представляет собой полиспецифичный слитый белок, который связывается с GITR и со вторым антигеном, таким как, например, любой другой член TNFRSF. В некоторых вариантах осуществления, слитый белок представляет собой полиспецифичный и поливалентный слитый белок.

В некоторых вариантах осуществления, GITR-BD связывает человеческий GITR и GITR яванской макаки. В некоторых вариантах осуществления, GITR-BD блокирует или иным образом модулирует взаимодействие GITR и его лиганда GITR-Лиганд (GITR-L). В других вариантах осуществления, GITR-BD не блокирует, не ингибирует или иным образом не модулирует взаимодействие GITR и GITR-L. В некоторых вариантах осуществления, слитый белок по настоящему изобретению включает несколько копий одного и того же GITR-BD. В некоторых вариантах осуществления, слитый белок по настоящему изобретению включает множество GITR-BD, которые распознают один и тот же эпитоп на GITR. В некоторых вариантах осуществления, слитый белок по настоящему изобретению включает множество GITR-BD, которые распознают различные эпитопы на GITR. В некоторых вариантах осуществления, слитый белок по настоящему изобретению включает множество GITR-BD, где некоторые GITR-BD блокируют взаимодействие GITR-GITR-L, а другие не блокируют взаимодействие GITR-GITR-L. В предпочтительных вариантах осуществления, слитые белки с направленным воздействием на GITR по настоящему изобретению индуцируют непосредственную клеточную смерть опухолевых клеток.

В некоторых вариантах осуществления, молекула с направленным воздействием на GITR включает по меньшей мере одну копию последовательности однодоменного антитела (sdAb), которая специфично связывается с GITR. В некоторых вариантах осуществления, молекулы с направленным воздействием на GITR, включают две или более копии sdAb, которые специфично связываются с GITR, например три или более, четыре или более, пять или более, или шесть или более копий sdAb, которое специфично связывает GITR.

Однодоменное антитело (sdAb) представляет собой фрагмент антитела, состоящий из антитела, содержащего один мономерный вариабельный домен, который способен селективно связываться с конкретным антигеном. При молекулярной массе, составляющей всего лишь 12-15 кДа однодоменные антитела намного меньше обычных антител (150-160 кДа), которые состоят из двух тяжелых белковых цепей и двух легких цепей, и даже меньше, чем Fab-фрагменты (~ 50 кДа, одна легкая цепь и половина тяжелой цепи), и одноцепочечные вариабельные фрагменты (~ 25 кДа, два вариабельных домена, один из легкой и один из тяжелой цепи).

Однодоменными антителами являются антитела, чьи области, определяющие комплементарность, являются частью однодоменного полипептида. Примеры включают, но не ограничиваются ими, антитела, содержащие тяжелую цепь, антитела, по своей природе лишенные легких цепей, однодоменные антитела, полученные из обычных 4-цепочечных антител, сконструированные антитела и однодоменные каркасы, отличных от тех, которые получены из антител. Однодоменные антитела могут быть получены из любых видов, включая, но не ограничиваясь ими, мышь, человека, верблюда, ламу, козу, кролика и/или крупный рогатый скот. В некоторых вариантах осуществления, однодоменное антитело, используемое в настоящем описании, представляет собой природное однодоменное антитело, известное как антитело, содержащее тяжелую цепь, лишенное легких цепей. Для ясности этот вариабельный домен, полученный из антитела, по своей природе содержащего только тяжелую цепь и лишенного легкой цепи, упоминается в настоящем описании как VHH, чтобы отличить его от обычного VH четырехцепочечных иммуноглобулинов. Такая молекула VHH может быть получена из антител с происхождением из верблюжьих, например, из верблюдов, лам, дромадаров, альпаков и гуанако. Другие виды, кроме верблюжьих, могут продуцировать антитела, по своей природе содержащие только тяжелую цепь и лишенные легкой цепи; такие VHH находятся в пределах объема изобретения.

GITR VHH (полученные из ламы) и гуманизированные последовательности приведены ниже, и последовательности CDR приведены в последовательностях, представленных ниже. В некоторых вариантах осуществления, GITR-связывающее sdAb слито с Fc-областью IgG, и в этих вариантах осуществления, слитый белок является двухвалентным, содержащим два GITR-связывающих домена на молекулу. В некоторых вариантах осуществления, два GITR-связывающих sdAb (2x) слиты с Fc-областью IgG, и в этих вариантах осуществления, слитый белок является четырехвалентным, содержащим четыре GITR-связывающих домена на молекулу. В некоторых вариантах осуществления, три GITR-связывающих sdAb (3x) слиты с Fc-областью IgG, и в этих вариантах осуществления, слитый белок является шестивалентным, содержащим шесть GITR-связывающих доменов на молекулу.

Иллюстративные GITR-связывающие sdAb

B09

QVQLQESGGXLVQSGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRLAPGKQRELVAVMSSGSPKYADSVKGRFTISRGSARGTVYLQMDSLKPEDTAVYYCYADVATGWGRDASAYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO: 19)

CDR1: GSVFSIDAM (SEQ ID NO: 106)

CDR2: VMSSGSPK (SEQ ID NO: 107)

CDR3: YADVATGWGRDASAYW (SEQ ID NO: 108)

H09

QVQLQQSGGGLVRAGGSLRLSCVAAGSTFSVNSMAWYRQAPGKERELVAAFTGGSTMNYASSVKGRFTISRGNAAHTVLLQMTNLKPEDTAVYYCNAEVNEGWNADYHDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO: 20)

CDR1: AGSTFSVNSM (SEQ ID NO: 109)

CDR2: FTGGSTMN (SEQ ID NO: 110)

CDR3: NAEVNEGWNADYHDYW (SEQ ID NO: 111)

F05

QVQLVQSGGGLVQAGGSLRLSCTASGSIFSINHMAWYRQAPGKQREMVAHITGGASTKYADSVKGRFTISRDSALNTVSLRMNSLKPEDTAVYYCNAEVNEGWNADYYDVWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO: 21)

CDR1: SGSIFSINHM (SEQ ID NO: 112)

CDR2: HITGGASTK (SEQ ID NO: 113)

CDR3: NAEVNEGWNADYYDVW (SEQ ID NO: 114)

C06

QVQLQESGGGLVQAGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRLAPGQQRELVAVLNGISSAKYADSVKGRFTISGDSAKNAVYLQMDGLKPEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO: 22)

CDR1: GSVFSIDAM (SEQ ID NO: 106)

CDR2: VLNGISSAK (SEQ ID NO: 115)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

2A1

EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGNIFSIDAMGWYRQAPGRQRELVAQIPGGPTDSVKGRFTVSGNSAKNTGYLQMNTLKPEDTAVYYCNIVASTSWGSPSKVYWGQGTQATVSS (SEQ ID NO: 23)

CDR1: SGNIFSIDAM (SEQ ID NO: 117)

CDR2: QIPGG (SEQ ID NO: 118)

CDR3: NIVASTSWGSPSKVYW (SEQ ID NO: 119)

E2

QVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGNERELVALITGGRTTTYADSVKGRFTISRASAPNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTQVTVS (SEQ ID NO: 24)

CDR1: SGSVFSIDSM (SEQ ID NO: 120)

CDR2: LITGGRTTT (SEQ ID NO: 121)

CDR3: NAVVSTGWGRNADDYW (SEQ ID NO: 122)

B12

QVQLQQSGGGLVQAGGSLRLSCAASGSIFSIDAMGWYRLAPGKQRELVAVIDGVSPNYADSVKGRFTISSDIAKNTVYLQMHSPKPEDTAVYYCNADVSTGWGRPADHYWGQGTQVTVS (SEQ ID NO: 25)

CDR1: SGSIFSIDAM (SEQ ID NO: 149)

CDR2: VIDGVSPN (SEQ ID NO: 123)

CDR3: NADVSTGWGRPADHYW (SEQ ID NO: 150)

B2

QVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGNERELVALITGGHTTTYGDSVKGRFTISRASAPNTVHLQMNSLQPEDTAVYYCNAAVSTGWGRNADDYWGQGTQVTVS (SEQ ID NO: 26)

CDR1: SGSVFSIDSM (SEQ ID NO: 120)

CDR2: LITGGHTTT (SEQ ID NO: 123)

CDR3: NAAVSTGWGRNADDYW (SEQ ID NO: 124)

F2

QLVQSGGGLVQPGESLRLSCAASGSVFSIDSVSWFRQGPGNERELVALITGGRTTTYADSVKGRFTISRANAPNTVHLRMNSLKPEDTAVYYCNAAVSTGWGRNADDYWGQGTQVTVS (SEQ ID NO: 27)

CDR1: SGSVFSIDSV (SEQ ID NO: 125)

CDR2: LITGGRTTT (SEQ ID NO: 121)

CDR3: NAAVSTGWGRNADDYW (SEQ ID NO: 124)

B3

QVQLVQSGGGLVQPGGSLRLICAASGSVFSIDSMSWFRQRPGNERELVALITGGRTTTYSDSVKGRFTISRASALNTVHLQMNSLKPEDTAVYYCNAALSTGWGRDASAYWGQGTQVTVS (SEQ ID NO: 28)

CDR1: SGSVFSIDSM (SEQ ID NO: 120)

CDR2: LITGGRTTT (SEQ ID NO: 121)

CDR3: NAALSTGWGRDASAYW (SEQ ID NO: 126)

E3

QVQLQESGGGLVQAGGSLRLSCTASGSIFSINHMAWYRQAPGKQREMVAHITGGASTKYADSVKGRFTISRDSALNTVSLRMNSLKPEDTAVYYCNAEVNEGWNADYYDVWGQGTQVTVS (SEQ ID NO: 29)

CDR1: SGSIFSINHM (SEQ ID NO: 112)

CDR2: HITGGASTK (SEQ ID NO: 113)

CDR3: AEVNEGWNADYYDVW (SEQ ID NO: 127)

B4

QLQLQESGGGTVQAGGSLRLSCAASRSIASINVMGWYRQAPGNQHELVAAITSGGSPNYAGSVRGRFIISRDNAKNTVYLQMNDLKPEDTAVYYCAGELRDDSNGYLHYWGQGTQVTVS (SEQ ID NO: 30)

CDR1: SRSIASINVM (SEQ ID NO: 148)

CDR2: ITSGGSPN (SEQ ID NO: 128)

CDR3: AGELRDDSNGYLHYW (SEQ ID NO: 129)

B7

QVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQTPGNERELVAHITGGRTTTYADSVKGRFTISRASAPNTVHLQMNNLKPEDTAVYYCNAAVSTGWGRNADDYWGQGTQVTVS (SEQ ID NO: 31)

CDR1: SGSVFSIDSM (SEQ ID NO: 120)

CDR2: HITGGRTTT (SEQ ID NO: 130)

CDR3: NAAVSTGWGRNADDYW (SEQ ID NO: 124)

C7

QVQLQESGGGLVQAGGSLRLSCTASGSIFSIDDMGWYRLAPGKQRELVAVHSGSSTNYGDSVKGRFTISGDSAKNTVYLQMHRLEPEDTAVYYCYAAISSGWGRDAEDYWGQGTQVTVS (SEQ ID NO: 32)

CDR1: SGSIFSIDDM (SEQ ID NO: 131)

CDR2: VHSGSSTN (SEQ ID NO: 132)

CDR3: YAAISSGWGRDAEDYW (SEQ ID NO: 133)

C4

QVQLVQSGGGLVQPGESLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQGPGNERELVALITGGRTTTYADSVKGRFTISRANAPNTVHLQMNSLKPEDTAVYYCNAAVSTGWGRSADDYWGQGTQVTVS (SEQ ID NO: 33)

CDR1: SGSVFSIDSM (SEQ ID NO: 120)

CDR2: ITGGRTTT (SEQ ID NO: 134)

CDR3: NAAVSTGWGRSADDYW (SEQ ID NO: 135)

B5

QVQLVQSGGGLVQPGESLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQGPGNERELVALITGGRTTTYADSVKGRFTISRANAPNTVHLQMNSLEPEDTAVYYCNAAVSTGWGRNADDYWGQGTQVTVS (SEQ ID NO: 34)

CDR1: SGSVFSIDSM (SEQ ID NO: 120)

CDR2: LITGGRTTT (SEQ ID NO: 121)

CDR3: NAAVSTGWGRNADDYW (SEQ ID NO: 124)

H11

QVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGNERELVALITGGRTTTYADSVKGRFTISRASAPNTVHLQMNSLKPEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTQVTVS (SEQ ID NO: 35)

CDR1: SGSVFSIDSM (SEQ ID NO: 120)

CDR2: LITGGRTTT (SEQ ID NO: 121)

CDR3: NAVVSTGWGRNADDYW (SEQ ID NO: 122)

H11v420

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSAITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKP (SEQ ID NO: 36)

CDR1: GSVFSIDAM (SEQ ID NO: 106)

CDR2: ITGGRTTY (SEQ ID NO: 136)

CDR3: NAVVSTGWGRNADDYW (SEQ ID NO: 122)

H11v420.1

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCAITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKP (SEQ ID NO: 37)

CDR1: GSVFSIDAM (SEQ ID NO: 106)

CDR2: AITGGRTTY (SEQ ID NO: 137)

CDR3: NAVVSTGWGRNADDYW (SEQ ID NO: 122)

H11v401

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKP (SEQ ID NO: 38)

CDR1: SGSVFSIDSM (SEQ ID NO: 120)

CDR2: LITGGRTTY (SEQ ID NO: 137)

CDR3: NAVVSTGWGRNADDYW (SEQ ID NO: 122)

H11v401.1

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKP (SEQ ID NO: 39)

CDR1: SGSVFSIDSM (SEQ ID NO: 120)

CDR2: LITGGRTTY (SEQ ID NO: 137)

CDR3: NAVVSTGWGRNADDYW (SEQ ID NO: 122)

H11v421

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKP (SEQ ID NO: 40)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LITGGRTTY (SEQ ID NO: 137)

CDR3: NAVVSTGWGRNADDYW (SEQ ID NO: 122)

H11v421.1

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKP (SEQ ID NO: 41)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LITGGRTTY (SEQ ID NO: 137)

CDR3: NAVVSTGWGRNADDYW (SEQ ID NO: 122)

hzC06v1.1

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKGLELVSALSGISSATYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 42)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LSGISSAT (SEQ ID NO: 139)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

hzC06v1.2

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKGRELVSALSGISSATYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 43)

CDR1: GSVFSIDAM (SEQ ID NO: 106)

CDR2: LSGISSAT (SEQ ID NO: 139)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

hzC06v1.3

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKQRELVSALSGISSATYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 44)

CDR1: GSVFSIDAM (SEQ ID NO: 106)

CDR2: LSGISSAT (SEQ ID NO: 139)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

hzC06v1.4

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGQQRELVSALSGISSATYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 45)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LSGISSAT (SEQ ID NO: 139)

CDR3: ADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 140)

hzC06v2.1

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKGLELVAVLSGISSATYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 46)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LSGISSAT (SEQ ID NO: 139)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

hzC06v2.2

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKGRELVAVLSGISSATYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 47)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LSGISSAT (SEQ ID NO: 139)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

hzC06v2.3

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKQRELVAVLSGISSATYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 48)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LSGISSAT (SEQ ID NO: 139)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

hzC06v2.4

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGQQRELVAVLSGISSATYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 49)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LSGISSAT (SEQ ID NO: 139)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

hzC06v3

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKQRELVAVLSGISSAKYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 50)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LSGISSAK (SEQ ID NO: 141)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

hzC06v3.1

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRLAPGQQRELVAVLSGISSAKYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 51)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LSGISSAK (SEQ ID NO: 141)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

hzC06v3.2

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKQRELVAVLSGISSAKYADSVKGRFTISGDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 52)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LSGISSAK (SEQ ID NO: 141)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

hzC06v3.3

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKQRELVAVLSGISSAKYAESVKGRFTISRDSAKNAVYLQMDGLKPEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 53)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LSGISSAK (SEQ ID NO: 141)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

hzC06v3.4

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKQRELVAVLSGISSAKYAESVKGRFTISRDNAKNTVYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 54)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LSGISSAK (SEQ ID NO: 141)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

hzC06v3.5

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKQRELVAVLSGISSAKYAESVKGRFTISRASAPNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 55)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LSGISSAK (SEQ ID NO: 141)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

hzC06v3.6

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKQRELVAVLSGISSAKYAESVKGRFTISRASAPNTVYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 56)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LSGISSAK (SEQ ID NO: 141)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

hzC06v3.7

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKQRELVAVLSGISSAKYAASAPGRFTISRDAVKNTVYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 57)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LSGISSAK (SEQ ID NO: 141)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

hzC06v3.8

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKQRELVAVLSGISSAKYAASAPGRFTISRDAVENTVYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 58)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LSGISSAK (SEQ ID NO: 141)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

hzC06v3.9

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKQRELVAVLSGISSAKYAASAPGRFTISRDNAKNTVYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 59)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LSGISSAK (SEQ ID NO: 141)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

hzC06v3.10

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKQRELVAVLSGISSAKYADAVKGRFTISRASAPNTVYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 60)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LSGISSAK (SEQ ID NO: 141)

CDR3: ADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 142)

hzC06v3.11

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKQRELVAVLSGISSAKYADAVEGRFTISRASAPNTVYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 61)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LSGISSAK (SEQ ID NO: 141)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

hzC06v3.12

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKQRELVAVLSGISSAKYAASAPGRFTISRASAPNTVYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTV (SEQ ID NO: 62)

CDR1: SGSVFSIDAM (SEQ ID NO: 138)

CDR2: LSGISSAK (SEQ ID NO: 141)

CDR3: YADVSTGWGRDAHGYW (SEQ ID NO: 116)

hzC04v1

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTHGMDWFRQAPGKDLEWVSAINNGGSWTSYASSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYWCQNRVTRGQGTLVTV (SEQ ID NO: 63)

CDR1: SGFTFSTHGM (SEQ ID NO: 143)

CDR2: AINNGGSWTS (SEQ ID NO: 144)

CDR3: CQNRVTR (SEQ ID NO: 145)

hzC04v1.2

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTHGMDWFRQAPGKDLEWVSAINNGGSWTSYASSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCQNRVTRGQGTLVTV (SEQ ID NO: 64)

CDR1: SGFTFSTHGM (SEQ ID NO: 143)

CDR2: AINNGGSWTS (SEQ ID NO: 144)

CDR3: QNRVTR (SEQ ID NO: 146)

hzC04v1.2.1

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTHGMDWFRQAPGKDLEWVSAINQGGSWTSYASSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCQNRVTRGQGTLVTV (SEQ ID NO: 65)

CDR1: SGFTFSTHGM (SEQ ID NO: 143)

CDR2: INQGGSWTS (SEQ ID NO: 147)

CDR3: QNRVTR (SEQ ID NO: 146)

hzC04v2

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTHGMDWFRQAPGKGLEWVSAINNGGSWTSYASSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYWCQNRVTRGQGTLVTV (SEQ ID NO: 66)

CDR1: SGFTFSTHGM (SEQ ID NO: 143)

CDR2: AINNGGSWTS (SEQ ID NO: 144)

CDR3: QNRVTR (SEQ ID NO: 146)

hzC04v2.2

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTHGMDWFRQAPGKGLEWVSAINNGGSWTSYASSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCQNRVTRGQGTLVTV (SEQ ID NO: 67)

CDR1: SGFTFSTHGM (SEQ ID NO: 143)

CDR2: AINNGGSWTS (SEQ ID NO: 144)

CDR3: QNRVTR (SEQ ID NO: 146)

hzC04v5

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTHGMDWFRQAPGKDLEWVSAIQSGGSWTSYASSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYWCQNRVTRGQGTLVTV (SEQ ID NO: 68)

CDR1: SGFTFSTHGM (SEQ ID NO: 143)

CDR2: AIQSGGSWTS (SEQ ID NO: 147)

CDR3: QNRVTR (SEQ ID NO: 146)

hzC04v5.1

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTHGMDWFRQAPGKDLEWVSAIQSGGSWTSYASSVKGRFTISRDNAKNTLYLEMNNLKPEDTAVYWCQNRVTRGQGTLVTV (SEQ ID NO: 69)

CDR1: SGFTFSTHGM (SEQ ID NO: 143)

CDR2: AIQSGGSWTS (SEQ ID NO: 147)

CDR3: QNRVTR (SEQ ID NO: 146)

hzC04v5.2

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTHGMDWFRQAPGKDLEWVSAIQSGGSWTSYASSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNNLRAEDTAVYWCQNRVTRGQGTLVTV (SEQ ID NO: 70)

CDR1: SGFTFSTHGM (SEQ ID NO: 143)

CDR2: AIQSGGSWTS (SEQ ID NO: 147)

CDR3: QNRVTR (SEQ ID NO: 146)

hzC04v5.3

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTHGMDWFRQAPGKDLEWVSAIQSGGSWTSYASSVKGRFTISRDNAKNTLYLEMSSLRAEDTAVYWCQNRVTRGQGTLVTV (SEQ ID NO: 71)

CDR1: SGFTFSTHGM (SEQ ID NO: 143)

CDR2: AIQSGGSWTS (SEQ ID NO: 147)

CDR3: QNRVTR (SEQ ID NO: 146)

hzC04v5.4

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTHGMDWFRQAPGKDLEWVSAIQSGGSWTSYASSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRPEDTAVYWCQNRVTRGQGTLVTV (SEQ ID NO: 72)

CDR1: SGFTFSTHGM (SEQ ID NO: 143)

CDR2: AIQSGGSWTS (SEQ ID NO: 147)

CDR3: QNRVTR (SEQ ID NO: 146)

hzC04v5.5

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTHGMDWFRQAPGKDLEWVSAIQSGGSWTSYASSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMQQLRAEDTAVYWCQNRVTRGQGTLVTV (SEQ ID NO: 73)

CDR1: SGFTFSTHGM (SEQ ID NO: 143)

CDR2: AIQSGGSWTS (SEQ ID NO: 147)

CDR3: QNRVTR (SEQ ID NO: 146)

hzC04v5.6

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTHGMDWFRQAPGKDLEWVSAIQSGGSWTSYASSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMQNLRAEDTAVYWCQNRVTRGQGTLVTV (SEQ ID NO: 74)

CDR1: SGFTFSTHGM (SEQ ID NO: 143)

CDR2: AIQSGGSWTS (SEQ ID NO: 147)

CDR3: QNRVTR (SEQ ID NO: 146)

hzC04v5.7

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTHGMDWFRQAPGKDLEWVSAIQSGGSWTSYASSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMDNLRAEDTAVYWCQNRVTRGQGTLVTV (SEQ ID NO: 75)

CDR1: SGFTFSTHGM (SEQ ID NO: 143)

CDR2: AIQSGGSWTS (SEQ ID NO: 147)

CDR3: QNRVTR (SEQ ID NO: 146)

hzC04v5.8

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTHGMDWFRQAPGKDLEWVSAIQSGGSWTSYASSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNDLRAEDTAVYWCQNRVTRGQGTLVTV (SEQ ID NO: 76)

CDR1: SGFTFSTHGM (SEQ ID NO: 143)

CDR2: AIQSGGSWTS (SEQ ID NO: 147)

CDR3: QNRVTR (SEQ ID NO: 146)

hzC04v5.9

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTHGMDWFRQAPGKDLEWVSAIQSGGSWTSYASSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMDDLRAEDTAVYWCQNRVTRGQGTLVTV (SEQ ID NO: 77)

CDR1: SGFTFSTHGM (SEQ ID NO: 143)

CDR2: AIQSGGSWTS (SEQ ID NO: 147)

CDR3: QNRVTR (SEQ ID NO: 146)

hzC04v5.10

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTHGMDWFRQAPGKDLEWVSAIQSGGSWTSYASSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMQDLRAEDTAVYWCQNRVTRGQGTLVTV (SEQ ID NO: 78)

CDR1: SGFTFSTHGM (SEQ ID NO: 143)

CDR2: AIQSGGSWTS (SEQ ID NO: 147)

CDR3: QNRVTR (SEQ ID NO: 146)

hzC04v5.11

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTHGMDWFRQAPGKDLEWVSAIQSGGSWTSYASSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNQLRAEDTAVYWCQNRVTRGQGTLVTV (SEQ ID NO: 79)

CDR1: SGFTFSTHGM (SEQ ID NO: 143)

CDR2: AIQSGGSWTS (SEQ ID NO: 147)

CDR3: QNRVTR (SEQ ID NO: 146)

hzC04v5.12

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGFTFSTHGMDWFRQAPGKDLEWVSAIQSGGSWTSYASSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSNLRAEDTAVYWCQNRVTRGQGTLVTV (SEQ ID NO: 80)

CDR1: SGFTFSTHGM (SEQ ID NO: 143)

CDR2: AIQSGGSWTS (SEQ ID NO: 147)

CDR3: QNRVTR (SEQ ID NO: 146)

2x H11v420+полипептид с делецией Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSAITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSAITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 81)

2x H11v420.1+полипептид с делецией Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCAITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCAITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 82)

2x H11v420 IgG1-Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSAITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSAITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 83)

2x H11v420.1 IgG1-Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCAITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCAITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 84)

2x H11v401+полипептид с делецией Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 85)

2x H11v401.1+полипептид с делецией Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 86)

2x H11v401 IgG1-Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 87)

2x H11v401.1 IgG1-Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 88)

2x H11v421+полипептид с делецией Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 89)

2x H11v421.1+полипептид с делецией Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 90)

2x H11v421 IgG1-Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 91)

2x H11v421.1 IgG1-Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 92)

2x hzC06 IgG1-Fc

EVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKQRELVAVLSGISSAKYAASAPGRFTISRDNAKNTVYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMGWYRQAPGKQRELVAVLSGISSAKYAASAPGRFTISRDNAKNTVYLQMSSLRAEDTAVYYCYADVSTGWGRDAHGYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 93)

3x H11v420+полипептид с делецией Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSAITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSAITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSAITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 94)

3x H11v420.1+полипептид с делецией Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCAITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCAITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCAITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 95)

3x H11v420 IgG1-Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSAITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSAITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSAITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 96)

3x H11v420.1 IgG1-Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCAITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCAITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCAITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 97)

3x H11v401+полипептид с делецией Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 98)

3x H11v401.1+полипептид с делецией Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 99)

3x H11v401 IgG1-Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 100)

3x H11v401.1 IgG1-Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDSMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 101)

3x H11v421+полипептид с делецией Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 102)

3x H11v421.1+полипептид с делецией Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 103)

3x H11v421 IgG1-Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVSLITGGRTTYYAESVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 104)

3x H11v421.1 IgG1-Fc

MKWVTFISLLFLFSSAYSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGSGGSEVQLLESGGGEVQPGGSLRLSCAASGSVFSIDAMSWFRQAPGKGLELVCLITGGRTTYYAESVKGRFTCSRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCNAVVSTGWGRNADDYWGQGTLVTVKPGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 105)

В некоторых вариантах осуществления, слитые белки с направленным воздействием на GITR по настоящему изобретению, включают две или более полипептидных последовательностей, которые функционально связаны через аминокислотные линкеры. В некоторых вариантах осуществления, эти линкеры состоят преимущественно из аминокислот глицин и серин, обозначенных здесь GS-линкерами. GS-линкеры слитых белков по настоящему изобретению могут иметь разную длину, составляющую например, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 аминокислот.

В некоторых вариантах осуществления, GS-линкер содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из GGSGGS, то есть (GGS)₂ (SEQ ID NO: 12); GGSGGSGGS, т. е. (GGS)₃ (SEQ ID NO: 13); GGSGGSGGSGGS, то есть (GGS)₄ (SEQ ID NO: 14); и GGSGGSGGSGGSGGS, то есть (GGS)₅ (SEQ ID NO: 15).

В некоторых вариантах осуществления, линкер представляет собой гибкий линкер, содержащий остатки глицина, например, в качестве неограничивающего примера: GG, GGG, GGGG (SEQ ID NO: 16), GGGGG (SEQ ID NO: 17) и GGGGGG (SEQ ID NO: 18).

В некоторых вариантах осуществления, слитый GITR-связывающий белок включает комбинацию GS-линкера и глицинового линкера.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок с направленным воздействием на GITR является четырехвалентным. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR по изобретению включает две копии слитого белка с направленным воздействием на GITR, и имеет следующую структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR по изобретению включает две копии слитого белка, связывающего GITR, имеющего следующую структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc, где GITR-BD представляет собой выделенную полипептидную последовательность, которая связывается с GITR. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR по изобретению включает две копии слитого белка, связывающего GITR, имеющего следующую структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc, где GITR-BD представляет собой последовательность sdAb, которая связывается с GITR. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR по изобретению включает две копии слитого белка, связывающего GITR, имеющего следующую структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc, где GITR-BD представляет собой гуманизированную или полностью человеческую последовательность sdAb, которая связывается с GITR. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит область 1, определяющую комплементарность (CDR1), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; область 2, определяющую комплементарность (CDR2), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и область 3, определяющую комплементарность (CDR3), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146 и 150. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80. В некоторых вариантах осуществления, четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 81-93.

В некоторых вариантах осуществления, поливалентный слитый белок с направленным воздействием на GITR является шестивалентным. В некоторых вариантах осуществления, шестивалентная молекула с направленным воздействием на GITR по изобретению включает две копии слитого белка с направленным воздействием на GITR, имеющего следующую структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc. В некоторых вариантах осуществления, шестивалентная молекула с направленным воздействием на GITR по изобретению включает две копии слитого белка с направленным воздействием на GITR, имеющего следующую структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc, где GITR-BD представляет собой гуманизированную или выделенную полипептидную последовательность, которая связывается с GITR. В некоторых вариантах осуществления, шестивалентная молекула с направленным воздействием на GITR по изобретению включает две копии слитого белка с направленным воздействием на GITR, имеющего следующую структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc, где GITR-BD представляет собой последовательностью sdAb, которая связывается с GITR. В некоторых вариантах осуществления, шестивалентная молекула с направленным воздействием на GITR по изобретению включает две копии слитого белка с направленным воздействием на GITR, имеющего следующую структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc, где GITR-BD представляет собой гуманизированную или полностью человеческую последовательность sdAb, которая связывается с GITR. В некоторых вариантах осуществления, шестивалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит область 1, определяющую комплементарность (CDR1), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 106, 109, 112, 117, 120, 125, 131, 138, 143, 148 и 149; область 2, определяющую комплементарность (CDR2), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 110, 113, 115, 118, 121, 123, 128, 130, 132, 134, 136, 137, 139, 141, 144 и 147; и область 3, определяющую комплементарность (CDR3), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 108, 111, 114, 116, 119, 122, 124, 126, 127, 129, 133, 135, 140, 142, 145, 146 и 150. В некоторых вариантах осуществления, шестивалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80. В некоторых вариантах осуществления, шестивалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62. В некоторых вариантах осуществления, шестивалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит по меньшей мере один GITR-BD, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80. В некоторых вариантах осуществления, шестивалентная молекула с направленным воздействием на GITR содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 94-105.

Описанные в настоящем описании белки с направленным воздействием на GITR полезны при различных терапевтических, диагностических и профилактических показаниях. Например, белки с направленным воздействием на GITR полезны при лечении различных заболеваний и расстройств у объекта. В некоторых вариантах осуществления, белки с направленным воздействием на GITR полезны при лечении, облегчении симптомов, ослаблении и/или замедлении прогрессирования заболевания или расстройства у объекта, страдающего или идентифицированного как подверженного риску воспалительного заболевания или расстройства. В некоторых вариантах осуществления, белки с направленным воздействием на GITR полезны при лечении, облегчении симптомов, ослаблении и/или замедлении прогрессирования злокачественного новообразования или другого неопластического состояния. В некоторых вариантах осуществления, злокачественное новообразование представляет собой рак мочевого пузыря, рак молочной железы, рак матки/шейки матки, рак яичников, рак предстательной железы, рак яичек, рак пищевода, рак желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, колоректальный рак, рак толстой кишки, рак почек, рак головы и шеи, рак легкого, рак желудка, герминогенный рак, рак кости, рак печени, рак щитовидной железы, рак кожи, новообразование центральной нервной системы, лимфому, лейкоз, миелому, саркому и злокачественное новообразование вирусной природы. В некоторых вариантах осуществления, злокачественное новообразование представляет собой метастатическое злокачественное новообразование, рефрактерное злокачественное новообразование или рецидивирующее злокачественное новообразование. В некоторых вариантах осуществления, белки с направленным воздействием на GITR полезны для уменьшения или истощения количества регуляторных Т-клеток в опухоли объекта, нуждающегося в этом. В некоторых вариантах осуществления, белки с направленным воздействием на GITR полезны для стимуляции иммунного ответа у объекта. В некоторых вариантах осуществления, белки с направленным воздействием на GITR полезны при лечении, облегчении симптомов, ослаблении и/или замедлении прогрессирования аутоиммунного заболевания или расстройства. В некоторых вариантах осуществления, белки с направленным воздействием на GITR полезны при лечении, облегчении симптомов, ослаблении и/или замедлении прогрессирования вирусных, бактериальных и паразитарных инфекций.

Терапевтические композиции по изобретению, которые включают молекулу с направленным воздействием на GITR, используют для лечения или облегчения симптома, ассоциированного с заболеванием или расстройством, связанным с аберрантной активностью и/или экспрессией GITR у объекта. Терапевтическую схему проводят путем идентификации объекта, например пациента, страдающего (или с риском развития) заболеванием или расстройством, связанным с аберрантной активностью и/или экспрессией GITR, с использованием стандартных методов, включая любой из множества клинических и/или лабораторных процедур. Термин «пациент» включает человека и ветеринарные объекты. Термин объект включает людей и других млекопитающих.

Эффективность лечения определяется в сочетании с любым известным методом диагностики или лечения конкретного заболевания или расстройства, связанного с аберрантной активностью и/или экспрессией GITR. Устранение одного или более симптомов заболевания или расстройства, связанных с аберрантной активностью и/или экспрессией GITR, указывает на то, что молекула с направленным воздействием на GITR, дает клиническое преимущество.

Терапевтическое использование молекул с направленным воздействием на GTRR по изобретению также может включать введение одного или более дополнительных агентов. В некоторых вариантах осуществления, один или более дополнительных агентов представляют собой антитело против GITR или слитый белок, антитело против PD1 или слитый белок, антитело против LAG-3 или слитый белок, антитело против CTLA-4 или слитый белок и/или антитело против PD-L1 или слитый белок.

Молекулы с направленным воздействием на GTRR по настоящему изобретению могут быть введены индивидуально или вместе с другими способами лечения. Они могут даваться до, по существу одновременно или после других способов лечения, таких как например, хирургическая операция, химиотерапия, лучевая терапия или введение биологического средства, как например, другого терапевтического полипептида/антитела.

В некоторых вариантах осуществления, молекулы с направленным воздействием на GITR по настоящему изобретению, могут использоваться в комбинации с химиотерапевтическим агентом. Примеры химиотерапевтических агентов включают, но не ограничиваются ими, алкилирующие агенты, такие как тиотепа и Цитоксан® циклофосфамид; алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пиросульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метилмеламины, включающие альтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметилолмеламин; ацетогенины (особенно буллатацин и буллатацинон); камптотецин (включая синтетический аналог топотекан); бриостатин; каллистатин; CC-1065 (включая его синтетические аналоги адоцелезин, карцелезин и бицелезин); криптофицины (в частности, криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая синтетические аналоги, KW-2189 и CB1-TM1); элеутеробин; панкратистатин; саркодиктиин; спонгистатин; мустаргены, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, холофосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлорэтамин, мехлорэтамин оксид гидрохлорид, мелфалан, новембичин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урамустин; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин и ранимнустин; антибиотики, такие как ендииновые антибиотики (например, калихеамицин, особенно калихеамицин гаммаII и калихеамицин омегаII (см., например, Agnew, Chem Intl., Engl., 33: 183-186 (1994)), динемицин, включая динемицин A, бисфосфонаты, такие как клодронат, эсперамицин, а также хромофор неокарциностатина и родственные хромофоры хромопротеин ендииновых антибиотиков), аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, карминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо- 5-оксо-L-норлейцин, адриамицин® доксорубицин (включая морфолин-доксорубицин, цианоморфолин-доксорубицин, 2-пирролин-доксорубицин и дезоксидоксорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицины, такие как митомицин С, микофенольная кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-ФУ); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; пуриновые аналоги, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; пиримидиновые аналоги, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флуксуридин; андрогены, такие как калустерон, пропионат дромостанолона, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; антиадренергические вещества, такие как аминоглютетимид, митотан, трилостан; заменитель фолиевой кислоты, такой как фролиновая кислота; ацеглатон; альдофосфамидгликозид; аминолевулиновая кислота; енилурацин; амсакрин; бестрабуцил; бисантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазиквон; элфорнитин; эллиптиний ацетат; эпотилон; этоглюцид; нитрат галлия; гидроксимочевина; лентинан; лонидаинин; майтансиноиды, такие как майтансин и ансамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопиданмол; нитраерин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; лозоксантрон; подофиллиновая кислота; 2-этилгидразид; прокарбазин; Полисахаридный комплекс PSK® (JHS Natural Products, Eugene, OR); разоксан; ризоксин; сизофиран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазиквон; 2,2',2'-трихлортриэтиламин, трихотецины (особенно токсин Т-2, верракурин А, роридин А и ангидин), уретан, виндезин, дакарбазин, манномустин, митобронитол, митолактол, пипроброман, гацитозин, арабинозид («Ara-С»), циклофосфамид, тиотепа, таксоиды, например Таксол® паклитаксел (Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ), Абраксан® без кремофора, сконструированная на основе альбумина композиция наночастиц паклитаксела с альбумином (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois) и Таксотер® доксетаксел (Rhône-Poulenc Rorer, Antony, Франция), хлоранбуцил, гемцитабин Гемзар®, 6-тиогуанин, меркаптопурин, метотрексат, платиновые аналоги, такие как цисплатин, оксалиплатин и карбоплатин, винбластин, платина, этопосид (VP-16), ифосфамид; митоксантрон, винкристин, винорелбин Навелбин®, новантрон, тенипосид, эдатрексат, дауномицин, аминоптерин, кселода, ибандронат, иринотекан (Камптозар, CPT-11) (включая схему лечения иринотеканом с 5-FU и лейковорином), ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (DMFO); ретиноиды, такие как ретиноевая кислота; капецитабин; комбретастатин; лейковорин (LV); оксалиплатин, включая схему лечения оксалиплатином (FOLFOX); ингибиторы PKC-альфа, Raf, H-Ras, EGFR (например, эрлотиниб (Тарцева®)) и VEGF-A, которые уменьшают пролиферацию клеток, и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеуказанных.

Другие неограничивающие иллюстративные химиотерапевтические агенты включают антигормональные агенты, которые функционируют, регулируя или ингибируя действие гормонов на злокачественные новообразования, как например, антиэстрогены и селективные модуляторы рецепторов эстрогенов (SERM), включая, например, тамоксифен (включая тамоксифен Нолвадекс®), ралоксифен, дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY117018, онапристон и торемифен Фарестон®; ингибиторы ароматазы, которые ингибируют фермент ароматазу, которая регулирует продуцирование эстрогенов в надпочечниках, как например, 4(5)-имидазолы, аминоглютетимид, мегестрол ацетат Мегейс®, экземестан Аромазин®, форместан, фадрозол, ворозол Ривизор®, Фемара® летрозол и анастрозол Аримидекс®; и антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалютамид, лейпролид и госерелин; а также трокацитабин (1,3-диоксолановый аналог нуклеозида цитозина); антисмысловые олигонуклеотиды, особенно те, которые ингибируют экспрессию генов в сигнальных путях, вовлеченных в абберантную пролиферацию клеток, как например, PKC-альфа, Ralf и H-Ras; рибозимы, такие как ингибитор экспрессии VEGF (например, рибозим Ангиозим®) и ингибитор экспрессии HER2; вакцины, такие как вакцины генной терапии, например, вакцина Алловектин®, вакцина Лейвектин® и вакцина Ваксид®; Пролейкин® rIL-2; ингибитор топоизомеразы 1 Лустотекан®; Абареликс® rmRH; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеуказанных.

В некоторых вариантах осуществления, молекула с направленным воздействием на GTRR по настоящему изобретению может использоваться вместе с антиангиогенным агентом. Антиангиогенный агент относится к низкомолекулярному веществу, полинуклеотиду (включая, например, ингибирующую РНК (РНКи или киРНК)), полипептиду, выделенному белку, рекомбинантному белку, антителу или конъюгату или к их слитым белкам, которые прямо или косвенно ингибируют ангиогенез, васкулогенез или нежелательную проницаемость сосудов. Следует понимать, что антиангиогенный агент включает те агенты, которые связывают и блокируют ангиогенную активность ангиогенного фактора или его рецептора. Например, антиангиогенный агент представляет собой антитело или другой антагонист ангиогенного агента, например антитела против VEGF-A (например, бевацизумаб (Авастин®)) или против рецептора VEGF-A (например, KDR-рецептор или Flt-1 рецептор), ингибиторы антител против PDGFR, такие как Гливек® (иматиниб мезилат), низкомолекулярные соединения, которые блокируют сигнализацию VEGF-рецептора (например, PTK787/ZK2284, SU6668, Сутент®/SU11248 (сунитиб малат), AMG706 или те, которые описаны, например, в международной патентной заявке WO 2004/113304). Антиангиогенные агенты также включают нативные ингибиторы ангиогенеза, например ангиостатин, эндостатин и т.д. см., например, Klagsbrun and D'Amore (1991) Annu. Rev. Physiol. 53: 217-39; Streit and Detmar (2003) Oncogene 22: 3172-3179 (например, в таблице 3 приведена антиангиогенная терапия при злокачественной меланоме); Ferrara & Alitalo (1999) Nature Medicine 5 (12): 1359-1364; Tonini et al. (2003) Oncogene 22: 6549-6556 (например, в Таблице 2 перечислены известные антиангиогенные факторы); и, Sato (2003) Int. J. Clin. Oncol. 8: 200-206 (например, в Таблице 1 перечислены антиангиогенные агенты, используемые в клинических испытаниях).

В некоторых вариантах осуществления, молекула с направленным воздействием на GITR используется в комбинации с другими противоопухолевыми агентами, такими как антитела против HER-2, антитела против CD20, антагонист рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) (например, ингибитор тирозинкиназы), ингибитор HER1/EGFR (например, эрлотиниб (Тарцева®), ингибиторы фактора роста тромбоцитов (например, Гливек® (иматиниб мезилат)), ингибитор COX-2 (например, целекоксиб), интерфероны, ингибиторы CTLA4 (например, антитело ипилимумаб против CTLA (Йервой®)), ингибиторы PD-1 (например, антитела против PD1, BMS-936558), ингибиторы PDL1 (например, антитела против PDL1, MPDL3280A), ингибиторы PDL2 (например, антитела против PDL2), цитокины, антагонисты (например, нейтрализующие антитела), которые связываются с одной или более из следующих мишеней: ErbB2, ErbB3, ErbB4, PDGFR-бета, BlyS, APRIL, BCMA, PD-1, PDL1, PDL2, CTLA4 или рецептор(ы) VEGF, TRAIL/Apo2 и другие биологически активные и органические химические агенты и т.д..

В некоторых вариантах осуществления, молекулу с направленным воздействием на GITR, вводят во время и/или после лечения в комбинации с одним или более дополнительными агентами. В некоторых вариантах осуществления, молекула с направленным воздействием на GITR и дополнительный агент вводят в одной терапевтической композиции, и молекулу с направленным воздействием на GITR, и дополнительный агент вводят одновременно. Альтернативно, молекула с направленным воздействием на GITR и дополнительный агент отделены друг от друга, например, каждый из них включен в состав отдельной терапевтической композиции, и молекулу с направленным воздействием на GITR и дополнительный агент вводят одновременно, или молекулу с направленным воздействием на GITR и дополнительный агент вводят в разное время во время схемы лечения. Например, молекулу с направленным воздействием на GITR вводят до введения дополнительного агента, молекулу с направленным воздействием на GITR вводят после введения дополнительного агента или молекулу с направленным воздействием на GITR и дополнительный агент вводят по очереди. Как описано в настоящем описании, молекулу с направленным воздействием на GITR и дополнительный агент вводят в виде однократных доз или в виде многократных доз.

В некоторых вариантах осуществления, молекулу с направленным воздействием на GITR и дополнительный агент (агенты) вводятся одновременно. Например, молекула с направленным воздействием на GITR и дополнительный агент (агенты) могут быть включены в состав в виде одной композиции или могут вводиться в виде двух или более отдельных композиций. В некоторых вариантах осуществления, молекулу с направленным воздействием на GITR и дополнительный агент (агенты) вводят последовательно, или молекулу с направленным воздействием на GITR и дополнительный агент вводят в разное время во время схемы лечения.

Методы скрининга молекул с направленным воздействием на GITR, которые обладают требуемой специфичностью, включают, но не ограничиваются ими, твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), ферментативные анализы, проточную цитометрию и другие иммунологически опосредованные методы, известные в данной области.

Далее в изобретении предлагаются последовательности нуклеиновых кислот, и в частности, последовательности ДНК, которые кодируют слитые белки по настоящему изобретению. Предпочтительно, последовательность ДНК переносится вектором, пригодным для внехромосомной репликации, таким как фаг, вирус, плазмида, фагмида, космида, YAC или эписома. Конкретно, ДНК-вектор, который кодирует целевой слитый белок, может быть использован для облегчения способов получения молекул GITR с направленным воздействием на, описанных в настоящем описании, и получения значительных количеств слитого белка. Последовательность ДНК может быть вставлена в соответствующий экспрессирующий вектор, то есть вектор, который содержит необходимые элементы для транскрипции и трансляции вставленной последовательности, кодирующей белок. Для экспрессии последовательности, кодирующей белок, могут быть использованы различные системы хозяин-вектор. Они включают системы клеток млекопитающих, инфицированные вирусом (например, вирусом коровьей оспы, аденовирусом и т.д.); системы клеток насекомых, инфицированные вирусом (например, бакуловирусом); микроорганизмы, такие как дрожжи, содержащие дрожжевые векторы, или бактерии, трансформированные ДНК бактериофага, плазмидной ДНК или космидной ДНК. В зависимости от используемой системы хозяин-вектор может использоваться любой из ряда подходящих элементов транскрипции и трансляции.

В изобретении также предлагаются способы получения молекулы с направленным воздействием на GITR путем культивирования клетки в условиях, которые приводят к экспрессии полипептида, где клетка содержит выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую описанную в настоящем описании молекулу с направленным воздействием на GITR, и/или векторы, которые включают эти выделенные последовательности нуклеиновой кислоты. В изобретении предлагаются способы получения молекулы с направленным воздействием на GITR, путем культивирования клетки в условиях, которые приводят к экспрессии молекулы с направленным воздействием на GITR, где клетка содержит выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую описанную в настоящем описании молекулу с направленным воздействием на GITR, и/или векторы, которые включают эти выделенные последовательности нуклеиновой кислоты.

Слитые белки по изобретению (также называемые в настоящем описании как «активные соединения») и их производные, фрагменты, аналоги и гомологи могут быть включены в фармацевтические композиции, подходящие для введения. Такие композиции обычно содержат слитый белок и фармацевтически приемлемый носитель. Используемый в настоящем описании термин «фармацевтически приемлемый носитель» предназначен для включения любых и всех растворителей, дисперсионных сред, покрытий, антибактериальных и противогрибных агентов, изотонических агентов и агентов, замедляющих абсорбцию, и т.п., совместимых с фармацевтическим введением. Подходящие носители описаны в последнем издании Remington's Pharmaceutical Sciences, стандартного справочника в этой области, который включен в настоящий документ в качестве ссылки. Подходящие примеры таких носителей или разбавителей включают, но не ограничиваются ими, воду, физиологический раствор, растворы Рингера, раствор декстрозы и 5% человеческий сывороточный альбумин. Также могут использоваться липосомы и неводные носители, такие как нелетучие масла. Использование таких сред и агентов для фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области. За исключением тех случаев, когда любые обычные среды или агенты несовместимы с активным соединением, предполагается использование их в композициях. В композиции также могут быть включены дополнительные активные соединения.

Фармацевтическую композицию изобретения составляют так, чтобы она соответствовала предполагаемому пути введения. Примеры путей введения включают парентеральное, например, внутривенное, внутрикожное, подкожное, внутриутробное, пероральное (например, ингаляционное), трансдермальное (то есть местное), трансмукозальное и ректальное введение. Растворы или суспензии, используемые для парентерального, внутрикожного или подкожного применения, могут включать следующие компоненты: стерильный разбавитель, такой как вода для инъекций, физиологический раствор, нелетучие масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители; антибактериальные агенты, такие как бензиловый спирт или метилпарабен; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелатирующие агенты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА); буферы, такие как ацетаты, цитраты или фосфаты, и агенты для регуляции тоничности, такие как хлорид натрия или декстроза. РН можно регулировать кислотами или основаниями, такими как хлороводородная кислота или гидроксид натрия. Парентеральный препарат может быть заключен в ампулы, одноразовые шприцы или многоразовые флаконы из стекла или пластика.

Фармацевтические композиции, пригодные для инъекционного применения, включают стерильные водные растворы (в случае водорастворимых) или дисперсии и стерильные порошки для немедленного приготовления стерильных растворов для инъекций или дисперсии. Для внутривенного введения подходящие носители включают физиологический раствор, бактериостатическую воду, Кремофор EL^TM (BASF, Parsippany, NJ) или фосфатный буферный солевой раствор (PBS). Во всех случаях композиция должна быть стерильной и должна быть текучей в такой степени, чтобы имелась возможность пропускать ее через иглу. Она должна быть стабильной при условиях производства и хранения и должна предохраняться против загрязняющего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы. Носитель может представлять собой растворитель или дисперсионную среду, содержащую, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и тому подобное) и их подходящие смеси. Должную текучесть можно поддерживать, например, путем использования покрытия, такого как лецитин, путем поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и путем использования поверхностно-активных веществ. Предотвращения действия микроорганизмов можно достичь с помощью различных антибактериальных и противогрибных агентов, например парабенов, хлорбутанола, фенола, аскорбиновой кислоты, тимеросала и тому подобного. Во многих случаях предпочтительно включать в композиции изотонические агенты, например сахара, полиспирты, такие как маннит, сорбит, хлорид натрия. Продолжительное всасывание инъекционных композиций может быть достигнуто путем включения в состав агента, который задерживает всасывание, например моностеарат алюминия и желатин.

Стерильные инъекционные растворы могут быть получены путем включения активного соединения в требуемом количестве в подходящем растворителе с использованием одного или комбинации ингредиентов, перечисленных выше, при необходимости с последующей стерилизацией путем фильтрации. Как правило, дисперсии получают путем включения активного соединения в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и требуемые другие ингредиенты из перечисленных выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъекционных растворов способы получения представляют собой вакуумную сушку и сушку вымораживанием, с помощью которых получают порошок активного ингредиента вместе с любым дополнительным желаемым ингредиентом из ранее стерильно-отфильтрованного раствора.

Пероральные композиции обычно включают инертный разбавитель или съедобный носитель. Они могут быть заключены в желатиновые капсулы или спрессованы в таблетки. Для целей перорального терапевтического введения активное соединение можно вводить с вспомогательными веществами и использовать в форме таблеток, пастилок или капсул. Пероральные композиции также могут быть получены с использованием жидкого носителя для использования в качестве полоскания для рта, при этом соединение в жидком носителе применяют перорально и полощут ими рот, отхаркивают или проглатывают. В состав композиции могут быть включены фармацевтически совместимые связывающие агенты и/или адъювантные материалы. Таблетки, пилюли, капсулы, пастилки и тому подобное могут содержать любой из следующих ингредиентов или соединений аналогичной природы: связующее вещество, такое как микрокристаллическая целлюлоза, трагакантовая камедь или желатин; вспомогательное вещество, такое как крахмал или лактоза, дезинтегрирующий агент, такой как альгиновая кислота, примогель или кукурузный крахмал; смазывающее вещество, такое как стеарат магния или стеротес (Sterotes); вещество, способствующее скольжению, такое как коллоидный диоксид кремния; подсластитель, такой как сахароза или сахарин; или ароматизатор, такой как перечная мята, метилсалицилат или апельсиновый ароматизатор.

Для введения путем ингаляции соединения доставляются в форме аэрозольного спрея из находящегося под давлением контейнера или дозатора, который содержит подходящий пропеллент, например газ, такой как диоксид углерода, или распылитель.

Системное введение может также осуществляться через трансмукозальные или трансдермальное средства. Для трансмукозального или трансдермального введения в составе используют пенетранты, соответствующие проницаемому барьеру. Такие пенетранты обычно известны в данной области и включают, например, для трансмукозального введения, детергенты, соли желчных кислот и производные фузидовой кислоты. Трансмукозальное введение может быть осуществлено с использованием назальных спреев или суппозиториев. Для трансдермального введения активные соединения включают в состав мазей, бальзамов, гелей или кремов, как общеизвестно в данной области.

Соединения также могут быть получены в виде суппозиториев (например, с обычными основаниями для суппозиториев, такими как масло какао и другие глицериды) или в виде удерживающих клизм для ректальной доставки.

В одном варианте осуществления, активные соединения получают с использованием носителей, которые защищают соединение от быстрого удаления из организма, как например в виде композиции с контролируемым высвобождением, включая имплантаты и микрокапсулированные системы доставки. Могут использоваться биодеградируемые, биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, полиортоэфиры и полимолочная кислота. Специалистам в данной области техники будут очевидны способы получения таких составов. Материалы также могут быть получены коммерчески из Alza Corporation и Nova Pharmaceuticals, Inc. Липосомные суспензии также могут быть использованы в качестве фармацевтически приемлемых носителей. Они могут быть получены в соответствии со способами, известными специалистам в данной области, например, как описано в патенте США № 4522811.

Особенно предпочтительно включать пероральные или парентеральные композиции в стандартную лекарственную форму для удобства введения и единообразия дозировки. Используемая в настоящем описании стандартная лекарственная форма относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичных доз для объекта, подлежащего лечению; причем каждая единица содержит предопределенное количество активного соединения, рассчитанное для получения целевого терапевтического эффекта в сочетании с необходимым фармацевтическим носителем. Спецификация для стандартных лекарственных форм по изобретению диктуется и непосредственно зависит от уникальных характеристик активного соединения и конкретного терапевтического эффекта, который должен быть достигнут, и ограничений, присущих технике приготовления такого активного соединения для лечения индивидуума.

Фармацевтические композиции могут быть включены в набор, контейнер, упаковку или дозатор вместе с инструкциями по введению. Эти фармацевтические композиции могут быть включены в диагностические наборы с инструкциями по применению.

Фармацевтические композиции вводят в количестве, эффективном для лечения или профилактики конкретного показания. Терапевтически эффективное количество, как правило, зависит от массы пациента, его физического состояния или состояния здоровья, экстенсивности состояния, подлежащего лечению, или возраста пациента, которого подвергают лечению. В некоторых вариантах осуществления, фармацевтическая композиция может вводиться в количестве, которое находится в диапазоне примерно от 50 мкг/на кг массы тела примерно до 50 мг/на кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления, фармацевтическая композиция может вводиться в количестве, которое находится в диапазоне примерно от 100 мкг/на кг массы тела примерно до 50 мг/на кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления, фармацевтическая композиция может вводиться в количестве, которое находится в диапазоне примерно от 100 мкг/на кг массы тела примерно до 20 мг/на кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления, фармацевтическая композиция может вводиться в количестве, которое находится в диапазоне примерно от 0,5 мг/на кг массы тела примерно до 20 мг/на кг массы тела на дозу.

В некоторых вариантах осуществления, фармацевтическая композиция может вводиться в количестве, которое находится в диапазоне примерно от 10 мг примерно до 1000 мг на дозу. В некоторых вариантах осуществления, фармацевтическая композиция может вводиться в количестве, которое находится в диапазоне примерно от 20 мг примерно до 500 мг на дозу. В некоторых вариантах осуществления, фармацевтическая композиция может вводиться в количестве, которое находится в диапазоне примерно от 20 мг примерно до 300 мг на дозу. В некоторых вариантах осуществления, фармацевтическая композиция может вводиться в количестве, которое находится в диапазоне примерно от 20 мг примерно до 200 мг на дозу.

Фармацевтическая композиция может вводиться пациентам по мере необходимости. В некоторых вариантах осуществления, эффективную дозу фармацевтической композиции вводят объекту один или более раз. В различных вариантах осуществления, эффективную дозу фармацевтической композиции вводят пациенту один раз в месяц, менее одного раза в месяц, как например, каждые два месяца, каждые три месяца или каждые шесть месяцев. В других вариантах осуществления, эффективную дозу фармацевтической композиции вводят более одного раза в месяц, например, каждые две недели, каждую неделю, два раза в неделю, три раза в неделю, ежедневно или несколько раз в день. Эффективную дозу фармацевтической композиции вводят пациенту по меньшей мере один раз. В некоторых вариантах осуществления, эффективную дозу фармацевтической композиции можно вводить многократно, включая периоды, составляющие по меньшей мере месяц, по меньшей мере шесть месяцев или по меньшей мере один год. В некоторых вариантах осуществления, фармацевтическую композицию вводят пациенту по мере необходимости для облегчения одного или более симптомов состояния.

Если не указано иное, научные и технические термины, используемые в связи с настоящим изобретением, должны иметь значения, которые обычно понимаются специалистами в данной области техники. Кроме того, если иное не требуется по контексту, термины в единственном числе будут включать в себя множественное число и термины во множественном числе будут включать термины в единственном числе. Как правило, номенклатура, используемая в связи с технологиями клеточной и тканевой культуры, молекулярной биологии и белковой и олиго- или полинуклеотидной химии и гибридизации, описанными в настоящем описании, хорошо известна и обычно используется в данной области. Стандартные методы используются для получения рекомбинантной ДНК, синтеза олигонуклеотидов и тканевых клеточных культур и трансформации (например, электропорации, липофекции). Ферментативные реакции и методы очистки осуществляют согласно инструкциям изготовителя или так, как обычно выполняются в данной области техники или как описано в настоящем описании. Вышеупомянутые методы и процедуры обычно осуществляются в соответствии с общепринятыми способами, хорошо известными в данной области техники и описанными в различных общих и более конкретных ссылках, которые цитируются и обсуждаются в настоящем описании. См., например, Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1989)). Используемая в связи с этим номенклатура и лабораторные процедуры и методы аналитической химии, синтетической органической химии и медицинской и фармацевтической химии, описанные в настоящем описании, хорошо известны и обычно используются в данной области. Стандартные методы используются для химического синтеза, химического анализа, фармацевтических препаратов, состава и доставки, а также для лечения пациентов. Термин «пациент» включает человека и объектов ветеринарии.

Следует понимать, что используемые в соответствии с настоящим изобретением следующие термины, если не указано иное, имеют следующие значения:

Используемые в настоящем описании термины «слитый белок направленного воздействия» и «антитело» могут быть синонимами. Используемый в настоящем описании термин «антитело» относится к молекулам иммуноглобулинов и к иммунологически активным частям молекул иммуноглобулинов (Ig), т. е. молекул, которые содержат антигенсвязывающий сайт, который специфично связывается (иммунореактивен) с антигеном. Термины «специфично связывает» или «иммунореактивен с» или «направлен против» означают, что антитело реагирует с одним или несколькими антигенными детерминантами целевого антигена и не реагирует с другими полипептидами или связывается со значительно более низкой аффинностью (K_d > 10^-6 ). Антитела включают, но не ограничиваются ими, поликлональное, моноклональное, химерное, dAb (доменное антитело), одноцепочечное, Fab, Fab' и F(ab')₂ фрагменты, Fv, scFv, Fab-экспрессирующую библиотеку и однодоменное антитело (sdAb), например VHH, V_NAR, VH или VK.

Известно, что основная структурная единица антитела содержит тетрамер. Каждый тетрамер состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, каждая пара имеет одну «легкую» (примерно 25 кДа) и одну «тяжелую» цепь (примерно 50-70 кДа). Аминоконцевая часть каждой цепи включает вариабельную область примерно 100-110 или более аминокислот, главным образом отвечающая за распознавание антигена. Карбоксиконцевая часть каждой цепи определяет константную область, главным образом отвечающую за эффекторную функцию. В общем, молекулы антител, имеющие человеческое происхождение, относятся к любому из классов IgG, IgM, IgA, IgE и IgD, которые отличаются друг от друга по характеру тяжелой цепи, присутствующей в молекуле. Некоторые классы также имеют подклассы (также известные как изотипы), такие как IgG1, IgG2 и другие. Кроме того, у людей легкая цепь может быть каппа-цепью или лямбда-цепью.

Используемый в настоящем описании термин «моноклональное антитело» (mAb) или «композиция моноклональных антител» относится к популяции молекул антител, которые содержат только один вид молекул антитела, состоящий из уникального продукта гена легкой цепи и уникального продукта гена тяжелой цепи. Конкретно, области, определяющие комплементарность (CDR), моноклонального антитела, идентичны во всех молекулах популяции. MAb содержат антигенсвязывающий сайт, способный к иммунореакции с конкретным эпитопом антигена, характеризующимся уникальной аффинностью связывания с ним.

Термин «антигенсвязывающий сайт» или «связывающая часть» относится к части молекулы иммуноглобулина, которая участвует в связывании антигена. Антигенсвязывающий сайт образуется аминокислотными остатками N-концевых вариабельных («V») областей тяжелой («H») и легкой («L») цепей. Три высоко дивергентных отрезка внутри V-областей тяжелой и легкой цепей, называемые «гипервариабельными областями», располагаются между более консервативными фланкирующими отрезками, известными как «каркасные области» или «FR». Таким образом, термин «FR» относится к аминокислотным последовательностям, которые естественным образом располагаются между гипервариабельными областями в иммуноглобулинах и соседствуют с ними. В молекуле антитела три гипервариабельные области легкой цепи и три гипервариабельные области тяжелой цепи располагаются друг относительно друга в трехмерном пространстве с образованием антигенсвязывающей поверхности. Антигенсвязывающая поверхность комплементарна трехмерной поверхности связанного антигена, а три гипервариабельные области каждой из тяжелой и легкой цепей называются «областями, определяющими комплементарность», или «CDR». Распределение аминокислот по каждому домену осуществляется в соответствии с определениями Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987 and 1991), или Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987), Chothia et al. Nature 342:878-883 (1989).

Части фрагментов однодоменных антител (sdAb) слитых белков по настоящему изобретению и полипептиды направленного воздействия обозначаются в настоящем описании взаимозаменяемо.

Используемый в настоящем описании термин «эпитоп» включает любую детерминанту белка, способную специфично связываться вместе с/с помощью иммуноглобулина или его фрагмента или Т-клеточного рецептора. Термин «эпитоп» включает любую детерминанту белка, способную специфично связываться вместе с/с помощью иммуноглобулина или Т-клеточного рецептора. Эпитопные детерминанты обычно состоят из химически активных поверхностных группировок молекул, таких как аминокислоты или боковые цепи сахара, и обычно имеют специфические трехмерные структурные характеристики, а также специфические характеристики заряда. Говорят, что антитело специфично связывает антиген, когда константа диссоциации составляет ≤ 1 мкМ ; например, ≤ 100 нМ, предпочтительно ≤ 10 нМ и более предпочтительно ≤ 1 нМ.

Используемые в настоящем описании термины «иммунологическое связывание» и «иммунологические связывающие свойства» и «специфичное связывание» относятся к нековалентным взаимодействиям типа, который имеет место между молекулой иммуноглобулина и антигеном, к которому иммуноглобулин специфичен. Сила или аффинность взаимодействий иммунологического связывания могут быть выражены через константу диссоциации (Kd) взаимодействия, где меньшее Kd представляет более высокую аффинность. Свойства иммунологического связывания выбранных полипептидов могут быть количественно определены с использованием способов, хорошо известных в данной области. Один из таких способов предполагает измерение скоростей образования антигенсвязывающего сайта/антигенного комплекса и диссоциации, причем эти скорости зависят от концентраций сложных партнеров, аффинности взаимодействия и геометрических параметров, которые одинаково влияют на скорость в обоих направлениях. Таким образом, как «константа ассоциации» (kon), так и «константа диссоциации» (koff) могут быть определены путем расчета концентраций и фактических скоростей ассоциации и диссоциации. (См. Nature 361: 186-87 (1993)). Отношение koff/kon позволяет аннулировать все параметры, не связанные с аффинностью, и равно константе диссоциации Kd. (См., вообще, Davies et al. (1990) Annual Rev Biochem 59:439-473). Говорят, что антитело по настоящему изобретению специфично связывается с антигеном, когда равновесие константы связывания (Kd) составляет≤1 μМ, предпочтительно≤100 нМ, более предпочтительно≤10 нМ и наиболее предпочтительно≤100 пМ примерно до 1 пМ, согласно измерениям с помощью анализов, таких как анализы радиолигандного связывания, поверхностного плазмонного резонанса (SPR), анализа связывания проточной цитометрии или аналогичных анализов, известных специалистам в данной области техники.

Предпочтительно, положения остатков, которые не идентичны, отличаются консервативными аминокислотными заменами.

Консервативные аминокислотные замены относятся к взаимозаменяемости остатков, имеющих сходные боковые цепи. Например, группа аминокислот, имеющих алифатические боковые цепи, представляет собой глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин; группа аминокислот, имеющих алифатические-гидроксильные боковые цепи, представляет собой серин и треонин; группа аминокислот, имеющих амидосодержащие боковые цепи, представляет собой аспарагин и глутамин; группа аминокислот, имеющих ароматические боковые цепи, представляет собой фенилаланин, тирозин и триптофан; группа аминокислот, имеющих основные боковые цепи, представляет собой лизин, аргинин и гистидин; и группа аминокислот, имеющих серосодержащие боковые цепи, представляет собой цистеин и метионин. Подходящими консервативными аминокислотными заменами являются группы: валин-лейцин-изолейцин, фенилаланин-тирозин, лизин-аргинин, аланин-валин, глутаминовая кислота-аспарагиновая кислота и аспарагин-глутамин.

Как обсуждалось в настоящем описании, небольшие вариации в аминокислотных последовательностях антител или молекул иммуноглобулина рассматриваются как охваченные настоящим изобретением, при условии, что вариации в аминокислотной последовательности сохраняют по меньшей мере 75%, более предпочтительно по меньшей мере 80%, 90%, 95% и наиболее предпочтительно 99%. Конкретно, предполагаются консервативные аминокислотные замены. Консервативные замены - это те, которые имеют место внутри семейства аминокислот, которые являются родственными по их боковым цепям. Генетически кодированные аминокислоты обычно делятся на семейства: (1) кислотные аминокислоты представляют собой аспартат, глутамат; (2) основные аминокислоты представляют собой лизин, аргинин, гистидин; (3) неполярные аминокислоты представляют собой аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин, триптофан и (4) незаряженные полярные аминокислоты представляют собой глицин, аспарагин, глутамин, цистеин, серин, треонин, тирозин. Гидрофильные аминокислоты включают аргинин, аспарагин, аспартат, глутамин, глутамат, гистидин, лизин, серин и треонин. Гидрофобные аминокислоты включают аланин, цистеин, изолейцин, лейцин, метионин, фенилаланин, пролин, триптофан, тирозин и валин. Другие семейства аминокислот включают (i) серин и треонин, которые относятся к семейству алифатических гидроксил-содержащих аминокислот; (ii) аспарагин и глутамин, которые относятся к семейству амидосодержащих аминокислот; (iii) аланин, валин, лейцин и изолейцин, которые относятся к семейству алифатических аминокислот; и (iv) фенилаланин, триптофан и тирозин, которые относятся к семейству ароматических аминокислот. Например, резонно ожидать, что отдельная замена лейцина изолейцином или валином, аспартата глутаматом, треонина серином или аналогичная замена аминокислоты на структурно родственную аминокислоту не будет оказывать существенного влияния на связывание или свойства полученной молекулы, особенно если замена не включает аминокислоту внутри каркасного сайта. Приводит ли замена аминокислоты к получению функционального пептида, можно легко определить, анализируя специфическую активность производного полипептида. Анализы подробно описаны в настоящем описании. Фрагменты или аналоги антител или молекул иммуноглобулинов могут быть легко получены специалистами в данной области. Подходящие амино- и карбокси-концевые фрагменты или аналоги располагаются вблизи границ функциональных областей. Структурные и функциональные домены могут быть идентифицированы путем сравнения данных нуклеотидной и/или аминокислотной последовательности с общедоступными или частными базами последовательностей. Предпочтительно, компьютеризированные методы сравнения используются для идентификации последовательностей мотивов или предполагаемых конформационных доменов белка, которые встречаются в других белках известной структуры и/или функции. Методы идентификации белковых последовательностей, которые складываются в известную трехмерную структуру, известны. Bowie et al. Science 253:164 (1991). Таким образом, приведенные выше примеры демонстрируют, что специалисты в данной области могут распознавать последовательности мотивов и структурную конформацию, которые могут быть использованы для определения структурных и функциональных доменов согласно изобретению.

Предпочтительными аминокислотными заменами являются те, которые: (1) снижают восприимчивость к протеолизу, (2) снижают восприимчивость к окислению, (3) изменяют аффинность связывания для образования белковых комплексов, (4) изменяют аффинности связывания и (4) придают или модифицируют другие Физико-химические или функциональные свойства таких аналогов. Аналоги могут включать различные мутеины с последовательностью, отличной от природной пептидной последовательности. Например, одиночные или множественные замены аминокислот (предпочтительно консервативные аминокислотные замены) могут быть сделаны в природной последовательности (предпочтительно в части полипептида вне домена(ов), образующего межмолекулярные контакты). Консервативная аминокислотная замена не должна существенно изменять структурные характеристики родительской последовательности (например, аминокислотная замена не должна иметь тенденцию нарушать спираль, которая возникает в родительской последовательности, или нарушать другие типы вторичной структуры, которая отличает родительскую последовательность). Примеры известных в данной области вторичных и третичных структур полипептидов описаны в Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed., W. H. Freeman and Company, New York (1984)); Introduction to Protein Structure (C. Branden and J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N. Y. (1991)); and Thornton et al. Nature 354:105 (1991).

Используемый в настоящем описании термин «полипептидный фрагмент» относится к полипептиду, который имеет аминоконцевую и/или карбоксиконцевую делецию, но где оставшаяся аминокислотная последовательность идентична соответствующим положениям в природной последовательности, выведенной, например, из полноразмерной последовательности кДНК. Фрагменты обычно имеют длину, составляющую по меньшей мере 5, 6, 8 или 10 аминокислот, предпочтительно, по меньшей мере, 14 аминокислот, более предпочтительно по меньшей мере 20 аминокислот, обычно по меньшей мере 50 аминокислот и еще более предпочтительно по меньшей мере 70 аминокислот. Используемый в настоящем описании термин «аналог» относится к полипептидам, которые состоят из сегмента по меньшей мере из 25 аминокислот, который имеет существенную идентичность с частью выведенной аминокислотной последовательности и который обладает специфичным связыванием с GITR при подходящих условиях связывания. Как правило, полипептидные аналоги содержат консервативную аминокислотную замену (или вставку, или делецию) по отношению к природной последовательности. Аналоги, как правило, имеют длину, составляющую по меньшей мере 20 аминокислот, предпочтительно по меньшей мере 50 аминокислот или более, и часто могут быть иметь длину, соответствующую полноразмерному природному полипептиду.

Пептидные аналоги обычно используются в фармацевтической промышленности в качестве непептидных лекарственных средств со свойствами, аналогичными свойствам матричного пептида. Эти типы непептидного соединения называются «пептидные миметики» или «пептидомиметики». Fauchere, J. Adv. Drug Res. 15:29 (1986), Veber and Freidinger TINS p. 392 (1985); и Evans et al. J. Med. Chem. 30:1229 (1987). Такие соединения часто разрабатываются с помощью компьютерного молекулярного моделирования. Пептидные миметики, которые структурно подобны терапевтически полезным пептидам, могут быть использованы для получения эквивалентного терапевтического или профилактического эффекта. Как правило, пептидомиметики структурно сходны с эталонным полипептидом (т.е. полипептидом, который обладает биохимическим свойством или фармакологической активностью), таким как человеческое антитело, но имеют одну или более пептидных связей, необязательно замененных связываниями, выбранными из группы, состоящей из: - CH₂NH-, -CH₂S-, -CH₂-CH₂-, -CH =CH- (цис и транс), -COCH₂-, CH(OH)CH₂- и -CH₂SO-, способами, хорошо известными в данной области. Для получения более стабильных пептидов может быть использована систематическая замена одной или более аминокислот консенсусной последовательности на D-аминокислоту того же типа (например, D-лизин вместо L-лизина). Кроме того, ограниченные пептиды, содержащие консенсусную последовательность или, по существу, идентичную вариацию консенсусной последовательности, могут быть получены способами, известными в данной области (Rizo and Gierasch Ann. Rev. Biochem., 61: 387 (1992)); например, путем вставки внутренних остатков цистеина, способных к образованию внутримолекулярных дисульфидных мостиков, которые циклизуют пептид.

Термин «агент» используется в настоящем описании для обозначения химического соединения, смеси химических соединений, биологической макромолекулы и/или экстракта, полученного из биологических материалов.

Используемый в настоящем описании термин «метка» или «меченный» относится к включению детектируемого маркера, например, путем введения радиоактивно-меченной аминокислоты или присоединения к полипептиду биотинильных компонентов, которые может детектироваться помеченным авидином (например, стрептавидином, содержащим флуоресцентный маркер или ферментативную активность, которые могут быть детектированы оптическими или калориметрическими методами). В определенных ситуациях метка или маркер также могут быть терапевтическими. Различные методы мечения полипептидов и гликопротеинов известны в данной области и могут быть использованы. Примеры меток для полипептидов включают, но не ограничиваются следующими: радиоизотопы или радионуклиды (например, ³H, ¹⁴C, ¹⁵N, ³⁵S, ⁹⁰Y, ⁹⁹Tc, ¹¹¹In, ¹²⁵I, ¹³¹I), флуоресцентные метки (например, FITC, родамин, лантанидные люминофоры), ферментативные метки (например, пероксидаза хрена, β-галактозидаза, люцифераза, щелочная фосфатаза), хемилюминесцентные, биотинильные группы, определенные полипептидные эпитопы, распознаваемые вторичным репортером (например, парные последовательности «лейциновой застежки», сайты связывания для вторичных антител, домены связывания металлов, маркеры эпитопов). В некоторых вариантах осуществления, метки присоединяются с помощью спейсерных ножек различной длины для уменьшения потенциальных пространственных помех. Используемый в настоящем описании термин «фармацевтический агент или лекарственное средство» относится к химическому соединению или композиции, которые способны индуцировать целевой терапевтический эффект при должном введении пациенту.

Используемые в настоящем описании термины «лечить», «лечение» и т. п. относятся к уменьшению и/или ослаблению расстройства и/или симптомов, связанных с ним. С помощью термина «облегчать» и/или «облегчение» обозначают уменьшение, подавление, ослабление, сокращение, блокировку и/или стабилизацию развития или прогрессирования заболевания, такого как, например, злокачественное новообразование. Понятно, что, хотя это не исключено, лечение расстройства или состояния не требует полного устранения расстройства, состояния или симптомов, связанных с ним.

В настоящем изобретении термины «содержит», «содержащий», «имеющий» и тому подобное, могут иметь значение, приписываемое им в патентном праве США, и они могут означать «включает», «включающий» и т.п.; термины «по существу состоящий из» или «по существу состоит из» также имеют значение, указанное в патентном праве США, и эти термины являются открытыми, что допускает присутствие большего, чем то, что перечислено, при условии, что основные или новые характеристики того, что перечислено, не изменятся присутствием большего, чем перечислено, но исключает воплощения предшествующего уровня техники.

Под «эффективным количеством» подразумевается количество, необходимое для улучшения симптомов заболевания по сравнению с пациентом, не подвергнутым лечению. Эффективное количество активного соединения (соединений), используемое для осуществления настоящего изобретения, для терапевтического лечения заболевания варьируется в зависимости от способа введения, возраста, массы тела и общего состояния здоровья объекта. В конечном счете, лечащий врач или ветеринар определит подходящее количество и схему введения. Такое количество называют «эффективным» количеством.

Под «пациентом» подразумевается млекопитающее, включая, но не ограничиваясь этим, человека или млекопитающее, не являющееся человеком, такое как крупный рогатый скот, лошади, собачьи, грызуны, овцы, приматы, верблюдовые или кошачьи.

Используемый в настоящем описании термин «введение» относится к любому способу переноса, доставки, введения или транспортировки терапевтического агента пациенту, нуждающемуся в лечении таким агентом. Такие способы включают, но не ограничиваются ими, пероральное, местное, внутривенное, внутрибрюшинное, внутримышечное, внутрикожное, интраназальное и подкожное введение.

Под «фрагментом» подразумевается часть полипептида или молекулы нуклеиновой кислоты. Эта часть содержит, предпочтительно, по меньшей мере 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% или 90% всей длины эталонной молекулы нуклеиновой кислоты или полипептида. Фрагмент может содержать 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 нуклеотидов или аминокислот.

Понятно, что представленные в настоящем описании диапазоны подразумевают все значения в пределах диапазона. Например, под диапазоном от 1 до 50 понимают любое число, комбинацию чисел или субдиапазон, выбранные из группы, состоящей из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 или 50.

Если специально не указано или очевидно не следует из контекста, то используемые в настоящем описании формы единственного числа подразумевают как единственное число, так и множественное число. Если специально не указано или очевидно не следует из контекста, то используемый в настоящем описании термин «или» понимают как включающий.

Если специально не указано или не очевидно из контекста, то используемый в настоящем описании термин «примерно» понимают как диапазон нормального допуска в данной области техники, например, в пределах 2 стандартных отклонений от среднего значения. «Примерно» можно понять, как в пределах 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0. 5%, 0,1%, 0,05%, или 0,01%, заявленной величины. Если иное не ясно из контекста, то все числовые значения, представленные в настоящем описании, модифицируют термином «примерно».

Далее изобретение будет описано в следующих примерах, которые не ограничивают его объем, описанный в формуле изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Молекулы с направленным воздействием на GITR связываются с GITR

Как показано на Фигурах 2А, 2В и 2С, различные слитые белки с направленным воздействием на GITR по изобретению связываются с GITR, экспрессируемыми на клетках СНО согласно оценкам проточной цитометрии. В качестве контроля для этих исследований использовали антитело TRX-518 против GITR.

Аффинности связывания молекул с направленным воздействием на GTRR, обозначенных в настоящем описании как hzC06v1. 1 (SEQ ID NO: 42), hzC06v1.2 (SEQ ID NO: 43), hzC06v1.3 (SEQ ID NO: 44), hzC06v1.4 (SEQ ID NO: 45), hzC06v2.1 (SEQ ID NO: 46), hzC06v2.2 (SEQ ID NO: 47), hzC06v2.3 (SEQ ID NO: 48), hzC06v2.4 (SEQ ID NO: 49), hzC06v3 (SEQ ID NO: 50), hzC06v3.1 (SEQ ID NO: 51), hzC06v3.2 (SEQ ID NO: 52), hzC06v3.3 (SEQ ID NO: 53), hzC06v3.4 (SEQ ID NO: 54), hzC06v3,5 (SEQ ID NO: 55), hzC06v3.6 (SEQ ID NO: 56), hzC06v3.7 (SEQ ID NO: 57), hzC06v3.8 (SEQ ID NO: 58), hzC06v3.9 (SEQ ID NO: 59), hzC06v3.10 (SEQ ID NO: 60), hzC06v3.11 (SEQ ID NO: 61), hzC06v3.12 (SEQ ID NO: 62), hzC04v4.1 (SEQ ID NO: 63), hzC04v4.1.2 (SEQ ID NO: 64), hzC04v4.2 (SEQ ID NO: 65), hzC04v4.2.2 (SEQ ID NO: 66), hzC04v5 (SEQ ID NO: 67), hzC04v1.2.1 (SEQ ID NO: ID NO: 68), hzC04v5.1 (SEQ ID NO: 69), hzC04v5.2 (SEQ ID NO: 70), hzC04v5.3 (SEQ ID NO: 71), hzC04v5.4 (SEQ ID NO: 72), hzC04v5.5 (SEQ ID NO: 73), hzC04v5.6 (SEQ ID NO: 74), hzC04v5.7 (SEQ ID NO: 75), hzC04v5.8 (SEQ ID NO: 76), hzC04v5.9 (SEQ ID NO: 77), hzC04v5.10 (SEQ ID NO: 78), hzC04v5.11 (SEQ ID NO: 79) и hzC04v5.12 (SEQ ID NO: ID NO: 80) для человеческого GITR и GITR яванской макаки, экспрессируемых на поверхности клеток CHO, определяли проточной цитометрией. Результаты показаны на Фигурах 4А-4Е и 5А-5Е.

Пример 2. Молекулы с направленным воздействием на GITR блокируют взаимодействие между GITR и GITR-L

Как показано на Фигурах 3А, 3В и 3С, различные слитые белки с направленным воздействием на GITR по изобретению способны блокировать взаимодействие между GITRL и GITR. Вкратце, в этих исследованиях для оценки блокирующей способности использовали анализ проточной цитометрии с использованием GITR-экспрессирующих клеток CHO и рекомбинантного GITRL. В качестве контроля для этих исследований использовали антитело TRX-518 против GITR.

Пример 3. Аффинности связывания молекул с направленным воздействием на GITR для GITR человека и яванской макаки

Аффинность связывания молекулы с направленным воздействием на GITR, обозначенной здесь как двухвалентная hzC06v3. 9-hIgG1 или 2x hzC06v3. 9-IgG1 Fc (SEQ ID NO: 93), для слитого белка GITR человека и яванской макаки и внеклеточного домена человеческого IgG1 (GITR -Fc) определяли поверхностным плазмонным резонансом. Вкратце, биотинилированные GITR-Fc человека и яванской макаки захватывали на поверхности чипа, а затем вводили двухвалентный hzC06v3.9-hIgG1 в 10 концентрациях (0нМ - 600нМ) при 40 мкл/мин в течение 120 секунд. Диссоциацию проводили в течение 240 секунд. ka1, kd1 и KD1 приведены в таблице ниже.

GITR-Fc	ka1(1/Мс)	kd1(1/с)	KD1(нМ)
Cyno	1,22Е+05	1,06Е-02	87,1
Человеческий	6,40Е+05	4,12Е-03	6,4

Пример 4. Связывание молекул с направленным воздействием на GITR для первичных человеческих Т-клеток

В настоящем описании оценивали способность анти-GITR молекулы по изобретению, обозначенной в настоящем описании как четырехвалентный hzC06-hIgG1, связываться с первичными человеческими Т-клетками. Четырехвалентный hzC06-hIgG1 конструировали с двумя копиями GITR-связывающей молекулы SEQ ID NO: 93, которую, в свою очередь, конструировали с двумя тандемными копиями однодоменной вариабельной области (sdAb) SEQ ID NO: 59, слитой с Fc-доменом человеческого IgG1 SEQ ID NO: 1.

Суммарные PBMC или очищенные Treg, выделенные путем флуоресцентно-активированной сортировки клеток, получали от здоровых доноров. Клетки активировали in vitro с использованием антител против CD3 и антител против CD28 с добавлением рекомбинантного IL2 человека. Клетки инкубировали с различными концентрациями четырехвалентного hzC06-hIgG1 и коктейлем антител поверхностного фенотипирования. Образцы затем промывали и окрашивали флуоресцентно меченным вторичным антителом против hIgG, а затем оценивали с помощью проточной цитометрии. Активированные CD4 Т-клетки идентифицировали окрашиванием CD3, CD4 и CD25. Результаты этих исследований показаны на Фигуре 7 для активированных CD4 Т-клеток от трех доноров (закрашенные символы, сплошные линии) и для активированных Treg от двух доноров (незакрашенные символы, пунктирные линии).

Пример 5. Молекулы с направленным воздействием на GITR активируют сигнализацию NF-kB

Четырехвалентные анти-GITR молекулы направленного воздействия активировали сигнализацию NF-kB в репортерных клеточных линиях, экспрессирующих GITR. В описанных здесь исследованиях использовали две четырехвалентные молекулы с направленным воздействием на GITR по изобретению. Первая четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR включает две копии GITR-связывающего слитого белка, обозначенные в настоящем описании как 2x hzC06v3.9 IgG1-Fc (SEQ ID NO: 93), которые, в свою очередь, включают две копии hzC06v3.9 GITR-BD (SEQ ID NO: 59) и полипептид IgG1 Fc SEQ ID NO: 1. Вторая четырехвалентная молекула с направленным воздействием на GITR включает две копии GITR-связывающего слитого белка, обозначенные в настоящем описании как 2x C06 IgG1-Fc, которые, в свою очередь, включают две копии C06 GITR-BD (SEQ ID NO: 22) и полипептид IgG1 Fc SEQ ID NO: 1.

Клеточные линии HEK293, содержащие репортерный ген секретируемой щелочной фосфатазы (SEAP) под регуляцией NF-kB, стабильно трансфецировали человеческим GITR (Фигура 8A) или GITR яванской макаки (Фигура 8B). Клеточные линии инкубировали с оттитрованными дозами четырехвалентных антител против GITR в течение ночи при 37 °C. Экспрессию репортерного гена SEAP определяли путем гидролиза субстрата, который измеряли по оптической плотности при 650 нм.

Пример 6. Молекулы с направленным воздействием на GITR в опухолевых моделях

Как показано на Фигурах 9А-9С, обработка молекулой с направленным воздействием на GITR значительно снижала рост опухоли CT26 независимо от дня введения. Мышей BALB/c инокулировали подкожно клетками колоректальной карциномы CT26 и вводили четырехвалентный C06-hIgG1, который включает две копии GITR-связывающего слитого белка, обозначенного здесь как 2x C06-IgG1 Fc, который, в свою очередь, включает две копии GITR-BD SEQ ID NO: 22 и полипептидную последовательность IgG1 Fc человека SEQ ID NO: 1) или IgG1-Fc человека в качестве контроля в день 7 (Фигура 9A), день 9 (Фигура 9B) или день 11 (Фигура 9C), при этом средние объемы опухолей составили 125, 230 или 310 мм³. Обработка четырехвалентным C06-IgG1 Fc приводила к значительному уменьшению роста опухоли по сравнению с Fc человека в течение 6-8 дней после введения независимо от дня обработки (p<0,05, определяли с помощью двухстороннего непарного t-теста).

Как показано на Фигуре 10, обработка молекулой с направленным воздействием на GITR, приводила к дозозависимому подавлении роста опухоли CT26. Мышей BALB/c инокулировали подкожно клетками колоректальной карциномы CT26 и вводили четырехвалентный C06-mIgG2a, который включает две копии GITR-связывающего слитого белка, обозначенные здесь как 2x C06-mIgG1 2a Fc, который, в свою очередь, включает две копии GITR-BD SEQ ID NO: 22 и последовательность IgG2a мыши или неспецифический mIgG2a в качестве контроля в день 9 (приблизительный объем опухоли 260 мм³). Обработка четырехвалентным C06-mIgG2a приводила к значительному уменьшению объема опухоли по сравнению с контролем при введении при 2,5, 0,25, 0,08 или 0,025 мг/кг (p<0,05). Четырехвалентный C06-mIgG2a с дозировкой 0,008 мг/кг не подавлял рост опухоли CT26 в значительной степени. Статистическую значимость определяли с помощью однонаправленного ANOVA с множественным сравнением групп четырехвалентного C06-mIgG2a с mIgG2a.

Как показано на Фигуре 11А-11В, обработка молекулой с направленным воздействием на GITR приводила к дозозависимому подавлению роста опухоли MC38. Мышей C57BL/6 инокулировали подкожно клетками колоректальной карциномы MC38 и вводили четырехвалентный C06-mIgG2a или неспецифический mIgG2a в качестве контроля в день 7 (средний объем опухоли 110-115 мм³). Введение четырехвалентного C06-mIgG2a в дозах 0,08 или выше приводило к значительному уменьшению роста опухоли по сравнению с контролем mIgG2a, начиная с 14-го дня (p<0,05) (Фигура 11A). Обработка четырехвалентным C06-mIgG2a при 0,025 значительно уменьшала рост опухоли по сравнению с контролем mIgG2a, начиная с 18-го дня (p<0,05). Четырехвалентный C06-mIgG2a с дозировкой 0,008 мг/кг не подавлял рост опухоли MC38 в значительной мере. Статистическую значимость определяли с помощью однонаправленного ANOVA с множественным сравнением групп C06 с IgG2a. Индивидуальные объемы опухоли на 20-й день после инокуляции МС38 показаны на Фигуре 11В. Аналогичное снижение роста опухолей происходит в этот момент времени в группах обработки 2,5, 0,25 и 0,08 мг/кг.

Пример 7. Влияние функции Fc на ингибирование роста опухоли CT26

Мышей BALB/c инокулировали подкожно клетками колоректальной карциномы CT26 и вводили четырехвалентный C06-mIgG2a либо с Fc дикого типа, либо с мутацией N297G, чтобы блокировать связывание с Fc-рецепторами (mIgG2a-silent) на 9-й день (средний объем опухоли 260 мм³). В качестве контролей использовались неспецифические mIgG2a, анти-GITR mAb1-mIgG2a и анти-GITR-контроль mAb1-mIgG2a-silent. Как показано на Фигуре 12А, хотя четырехвалентный C06 был наиболее эффективным с Fc дикого типа, при этом оба формата, как дикого типа, так и формат silent значительно уменьшали рост опухоли по сравнению с контролем (p<0,05). mAb1 ингибировал рост CT26 при введении в формате Fc дикого типа. Статистическую значимость определяли с помощью однонаправленного ANOVA с множественным сравнением групп обработки с mIgG2a. Индивидуальные объемы опухолей в день 22 после инокуляции CT26 показаны на Фигуре 12B. Разница в опухолевом росте между Fc дикого типа и форматом silent четырехвалентного C06 незначительна, тогда как формат имел значение для способности mAb1 подавлять рост опухоли. Анализ Каплана-Мейера показал, что обработки четырехвалентным C06 с Fc дикого типа может значительно повысить выживаемость мышей, несущих CT26 (Фигура 12C). Однократное введение четырехвалентного C06-mIgG2a на 10-й день увеличивало медианную выживаемость до 66 дней по сравнению с 20 днями для контрольной группы mIgG2a.

Пример 8. Обработка молекулами с направленным воздействием на GITR приводит к устойчивости к повторной антигенной стимуляции

Мыши, получившие четырехвалентный C20-mIgG2a, который индуцировал отторжение CT26, были устойчивы к повторной антигенной стимуляции. Мышей BALB/c, которые отторгали опухоли CT26 при обработке четырехвалентным C06-mIgG2a, повторно заражали опухолевыми клеточными линиями CT26, Renca или EMT6. Как показано на Фигуре 13А, мыши, которые ранее отторгали CT26, были полностью устойчивы к росту опухоли при последующей повторной инокуляции этой модели. Важно отметить, что наивные мыши того же возраста продемонстрировали рост опухоли CT26. Как показано на Фигуре 13B, опухоли Renca плохо развивались у мышей, которые ранее отторгли CT26. Действительно, две из четырех мышей были полностью устойчивыми, а одна мышь имела заметное снижение роста Renca по сравнению с ранее не обработанными контролями того же возраста. Renca имеет общие с CT26 Т-клеточные эпитопы, что предполагает индукцию иммунитета, опосредованного Т-клетками. Как показано на Фигуре 13C, опухоли EMT6 хорошо растут у мышей BALB/c независимо от того, имела ли место ранее элиминация CT26 при обработке C06 или они ранее не подвергались обработке. EMT6 не имеет общих с CT26 Т-клеточных эпитопов.

Пример 9. Влияние обработки с помощью молекул с направленным воздействием на GITR на Т-клетки

Обработка значительно уменьшала частоту встречаемости Treg и меняла их соотношение с эффекторными Т-клеткам в микроокружении опухоли. Мышей BALB/c инокулировали подкожно клетками колоректальной карциномы CT26 и вводили четырехвалентный C06-mIgG2a 2,5 мг/кг с Fc дикого типа или с мутацией N297G, чтобы блокировать связывание с Fc-рецепторами (mIgG2a-silent) на 9-й день. В качестве контроля использовали неспецифический mIgG2a. Периферическую кровь и опухоли собирали и анализировали с помощью проточной цитометрии через 3 дня после обработки. Как показано на Фигуре 14А, обработка четырехвалентным C06-mIgG2a значительно уменьшала частоту циркулирующих Treg, обычных CD4 T-клеток (4Tcon) и CD8 T-клеток (8T) (p<0,05). Не наблюдали никакого эффекта с форматом mIgG2a-silent. Как показано на Фигуре 14B, обработка четырехвалентом C06-mIgG2a значительно уменьшала частоту внутриопухолевых Treg и обычных CD4 T-клеток (p<0,001), но CD8 T-клетки не изменялись. Никакого эффекта не наблюдали в формате mIgG2a-silent. Как показано на Фигуре 14С, вследствие сильного уменьшения Treg с помощью четырехвалентного C06-mIgG2a, соотношение эффекторных Т-клеток и Treg было значительно увеличено в опухоли (p<0,05). Статистическую значимость определяли с помощью двухстороннего непарного t-теста.

Пример 10. Влияние молекул с направленным воздействием на GITR на активацию и пролиферацию Т-клеток

Обработка значительно индуцировало активацию и пролиферацию CD8 Т-клеток. Мышей BALB/c инокулировали подкожно клетками колоректальной карциномы CT26 и вводили четырехвалентный C06-mIgG2a 2,5 мг/кг с Fc дикого типа или с мутацией N297G дикого типа, чтобы блокировать связывание с Fc-рецепторами (mIgG2a-silent) на 9-й день. В качестве контроля использовали неспецифический mIgG2a. Периферическую кровь анализировали с помощью проточной цитометрии через 12 дней после обработки. Как показано на Фигуре 15А, обработка четырехвалентным C06-mIgG2a значительно индуцировала частоту встречаемости циркулирующих CD8 Т-клеток (p<0,005), но Treg и обычные CD4 Т-клетки не изменялись. Этот эффект не наблюдали в формате mIgG2a-silent. Как показано на Фигуре 15В, CD8 Т-клетки также адаптировали активированный пролиферирующий фенотип (CD62L^-Ki67⁺) после обработки четырехвалентным C06-mIgG2a. Статистическую значимость определяли с помощью двухстороннего непарного t-теста.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> INHIBRX LP

Timmer, John C.

Jones, Kyle S.

Razai, Amir S.

Hussain, Abrahim

Willis, Katelyn M.

Deveraux, Quinn

Eckelman, Brendan P.

<120> ПОЛИВАЛЕНТНЫЕ И ПОЛИСПЕЦИФИЧНЫЕ GITR-СВЯЗЫВАЮЩИЕ СЛИТЫЕ БЕЛКИ

<130> INHI-022/001WO

<150> US 62/195,822

<151> 2015-07-23

<160> 150

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 218

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 1

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

1 5 10 15

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

20 25 30

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

35 40 45

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

50 55 60

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

65 70 75 80

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

85 90 95

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

100 105 110

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

115 120 125

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

130 135 140

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

145 150 155 160

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

165 170 175

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

180 185 190

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

195 200 205

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

210 215

<210> 2

<211> 215

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 2

Pro Ala Pro Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

1 5 10 15

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

20 25 30

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

35 40 45

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

50 55 60

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

65 70 75 80

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

85 90 95

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

100 105 110

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys

115 120 125

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

130 135 140

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

145 150 155 160

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

165 170 175

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

180 185 190

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

195 200 205

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

210 215

<210> 3

<211> 217

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 3

Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

1 5 10 15

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

20 25 30

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr

35 40 45

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

50 55 60

Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His

65 70 75 80

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

85 90 95

Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln

100 105 110

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

115 120 125

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

130 135 140

Ser Asp Ile Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

145 150 155 160

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

165 170 175

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

180 185 190

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

195 200 205

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

210 215

<210> 4

<211> 218

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 4

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

1 5 10 15

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

20 25 30

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp

35 40 45

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

50 55 60

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

65 70 75 80

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

85 90 95

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly

100 105 110

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

115 120 125

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

130 135 140

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn

145 150 155 160

Asn Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

165 170 175

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

180 185 190

Ile Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr

195 200 205

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

210 215

<210> 5

<211> 218

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 5

Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

1 5 10 15

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

20 25 30

Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp

35 40 45

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

50 55 60

Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

65 70 75 80

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

85 90 95

Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

100 105 110

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu

115 120 125

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

130 135 140

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

145 150 155 160

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

165 170 175

Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn

180 185 190

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

195 200 205

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

210 215

<210> 6

<211> 218

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 6

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

1 5 10 15

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

20 25 30

Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp

35 40 45

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

50 55 60

Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

65 70 75 80

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

85 90 95

Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

100 105 110

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu

115 120 125

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

130 135 140

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

145 150 155 160

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

165 170 175

Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn

180 185 190

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

195 200 205

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

210 215

<210> 7

<211> 14

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 7

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

1 5 10

<210> 8

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 8

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

1 5

<210> 9

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 9

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys

1 5 10

<210> 10

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 10

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10

<210> 11

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 11

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Glu Pro Gly Gly

1 5 10

<210> 12

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 12

Gly Gly Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 13

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 13

Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 14

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 14

Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 15

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 15

Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 16

<211> 4

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 16

Gly Gly Gly Gly

1

<210> 17

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 17

Gly Gly Gly Gly Gly

1 5

<210> 18

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 18

Gly Gly Gly Gly Gly Gly

1 5

<210> 19

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<220>

<221> особые признаки

<222> (10)..(10)

<223> Xaa может представлять собой любую природную аминокислоту

<400> 19

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Xaa Leu Val Gln Ser Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Leu Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Met Ser Ser Gly Ser Pro Lys Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Gly Ser Ala Arg Gly Thr Val Tyr Leu Gln

65 70 75 80

Met Asp Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr Ala

85 90 95

Asp Val Ala Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala Ser Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 20

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 20

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Arg Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ala Gly Ser Thr Phe Ser Val Asn

20 25 30

Ser Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Ala Phe Thr Gly Gly Ser Thr Met Asn Tyr Ala Ser Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Gly Asn Ala Ala His Thr Val Leu Leu

65 70 75 80

Gln Met Thr Asn Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Ala Glu Val Asn Glu Gly Trp Asn Ala Asp Tyr His Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 21

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 21

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ile Asn

20 25 30

His Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Met Val

35 40 45

Ala His Ile Thr Gly Gly Ala Ser Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Leu Asn Thr Val Ser Leu

65 70 75 80

Arg Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Ala Glu Val Asn Glu Gly Trp Asn Ala Asp Tyr Tyr Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 22

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 22

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Leu Ala Pro Gly Gln Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Leu Asn Gly Ile Ser Ser Ala Lys Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gly Asp Ser Ala Lys Asn Ala Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asp Gly Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 23

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 23

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Asn Ile Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Gln Ile Pro Gly Gly Pro Thr Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr

50 55 60

Val Ser Gly Asn Ser Ala Lys Asn Thr Gly Tyr Leu Gln Met Asn Thr

65 70 75 80

Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ile Val Ala Ser

85 90 95

Thr Ser Trp Gly Ser Pro Ser Lys Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln

100 105 110

Ala Thr Val Ser Ser

115

<210> 24

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 24

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Asn Glu Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Ser Ala Pro Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

115 120

<210> 25

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 25

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Leu Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Ile Asp Gly Val Ser Pro Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Ile Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln

65 70 75 80

Met His Ser Pro Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala

85 90 95

Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Pro Ala Asp His Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

115

<210> 26

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 26

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Asn Glu Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Leu Ile Thr Gly Gly His Thr Thr Thr Tyr Gly Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Ser Ala Pro Asn Thr Val His Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Ala Ala Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

115 120

<210> 27

<211> 118

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 27

Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu Ser Leu

1 5 10 15

Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp Ser Val

20 25 30

Ser Trp Phe Arg Gln Gly Pro Gly Asn Glu Arg Glu Leu Val Ala Leu

35 40 45

Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg

50 55 60

Phe Thr Ile Ser Arg Ala Asn Ala Pro Asn Thr Val His Leu Arg Met

65 70 75 80

Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala Ala

85 90 95

Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Gln Val Thr Val Ser

115

<210> 28

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 28

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ile Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Arg Pro Gly Asn Glu Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Thr Tyr Ser Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Ser Ala Leu Asn Thr Val His Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Ala Ala Leu Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala Ser Ala Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

115 120

<210> 29

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 29

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ile Asn

20 25 30

His Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Met Val

35 40 45

Ala His Ile Thr Gly Gly Ala Ser Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Leu Asn Thr Val Ser Leu

65 70 75 80

Arg Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Ala Glu Val Asn Glu Gly Trp Asn Ala Asp Tyr Tyr Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

115 120

<210> 30

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 30

Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Thr Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Ser Ile Ala Ser Ile Asn

20 25 30

Val Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Asn Gln His Glu Leu Val

35 40 45

Ala Ala Ile Thr Ser Gly Gly Ser Pro Asn Tyr Ala Gly Ser Val Arg

50 55 60

Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Asp Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Gly Glu Leu Arg Asp Asp Ser Asn Gly Tyr Leu His Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

115

<210> 31

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 31

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Thr Pro Gly Asn Glu Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala His Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Ser Ala Pro Asn Thr Val His Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Ala Ala Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

115 120

<210> 32

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 32

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Asp Met Gly Trp Tyr Arg Leu Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val His Ser Gly Ser Ser Thr Asn Tyr Gly Asp Ser Val Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Gly Asp Ser Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln

65 70 75 80

Met His Arg Leu Glu Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr Ala

85 90 95

Ala Ile Ser Ser Gly Trp Gly Arg Asp Ala Glu Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

115

<210> 33

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 33

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Gly Pro Gly Asn Glu Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Asn Ala Pro Asn Thr Val His Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Ala Ala Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Ser Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

115 120

<210> 34

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 34

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Gly Pro Gly Asn Glu Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Asn Ala Pro Asn Thr Val His Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Glu Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Ala Ala Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

115 120

<210> 35

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 35

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Asn Glu Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Ser Ala Pro Asn Thr Val His Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

115 120

<210> 36

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 36

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ser Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro

115 120

<210> 37

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 37

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Cys Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro

115 120

<210> 38

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 38

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro

115 120

<210> 39

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 39

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro

115 120

<210> 40

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 40

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro

115 120

<210> 41

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 41

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro

115 120

<210> 42

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 42

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ser Ala Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Thr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 43

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 43

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ser Ala Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Thr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 44

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 44

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ser Ala Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Thr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 45

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 45

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ser Ala Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Thr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 46

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 46

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Thr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 47

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 47

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Thr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 48

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 48

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Thr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 49

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 49

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Thr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 50

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 50

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Lys Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 51

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 51

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Leu Ala Pro Gly Gln Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Lys Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 52

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 52

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Lys Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gly Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 53

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 53

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Lys Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ala Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asp Gly Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 54

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 54

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Lys Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 55

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 55

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Lys Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Ser Ala Pro Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 56

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 56

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Lys Tyr Ala Glu Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Ser Ala Pro Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 57

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 57

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Lys Tyr Ala Ala Ser Ala Pro

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ala Val Lys Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 58

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 58

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Lys Tyr Ala Ala Ser Ala Pro

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ala Val Glu Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 59

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 59

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Lys Tyr Ala Ala Ser Ala Pro

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 60

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 60

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Lys Tyr Ala Asp Ala Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Ser Ala Pro Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 61

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 61

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Lys Tyr Ala Asp Ala Val Glu

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Ser Ala Pro Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 62

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 62

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Lys Tyr Ala Ala Ser Ala Pro

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Ser Ala Pro Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

115

<210> 63

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 63

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Gly Met Asp Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Asn Gly Gly Ser Trp Thr Ser Tyr Ala Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Trp Cys

85 90 95

Gln Asn Arg Val Thr Arg Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

<210> 64

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 64

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Gly Met Asp Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Asn Gly Gly Ser Trp Thr Ser Tyr Ala Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Gln Asn Arg Val Thr Arg Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

<210> 65

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 65

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Gly Met Asp Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Gln Gly Gly Ser Trp Thr Ser Tyr Ala Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Gln Asn Arg Val Thr Arg Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

<210> 66

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 66

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Gly Met Asp Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Asn Gly Gly Ser Trp Thr Ser Tyr Ala Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Trp Cys

85 90 95

Gln Asn Arg Val Thr Arg Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

<210> 67

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 67

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Gly Met Asp Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Asn Gly Gly Ser Trp Thr Ser Tyr Ala Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Gln Asn Arg Val Thr Arg Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

<210> 68

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 68

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Gly Met Asp Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Gln Ser Gly Gly Ser Trp Thr Ser Tyr Ala Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Trp Cys

85 90 95

Gln Asn Arg Val Thr Arg Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

<210> 69

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 69

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Gly Met Asp Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Gln Ser Gly Gly Ser Trp Thr Ser Tyr Ala Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Glu Met Asn Asn Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Trp Cys

85 90 95

Gln Asn Arg Val Thr Arg Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

<210> 70

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 70

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Gly Met Asp Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Gln Ser Gly Gly Ser Trp Thr Ser Tyr Ala Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Trp Cys

85 90 95

Gln Asn Arg Val Thr Arg Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

<210> 71

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 71

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Gly Met Asp Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Gln Ser Gly Gly Ser Trp Thr Ser Tyr Ala Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Glu Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Trp Cys

85 90 95

Gln Asn Arg Val Thr Arg Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

<210> 72

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 72

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Gly Met Asp Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Gln Ser Gly Gly Ser Trp Thr Ser Tyr Ala Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Trp Cys

85 90 95

Gln Asn Arg Val Thr Arg Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

<210> 73

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 73

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Gly Met Asp Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Gln Ser Gly Gly Ser Trp Thr Ser Tyr Ala Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Gln Gln Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Trp Cys

85 90 95

Gln Asn Arg Val Thr Arg Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

<210> 74

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 74

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Gly Met Asp Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Gln Ser Gly Gly Ser Trp Thr Ser Tyr Ala Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Gln Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Trp Cys

85 90 95

Gln Asn Arg Val Thr Arg Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

<210> 75

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 75

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Gly Met Asp Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Gln Ser Gly Gly Ser Trp Thr Ser Tyr Ala Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asp Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Trp Cys

85 90 95

Gln Asn Arg Val Thr Arg Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

<210> 76

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 76

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Gly Met Asp Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Gln Ser Gly Gly Ser Trp Thr Ser Tyr Ala Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Asp Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Trp Cys

85 90 95

Gln Asn Arg Val Thr Arg Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

<210> 77

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 77

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Gly Met Asp Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Gln Ser Gly Gly Ser Trp Thr Ser Tyr Ala Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asp Asp Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Trp Cys

85 90 95

Gln Asn Arg Val Thr Arg Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

<210> 78

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 78

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Gly Met Asp Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Gln Ser Gly Gly Ser Trp Thr Ser Tyr Ala Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Gln Asp Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Trp Cys

85 90 95

Gln Asn Arg Val Thr Arg Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

<210> 79

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 79

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Gly Met Asp Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Gln Ser Gly Gly Ser Trp Thr Ser Tyr Ala Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Gln Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Trp Cys

85 90 95

Gln Asn Arg Val Thr Arg Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

<210> 80

<211> 110

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 80

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr His

20 25 30

Gly Met Asp Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Gln Ser Gly Gly Ser Trp Thr Ser Tyr Ala Ser Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Trp Cys

85 90 95

Gln Asn Arg Val Thr Arg Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

<210> 81

<211> 494

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 81

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Ser Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Ser Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys

260 265 270

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Gly Gly Pro Ser Val Phe

275 280 285

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

290 295 300

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

305 310 315 320

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

325 330 335

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

340 345 350

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

355 360 365

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

370 375 380

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

385 390 395 400

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

405 410 415

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

420 425 430

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

435 440 445

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

450 455 460

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

465 470 475 480

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

485 490

<210> 82

<211> 494

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 82

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Cys Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Cys Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys

260 265 270

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Gly Gly Pro Ser Val Phe

275 280 285

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

290 295 300

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

305 310 315 320

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

325 330 335

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

340 345 350

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

355 360 365

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

370 375 380

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

385 390 395 400

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

405 410 415

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

420 425 430

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

435 440 445

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

450 455 460

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

465 470 475 480

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

485 490

<210> 83

<211> 497

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 83

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Ser Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Ser Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys

260 265 270

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

275 280 285

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

290 295 300

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

305 310 315 320

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

325 330 335

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

340 345 350

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

355 360 365

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

370 375 380

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

385 390 395 400

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

405 410 415

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

420 425 430

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

435 440 445

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

450 455 460

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

465 470 475 480

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

485 490 495

Lys

<210> 84

<211> 497

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 84

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Cys Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Cys Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys

260 265 270

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

275 280 285

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

290 295 300

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

305 310 315 320

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

325 330 335

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

340 345 350

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

355 360 365

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

370 375 380

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

385 390 395 400

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

405 410 415

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

420 425 430

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

435 440 445

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

450 455 460

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

465 470 475 480

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

485 490 495

Lys

<210> 85

<211> 494

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 85

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys

260 265 270

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Gly Gly Pro Ser Val Phe

275 280 285

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

290 295 300

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

305 310 315 320

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

325 330 335

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

340 345 350

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

355 360 365

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

370 375 380

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

385 390 395 400

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

405 410 415

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

420 425 430

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

435 440 445

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

450 455 460

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

465 470 475 480

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

485 490

<210> 86

<211> 494

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 86

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys

260 265 270

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Gly Gly Pro Ser Val Phe

275 280 285

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

290 295 300

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

305 310 315 320

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

325 330 335

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

340 345 350

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

355 360 365

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

370 375 380

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

385 390 395 400

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

405 410 415

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

420 425 430

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

435 440 445

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

450 455 460

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

465 470 475 480

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

485 490

<210> 87

<211> 497

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 87

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys

260 265 270

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

275 280 285

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

290 295 300

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

305 310 315 320

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

325 330 335

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

340 345 350

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

355 360 365

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

370 375 380

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

385 390 395 400

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

405 410 415

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

420 425 430

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

435 440 445

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

450 455 460

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

465 470 475 480

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

485 490 495

Lys

<210> 88

<211> 497

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 88

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys

260 265 270

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

275 280 285

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

290 295 300

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

305 310 315 320

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

325 330 335

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

340 345 350

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

355 360 365

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

370 375 380

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

385 390 395 400

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

405 410 415

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

420 425 430

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

435 440 445

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

450 455 460

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

465 470 475 480

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

485 490 495

Lys

<210> 89

<211> 494

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 89

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys

260 265 270

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Gly Gly Pro Ser Val Phe

275 280 285

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

290 295 300

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

305 310 315 320

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

325 330 335

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

340 345 350

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

355 360 365

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

370 375 380

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

385 390 395 400

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

405 410 415

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

420 425 430

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

435 440 445

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

450 455 460

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

465 470 475 480

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

485 490

<210> 90

<211> 494

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 90

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys

260 265 270

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Gly Gly Pro Ser Val Phe

275 280 285

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

290 295 300

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

305 310 315 320

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

325 330 335

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

340 345 350

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

355 360 365

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

370 375 380

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

385 390 395 400

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

405 410 415

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

420 425 430

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

435 440 445

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

450 455 460

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

465 470 475 480

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

485 490

<210> 91

<211> 497

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 91

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys

260 265 270

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

275 280 285

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

290 295 300

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

305 310 315 320

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

325 330 335

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

340 345 350

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

355 360 365

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

370 375 380

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

385 390 395 400

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

405 410 415

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

420 425 430

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

435 440 445

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

450 455 460

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

465 470 475 480

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

485 490 495

Lys

<210> 92

<211> 497

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 92

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys

260 265 270

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

275 280 285

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

290 295 300

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

305 310 315 320

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

325 330 335

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

340 345 350

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

355 360 365

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

370 375 380

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

385 390 395 400

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

405 410 415

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

420 425 430

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

435 440 445

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

450 455 460

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

465 470 475 480

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

485 490 495

Lys

<210> 93

<211> 479

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 93

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Val Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Lys Tyr Ala Ala Ser Ala Pro

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly Ser Glu

115 120 125

Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly Ser

130 135 140

Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp Ala

145 150 155 160

Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala

165 170 175

Val Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Lys Tyr Ala Ala Ser Ala Pro Gly

180 185 190

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln

195 200 205

Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr Ala

210 215 220

Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp Gly Gln

225 230 235 240

Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr His

245 250 255

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

260 265 270

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

275 280 285

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

290 295 300

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

305 310 315 320

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

325 330 335

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

340 345 350

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

355 360 365

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

370 375 380

Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

385 390 395 400

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

405 410 415

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

420 425 430

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

435 440 445

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

450 455 460

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

465 470 475

<210> 94

<211> 621

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 94

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Ser Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Ser Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly Ser

260 265 270

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

275 280 285

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

290 295 300

Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

305 310 315 320

Ser Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

325 330 335

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

340 345 350

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

355 360 365

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

370 375 380

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr

385 390 395 400

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

405 410 415

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

420 425 430

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

435 440 445

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

450 455 460

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

465 470 475 480

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

485 490 495

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

500 505 510

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

515 520 525

Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

530 535 540

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

545 550 555 560

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

565 570 575

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

580 585 590

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

595 600 605

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610 615 620

<210> 95

<211> 621

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 95

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Cys Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Cys Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly Ser

260 265 270

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

275 280 285

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

290 295 300

Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

305 310 315 320

Cys Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

325 330 335

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

340 345 350

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

355 360 365

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

370 375 380

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr

385 390 395 400

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

405 410 415

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

420 425 430

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

435 440 445

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

450 455 460

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

465 470 475 480

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

485 490 495

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

500 505 510

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

515 520 525

Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

530 535 540

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

545 550 555 560

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

565 570 575

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

580 585 590

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

595 600 605

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610 615 620

<210> 96

<211> 624

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 96

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Ser Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Ser Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly Ser

260 265 270

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

275 280 285

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

290 295 300

Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

305 310 315 320

Ser Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

325 330 335

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

340 345 350

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

355 360 365

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

370 375 380

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr

385 390 395 400

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

405 410 415

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

420 425 430

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

435 440 445

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

450 455 460

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

465 470 475 480

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

485 490 495

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

500 505 510

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

515 520 525

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

530 535 540

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

545 550 555 560

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

565 570 575

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

580 585 590

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

595 600 605

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610 615 620

<210> 97

<211> 624

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 97

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Cys Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Cys Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly Ser

260 265 270

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

275 280 285

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

290 295 300

Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

305 310 315 320

Cys Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

325 330 335

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

340 345 350

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

355 360 365

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

370 375 380

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr

385 390 395 400

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

405 410 415

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

420 425 430

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

435 440 445

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

450 455 460

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

465 470 475 480

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

485 490 495

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

500 505 510

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

515 520 525

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

530 535 540

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

545 550 555 560

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

565 570 575

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

580 585 590

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

595 600 605

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610 615 620

<210> 98

<211> 621

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 98

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly Ser

260 265 270

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

275 280 285

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

290 295 300

Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

305 310 315 320

Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

325 330 335

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

340 345 350

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

355 360 365

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

370 375 380

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr

385 390 395 400

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

405 410 415

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

420 425 430

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

435 440 445

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

450 455 460

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

465 470 475 480

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

485 490 495

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

500 505 510

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

515 520 525

Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

530 535 540

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

545 550 555 560

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

565 570 575

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

580 585 590

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

595 600 605

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610 615 620

<210> 99

<211> 621

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 99

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly Ser

260 265 270

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

275 280 285

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

290 295 300

Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

305 310 315 320

Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

325 330 335

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

340 345 350

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

355 360 365

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

370 375 380

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr

385 390 395 400

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

405 410 415

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

420 425 430

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

435 440 445

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

450 455 460

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

465 470 475 480

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

485 490 495

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

500 505 510

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

515 520 525

Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

530 535 540

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

545 550 555 560

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

565 570 575

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

580 585 590

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

595 600 605

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610 615 620

<210> 100

<211> 624

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 100

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly Ser

260 265 270

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

275 280 285

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

290 295 300

Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

305 310 315 320

Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

325 330 335

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

340 345 350

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

355 360 365

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

370 375 380

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr

385 390 395 400

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

405 410 415

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

420 425 430

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

435 440 445

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

450 455 460

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

465 470 475 480

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

485 490 495

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

500 505 510

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

515 520 525

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

530 535 540

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

545 550 555 560

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

565 570 575

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

580 585 590

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

595 600 605

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610 615 620

<210> 101

<211> 624

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 101

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly Ser

260 265 270

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

275 280 285

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

290 295 300

Ser Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

305 310 315 320

Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

325 330 335

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

340 345 350

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

355 360 365

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

370 375 380

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr

385 390 395 400

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

405 410 415

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

420 425 430

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

435 440 445

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

450 455 460

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

465 470 475 480

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

485 490 495

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

500 505 510

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

515 520 525

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

530 535 540

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

545 550 555 560

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

565 570 575

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

580 585 590

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

595 600 605

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610 615 620

<210> 102

<211> 621

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 102

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly Ser

260 265 270

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

275 280 285

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

290 295 300

Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

305 310 315 320

Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

325 330 335

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

340 345 350

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

355 360 365

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

370 375 380

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr

385 390 395 400

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

405 410 415

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

420 425 430

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

435 440 445

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

450 455 460

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

465 470 475 480

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

485 490 495

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

500 505 510

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

515 520 525

Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

530 535 540

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

545 550 555 560

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

565 570 575

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

580 585 590

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

595 600 605

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610 615 620

<210> 103

<211> 621

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 103

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly Ser

260 265 270

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

275 280 285

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

290 295 300

Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

305 310 315 320

Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

325 330 335

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

340 345 350

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

355 360 365

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

370 375 380

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr

385 390 395 400

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

405 410 415

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

420 425 430

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

435 440 445

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

450 455 460

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

465 470 475 480

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

485 490 495

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

500 505 510

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

515 520 525

Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

530 535 540

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

545 550 555 560

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

565 570 575

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

580 585 590

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

595 600 605

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610 615 620

<210> 104

<211> 624

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 104

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly Ser

260 265 270

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

275 280 285

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

290 295 300

Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

305 310 315 320

Ser Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

325 330 335

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

340 345 350

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

355 360 365

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

370 375 380

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr

385 390 395 400

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

405 410 415

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

420 425 430

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

435 440 445

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

450 455 460

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

465 470 475 480

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

485 490 495

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

500 505 510

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

515 520 525

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

530 535 540

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

545 550 555 560

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

565 570 575

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

580 585 590

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

595 600 605

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610 615 620

<210> 105

<211> 624

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 105

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser

35 40 45

Ile Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Leu Val Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser

65 70 75 80

Val Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

85 90 95

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile

165 170 175

Asp Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

180 185 190

Val Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Ser Gly Gly Ser

260 265 270

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly

275 280 285

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp

290 295 300

Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

305 310 315 320

Cys Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

325 330 335

Gly Arg Phe Thr Cys Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

340 345 350

Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

355 360 365

Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp Gly

370 375 380

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Lys Pro Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr

385 390 395 400

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

405 410 415

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

420 425 430

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

435 440 445

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

450 455 460

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

465 470 475 480

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

485 490 495

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

500 505 510

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

515 520 525

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

530 535 540

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

545 550 555 560

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

565 570 575

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

580 585 590

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

595 600 605

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610 615 620

<210> 106

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 106

Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp Ala Met

1 5

<210> 107

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 107

Val Met Ser Ser Gly Ser Pro Lys

1 5

<210> 108

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 108

Tyr Ala Asp Val Ala Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala Ser Ala Tyr Trp

1 5 10 15

<210> 109

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 109

Ala Gly Ser Thr Phe Ser Val Asn Ser Met

1 5 10

<210> 110

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 110

Phe Thr Gly Gly Ser Thr Met Asn

1 5

<210> 111

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 111

Asn Ala Glu Val Asn Glu Gly Trp Asn Ala Asp Tyr His Asp Tyr Trp

1 5 10 15

<210> 112

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 112

Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ile Asn His Met

1 5 10

<210> 113

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 113

His Ile Thr Gly Gly Ala Ser Thr Lys

1 5

<210> 114

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 114

Asn Ala Glu Val Asn Glu Gly Trp Asn Ala Asp Tyr Tyr Asp Val Trp

1 5 10 15

<210> 115

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 115

Val Leu Asn Gly Ile Ser Ser Ala Lys

1 5

<210> 116

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 116

Tyr Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp

1 5 10 15

<210> 117

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 117

Ser Gly Asn Ile Phe Ser Ile Asp Ala Met

1 5 10

<210> 118

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 118

Gln Ile Pro Gly Gly

1 5

<210> 119

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 119

Asn Ile Val Ala Ser Thr Ser Trp Gly Ser Pro Ser Lys Val Tyr Trp

1 5 10 15

<210> 120

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 120

Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp Ser Met

1 5 10

<210> 121

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 121

Leu Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Thr

1 5

<210> 122

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 122

Asn Ala Val Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

1 5 10 15

<210> 123

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 123

Val Ile Asp Gly Val Ser Pro Asn

1 5

<210> 124

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 124

Asn Ala Ala Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asn Ala Asp Asp Tyr Trp

1 5 10 15

<210> 125

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 125

Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp Ser Val

1 5 10

<210> 126

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 126

Asn Ala Ala Leu Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala Ser Ala Tyr Trp

1 5 10 15

<210> 127

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 127

Ala Glu Val Asn Glu Gly Trp Asn Ala Asp Tyr Tyr Asp Val Trp

1 5 10 15

<210> 128

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 128

Ile Thr Ser Gly Gly Ser Pro Asn

1 5

<210> 129

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 129

Ala Gly Glu Leu Arg Asp Asp Ser Asn Gly Tyr Leu His Tyr Trp

1 5 10 15

<210> 130

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 130

His Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Thr

1 5

<210> 131

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 131

Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ile Asp Asp Met

1 5 10

<210> 132

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 132

Val His Ser Gly Ser Ser Thr Asn

1 5

<210> 133

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 133

Tyr Ala Ala Ile Ser Ser Gly Trp Gly Arg Asp Ala Glu Asp Tyr Trp

1 5 10 15

<210> 134

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 134

Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Thr

1 5

<210> 135

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 135

Asn Ala Ala Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Ser Ala Asp Asp Tyr Trp

1 5 10 15

<210> 136

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 136

Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr

1 5

<210> 137

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 137

Ala Ile Thr Gly Gly Arg Thr Thr Tyr

1 5

<210> 138

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 138

Ser Gly Ser Val Phe Ser Ile Asp Ala Met

1 5 10

<210> 139

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 139

Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Thr

1 5

<210> 140

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 140

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp

1 5 10 15

<210> 141

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 141

Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Lys

1 5

<210> 142

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 142

Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Asp Ala His Gly Tyr Trp

1 5 10 15

<210> 143

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 143

Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr His Gly Met

1 5 10

<210> 144

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 144

Ala Ile Asn Asn Gly Gly Ser Trp Thr Ser

1 5 10

<210> 145

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 145

Cys Gln Asn Arg Val Thr Arg

1 5

<210> 146

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 146

Gln Asn Arg Val Thr Arg

1 5

<210> 147

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 147

Ile Asn Gln Gly Gly Ser Trp Thr Ser

1 5

<210> 148

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 148

Ser Arg Ser Ile Ala Ser Ile Asn Val Met

1 5 10

<210> 149

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 149

Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ile Asp Ala Met

1 5 10

<210> 150

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> химически синтезированная

<400> 150

Asn Ala Asp Val Ser Thr Gly Trp Gly Arg Pro Ala Asp His Tyr Trp

1 5 10 15

<---

1. Выделенный полипептид, который связывается с глюкокортикоид-индуцированным TNFR-родственным белком (GITR), включающий по меньшей мере один GITR-связывающий домен (GITR-BD), содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80.

2. Выделенный полипептид по п.1, причем полипептид содержит два или более GITR-связывающих доменов (GITR-BD), которые специфически связывают GITR.

3. Выделенный полипептид по п.2, в котором указанные два или более GITR-связывающих доменов функционально связаны через линкерный полипептид.

4. Выделенный полипептид по любому из пп. 2, 3, в котором каждый GITR-BD содержит область 1, определяющую комплементарность (CDR1), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19-80.

5. Выделенный полипептид по п.4, причем полипептид содержит по меньшей мере две или по меньшей мере три копии одного и того же GITR-BD.

6. Выделенный полипептид по п.3, причем полипептид является четырехвалентным, для связывания GITR, причем необязательно полипептид содержит две копии слитого белка, который включает структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc.

7. Выделенный полипептид по п.3, причем полипептид является шестивалентным, для связывания GITR, причем необязательно полипептид содержит две копии слитого белка, который включает структуру: (GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-(GITR-BD)-Линкер-Шарнир-Fc.

8. Выделенный полипептид по п.1, причем GITR-BD представляет собой последовательность sdAb и содержит область 1, определяющую комплементарность (CDR1), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 138; область 2, определяющую комплементарность, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 141; и область 3, определяющую комплементарность (CDR3), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 116, причем необязательно каждый GITR-BD содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 50-59 и 61-62.

9. Выделенный полипептид по п.8, причем полипептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 93.

10. Выделенный полипептид по п.1, содержащий один или более дополнительных связывающих доменов.

11. Выделенный полипептид по п.1, в котором GITR-BD содержит однодоменное антитело (sdAb).

12. Выделенный полипептид по п.11, в котором GITR-BD содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 42-62, и/или в котором GITR-BD содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 63-80.

13. Выделенный полипептид по п.1, причем полипептид содержит полипептид Fc-области иммуноглобулина.

14. Выделенный полипептид по п.13, причем выделенный полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 81-105, или аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 81-105.

15. Выделенный полипептид по п.10, в котором один или более дополнительных связывающих доменов связываются с мишенью, отличной от GITR, причем необязательно один или более дополнительных связывающих доменов связываются с суперсемейством рецепторов фактора некроза опухоли (TNFRSF), причем необязательно член TNFRSF выбран из группы, состоящей из OX40, CD27, медиатора проникновения вируса герпеса (HVEM), CD40, бета-рецептора лимфотоксина (LTBR), рецептора A2 эктодисплазина (ED2R), рецептора A эктодисплазина (EDAR), TweakR, антигена созревания B-клеток (BCMA), рецептора фактора, активирующего B-клетки (BAFFR), рецептора смерти 3 (DR3), рецептора смерти 6 (DR6) и CD137.

16. Выделенный полипептид по п.10, в котором один или более дополнительных связывающих доменов связываются с не-членом TNFRSF.

17. Выделенный полипептид по п.10, в котором один или более дополнительных связывающих доменов содержат антитело или его антиггенсвязывающий фрагмент, причем необязательно антитело или его антиггенсвязывающий фрагмент представляет собой scFv, Fab, однодоменное антитело (sdAb), V_NAR или VHH.

18. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая выделенный полипептид по п.1.

19. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по п.18.

20. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид по п.1, для лечения злокачественного новообразования у пациента, причем злокачественное новообразование выбрано из группы, состоящей из рака мочевого пузыря, рака молочной железы, рака матки, рака шейки матки, рака яичников, рака предстательной железы, рака яичек, рака пищевода, рака желудочно-кишечного тракта, рака поджелудочной железы, колоректального рака, рака толстой кишки, рака почки, рака головы и шеи, рака легких, рака желудка, герминогенного рака, рака кости, рака печени, рака щитовидной железы, рака кожи, новообразования центральной нервной системы, лимфомы, лейкоза, миеломы, саркомы и рака вирусного происхождения, причем необязательно злокачественное новообразование представляет собой метастатическое злокачественное новообразование, рефрактерное злокачественное новообразование или рецидивирующее злокачественное новообразование.

21. Фармацевтическая композиция по п.20 или выделенный полипептид по п.17 для применения в комбинации с антителом к PD1 или к PDL1, причем необязательно антитело представляет собой антитело к PD1, и антитело к PD1 представляет собой BMS-936558.