Способ прогнозирования риска развития covid-19 у больных гемобластозами

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано для прогнозирования риска возникновения инфекции, вызванной SARS-CoV-2 с поражением легких у больных гемобластозами. Осуществляют оценку полиморфизма генов IL4 и IL10 в геномной ДНК, выделенной из лейкоцитов цельной крови. Проводят анализ распределения генотипов изучаемых локусов. В случае выявления сочетаний генотипов локусов IL10-1082TT × IL4-590CC × IL10-819AG, IL10-1082TT × IL4-590TT × IL10-819AA, IL10-1082TT × IL4-590TT × IL10-819AG, IL10-1082ТС × IL4-590СС × IL10-819AG, IL10-1082TC × IL4-590CT × IL10-819AG, IL10-1082TC × IL4-590ТТ × IL10-819AA, IL10-1082ТС × IL4-590TT × IL10-819AG, IL10-1082СС × IL4-590CC × IL10-819AG, IL10-1082CC × IL4-590ТТ × IL10-819AA, IL10-1082CC × IL4-590TT × IL10-819AG прогнозируют высокий риск поражения легких при COVID-19. Способ обеспечивает эффективное прогнозирование риска развития COVID-19 с поражением легких у больных гемобластозами за счет проведения анализа распределения генотипов локусов IL4 и IL10. 3 ил., 4 табл., 4 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано для выявления группы высокого риска инфицирования SARS-CoV-2 с поражением легких у больных гемобластозами на основании обнаружения отдельных генотипов и их комбинаций локусов интерлейкинов-4 и -10 (IL4 и IL10).

В декабре 2019 г. вспышка атипичной пневмонии с тяжелым острым респираторным синдромом (SARS) выявлена в г. Ухань в Китае. Быстрая передача от человека к человеку нового антропозоонозного коронавируса (SARS-CoV-2), ответственного за развитие коронавирусного заболевания 2019 года (COVID-19) привела к глобальному всплеску числа заболевших. 11 марта 2020 г. Всемирная организация здравоохранения объявила COVID-19 пандемией [1]. К 19 апреля 2021 г. во всем мире было зарегистрировано более 140 миллионов случаев заражения SARS-CoV-2 и погибло более 3 миллионов человек [2]. Пандемия COVID-19 - это беспрецедентный вызов медицинскому сообществу, создавший множество медицинских, материально-технических, финансовых проблем и трудностей для учреждений здравоохранения при поиске возможностей оказания оптимальной помощи больным онкогематологическими заболеваниями [1, 3, 4]. В то время как клинический спектр проявлений инфекции, вызванный SARS-CoV-2, чрезвычайно широк, начиная от легких или бессимптомных случаев до тяжелого острого респираторного синдрома, стало очевидно, что исход заболевания значительно зависит от факторов, связанных с хозяином, таких как возраст, пол и сопутствующие заболевания [2, 5, 6], включая гемобластозы. Восприимчивость больных с заболеваниями системы крови к SARS-Cov-2 обусловлена, в том числе, структурными особенностями генома человека: не все лица, подвергшиеся воздействию вируса, заражаются, не у всех инфицированных развиваются симптомы болезни, тогда как у части пациентов возникает фатальное течение заболевания с развитием синдрома выброса цитокинов, дыхательной и полиорганной недостаточности [3, 4, 7-10].

Пациенты гематологического профиля представляют собой группу высокого риска развития инфекционных заболеваний, в том числе COVID-19, в связи с аберрантным функционированием иммунной системы и иммуносупрессией, вызванной противоопухолевым лечением [1, 11]. Они более восприимчивы к инфицированию SARS-CoV-2, имеют быстро развивающийся COVID-19 с неблагоприятным течением и высокий риск возникновения тяжелых осложнений, чаще нуждаются в интенсивной терапии и отличаются значительным уровнем смертности по сравнению с общей популяцией и с больными солидными новообразованиями [1, 4, 3, 7, 8, 12]. У госпитализированных пациентов с гемобластозами и с COVID-19 риск летальных исходов оценивается на уровне 39% [4, 11, 13]. В частности, к независимым прогностическим факторам смерти от COVID-19, наблюдаемой у 33% больных множественной миеломой, относят мужской пол, пожилой возраст, прогрессирование заболевания, наличие почечной недостаточности и других сопутствующих заболеваний (артериальная гипертензия, хронические заболевания легких, сахарный диабет и вторые злокачественные новообразования) [4-7, 11, 12].

Хотя патогенез COVID-19 остается, в большей степени, неясным, генетический полиморфизм в локусах хозяина, белковые продукты которых участвуют в распознавании инфекционных агентов, в развитии реинфицирования, воспаления, гипериммунной реакции может играть роль в определении характера течения и исхода заболевания. Ряд данных, полученных при полногеномных исследованиях (GWAS), не имеют прямого биологического отношения к патогенезу заболевания и не всегда позволяют обнаружить мутации, вовлеченные в возникновение и прогрессирование патологического процесса. Поэтому, наряду с GWAS по-прежнему актуальны анализ генов-кандидатов и когортные исследования [2, 10]. Индивидуальные различия в восприимчивости к инфекции SARS-CoV-2 связаны с наличием полиморфизма во многих генах, особенно в тех, которые отвечают за кодирование рецепторов клеток хозяина, участвующих в процессах распознавания и пенетрации вируса [5, 10, 14]. Такие исследования оценили роль функциональных SNPs (single nucleotide polymorphisms, однонуклеотидные замены) в генах, ответственных за контроль вирусной инфекции путем индукции воспаления (IFNL3/IFNL4), поляризации макрофагов (MERTK), локального и системного воспалительного ответа (PNPLA3, IL6), активации комплемента по C1q пути и потенциально способных активировать шиловидный белок SARS-CoV-2 (TLL-1) [2, 14-16], облегчать прикрепление к поверхности и проникновение вируса в клетку (АСЕ2, TMPRSS2, DPP4, гены HLA I класса) [5, 14, 17-24]. Кроме того, описан вклад SNPs в генах ABO, АроЕ, IFITM3, SLC6A20, LZTFL1, CCR9, FYCO1, CXCR6, XCR1 и ТМЕМ189-UBE2V1, DC26, Cathepsin С [5, 9, 10, 24], ERAP2, MBL, CCL2, CCL5, Furin, MUC5B, GSTT1-M1, DBP, ICAM3, AHSG и многих других в предрасположенность к инфицированию, к тяжелому течению COVID-19 и к высокому уровню смертности [5, 10, 23].

Идентификация вышеупомянутых генетических вариантов ассоциируется с более длительным течением COVID-19 или фатальным исходом инфекции, а также поддерживает разработку прогностических инструментов, полезных для стратификации субъектов на группы риска при их обнаружении. Более того, индивидуализация ключевых генов может способствовать лучшему пониманию путей, участвующих в патогенезе новой коронавирусной инфекции, что дает основу для разработки рациональных терапевтических подходов [2, 5].

Основная роль в защите организма от инфекций отводится иммунной системе. Поэтому большое внимание уделяется поиску иммуноопосредованных маркеров прогноза, которыми могут стать SNPs в генах, участвующих в реализации противовирусного иммунитета, в частности цитокинов (IFNγ, IL4, IL6, IL10, IL17, IL37, TNFα, IFNα/β), Толл-подобных (TLR3, TLR4, TLR7) и других рецепторов [5, 6, 8-10, 14, 24-33].

В ходе COVID-19 чрезмерная продукция провоспалительных медиаторов приводит к цитокиновому шторму, который обусловливает тяжелое течение болезни и острое повреждение органов. Основной механизм этого осложнения заключается в том, что SARS-CoV-2 быстро активирует Т-хелперы 1 типа (Th1) с секрецией провоспалительных цитокинов, включая IL-6, IL-10 и IL-17 [24, 34]. При COVID-19 высокий уровень IL-6, IL-10 и низкое содержание CD4+ и CD8+ Т-клеток связывают с тяжелым течением заболевания. Описано также, что пациенты с этой формой COVID-19 имеют более высокие концентрации сывороточных IL-2, IL-6, IL-7, IL-10, чем пациенты с легкими и среднетяжелыми формами инфекции, а уровень IL-17 повышен у больных COVID-19, проходивших лечение в отделении интенсивной терапии [34].

Секреция цитокинов находится под жестким генетическим контролем, опосредуемым структурными особенностями кодируемых генов. Однонуклеотидные полиморфизмы, расположенные в регуляторных участках генов, относятся к наименее изученной функциональной группе SNPs. Однако, изменяя уровень экспрессии генов, они играют значимую роль в развитии различных патологических состояний человека, включая инфекции и злокачественные новообразования [34, 35]. Полиморфизм генов цитокинов оказывает влияние на индивидуальные различия в восприимчивости к короновирусной инфекции [14].

Носительство альтернативного аллеля гена может приводить к подавлению его экспрессии и соответственно к снижению концентрации кодируемого им продукта, а также к изменению функциональной активности белка [24], оказывая влияние на резистентность к инфекционным, и в частности, вирусным заболеваниям в популяции, что определяет возможность использования полиморфизма генов цитокинов в качестве прогностического маркера развития новой коронавирусной инфекции [8, 34]. Кроме того, полиморфизм может влиять на эффективность терапии и вакцинации против SARS-CoV-2 [24, 34].

Однако большинство работ, касающихся этой темы, направлено на изучение влияния уровня цитокинов на течение и исход заболевания. И лишь в последнее время появляются ограниченные исследования о корреляции полиморфизма генов цитокинов с возникновением COVID-19.

Описано несколько способов прогнозирования развития и течения COVID-19 с учетом полиморфизма генов цитокинов. Так, опубликовано две работы [9, 34], в которых представлены результаты генотипирования локуса IL10 у больных COVID-19 и одна статья, касающаяся полиморфизма гена IL4 [23]. Однако ни в одной из них не обследовались пациенты с заболеваниями системы крови.

Так, в своем исследовании М. Avendano-Felix et al. [9] выдвинули предположение о том, что полиморфизм гена IL10 в точках rs1800871 (- 819С>Т) и rs1800872 (-592С>А) связан с клиническим течением COVID-19 (обследовано 193 жителя Мексики). В качестве сопутствующих заболеваний у них указаны, артериальная гипертензия, сахарный диабет и другие. Генотипирование проводили методом ПЦР в реальном времени. Однако авторами не было получено никаких доказательств связи между частотами аллелей, генотипов или гаплотипов и тяжестью исходов COVID-19.

В работе L.K. Batur et al. [34] носительство гетерозигот гена IL10-1082G>A коррелировало с самой широкой распространенностью COVID-19 в Бразилии, Испании и Нидерландах и с самым высоким уровнем смертности в Испании, Великобритании и Италии (из расчета на 1 млн. человек в популяции) среди 23 стран. Проведенный анализ подтверждает представление о том, что полиморфизмы генов интерлейкинов играют важную роль в распространении COVID-19 по всему миру, несмотря на предпринимаемые ограничительные национальные и международные мероприятия.

Интерлейкин-10 (IL-10) продуцируется, в основном CD4+ Т-лимфоцитами-хелперами, а также некоторыми активированными В-клетками и макрофагами. IL-10 ингибирует функции Т-лимфоцитов и антигенпрезентирующих клеток путем подавления экспрессии провоспалительных цитокинов (фактора некроза опухоли альфа, IL-1, -6, -8, -12, а также HLA II класса). В дополнение к своим иммуносупрессивным свойствам, IL-10 повышает выживаемость, пролиферацию, дифференцировку В-лимфоцитов и выработку ими антител. Ген IL10 высоко полиморфен, картирован на 1 хромосоме (участок 1q31-q32), составляет по протяженности около 5,2 килобаз, включает пять экзонов. В гене насчитывается 194 полиморфных варианта, однако три наиболее частые и значимые точечные мутации обнаружены в области промотора: -1082 (G/A), -819 (С/Т) и-592 (С/А). Кроме того, там же описаны два микросателлитных полиморфизма (IL10.G и IL10.R). Показано, что присутствие мутантного аллеля и мутантных гомозигот коррелирует со снижением продукции IL-10 при стимуляции клеток in vitro и in vivo, с низкой концентрацией цитокина в плазме крови и более выраженным воспалительным ответом [35]. Результаты исследований при COVID-19 продемонстрировали, что при тяжелом течении инфекции в сыворотке периферической крови больных наблюдаются экстремально высокие уровни IL-10 [25, 34, 36], которые связаны с компенсаторным противовоспалительным ответом, ответственным за большое число случаев вторичных инфекций (50%) и сепсиса (100%) у выживших пациентов [34].

Ген IL4 у человека расположен на хромосоме 5q31 и состоит из 25 т.п.н, и в нем обнаружены многочисленные аллельные варианты, к наиболее значимым из которых относят 590С/Т (rs2243250), 33С/Т (rs2070874), +3437C/G (rs2227282) и 2979G/T (rs2227284). Полиморфизм rs2243250 локализован в промоторной области, rs2070874 - в 5'-нетранслируемом регионе, rs2227282 и rs2227284 - во втором интроне гена.

При исследовании полиморфизма rs2070874 гена IL4-33С>Т у больных COVID-19 выявлены различия в частоте встречаемости альтернативного аллеля в зависимости от региона проживания пациентов: его встречаемость у жителей Катара примерно в 3 раза ниже (13,7%) по сравнению с общемировыми данными (40,1%), и ниже в 5,7 раза при сравнении с населением Восточной Азии (77,9%). Среди населения Европы его частота встречаемости является самой низкой (16,8%) [23]. Таким образом, данные касающиеся связи полиморфизма гена IL4 и COVID-19 представлены лишь в одной публикации, характеризующей межпопуляционные различия при инфицировании SARS-CoV-2 и не касаются больных гемобластозами.

Интерлейкин 4 (IL-4) представляет собой плейотропный цитокин, секретируемый активированными Т-лимфоцитами и тучными клетками. Он играет важную роль в Th-иммунном ответе 2-го типа, характеризующийся производством IgE и IgG1 [37]. IL-4 связан с профиброгенным воспалительным ремоделированием тканей, что может выступать в качестве причины поражения легочной ткани при COVID-19 [38].

Принимая во внимание все вышеизложенное, острая необходимость защиты пациентов с гемобластозами от инфицирования SARS-CoV-2 путем применения общих мер (тщательной гигиены рук, ношения масок, социального дистанцирования, сокращения времени пребывания в стационаре) и вакцинации [4, 12], генотипирование локусов иммунного ответа может обеспечить прогнозирование выявления группы высокого риска инфицирования SARS-CoV-2 с поражением легких, своевременное проведение противоэпидемических и профилактических мероприятий, что приведет к существенному снижению заболеваемости и смертности вследствие COVID-19 больных с заболеваниями системы крови.

Ни один из вышеупомянутых способов не касается обнаружения генов-кандидатов предрасположенности к развитию COVID-19 у пациентов с заболеваниями системы крови.

В целом, анализ литературы показал, что ассоциация полиморфизма в промоторе гена IL4 rs2243250 с развитием COVID-19 ранее совсем не исследовалась, а связь полиморфизма гена IL10 при инфекции, вызванной SARS-CoV-2 не изучалась у больных гемобластозами, а в популяционных исследованиях получены противоречивые результаты.

Двойственные итоги молекулярно-генетических исследований могут быть результатом различных сроков отбора образцов («при поступлении», «на ранней стадии заболевания», «в первый день после госпитализации», «до начала лечения»), субстратов, взятых на исследование, методик измерения и анализируемых популяций/географических регионов проживания обследуемых [9].

Таким образом, предлагаемый способ прогнозирования возникновения COVID-19 с поражением легких у пациентов с онкогематологическими заболеваниями на основании анализа SNPs генов иммунного ответа отличается от прототипов выявлением не только отдельных генотипов генов IL4 и IL10, но и комбинаций генотипов трех локусов иммунного ответа. Поэтому данный способ обладает критерием «новизна» и по совокупности отличительных действий от аналогов в нем присутствует критерий «существенные отличия».

Цель изобретения - разработка способа прогнозирования риска развития COVID-19 с поражением легких у больных гемобластозами.

Поставленная цель достигается с помощью анализа регуляторных SNPs в генах TLR2, TLR3, TLR4, TLR9, IL1β, IL2, IL4, IL6, IL10, IL17A, TNFα, TGFβ, CD14 и FCGR2A до установления диагноза COVID-19, в его дебюте или на любом этапе наблюдения за больными с онкогематологическими заболеваниями.

Способ применяли следующим образом. При госпитализации в стационар ФГБУН "КНИИГиПК ФМБА России" и подтверждении заболевания системы крови у взрослых больных проводили взятие 2000 мкл венозной крови в вакуумную пробирку объемом 2 мл, содержащую 3,6 мг К₂ЭДТА.

Дальнейшее исследование осуществляли согласно методике в три этапа с использованием комплектов реагентов «SNP-экспресс» для выявления 21 полиморфизма 15 генов TLR2, TLR3, TLR4, TLR9, IL1β, IL2, IL4, IL6, IL10, IL17A, TNFα, TGFβ, CD14 и FCGR2A методом полимеразной цепной реакции с аллель-специфичными праймерами (производства НПФ «Литех», г. Москва), на амплификаторе «Терцик» (ООО «ДНК технология», г. Москва) и с электрофоретической детекцией продуктов реакции в агарозном геле.

На первом этапе (выделение ДНК из биопроб) в чистую пробирку типа Eppendorf с замком объемом 1,7 мл вносили 1 мл цельной крови. В случае ее расслоения в процессе хранения кровь перемешивали до однородного состояния. Пробирку типа Eppendorf с замком, содержащую кровь, закрывали пробкой и центрифугировали со скоростью 3000 об/мин на микроцентрифуге-вортексе при температуре 22±1°С в течение 5 мин. После центрифугирования крови с помощью автоматической пипетки-дозатора переменного объема аккуратно удаляли плазму, оставляя ее тонкий слой, не захватывая лейкоциты. Пробирку закрывали и выдерживали при температуре минус 20°С в морозильной камере в течение 1 часа до полного замораживания форменных элементов. Затем размораживали содержимое пробирки при температуре 22±1°С и добавляли 500 мкл реактива «ДНК-экспресс-кровь». Объем добавляемого реактива должен быть равным суммарному объему оставшихся в пробирке форменных элементов и плазмы. После этого содержимое пробирки в течение 10 с тщательно перемешивали на вортексе. Пробирку устанавливали в предварительно прогретый до температуры 98°С твердотельный термостат и выдерживали в течение 15 мин. Затем пробирку помещали в высокоскоростную микроцентрифугу и центрифугировали при 1200 об/мин при температуре 22±1°С в течение 10 мин. Полученный супернатант использовали для исследования ДНК непосредственно после его приготовления или замораживали в морозильной камере при минус 20°С на срок не более 6 мес. Замороженные образцы перед использованием полностью размораживали при температуре 22±1°С.

На втором этапе (проведение полимеразной цепной реакции) использовали комплект реагентов для амплификации «SNP-экспресс». Вначале подготавливали и маркировали пробирки вместимостью 0,5 мл для проведения амплификации из расчета 2 штуки на одну пробу («норма»-N и «мутация»-М) плюс 1 пробирка для отрицательного контроля. За 20 минут до приготовления рабочей амплификационной смеси комплект реагентов для ПЦР извлекали из морозильной камеры и полностью размораживали при температуре 22±1°С. Пробирки с реакционной смесью и раствором разбавителя тщательно перемешивали (с использованием вортекса и переворачиванием пробирки). Из компонентов комплекта готовили рабочие смеси реагентов для амплификации из расчета на 1 пробу: одна пробирка с реакционной смесью «Норма»: 17,5 мкл разбавителя; 2,5 мкл реакционной смеси «Норма»; 0,2 мкл Taq-полимеразы. Вторая пробирка с реакционной смесью «Мутация»: 17,5 мкл разбавителя; 2,5 мкл реакционной смеси «Мутация»; 0,2 мкл Taq-полимеразы. Рабочие смеси для амплификации тщательно перемешивали пипетированием. В пробирки, подготовленные для амплификации, добавляли по 20 мкл соответствующей рабочей смеси. Во все пробирки вносили по 1 капле минерального масла и по 5 мкл образца под слой масла в пробирку с рабочей амплификационной смесью «Норма» и в пробирку с рабочей амплификационной смесью «Мутация». В качестве отрицательного контрольного образца добавляли разбавитель в объеме 5 мкл. Пробирки закрывали и центрифугировали на микроцентрифуге-вортексе при 3000 об/мин при температуре 22±1°С в течение 3 с. Затем перемещали пробирки в прогретый до 94°С (температура, установившаяся в режиме «Пауза») программируемый твердотельный термостат (амплификатор) и проводили амплификацию по следующей программе (таблица 1):

На третьем этапе (детекция) для разделения продуктов амплификации использовали набор реагентов для электрофоретической детекции продуктов амплификации в агарозном геле. Для этого в камеру для горизонтального электрофореза заливали ТАЕ буфер, приготовленный путем разведения 50хТАЕ в 50 раз дистиллированной водой (рН=8,3). К 3 г агарозы с низким электроэндоосмосом добавляли 2 мл 50хТАЕ буфера и 100 мл дистиллированной воды. Смесь расплавляли в микроволновой печи и при перемешивании добавляли 10 мкл 1% раствора бромистого этидия. Расплавленную агарозу охлаждали до температуры 60°С и заливали в планшет с гребенками для формировали ячеек для нанесения образцов. После застывания агарозы осторожно вынимали гребенку из геля и переносили планшет с гелем в камеру для электрофореза. В ячейки геля наносили по 15 мкл ампликона в последовательности, соответствующей нумерации проб. Подключали электрофоретическую камеру к источнику питания и задавали напряжение электрического поля 15 В/см геля. Проводили электрофоретическое разделение продуктов амплификации в направлении от катода (-) к аноду (+). Контроль за электрофоретическим разделением осуществляли визуально по движению полосы красителя в течение 15 мин. По окончанию электрофореза вынимали гель из формы и переносили его на стекло ультрафиолетового трансиллюминатора (λ=312 нм).

Оценка результатов

При ультрафиолетовом облучении агарозного геля фрагменты ДНК проявлялись в виде светящихся полос (таблица 2).

Пример интерпретации результата представлен на фиг. 1, где К-отрицательный контрольный образец; 1 - нормальная гомозигота; 2 - гетерозигота; 3 - мутантная гомозигота; 4 - контаминация или затекание амплификата из соседнего кармана геля в тесте на мутантный аллель.

Распределение генотипов в исследуемых локусах TLR2, TLR3, TLR4, TLR9, IL1β, IL2, IL4, IL6, IL10, IL17A, TNFα, TGFβ, CD14 и FCGR2A проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга с помощью точного теста Фишера. Для сравнения частот аллелей и генотипов между различными группами использовали критерий χ² Пирсона с поправкой Иэйтса на непрерывность. Дополнительно оценивали показатель отношения шансов - odds ratio (OR) с вычислением границ 95%-го доверительного интервала (95%CI). Значение OR=1 свидетельствовало об отсутствии ассоциации риска развития поражения легких, вызванного SARS-CoV-2, у больных гемобластозами с наблюдаемым генотипом. При значении OR<1 говорили об отрицательной ассоциации (фактор пониженного риска возникновения поражения легких, вызванного SARS-CoV-2, у больных гемобластозами), a OR>1 рассматривали как положительную ассоциацию с признаком (фактор повышенного риска). Для расчета результатов использовали пакеты программ MS Office Excel 2003, Stadia, а также сайт онлайн калькуляторов для расчета статистических критериев (https://medstatistic.ru/calculators.html). Статистический анализ массивов генов с целью установления межгенных взаимодействий локусов, доказавших ассоциацию с риском поражения легких, вызванного SARS-CoV-2, у больных гемобластозами проводили с использованием непараметрического метода сокращения многофакторной размерности (MDR, Multifactor Dimensionality Reduction) http://www.healthsystem.virginia.edu/internet/addiction-genomics/Software/ [16981]. Статистически значимыми считали различия при р<0,05.

Разработанный способ выявления группы высокого риска инфекции, вызванной SARS-CoV-2 с поражением легких, у больных с заболеваниями системы крови был оценен у 390 пациентов (острым лимфобластным, острым миелоидным лейкозом, миелодиспластическим синдромом, хроническим миелолейкозом, хроническим лимфолейкозом/лимфомой из малых лимфоцитов, множественной миеломой, апластической анемией, диффузной В-клеточной крупноклеточной лимфомой, лимфомой Ходжкина), проходивших стационарное лечение в клинике ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России с марта 2020 г. Из них у 21 пациента (1 группа) был выставлен диагноз: Коронавирусная инфекция COVID-19, вирус идентифицирован (код МКБ-10 U07.1). Другая вирусная пневмония (код МКБ-10J12.8). Диагноз инфекционного осложнения установлен на основании клинической картины, изменений в общеклиническом анализе крови, подтвержден данными эпиданамнеза, обнаружением РНК SARS-CoV-2 методом полимеразной цепной реакции в мазках со слизистой оболочки носоглотки и характерной рентгенологической картиной при компьютерной томографии (КТ) органов грудной клетки: наличие множественных билатеральных участков альвеолярной инфильтрации, средней и высокой интенсивности (по типу матового стекла), широким основанием прилежащих к костальной плевре или имеющих сливной характер.

Во 2 группу (группа сравнения) вошли 369 больных гемобластозами без признаков инфекции, вызванной SARS-CoV-2.

Генотипирование локусов иммунного ответа TLR2, TLR3, TLR4, TLR9, IL1β, IL2, IL4, IL6, IL10, IL17A, TNFα, TGFβ, CD14 и FCGR2A выявило взаимосвязь полиморфизма генов IL4-590C>T, IL10-819C>T и IL10-1082G>A с высоким риском инфекции, вызванной SARS-CoV-2 с поражением легких у пациентов с заболеваниями системы крови (таблица 3).

Установлено, что при оценке мутационного статуса генов иммунного ответа пациентов с заболеваниями системы крови и инфекцией, вызванной SARS-CoV-2 с поражением легких, характеризовало преобладание мутантных гомозигот -590ТТ гена IL4 (33,3% vs. 10,3%, χ²=12,827, р=0,002, OR=4,355, 95%CI: 1,655-11,459), гетерозигот -819AG гена IL10 (65,0% vs. 31,4%, χ²=10,366, p=0,006, OR=4,050, 95%CI: 1,575-10,419), мутантного аллеля -1082C (57,9% vs. 40,0%, χ²=5,804, p=0,016, OR=2,065, 95%CI: 1,067-3,997) имутантных гомозигот -1082CC (42,1% vs. 17,6%, χ²=7,095, p=0,029, OR=3,401, 95%CI: 1,316-8,789) гена IL10.

Кроме того, при изучении межгенных взаимодействий полиморфных маркеров генов иммунного ответа, установлена трехлокусная модель сочетания вариантов генов IL4-590C>T, IL10-819C>T и IL10-1082G>A с высокой степенью согласованности модели (Cross Validation Consistency: 10/10, 100%) и точностью предсказания (Testing Balanced Accuracy: 76,87%, χ²=25,262, p<0,0001).

На фиг. 2 представлена трехлокусная модель комбинации генотипов генов IL4-590C>T, IL10-819C>Т и IL10-1082G>A, ассоциированных с различной степенью риска развития COVID-19 с поражением легких у больных гемобластозами. На диаграмме темно-серые ячейки содержат комбинации низкого риска развития COVID-19, светло-серые - высокого риска развития COVID-19, белые обозначают, что сочетания комбинаций генотипов отсутствуют. Левые столбики - количество больных гемобластозами без COVID-19, правые - число пациентов с гемобластозами и с COVID-19. Под сочетанием «00» подразумеваются гомозиготы дикого типа, «01» - гетерозиготы, «11» - мутантные гомозиготы.

В рамках данной модели значимыми предикторами низкого риска развития COVID-19 с поражением легких у больных с заболеваниями системы крови являлись 15 сочетаний генотипов, высокого риска - 10 комбинаций генотипов генов IL4-590C>T, IL10-819C>T и IL10-1082G>A (табл. 4).

Характер и сила взаимодействий генов IL4-590C>T, IL10-819C>Т и IL10-1082G>A, обусловливающих предрасположенность к развитию COVID-19, у больных гемобластозами графически представлены на фиг. 3. Под буквой А изображена дендрограмма кластерной структуры взаимодействия исследуемых генов, под буквой В - граф межгенных взаимодействий локусов IL4-590C>T, IL10-819C>T и IL10-1082G>A. Характер взаимодействия между генами при проявлении фенотипа заболевания характеризуется цветом линии: синий - выраженный антагонизм, зеленый - умеренный антагонизм. Длинные линии в дендрограмме описывают слабую взаимосвязь между маркерами, короткие отражают сильное взаимодействие между локусами. Информационная ценность каждого маркера указана в вершинах графа. Сила и направленность взаимодействия выражены в процентах энтропии.

Наибольшая степень взаимодействия в виде выраженного антагонизма характерна для локусов IL10-1082G>A и IL10-819C>T (А), которые, согласно схеме Фрюхтерман-Рейнгольда (В), обладают наибольшим значением (3,27% и 3,17% соответственно). Они же представляют собой оптимальное межгенное взаимодействие на долю которого приходится -3,81% фенотипической энтропии, демонстрируя выраженный антагонистичный эффект этих полиморфизмов при развитии COVID-19 у больных гемобластозами.

Полученные результаты свидетельствуют об ассоциации полиморфизма генов IL4-590С>Т, IL10-819C>T и IL10-1082G>А с высоким риском развития инфекции, вызванной SARS-CoV-2 с поражением легких, у больных гемобластозами. К факторам высокого риска возникновения инфекции, вызванной SARS-CoV-2, у пациентов с заболеваниями системы крови относились: присутствие мутантного аллеля и мутантных гомозигот гена IL10-1082G>A, гетерозигот гена IL10-819С>Т и мутантных гомозигот гена IL4-590C>T увеличивающих шанс неблагоприятного течения COVID-19 в 2, 3, 4 и 4 раза соответственно, а также определенных комбинаций локусов IL4-590С>Т, IL10-819C>T и IL10-1082G>A. Следовательно, протективными маркерами в отношении возникновения новой коронавирусной инфекции выступили аллель дикого типа и генотипы, его содержащие гена IL10-1082G>A, гомозиготы дикого и мутантного типов гена IL10-819C>T, генотипы с аллелем дикого типа гена IL4-590C>T и десять определенных сочетаний генотипов этих локусов.

Таким образом, выявлены молекулярно-генетические маркеры, коррелирующие с высоким риском инфекции, вызванной SARS-CoV-2 с поражением легких, у больных гемобластозами - носительство мутантных гомозигот генов IL4-590С>Т и IL10-1082G>A, а также гетерозигот гена IL10-819С>Т. Определение этих показателей и комбинаций генотипов генов IL4-590C>Т, IL10-819C>T и IL10-1082G>A (табл. 4) позволяет прогнозировать возникновение COVID-19 и дает возможность персонифицировать тактику профилактики данного инфекционного осложнения (вакцинация, использование противовирусных препаратов) путем ее эскалации, противоэпидемических (карантинная изоляция, регулярное тестирование на предмет инфицирования SARS-CoV-2) мероприятий и, следовательно, улучшать исходы инфекции на основании риск-адаптированного подхода.

Пример 1. Больная Р., 1957 года рождения. С 22.12.2020 г. проходила лечение во взрослом отделении гематологии и химиотерапии ФГБУН КНИИГиПК с диагнозом: Острый лимфобластный лейкоз В2-вариант, делеция 14q, поздний рецидив 1 от мая 2019 г., ремиссия 2 от июля 2019 г. Поздний рецидив 2 от 12.20.2020 г. Сахарный диабет 2 типа, инсулинзависимый целевой HbA1 с<7%. Гипертоническая болезнь III стадии, риск 4. С циторедуктивной целью проведена for-фаза: дексаметазон 6 мг/м², №5, на 15 сутки 1 курса противорецидивной терапии VDMA с редукцией доз химиотерапия отменена в связи с гипоплазией кроветворения. В общем анализе крови: лейкоциты 0,7×10⁹/л, гемоглобин 93 г/л, эритроциты 3,0×10¹²/л, тромбоциты 50×10⁹/л, СОЭ 23 мм/час. С 13.01.2021 г. отмечает повышение температуры тела до 38°С, слабость, кашель. Объективно: в легких дыхание жесткое, в нижних отделах слева и по передней поверхности грудной клетки выслушивается небольшое количество сухих хрипов. При КТ (выдержки из заключения) грудной полости (легкие и средостение, низкодозовый протокол, толщина сканируемого слоя 2,5 мм, контрастное усиление не проводилось): по всей паренхиме легких визуализируются множественные небольшие участки понижения прозрачности легочной ткани по типу матового стекла, без четких контуров (поражение легких справа 15%, слева 10%). В S3 верхней доли правого легкого определяется участок консолидации размерами 31×25 мм. В нижних долях - линейные уплотнения. При исследовании биологического материала пациента (мазок из носо- и ротоглотки) методом амплификации нуклеиновых кислот выявлена РНК SARS-CoV-2. При генотипировании полиморфизма генов иммунного ответа обнаружена комбинация генотипов высокого риска развития новой коронавирусной инфекции: IL10-1082СС × IL4-590TT × IL10-819АА (табл. 4). Пациентка переведена в стационар инфекционного профиля для лечения COVID-19.

Пример 2. Больная З., 1962 года рождения. С 03.12.2020 г. проходила лечение во взрослом отделении гематологии и химиотерапии ФГБУН КНИИГиПК с диагнозом: Хронический миелоидный лейкоз, бластный криз по мегакариоцитарному типу от 30.05.2018 г., мутация гена BCR-ABL T315I, прогрессирование на ингибиторах тирозинкиназ 2 поколения, бластный криз 2 от 03.11.2020 г., резистентное течение. Злокачественное новообразование верхненаружного квадранта правой молочной железы T2N0M0, хирургическое лечение в 2016 г., метастатическое поражение костей скелета, в процессе полихимиотерапии, 4 клиническая группа. На 23 сутки после 1 циторедуктивного курса Aza+Ida+Ara при выходе из агранулоцитоза - прогрессия заболевания, резистентность к химиотерапии (спленомегалия, появление бластных клеток в общем анализе крови). На 34 день госпитализации - повышение температуры тела до субфебрильных цифр. В общем анализе крови: лейкоциты 0,57×10⁹/л, гемоглобин 63 г/л, эритроциты 2,3×10¹²/л, тромбоциты 28×10⁹/л, СОЭ 28 мм/час. С 35 дня госпитализации - фебрильная лихорадка, объективно: в легких дыхание везикулярное, в нижних отделах ослабленное, более выраженное слева; с 38 дня - заложенность носового дыхания; с 40 дня - редкий малопродуктивный кашель. При исследовании биологического материала пациента (мазок из носо- и ротоглотки) методом амплификации нуклеиновых кислот выявлена РНК SARS-CoV-2. При КТ (выдержки из заключения) грудной полости (легкие и средостение, низкодозовый протокол, толщина сканируемого слоя 2,5 мм, контрастное усиление не проводилось): в S3 верхней доли, в S4 средней доли и S6 нижней доли правого легкого на фоне зон понижения прозрачности по типу матового стекла определяются мелкие очажки с нечеткими контурами. В S5 средней доли правого легкого визуализируется участок уплотнения размерами 18×9 мм. В нижних долях обоих легких - единичные очаги диаметром 3-6 мм. При генотипировании полиморфизма генов иммунного ответа обнаружена комбинация генотипов высокого риска развития новой коронавирусной инфекции: IL10-1082TC × IL4-590CC × IL10-819AG (табл. 4). Пациентка переведена в стационар инфекционного профиля для лечения COVID-19.

Пример 3. Больной К., 1948 года рождения. С 20.09.2021 г. проходил лечение во взрослом отделении гематологии и химиотерапии ФГБУН КНИИГиПК с диагнозом: Множественная миелома 3А стадия, лямбда-тип, t(11;14), 1 линия терапии VCD. Компрессионные переломы тел Th7-8. Атрофический гастрит. Катарально-фиброзный эзофагит.

Цереброваскулярная болезнь. Церебральный атеросклероз. Кортикальная атрофия. Дисциркуляторная энцефалопатия 2 степени. Получил 2 курс VCD (с редукцией доз). На 10 день терапии ощутил слабость, чувство нехватки воздуха. Сатурация О₂ - 90-91%. При КТ (выдержки из заключения) грудной полости (легкие и средостение, низкодозовый протокол, толщина сканируемого слоя 2,5 мм, контрастное усиление не проводилось): во всех отделах легких множественные участки понижения прозрачности легочной ткани по типу матового стекла без четких контуров. На фоне интерстициальных изменений отмечается утолщение внутри- и междольковых перегородок и линейные уплотнения (справа 60%, слева 50%).При исследовании биологического материала пациента (мазок из носо- и ротоглотки) методом амплификации нуклеиновых кислот выявлена РНК SARS-CoV-2. При генотипировании полиморфизма генов иммунного ответа обнаружена комбинация генотипов высокого риска развития новой коронавирусной инфекции: IL10-1082TT × IL4-590CC × IL10-819AG (табл. 4). Пациент переведен в стационар инфекционного профиля для лечения COVID-19.

Пример 4. Больная Ш., 1957 года рождения. С 07.10.2020 г. проходила лечение во взрослом отделении гематологии и химиотерапии ФГБУН КНИИГиПК с диагнозом: Острый миеломонобластный лейкоз, М4 вариант, промежуточный риск, без цитогенетических нарушений, ремиссия от 04.06.2020 г., с декабря 2020 г. поддерживающее лечение. Сахарный диабет 2 типа, инсулиннезависимый, целевой HbA1 с <7%. Иммунодефицит с преимущественной недостаточностью антител. Хронический пиелонефрит вне обострения. Хроническая болезнь почек: С3Б. Хронический калькулезный холецистит вне обострения. Эритематозная гастропатия, ассоциированная с Н. pylori. Миома матки. Поступила в стационар с жалобами на слабость, фебрильную лихорадку с повышением температуры тела до 38,4°С без озноба. Начала получать курс сопроводительной терапии. На 3 день терапии в общем анализе крови: лейкоциты 3,4×10⁹/л, гемоглобин 93 г/л, эритроциты 3,0×10¹²/л, тромбоциты 250×10⁹/л, СОЭ 38 мм/час. При КТ (выдержки из заключения) грудной полости (легкие и средостение, низкодозовый протокол, толщина сканируемого слоя 2,5 мм, контрастное усиление не проводилось): в легких наблюдаются обширные участки понижения прозрачности легочной ткани по типу матового стекла, наиболее выраженные в средних и нижних отделах (более 50% поражения легких). В нижних долях легких - участки уплотнения легочной ткани неправильной округлой формы с неровными нечеткими контурами, в отдельных визуализируются мелкие полости. При исследовании биологического материала пациента (мазок из носо- и ротоглотки) методом амплификации нуклеиновых кислот выявлена РНК SARS-CoV-2. При генотипировании полиморфизма генов иммунного ответа обнаружена комбинация генотипов высокого риска развития новой коронавирусной инфекции: IL10-1082TT × IL4-590ТТ × IL10-819AA (табл. 4). Пациентка переведена в стационар инфекционного профиля для лечения COVID-19.

Список литературы:

1. Management of patients with hematologic malignancies during the COVID-19 pandemic: practical considerations and lessons to be learned / A. Isidori, L. de Leval, U. Gergis, P. Musto, P. Porcu // Front. Oncol. - 2020. - Vol. 10. - P. 1439. doi: 10.3389/fonc.2020.01439.

2. PNPLA3 and TLL-1 polymorphisms as potential predictors of disease severity in patients with COVID-19 / S. Grimaudo, E. Amodio, R.M. Pipitone, C.M. Maida, S. Pizzo, T. Prestileo, F. Tramuto, D. Sardina, F. Vitale, A. Casuccio, A. Craxi // Front. Cell Dev. Biol. - 2021. - Vol. 9. - P. 627914. doi: 10.3389/fcell.2021.627914.

3. COVID-19 in 96 patients with hematologic disease: the first single-center experience from the Czech Republic / M. Cernan, T. Szotkowski, A. Obr, P. Sauer, E. Faber, // Clin. Lymphoma, Myeloma & Leukemia. - 2021. - Vol. 21. - no. 9. - P. 606-612. https://doi.org/10.1016/j.clml.2021.04.016.

4. Treatment of acute leukemia during COVID-19: focused review of evidence / S. Singh, J. Singh, D. Paul, K. Jain // Clin. Lymphoma, Myeloma & Leukemia. - 2021. - Vol. 21. - no. 5. - P. 289-294. https://doi.org/10.1016/j.clml.2021.01.004.

5. Role of genetic variants and host polymorphisms on COVID-19: From viral entrance mechanisms to immunological reactions / A. Adli, M. Rahimi, R. Khodaie, N. Hashemzaei, S.M. Hosseini // J. Med.Virol. - 2022. - no. 1. - P. 1-20. doi: 10.1002/jmv.27615.

6. Interleukin-37 gene polymorphism and susceptibility to coronavirus disease 19 among Iraqi patients / A.A. Ahmed, A.H. Ad'hiah // Meta Gene. - 2022. - Vol. 31. - P. 100989. https://doi.org/10.1016/j.mgene.2021.100989.

7. COVID-19 prevalence and mortality in patients with cancer and the effect of primary tumour subtype and patient demographics: a prospective cohort study / L.Y.W. Lee, J.-B. Cazier, T. Starkey, S.E.W. Briggs, R. Arnold, V. Bisht, S. Booth, N.A. Campton, V.W.T. Cheng, G. Collins, H.M. Curley, P. Earwaker, M.W. Fittall, S. Gennatas, A. Goel, S. Hartley, D.J. Hughes, D. Kerr, A.J.X. Lee, R.J. Lee, S. Ming Lee, H. Mckenzie, C.P. Middleton, N. Murugaesu, T. Newsom-Davis, A.C Olsson-Brown, С Palles, T. Powles, E.A. Protheroe, K. Purshouse, A. Sharma-Oates, S. Sivakumar, A.J. Smith, O. Topping, C.D. Turnbull, A.D.M. Briggs, G. Middleton, R. Kerr, on behalf of the UK Coronavirus Cancer Monitoring Project Team // Lancet Oncol. - 2020. - Vol. 21. - P. 1309-1316. https://doi.org/10.1016/S1470-2045(20)30442-3.

8. Toll-like receptor 4 polymorphisms (896A/G and 1196C/T) as an indicator of COVID-19 severity in a convenience sample of Egyptian patients / S.I. Taha, A.K. Shata, S.A. Baioumy, S.H. Fouad, S.G. Anis, I.M. Mossad, N.M. Moustafa, D.M. Abdou, M.K. Youssef// J. Inflamm. Res. - 2021. - Vol. 14. - P. 6293-6303. https://doi.org/10.2147/JIR.S343246.

9. Lack of effects of the genetic polymorphisms of interleukin-10 in clinical outcomes of COVID-19 / M. Avendano-Felix, L.A. Ochoa-Ramirez, R. Ramos-Payan, M. Aguilar-Medina, A. Ayala-Ham, H. Rendon-Aguilar, E. Lizarraga-Verdugo, F. Peraza-Garay, J.J. Rios-Tostado, J.S. Velarde-Felix // Viral Immunol. - 2021. - Vol. 34. - no. 8. - P. 567-572. DOI: 10.1089/vim.2021.0022.

10. Host genetic factors determining COVID-19 susceptibility and severity / T.P. Velavan, S.R. Pallerla, Y. Augustin, P.G. Kremsner, S. Krishna, C.G. Meyer // EBioMedicine. - 2021. - Vol. 72. P. 103629. doi: 10.1016/j.ebiom.2021.103629.

11. Outcomes of patients with hematologic malignancies and COVID-19: a systematic review and meta-analysis of 3377 patients / A. Vijenthira, I.Y. Gong, T.A. Fox, S. Booth, G. Cook, B. Fattizzo, J. Razanamahery, J.C Riches, J. Zwicker, R. Patell, M.C Vekemans, L. Scarfo, T. Chatzikonstantinou, H. Yildiz, R. Lattenist, I. Mantzaris, W. A. Wood, L.K. Hicks // Blood. - 2020. - Vol. 136. - no. 25. - P. 2881-2892. doi: 10.1182/blood.2020008824.

12. SARS-CoV-2 vaccines in patients with multiple myeloma / M. Gavriatopoulou, I. Ntanasis-Stathopoulos, E. Korompoki, E. Terpos, M.A. Dimopoulos // Hemasphere. - 2021. - Vol. 5. - no. 3. - e547. doi: 10.1097/HS9.0000000000000547.

13. Multiple myeloma in the time of COVID-19 / A.S. Al Saleh, T. Sher, M.A. Gertz // ActaHaematol. - 2020. - Vol. 143. - P. 410-416. doi: 10.1159/000507690.

14. Mutations and polymorphisms in genes involved in the infections by covid 19: a review / A.B.O. Kaltoum // Gene Reports. - 2021. - Vol. 23. - P. 101062. doi: 10.1016/j.genrep.2021.101062.

15. Anti-IL-6 receptor antibody treatment for severe COVID-19 and the potential implication of IL-6 gene polymorphisms in novel coronavirus pneumonia / Z.S. Ulhaqa, G.V. Soraya // Med. Clin. (Engl. Ed.). - 2020. - Vol. 155. - no. 12. - P. 548-556. DOI: 10.1016/j.medcle.2020.07.014.

16. Interleukin 6 polymorphisms as an indicator of COVID-19 severity in humans / N. Kirtipal, S. Bharadwaj / J. Biomol. Struct. Dyn. - 2020. - Vol. 39. -no. 12.-P. 4563-4565. Doi: 10.1080/07391102.2020.1776640.

17. The host's angiotensin-converting enzyme polymorphism may explain epidemiological findings in COVID-19 infections / J.R. Delanghe, M.M. Speeckaert, M.L. De Buyzere // Clin. Chim. Acta. - 2020. - Vol. 505. - P. 192-193. DOI: 10.1016/j.cca.2020.03.031.

18. Comparative genetic analysis of the novel coronavirus (2019-nCoV/SARS-CoV-2) receptor ACE2 in different populations / Y. Cao, L. Li, Z.Feng, S. Wan, P. Huang, X. Sun // Cell Discov. - 2020. - Vol. 6. - P. 11. DOI: 10.1038/s41421-020-0147-1.

19. Individual variation of the SARS-CoV2 receptor ACE2 gene expression and regulation / J. Chen, Q. Jiang, X. Xia, K. Liu, Z. Yu, W. Tao // Aging cell. - 2020. -Vol. 19. - no. 7. - P. e13168. DOI: 10.1111/acel.13168.

20. Human ACE2 receptor polymorphisms predict SARS-CoV-2 susceptibility / E.W. Stawiski, D. Diwanji, K. Suryamohan // Commun. Biol. - 2021. - Vol. 4. - P. 475. https://doi.org/10.1038/s42003-021-02030-3.

21. Assessment of risk conferred by coding and regulatory variations of TMPRSS2 and CD26 in susceptibility to SARS-CoV-2 infection in human / S. Senapati, S. Kumar, A.K. Singh, P. Banerjee, S. Bhagavatula // J. Genet. - 2020. -Vol. 99. - no. 1. - P. 53. DOI: 10.1007/s12041-020-01217-7.

22. Способ оценки риска развития тяжелой формы COVID-19: пат. 2751410 Рос. Федерация. №2021104170; заявл. 18.02.2021; опубл. 13.07.2021, бюл. №20.

23. Host genetic variants potentially associated with SARS-CoV-2: A multi-population analysis / M.K. Smatti, Y.A. Al-Sarraj, O. Albagha, H.M. Yassine / Front Genet. - 2020. - Vol. 11. - P. 578523. doi: 10.3389/fgene.2020.578523.

24. Implications of the immune polymorphisms of the host and the genetic variability of SARS-CoV-2 in the development of COVID-19 / J. Zepeda-Cervantes, D. Tecalco-Cruz, N.S. Vaca, R.E. Sarmiento-Silva // Viruses. - 2022. - Vol.14. -P. 94. https://doi.org/10.3390/v14010094.

25. Predictive immunogenetic markers in COVID-19 / M.M. Leite, F.F. Gonzalez-Galarza, B.C. Costa da Silva, D. Middleton, E.J. Melo dos Santos // Hum. Immunol. - 2021. - Vol. 82. - no. 4. - P. 247-254. doi.org/10.1016/j.humimm.2021.01.008.

26. Association of TLR3 functional variant (rs3775291) with COVID-19 susceptibility and death: a population-scale study / G. Dhangadamajhi, R. Rout // Hum. Cell. - 2021. - Vol. 2021. - P. 1-3. doi: 10.1007/s13577-021-00510-6.

27. TLR3 (rs3775291) variant is not associated with SARS-CoV-2 infection and related mortality: a population-based correlation analysis / A. Pati, S. Padhi, S. Chaudhury, A.K. Panda // Hum. Cell. - 2021. - Vol. 34. - no. 4. - P. 1274-1277. doi: 10.1007/s13577-021-00530-2.

28. Prognostic impact of toll-like receptors gene polymorphism on outcome of COVID-19 pneumonia: A case-control study / M.M. Alseoudy, M. Elgamal, D.A. Abdelghany, A.M. Borg, A. El-Mesery, D. Elzeiny, M. О Hammad// Clinical Immunology. - 2022 - Vol. 235. - P. 108929. doi.org/10.1016/j.clim.2022.108929.

29. Genetic variants of the human host influencing the coronavirus-associated phenotypes (SARS, MERS and COVID-19): rapid systematic review and field synopsis / E. Di Maria, A. Latini, P. Borgiani, G. Novelli // Human Genomics. - 2020. - Vol. 14. - P. 30. https://doi.org/10.1186/s40246-020-00280-6.

30. Association of Toll-like receptor 7 variants with life-threatening COVID-19 disease in males: findings from a nested case-control study / C. Fallerini, S. Daga, S. Mantovani, E. Benetti, N. Picchiotti, D. Francisci, F. Paciosi, E. Schiaroli, M. Baldassarri, F. Fava, M. Palmieri, S. Ludovisi, F. Castelli, E. Quiros-Roldan, M. Vaghi, S. Rusconi, M. Siano, M. Bandini, O. Spiga, K. Capitani, S. Furini, F. Mari, GEN-COVID Multicenter Study, A.Renieri, M.U. Mondelli, E. Frullanti // eLife. - 2021. - Vol. 10. - P. e67569. DOI: https://doi.org/10.7554/eLife.67569.

31. TLRs in COVID-19: How they drive immunopathology and the rationale for modulation / FX. Mabrey, E.D. Morrell, M.M. Wurfel // Innate Immunity. -2021. - Vol. 27. - no. 7-8. - P. 503-513. DOI: 10.1177/17534259211051364.

32. The genetic polymorphism of TNF-α associated with the anti-TNF-α therapy used for COVID-19 patients - another possible approach / L. Barreto Silva, G. Marinho Sampaio, R. Scavuzz iCarneiro Cunha, , A. Pereira dos Santos Neto, H. Albuquerque dos Anjos, FX. de Melo Almeida Fonseca, // Research, Society and Development. - 2022. - Vol. 11. - no. 1. - P. e47411121576. DOI: http://dx.doi.org/10.33448/rsd-v11i1.21576.

33. Frequency of interleukin-6 rsl800795 (-174G/C) and rsl800797 (-597G/A) polymorphisms in COVID-19 patients in Turkey who develop macrophage activation syndrome / F. Kerget, B. Kerget // Jpn. J. Infect. Dis. -2021. - Vol. 74. - no. 6. - P. 543-548. doi: 10.7883/yoken.JJID.2021.046.

34. Correlation between interleukin gene polymorphisms and current prevalence and mortality rates due to novel coronavirus disease 2019 (COVID-2019) in 23 countries / L.K. Batur, N. Hekim // J. Med. Virol. - 2021. - Vol. 93. - P. 5853-5863. DOI: 10.1002/jmv.27127.

35. Способ выявления первично рефрактерной формы множественной миеломы в дебюте заболевания: пат. 2749612 Рос. Федерация, №2020127910; заявл. 19.08.2020; опубл. 16.06.2021, бюл. №17.

36. A potential role of interleukin 10 in COVID-19 pathogenesis / L. Lu, H. Zhang, D.J. Dauphars, Y.-W. He // Trends Immunol. - 2021. - Vol. 42. - no. 1. - P. 3-5. doi: 10.1016/j.it.2020.10.012.

37. Association of IL4 rs2070874, FoxP3 rs3761548 polymorphisms with keratoconus in Algeria / W. Meteoukki, M. Fodil, N. Adda Negaz, N. Rahmoun, S. Lardjam Hetraf, H. Ouhaibi Djellouli, A. Djelti Messal, M. Abdi, M. Samia Aberkane, A. Chiali, A. Derdour, A. Idder, F. Zemani-Fodil // J. Ophthalmic Vis. Res. - 2021. - Vol. 16. - no. 4. - P. 558-565. DOI: 10.18502/jovr.v16i4.9745.

38. IL-4/IL-13 remodeling pathway of COVID-19 lung injury / C.B.V. de Paula, M.L.V. de Azevedo, S. Nagashima, A.P. Camargo Martins, M.A. Scaranello Malaquias, A.F. Ribeiro dos Santos Miggiolaro, J. da Silva Motta Junior, G. Avelino, Leticia A. Panini do Carmo, L. Baena Carstens, L. de Noronha // Scientific Reports. - 2020. - Vol. 10. - P. 18689. https://doi.org/10.1038/s41598-020-75659-5.

Способ прогнозирования риска возникновения инфекции, вызванной SARS-CoV-2 с поражением легких у больных гемобластозами, включающий оценку полиморфизма генов IL4 и IL10 в геномной ДНК, выделенной из лейкоцитов цельной крови, характеризующийся анализом распределения генотипов изучаемых локусов, в случае выявления сочетаний генотипов локусов IL10-1082TT × IL4-590CC × IL10-819AG, IL10-1082TT × IL4-590TT × IL10-819AA, IL10-1082TT × IL4-590TT × IL10-819AG, IL10-1082ТС × IL4-590СС × IL10-819AG, IL10-1082TC × IL4-590CT × IL10-819AG, IL10-1082TC × IL4-590ТТ × IL10-819AA, IL10-1082ТС × IL4-590TT × IL10-819AG, IL10-1082СС × IL4-590CC × IL10-819AG, IL10-1082CC × IL4-590ТТ × IL10-819AA, IL10-1082CC × IL4-590TT × IL10-819AG прогнозируют высокий риск поражения легких при COVID-19.