Производные 2-(хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)уксусной кислоты и способ их получения

Авторы патента:

G01N33/533 - с флуоресцентными метками

G01N33/52 - использование соединений или составов для колориметрического, спектрофотометрического или флуорометрического анализа, например реактивной бумаги

C09B57/02 - кумариновые красители

C07D491/052 - в шестичленном кислородсодержащем кольце

Владельцы патента RU 2793186:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Санкт-Петербургский государственный химико-фармацевтический университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО СПХФУ Минздрава России) (RU)

где:

Изобретение относится также к способу получения производных 2-(хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)уксусной кислоты из электронодефицитных 3-винилхромонов и 1,3-N,N-бинуклеофильного реагента - цианацетамида. Технический результат – получены новые соединения, которые могут быть использованы в органическом синтезе и в биохимических исследованиях в качестве флуоресцентных красителей и зондов. 2 н.п. ф-лы, 1 табл., 21 пр.

Группа изобретений относится к области органической химии и химии красителей, а именно к новым полициклическим гетероциклическим соединениям - производным 2-(хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)уксусной кислоты Ia-ф, которые могут быть использованы в органическом синтезе и в биохимических исследованиях в качестве флуоресцентных красителей и зондов, а также способу их получения.

где:

В научно-технической литературе представлено несколько способов синтеза хромено[4,3-b]пиридинов, преимущественно построенных на взаимодействии хромонов с 1,3-N,С-бинуклеофильными реагентами. Так, реакция 3-формилхромонов II с 2-нитроэтилен-1,1-диаминами III в этаноле при катализе хлорной кислотой приводит к образованию хромено[4,3-b]пиридинов IV с выходами 74-91% [Zhang, С.-Н. Three-component site-selective synthesis of highly substituted 5H-chromeno[4,3-b]pyridines / C.-H. Zhang, R. Huang, X.-M. Hu, J. Lin, S.-J. Yan // Journal of Organic Chemistry. - 2018. - Vol. 83. - P. 4981-4989].

Другим подходом, представленным единичным примером, является использование 3-(6-метил-4-оксо-4Н-хромен-3-ил)акрилонитрила V с цианацетамидом VI в спирте при катализе пиперидином [Ibrahim, М.А. Domino reactions between 3-(6-methylchromonyl)acrylonitrile and nucleophilic reagents / M.A. Ibrahim, N.M. El-Gohary // Tetrahedron. - 2018. - Vol. 74. - P. 512-518]. Выход хромено[4,3-b]пиридина VII составил 61%.

Недостатком существующего метода является невысокий выход продукта и отсутствие данных о применении его для широкого круга возможных субстратов.

Таким образом, задачей предполагаемой группы изобретений является создание ряда неописанных в литературе хромено[4,3-b]пиридинов формулы Iа-ф.

Техническими результатами, на решение которых направлена группа изобретений, являются получение ряда новых полифункциональных гетероциклических соединений (Ia-ф), обладающих флуоресцентными свойствами; простой и эффективный способ их получения из электронодефицитных 3-винилхромонов VIIIa-ф и 1,3-N,N-бинуклеофильного реагента - цианацетамида VI.

Согласно разработанному способу получения взаимодействие 3-винилхромонов VIIIa-ф и цианацетамида VI протекает в этаноле при температуре 80°С при катализе сильными ненуклеофильными основаниями - 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-еном (DBU) или тетраметилгуанидином (TMG), применяемыми в количестве 1,5 эквивалента.

По завершении реакции выделение хромено[4,3-b]пиридинов Iа-ф выполняется путем закисления реакционной массы подходящей неорганической (серной, соляной) или органической (уксусной) кислотами. Выход продуктов Ia-ф составляет 8-88%, преимущественно 75-85%.

Высокий выход большей части целевых продуктов Ia-ф и, как следствие, эффективности синтеза связано с использованием сильных ненуклеофильных оснований (DBU или TMG). Последние в отличие от вторичных аминов несклонны к присоединению по кратной связи 3-винилхромонов VIIIa-ф и, как следствие, не приводят к побочным реакциям.

Разработанный способ получения хромено[4,3-b]пиридинов Iа-ф изучен и проверен в лабораторных условиях. Структура и чистота полученных продуктов установлены методами спектроскопии ЯМР ¹Н, ¹³С и масс-спектрометрии высокого разрешения (HRMS-ESI). Изучение фотофизических свойств производных 2-(хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)уксусной кислоты Ia-ф показало их способность к флуоресценции в сине-зеленой области спектра (455-500 нм).

Предлагаемая группа изобретений проиллюстрирована примерами практического осуществления.

Пример 1. Получение этил-2-(2-оксо-9-хлор-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетата (Iа).

Смесь этил-3-(6-хлор-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата VIIIa (556 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и DBU (456 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют ледяной уксусной кислотой (0,5 мл), отфильтровывают выпавший осадок продукта, промывают этанолом и сушат на воздухе. Получают 605 мг (выход 88%) соединения Iа в виде желтоватого порошка с Т_пл. 275-276°С. Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆): δ_H (м.д.) 1.17 (t, J=7.0 Hz, 3Н, СН₃СН₂), 2.82 (dd, J=9.3, 15.6 Hz, 1H, H-2'a), 2.91 (dd, J=4.3, 15.6 Hz, 1H, H-2'b), 4.06-4.12 (m, 2H, CH₃CH₂), 5.67 (dd, J=4.3, 9.3 Hz, 1H, H-5), 6.98 (d, J=8.8 Hz, 1H, H-7), 7.47 (dd, J=2.5, 8.8 Hz, 1H, H-8), 8.15 (s, 1H, H-4), 8.16 (d, J=2.5 Hz, 1H, H-10), 12.80 (br. s, 1H, NH). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_C (м.д.) 14.28 (CH₂CH₃), 40.22 (С-2'), 60.74 (СН₂СН₃), 72.92 (С-5), 100.60 (С-3), 112.82 (С-4а), 116.58 (CN), 118.11 (С-10а), 120.17 (С-7), 124.76 (С-10), 126.83 (С-9), 133.54 (С-8), 142.19 (С-10b), 145.23 (С-4), 153.37 (С-6а), 161.48 (С-2), 169.56 (С-1'). Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₁₇H₁₃ClN₂O₄: 367.0456; найдено: 367.0447.

Пример 2. Получение этил-2-(2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетата (Iб).

Смесь этил-3-(4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата VIIIб (488 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и DBU (456 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют концентрированной соляной кислотой (0,5 мл), отфильтровывают выпавший осадок продукта, промывают этанолом и сушат на воздухе. Получают 520 мг (выход 84%) соединения Iб в виде желтоватого порошка с Т_пл. 251-253°С. Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, CD₃CO₂D): δ_H (м.д.) 1.28 (t, J=7.0 Hz, 3Н, СН₃СН₂), 2.90 (dd, J=5.0, 15.6 Hz, 1H, H-2'a), 3.00 (dd, J=9.0, 15.6 Hz, 1H, H-2'b), 4.21-4.24 (m, 2H, CH₃CH₂, 5.75 (dd, J=5.0, 9.0 Hz, 1H, H-5), 7.06 (dd, J=0.9, 8.3 Hz, 1H, H-7), 7.23 (m, 1H, H-9), 7.54 (m, 1H, H-8), 8.00 (dd, J=1.4, 8.0 Hz, 1H, H-10), 8.06 (s, 1H, H-4). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, CD₃CO₂D): δ_C (м.д.) 13.30, 39.06, 61.26, 72.27, 101.76, 112.41, 114.67, 114.80, 118.56, 122.93, 123.94, 134.64, 141.46, 146.20, 154.76, 162.96, 170.50. Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₁₇H₁₄N₂O₄: 333.0846; найдено: 333.0839.

Пример 3. Получение этил-2-(9-метил-2-метил-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетата (Iв).

Смесь этил-3-(6-метил-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата VIIIв (516 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и DBU (456 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют серной кислотой (0,5 мл), отфильтровывают выпавший осадок продукта, промывают этанолом и сушат на воздухе. Получают 545 мг (выход 83%) соединения Iв в виде желтоватого порошка с Т_пл 295-296°С. Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_H (м.д.) 1.17 (t, J=7.0 Hz, 3Н, СН₃СН₂), 2.28 (s, 3Н, СН₃), 2.77 (dd, J=9.2, 15.4 Hz, 1Н, H-2'a), 2.85 (dd, J=4.4, 15.4 Hz, 1H, H-2'b), 4.05-4.11 (m, 2H, СН₃СН₂), 5.57 (dd, J=4.4, 9.2 Hz, 1H, H-5), 6.85 (d, J=8.3 Hz, 1H, H-7), 7.26 (dd, J=1.0, 8.3 Hz, 1H, H-8), 7.94 (d, J=1.0 Hz, 1H, H-10), 8.09 (s, 1H, H-4). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_C (м.д.) 14.41, 20.02, 39.11, 60.69, 72.52, 100.02, 111.99, 115.89, 116.91, 118.17, 125.25, 131.93, 134.99, 143.10, 145.65, 152.57, 161.36, 169.68. Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₁₈H₁₆N₂O₄: 347.1002; найдено: 347.0991.

Пример 4. Получение этил-2-(9-бром-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетата (Iг).

Смесь этил-3-(6-бром-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата VIIIг (646 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и TMG (345 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют ледяной уксусной кислотой (0,5 мл), отфильтровывают выпавший осадок продукта, промывают этанолом и сушат на воздухе. Получают 665 мг (выход 86%) соединения Iг в виде желтоватого порошка с Т_пл. 282-284°С. Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_н (м.д.) 1.16 (t, J=7.1 Hz, 3Н, СН₃СН₂), 2.80 (dd, J=9.0, 15.6 Hz, 1H, H-2'a), 2.88 (dd, J=4.5, 15.6 Hz, 1H, H-2'b), 4.03-4.11 (m, 2H, CH₃CH₂), 5.65 (dd, J=4.5, 9.0 Hz, 1H, H-5), 6.88 (d, J=8.8 Hz, 1H, H-7), 7.55 (dd, J=2.1, 8.8 Hz, 1H, H-8), 8.09 (s, 1H, H-4), 8.28 (d, J=2.1 Hz, 1H, H-10). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_C (м.д.) 14.35, 40.03, 60.76, 72.92, 100.34, 112.98, 114.37, 116.58, 118.70, 120.48, 127.64, 136.36, 142.30, 145.13, 153.82, 161.60, 169.56. Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₁₇H₁₃BrN₂O₄: 410.9951; найдено: 410.9960.

Пример 5. Получение этил-2-(2-оксо-9-фтор-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетата (Iд).

Смесь этил-3-(6-фтор-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата VIIIд (524 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и TMG (345 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют соляной кислотой (0,5 мл), отфильтровывают выпавший осадок продукта, промывают этанолом и сушат на воздухе. Получают 570 мг (выход 87%) соединения Iд в виде желтоватого порошка с Т_пл. 227-230°С. Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_H (м.д.) 1.08 (t, J=7.0 Hz, 3Н, СН₃СН₂), 2.70 (dd, J=5.1, 15.6 Hz, 1H, H-2'a), 2.75 (dd, J=8.5, 15.6 Hz, 1H, H-2'b), 3.96-4.04 (m, 2H, CH₃CH₂), 5.52 (dd, J=5.1, 8.5 Hz, 1H, H-5), 6.87 (dd, J=9.0 Hz, J_HF=4.6 Hz, 1H, H-7), 7.12 (pseudotd, J=2.7, 8.5 Hz, J_HF=8.5 Hz, 1H, H-8), 7.76 (dd, J=2.7 Hz, J_HF=9.2 Hz, 1H, H-10), 7.90 (s, 1H, H-4). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_C (м.д.) 13.79, 38.93, 60.68, 72.51, 101.39, 110.94 (d, ²J_CF=23.8 Hz), 112.53, 116.01, 116.74 (d, ³J_CF=8.8 Hz), 119.80 (d, ³J_Cf=8.1 Hz), 120.73 (d, ²J_CF=24.0 Hz), 141.62, 145.34, 150.69, 157.53 (d, ¹J_CF=239.7 Hz), 161.59, 169.49. Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₁₇H₁₃FN₂O₄: 351.0752; найдено: 351.0754.

Пример 6. Получение этил-2-(9-нитро-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетата (Iе).

Смесь этил-3-(6-нитро-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата VIIIe (578 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и TMG (345 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют ледяной уксусной кислотой (0,5 мл), отфильтровывают выпавший осадок. Далее его 2 часа кипятят в 10 мл этанола, содержащего триэтиламин (303 мг, 3 ммоль). После этого раствор охлаждают и закисляют ледяной уксусной кислотой (0,5 мл). Выпавший осадок продукта отфильтровывают, промывают этанолом и сушат на воздухе. Получают 530 мг (выход 75%) соединения Iе в виде желтоватого порошка с Т_пл. 230-232°С. Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_H (м.д.) 1.16 (t, J=7.0 Hz, 3Н, СН₃СН₂), 2.89 (dd, J=8.8, 15.8 Hz, 1H, H-2'a), 2.97 (dd, J=4.1, 15.8 Hz, 1H, H-2'b), 4.05-4.11 (m, 2H, СН₃СН₂), 5.85 (dd, J=4.1, 8.8 Hz, 1H, H-5), 7.12 (d, J=9.0 Hz, 1H, H-7), 8.16 (s, 1H, H-4), 8.24 (dd, J=2.8, 9.0 Hz, 1H, H-8), 9.03 (d, J=2.8 Hz, 1H, H-10). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_C (м.д.) 14.23, 40.09, 60.82, 74.03, 99.72, 114.32, 116.27, 117.87, 119.21, 121.47, 128.70, 142.63, 142.91, 144.37, 159.71, 162.26, 169.40. Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₁₇H₁₃N₃O₆: 378.0697; найдено: 378.0705.

Пример 7. Получение этил-2-(9-метокси-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетата (Iж).

Смесь этил-3-(6-метокси-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата VIIIж (548 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и TMG (345 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют серной кислотой (0,5 мл), отфильтровывают выпавший осадок продукта, промывают этанолом и сушат на воздухе. Получают 515 мг (выход 76%) соединения Iд в виде желтого порошка с Т_пл. 294-296°С. Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_н (м.д.) 1.16 (t, J=7.0 Hz, 3Н, СН₃СН₂), 2.76 (dd, J=8.8, 15.6 Hz, 1H, H-2'a), 2.83 (dd, J=4.6, 15.6 Hz, 1H, H-2'b), 3.77 (s, 3H, CH₃O), 4.04-4.10 (m, 2H, CH₃CH₂), 5.53 (dd, J=4.6, 8.8 Hz, 1H, H-5), 6.86 (d, J=8.9 Hz, 1H, H-7), 7.00 (dd, J=2.9, 8.9 Hz, 1H, H-8), 7.65 (d, J=2.9 Hz, 1H, H-10), 8.06 (s, 1H, H-4). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_C (м.д.) 14.37, 39.12, 56.06, 60.69, 72.46, 100.48, 108.19, 111.82, 116.26, 116.91, 119.44, 121.62, 142.84, 145.65, 148.54, 154.85, 161.36, 169.70. Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₁₈H₁₆N₂O₅: 363.0951; найдено: 363.0943.

Пример 8. Получение этил-2-(8-метил-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетата (Iз).

Смесь этил-3-(7-метил-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата VIIIз (516 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и TMG (345 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют ледяной уксусной кислотой (0,5 мл), отфильтровывают выпавший осадок продукта, промывают этанолом и сушат на воздухе. Получают 525 мг (выход 81%) соединения Iз в виде желтоватого порошка с Т_пл. 290-292°С. Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_H (м.д.) 1.14 (t, J=7.0 Hz, 3Н, СН₃СН₂), 2.27 (s, 3Н, СН₃), 2.74 (dd, J=8.5, 15.6 Hz, 1Н, H-2'a), 2.80 (dd, J=5.0, 15.6 Hz, 1H, H-2'b), 4.01-4.10 (m, 2H, CH₃CH₂), 5.55 (dd, J=5.0, 8.5 Hz, 1H, H-5), 6.74 (s, 1H, H-7), 6.89 (d, J=8.0 Hz, 1H, H-9), 7.94 (d, J=8.0 Hz, 1H, H-10), 7.98 (s, 1H, H-4). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_C (м.д.) 14.17, 21.28, 39.83, 60.65, 72.50, 99.92, 110.99, 113.28, 116.86, 118.50, 118.60, 123.75, 124.99, 142.84, 145.39, 154.67, 161.29, 169.60. Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₁₈H₁₆N₂O₄: 347.1002; найдено: 347.1015.

Пример 9. Получение этил-2-(8-метокси-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетата (Iи).

Смесь этил-3-(7-метокси-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата VIIIк (548 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и TMG (345 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют ледяной уксусной кислотой (0,5 мл), отфильтровывают выпавший осадок продукта, промывают этанолом и сушат на воздухе. Получают 400 мг (выход 59%) соединения Iк в виде желтого порошка с Т_пл. 285-286°С. Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_H (м.д.) 1.17 (t, J=7.2 Hz, 3Н, СН₃СН₂), 2.78 (dd, J=8.8, 15.6 Hz, 1H, H-2'а), 2.86 (dd, J=4.4, 15.6 Hz, 1Н, H-2'b), 3.79 (s, 3 H, CH₃O), 4.06-4.12 (m, 2H, CH₃CH₂), 5.58 (dd, J=4.4, 8.8 Hz, 1H, H-5), 6.49 (d, J=2.5 Hz, 1H, H-7), 6.70 (dd, J=2.5, 8.8 Hz, 1H, H-9), 8.03 (m, 2H, H-4, H-10). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_C (м.д.) 14.41, 40.34, 56.15, 60.72, 72.88, 98.69, 103.13, 108.73, 109.89, 109.97, 117.19, 126.73, 143.11, 145.53, 156.71, 161.36, 164.53, 169.67. Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₁₈H₁₆N₂O₅: 363.0951; найдено: 363.0955.

Пример 10. Получение этил-2-(8-гидрокси-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетата (Iк).

Смесь этил-3-(7-гидрокси-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата VIIIк (520 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и TMG (345 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют соляной кислотой (0,5 мл) и отфильтровывают выпавший оранжевый осадок побочно образовавшегося пиранохромена. Фильтрат разбавляют 100 мл воды, отфильтровывают выпавший осадок продукта, перекристаллизовывают его из этанола и сушат на воздухе. Получают 50 мг (выход 8%) соединения Iк в виде желтого порошка с Т_пл. 295-297°С. Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_H (м.д.) 1.17 (t, J=7.1 Hz, 3Н, СН₃СН₂), 2.75 (dd, J=8.9, 15.4 Hz, 1Н, Н-2'а), 2.82 (dd, J=4.8, 15.4 Hz, 1Н, H-2'b), 4.03-4.12 (m, 2H, CH₃CH₂), 5.53 (dd, J=4.8, 8.9 Hz, 1Н, H-5), 6.32 (d, J=2.3 Hz, 1H, H-7), 6.53 (dd, J=2.3, 8.8 Hz, 1H, H-9), 7.94 (d, J=8.8 Hz, 1H, H-10), 7.98 (s, 1H, H-4). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_C (м.д.) 14.34, 40.16, 60.68, 72.74, 98.20, 104.46, 107.29, 109.29, 111.07, 117.28, 126.93, 143.28, 145.49, 156.72, 161.31, 163.37, 169.69. Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₁₇H₁₄N₂O₅: 349.0795; найдено: 349.0808.

Пример 11. Получение этил-2-(8,9-диметил-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетата (Iл).

Смесь этил-3-(6,7-диметил-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата VIIIл (544 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и TMG (345 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют ледяной уксусной кислотой (0,5 мл), отфильтровывают выпавший осадок продукта, промывают этанолом и сушат на воздухе. Получают 530 мг (выход 78%) соединения Iл в виде желтоватого порошка с Т_пл. 271-273°С. Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_н (м.д.) 1.14 (t, J=7.0 Hz, 3Н, СН₃СН₂), 2.16 (s, 3Н, СН₃), 2.18 (s, 3Н, СН₃), 2.74 (m, 2Н, Н-2), 4.01-4.09 (m, 2Н, СН₃СН₂), 5.52 (dd, J=5.7, 7.8 Hz, 1Н, H-5), 6.72 (s, 1H, H-7), 7.85 (s, 1H, H-10), 7.95 (s, 1H, H-4). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_C (м.д.) 14.15, 18.70, 18.77, 39.77, 60.62, 72.44, 99.72, 110.92, 113.16, 116.91, 118.90, 125.35, 131.02, 142.92, 144.22, 145.44, 152.77, 161.26, 169.63. Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₁₉H₁₈N₂O₄: 361.1159; найдено: 361.1160.

Пример 12. Получение этил-2-(2-оксо-8,9-дифтор-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетата (Iм).

Смесь этил-3-(6,7-дифтор-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата VIIIм (560 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и TMG (345 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют ледяной уксусной кислотой (0,5 мл), отфильтровывают выпавший осадок продукта, промывают этанолом и сушат на воздухе. Получают 555 мг (выход 80%) соединения Iм в виде желтоватого порошка с Т_пл. 252-253°С. Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, CD₃CO₂D): δ_н (м.д.) 1.28 (t, J=7.0 Hz, 3Н, СН₃СН₂), 2.93 (dd, J=5.0, 15.6 Hz, 1H, H-2'a), 3.03 (dd, J=8.5, 15.6 Hz, 1H, H-2'b), 4.20-4.26 (m, 2H, СН₃СН₂), 5.78 (dd, J=5.0, 8.5 Hz, 1H, H-5), 7.00 (dd, J_HF=6.8, 10.8 Hz, 1H, H-7), 7.99 (dd, J_HF=8.5, 10.8 Hz, 1H, H-10), 8.08 (s, 1H, H-4). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, CD₃CO₂D): δ_C (м.д.) 13.29, 38.87, 61.38, 72.87, 102.29, 107.93 (d, J_CF=20.9 Hz), 111.28 (d, J_CF=5.7 Hz), 112.07, 112.57 (d, J_CF=20.9 Hz), 114.59, 140.13, 146.16, 146.35 (dd, J_CF=13.5, 243.0 Hz), 151.85 (d, J_CF=9.4 Hz), 153.75 (dd, J_CF=14.1, 255.8 Hz), 162.84, 170.28. Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₇H₁₂F₂N₂O₄: 369.0657; найдено: 369.0652.

Пример 13. Получение этил-2-(7-бром-9-метил-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетата (Iн).

Смесь этил-3-(8-бром-6-метил-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата VIIIн (674 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и TMG (345 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют ледяной уксусной кислотой (0,5 мл), отфильтровывают выпавший осадок продукта, промывают этанолом и сушат на воздухе. Получают 690 мг (выход 86%) соединения Iн в виде желтоватого порошка с Т_пл. 310-312°С. Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_Н (м.д.) 1.19 (t, J=7.0 Hz, 3Н, СН₃СН₂), 2.28 (s, 3Н, СН₃), 2.74 (dd, J=10.2, 15.4 Hz, 1H, H-2'a), 2.88 (dd, J=3.8, 15.4 Hz, 1H, H-2'b), 4.07-4.13 (q, J=7.0 Hz, 2H, CH₃CH₂), 5.73 (dd, J=3.8, 10.2 Hz, 1H, H-5), 7.57 (s, 1H, H-8), 7.93 (s, 1H, H-10), 8.14 (s, 1H, H-4). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_C (м.д.) 14.44, 20.02, 39.10, 60.92, 73.57, 100.32, 111.46, 112.88, 116.68, 117.94, 124.99, 133.37, 137.24, 142.83, 145.29, 148.92, 161.60, 169.41. Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₁₈H₁₅BrN₂O₄: 425.0107; найдено: 425.0101.

Пример 14. Получение этил-2-(9-метил-7-нитро-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетата (Iо).

Смесь этил-3-(6-метил-8-нитро-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата VIIIo (606 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и TMG (345 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют ледяной уксусной кислотой (0,5 мл), отфильтровывают выпавший осадок. Далее его 2 часа кипятят в 10 мл этанола, содержащего триэтиламин (303 мг, 3 ммоль). После этого раствор охлаждают и закисляют ледяной уксусной кислотой (0,5 мл). Выпавший осадок продукта отфильтровывают, промывают этанолом и сушат на воздухе. Получают 530 мг (выход 72%) соединения Iо в виде желтоватого порошка с Т_пл. 268-270°С. Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_H (м.д.) 1.15 (t, J=7.0 Hz, 3Н, СН₃СН₂), 2.35 (s, 3Н, СН₃), 2.78 (dd, J=10.0, 15.6 Hz, 1Н, H-2'a), 2.90 (dd, J=3.6, 15.6 Hz, 1H, H-2'b), 4.03-4.08 (m, 2H, CH₃CH₂), 5.78 (dd, J=3.6, 10.0 Hz, 1H, H-5), 7.86 (s, 1H, H-8), 8.15 (s, 1H, H-4), 8.19 (s, 1H, H-10). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_C (м.д.) 14.21, 20.26, 39.04, 60.88, 74.04, 100.30, 113.73, 116.42, 119.48, 128.71, 130.28, 132.21, 139.79, 142.30, 144.86, 145.57, 161.88, 169.23. Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₁₈H₁₅N₃O₆: 392.0853; найдено: 392.0846.

Пример 15. Получение этил-2-(9-бром-8-метокси-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетата (Iп).

Смесь этил-3-(6-бром-6-метокси-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата VIIIп (674 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и TMG (345 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют ледяной уксусной кислотой (0,5 мл), отфильтровывают выпавший осадок продукта, промывают этанолом и сушат на воздухе. Получают 700 мг (выход 84%) соединения Iп в виде желтоватого порошка с Т_пл. 279-282°С. Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_H (м.д.) 1.15 (t, J=7.0 Hz, 3Н, СН₃СН₂), 2.83 (m, 2Н, Н-2), 3.84 (s, 3Н, CH₃O), 4.04-4.10 (m, 2Н, СН₃СН₂), 5.61 (pseudo t, J=7.0 Hz, 1Н, H-5), 6.63 (s, 1H, H-7), 7.96 (s, 1H, H-10), 8.34 (s, 1H, H-4). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_C (м.д.) 14.19, 39.83, 57.01, 60.71, 73.15, 99.19, 102.40, 104.43, 109.99, 110.29, 116.84, 129.10, 142.27, 145.13, 156.16, 159.97, 161.35, 169.56. Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₁₈H₁₅BrN₂O₅: 441.0056; найдено: 441.0053.

Пример 16. Получение этил-2-(3-оксо-2-циан-4,12-дигидро-3H-бензо[7,8]хромено[4,3-b]пиридин-12-ил)ацетата (Iр).

Смесь этил-3-(4-оксо-4H-бензо[h]хромен-3-ил)акрилата VIIIp (589 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и TMG (345 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют ледяной уксусной кислотой (0,5 мл), отфильтровывают выпавший осадок продукта, промывают этанолом и сушат на воздухе. Получают 700 мг (выход 84%) соединения Iр в виде желтого порошка с Т_пл296-298°С. Спектр ЯМР ¹H (400 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_H (м.д.) 1.08 (t, J=7.0 Hz, 3Н, СН₃СН₂), 2.85 (dd, J=9.5, 15.4 Hz, 1H, H-2'a), 2.93 (dd, J=43, 15.4 Hz, 1H, H-2'b), 4.04-4.10 (m, 2H, CH₃CH₂), 5.84 (dd, J=4.3, 9.5 Hz, 1H, H-12), 7.52-7.63 (m, 3Н, H-6, H-8, H-9), 7.88 (d, J=8.0 Hz, 1H, H-7), 8.01 (d, J=8.0 Hz, 1H, H-10), 8.09 (s, 1H, H-1), 8.11 (d, J=8.8 Hz, 1H, H-5). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_C (м.д.) 14.35, 39.09, 60.78, 73.46, 99.03, 110.99, 111.24, 117.07, 120.70, 122.19, 122.72, 124.71, 127.07, 128.26, 129.38, 136.09, 143.92, 144.92, 151.76, 161.79, 169.67. Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₂₁H₁₆N₂O₄: 383.1002; найдено: 383.0994.

Пример 17. Получение 2-(2-оксо-9-хлор-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-5]пиридин-5-ил)уксусной кислоты (Iс).

Смесь 3-(6-хлор-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акриловой кислоты VIIIc (501 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и TMG (345 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют ледяной уксусной кислотой (0,5 мл), отфильтровывают выпавший осадок продукта, промывают этанолом и сушат на воздухе. Получают 290 мг (выход 46%) соединения Iс в виде желтоватого порошка с Т_пл. 320-322°С. Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_H (м.д.) 2.75 (dd, J=8.8, 15.8 Hz, 1H, H-2'a), 2.82 (dd, J=4.6, 15.8 Hz, 1H, H-2'b), 5.62 (dd, J=4.6, 8.8 Hz, 1H, H-5), 6.97 (d, J=8.8 Hz, 1H, H-7), 7.44 (dd, J=2.5, 8.8 Hz, 1H, H-8), 8.09 (s, 1H, H-4), 8.16 (d, J=2.5 Hz, 1H, H-10). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_C (м.д.) 40.27, 73.05, 100.41, 113.16, 116.63, 118.22, 120.20, 124.73, 126.74, 133.55, 142.33, 145.24, 153.54, 161.54, 171.07. Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₁₅H₉ClN₂O₄: 339.0143; найдено: 339.0149.

Пример 18. Получение 2-(2-оксо-9-хлор-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетамида (Iт).

Смесь 3-(6-хлор-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акриламида VIIIт (500 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и TMG (345 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют ледяной уксусной кислотой (0,5 мл), отфильтровывают выпавший осадок продукта, промывают этанолом и сушат на воздухе. Получают 420 мг (выход 67%) соединения Iт в виде желтоватого порошка с Т_пл. 343-345°С. Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_н (м.д.) 2.56 (dd, J=5.3, 14.7 Hz, 1H, H-2'a), 2.65 (dd, J=8.0, 14.8 Hz, 1H, H-2'b), 5.62 (dd, J=5.3, 8.0 Hz, 1H, H-5), 6.96-6.98 (m, 2H, H-7, NH), 7.38 (br. s, 1H, NH), 7.43 (dd, J=2.0, 8.7 Hz, 1H, H-8), 7.99 (s, 1H, H-4), 8.15 (d, J=2.0 Hz, 1H, H-10). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_C (м.д.) 40.48, 73.46, 100.41, 113.55, 116.65, 118.19, 120.32, 124.67, 126.64, 133.52, 142.16, 145.15, 153.71, 161.58, 170.60. Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₁₅H₁₀ClN₃O₃: 338.0303; найдено: 338.0311.

Пример 19. Получение N,N-диэтил-2-(2-оксо-9-хлор-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-6]пиридин-5-ил)ацетамида (Iу).

Смесь N,N-диэтил-3-(6-хлор-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акриламида VIIIy (612 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и TMG (345 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют ледяной уксусной кислотой (0,5 мл), отфильтровывают выпавший осадок продукта, промывают этанолом и сушат на воздухе. Получают 540 мг (выход 73%) соединения Iу в виде желтоватого порошка с Т_пл. 128-130°С. Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_н (м.д.) 0.93 (t, J=7.1 Hz, 3Н, СН₃СН₂), 0.99 (t, J=7.1 Hz, 3Н, СН₃СН₂), 2.75 (dd, J=5.0, 15.7 Hz, 1H, H-2'a), 2.93 (dd, J=8.0, 15.7 Hz, 1H, H-2'b), 3.08-3.32 (m, 4H, CH₃CH₂), 5.72 (dd, J=5.0, 8.0 Hz, 1H, H-5), 6.95 (d, J=8.8 Hz, 1H, H-7), 7.44 (dd, J=2.4, 8.8 Hz, 1H, H-8), 8.07 (s, 1H, H-4), 8.17 (d, J=2.4 Hz, 1H, H-10). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_C (м.д.) 13.31, 14.54, 37.50, 41.86, 73.54, 100.36, 113.61, 116.66, 118.20, 120.11, 124.77, 126.57, 133.48, 142.22, 145.53, 153.83, 161.49, 167.57. Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₁₉H₁₈ClN₃O₃: 394.0929; найдено: 394.0932.

Пример 20. Получение 2-оксо-9-хлор-5-(цианметил)-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-6]пиридин-3-карбонитрила (Iф).

Смесь 3-(6-хлор-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилонитрила VIIIф (463 мг, 2 ммоль), цианацетамида VI (252 мг, 3 ммоль) и TMG (345 мг, 3 ммоль) в 10 мл этанола перемешивают при 80°С в течение получаса. Затем реакционную массу подкисляют ледяной уксусной кислотой (0,5 мл), отфильтровывают выпавший осадок продукта, промывают этанолом и сушат на воздухе. Получают 420 мг (выход 82%) соединения Iф в виде желтоватого порошка с Т_пл. 312-314°С. Спектр ЯМР ¹Н (400 МГц, ДМСО-d₆ - CD₃CO₂D, 9:1): δ_н (м.д.) 3.14 (dd, J=4.5, 17.3 Hz, 1Н, H-2'a), 3.22 (dd, J=7.3, 17.3 Hz, 1H, H-2'b), 5.65 (dd, J=4.5, 7.3 Hz, 1H, H-5), 7.08 (d, J=8.8 Hz, 1H, H-7), 7.47 (dd, J=2.5, 8.8 Hz, 1H, H-8), 8.12 (s, 1H, H-4), 8.17 (d, J=2.5 Hz, 1H, H-10). Спектр ЯМР ¹³C (100 МГц, ДМСО-d₆): δ_C (м.д.) 23.44, 71.75, 100.38, 111.75, 116.52, 117.67, 118.19, 120.13, 124.76, 127.21, 133.75, 142.82, 144.88, 152.99, 161.82. Масс-спектр HRMS-ESI: m/z [M+Na]⁺ вычислено для C₁₅H₈ClN₃O₂: 320.0197; найдено: 320.0210.

Пример 21. Флуоресцентные свойства производных 2-(хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)уксусной кислоты (Iа-ф).

Спектры флуоресценции растворов исследуемых соединений Iа-ф зарегистрированы на спектрофлуориметре BMG Labtech CLARIOstar. Растворы веществ Ia-ф были приготовлены в этаноле в концентрации 10^-4 ^{моль/л. Длины волн максимумов поглощения (λ_abs) и эмиссии (λ_em) представлены в таблице 1. Сдвиг Стокса (Δλ) рассчитан по формуле (1):}

Из полученных данных следует, что синтезированные хромено[4,3-b]пиридины Ia-ф флуоресцируют в сине-зеленой области спектра (455-500 нм) со стоксовым сдвигом 54-94 нм, что делает данные соединения пригодными для применения в качестве флуоресцентных красителей и/или зондов в биохимических исследованиях.

1. Производные 2-(хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)уксусной кислоты общей формулы I

где

R¹=Cl, R²=H, R³=H, EWG=COOC₂H₅; Ia - этил-2-(2-оксо-9-хлор-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетат;

R¹=H, R²=H, R³=H, EWG=COOC₂H₅; Iб - этил-2-(2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетат;

R¹=CH₃, R²=H, R³=H, EWG=COOC₂H₅; Iв - этил-2-(9-метил-2-метил-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетат;

R¹=Br, R²=H, R³=H, EWG=COOC₂H_5; Iг - этил-2-(9-бром-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетат;

R¹=F, R²=H, R³=H, EWG=COOC₂H_5; Iд - этил-2-(2-оксо-9-фтор-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетат;

R¹=NO₂, R²=H, R³=H, EWG=COOC₂H₅; Ie - этил-2-(9-нитро-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетат;

R¹=CH₃O, R²=H, R³=H, EWG=COOC₂H₅; Iж - этил-2-(9-метокси-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетат;

R¹=H, R²=CH₃, R³=H, EWG=COOC₂H_5; Iз - этил-2-(8-метил-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетат;

R¹=H, R²=CH₃O, R³=H, EWG=COOC₂H₅; Iи - этил-2-(8-метокси-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетат;

R¹=H, R²=OH, R³=H, EWG=COOC₂H₅; Iк - этил-2-(8-гидрокси-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетат;

R¹=CH₃, R²=CH₃, R³=H, EWG=COOC₂H₅; Iл - этил-2-(8,9-диметил-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетат;

R¹=F, R²=F, R³=H, EWG=COOC₂H₅; Iм - этил-2-(2-оксо-8,9-дифтор-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетат;

R¹=CH₃, R²=H, R³=Br, EWG=COOC₂H₅; Iн - этил-2-(7-бром-9-метил-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетат;

R¹=CH₃, R²=H, R³=NO₂, EWG=COOC₂H₅; Iо - этил-2-(9-метил-7-нитро-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетат;

R¹=Br, R²=CH₃O, R³=H, EWG=COOC₂H₅; Iп - этил-2-(9-бром-8-метокси-2-оксо-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетата;

R¹=H, R²+R³=бензо, EWG=COOC₂H₅; Ip - этил-2-(3-оксо-2-циан-4,12-дигидро-3H-бензо[7,8]хромено[4,3-b]пиридин-12-ил)ацетат;

R¹=Cl, R²=H, R³=H, EWG=COOH; Iс - 2-(2-оксо-9-хлор-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)уксусной кислоты;

R¹=Cl, R²=H, R³=H, EWG=CONH₂; Iт - 2-(2-оксо-9-хлор-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетамид;

R¹=Cl, R²=H, R³=H, EWG=CON(C₂H₅)₂; Iу - N,N-диэтил-2-(2-оксо-9-хлор-3-циан-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)ацетамид;

R¹=Cl, R²=H, R³=H, EWG=C≡N; Iф - 2-оксо-9-хлор-5-(цианметил)-2,5-дигидро-1H-хромено[4,3-b]пиридин-3-карбонитрил.

2. Способ получения производных 2-(хромено[4,3-b]пиридин-5-ил)уксусной кислоты общей формулы I по п. 1, включающий взаимодействие выбранных из группы: этил-3-(6-хлор-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата, этил-3-(4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата, этил-3-(6-метил-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата, этил-3-(6-бром-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата, этил-3-(6-фтор-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата, этил-3-(6-нитро-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата, этил-3-(6-метокси-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата, этил-3-(7-метил-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата, этил-3-(7-метокси-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата, этил-3-(7-гидрокси-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата, этил-3-(6,7-диметил-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата, этил-3-(6,7-дифтор-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата, этил-3-(8-бром-6-метил-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата, этил-3-(6-метил-8-нитро-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата, этил-3-(6-бром-6-метокси-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилата, этил-3-(4-оксо-4H-бензо[h]хромен-3-ил)акрилата, 3-(6-хлор-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акриловой кислоты, 3-(6-хлор-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акриламида, N,N-диэтил-3-(6-хлор-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акриламида, 3-(6-хлор-4-оксо-4H-хромен-3-ил)акрилонитрила, - соответствующих 3-винилхромонов и цианацетамида при катализе сильными ненуклеофильными основаниями - 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-еном (DBU) или тетраметилгуанидином (TMG), взятыми в мольном соотношении 1:1,5:1,5 соответственно, в этаноле при температуре 80°С, а выделение производных хромено[4,3-b]пиридинов выполняют путем закисления реакционной массы неорганической (серной, соляной) или органической (уксусной) кислотами.

Настоящее изобретение относится к способу изготовления наборов нуклеотидных и/или иных молекулярных последовательностей с использованием микрочастиц, несущих метки, взаимно-однозначно связанные с изготавливаемыми последовательностями, характеризующемуся тем, что набор микрочастиц изготавливают в единой синтетической процедуре, не ограничивающей количество микрочастиц, количество меток, длину и состав последовательностей, олигонуклеотидных или иных; где синтез осуществляют циклически над всей совокупностью микрочастиц, разделённой на небольшое количество подгрупп в каждом цикле, для чего сортировщиком осуществляют сортировку микрочастиц по уникальной для каждой синтезируемой последовательности метке в каждом цикле синтеза и добавляют нуклеотид или иной элемент последовательности к последовательностям на каждой отсортированной по меткам подгруппе частиц, в каждом цикле синтеза; алгоритм синтеза и соответствующий ему алгоритм программного обеспечения, управляющего сортировщиками, включает следующую последовательность действий: а) формирование базы соответствия меток на микрочастицах и синтезируемых на этих частицах молекулярных последовательностей; б) формирование нескольких множеств меток на каждом шаге синтеза, по количеству молекулярных элементов, вводимых в последовательности в каждом цикле синтеза; в частности, для синтеза олигонуклеотидных последовательностей - четырёх множеств, по количеству нуклеотидов; в) сортировку микрочастиц на подгруппы, соответствующие выбранным множествам меток для каждого шага синтеза; г) добавление требуемого нуклеотида, или иного элемента последовательности, к уже иммобилизованным частям синтезируемых последовательностей, иммобилизованным на микрочастицах каждой подгруппы, соответствующей множеству меток, выбранных для данной операции на данном цикле синтеза; этап добавления элемента включает вырожденный случай добавления «пустого» элемента последовательности, когда одна из подгрупп не подвергается модификации; д) смешивание подгрупп частиц и переход к сортировке для следующего цикла синтеза.

Количественный клеточный способ определения биологической активности лиганда антитела против cd26 // 2778454

Настоящее изобретение относится к количественному клеточному способу определения in vitro действия лиганда антитела против CD26, предпочтительно моноклонального антитела против CD26, такого как бегеломаб. Способ определения in vitro эффективности лиганда антитела против CD26, включает следующие стадии: а) инкубацию при 37°С или при комнатной температуре популяции человеческих Т-лимфоцитов, экспрессирующих рецептор CD26, в процентной доле более 75% с лигандом антитела против CD26 в концентрации в диапазоне от 0,001 мкг/мл до 150 мкг/мл; б) инкубацию с антителом против антитела CD26, меченным флуорохромом, которое распознает эпитоп CD26, отличающийся от эпитопа, распознаваемого лигандом антитела против CD26, используемого на стадии а); в) определение величины MFI (медиана интенсивности флуоресценции) для CD26, измеренной для образца клеток, обработанных лигандом антитела против CD26 (MFIT), и величины MFI для необработанных клеток (MFINT) путем цитофлуориметрического анализа; г) оценку процентной доли интернализации рецептора CD26 (%int CD26) или RFI (относительная интенсивность флуоресценции), рассчитываемой в соответствии со следующей формулой: где: если величина %int CD26 составляет менее 20%, это указывает на низкую эффективность лиганда антитела против CD26; если находится в диапазоне от 20% до 30%, это указывает на среднюю эффективность лиганда антитела против CD26; если составляет более 30%, это указывает на высокую эффективность лиганда антитела против CD26.

Флуоресцентная многоцелевая наноразмерная метка и конъюгаты на её основе // 2777648

Изобретение относится к нанотехнологии, оптоэлектронике и медицинской диагностике и может быть использовано при специфической флуоресцентной молекулярно-нацеленной визуализации маркеров, диагностике заболеваний, а также при изготовлении средств для обнаружения утечек. Квантовая точка имеет кристаллическую структуру вюрцита и размер 6-8 нм.

Способ диагностики колоректального рака // 2772203

Изобретение относится к медицине и касается способа диагностики колоректального рака (КРР) путем количественной оценки концентрации внеклеточных нановезикул (ВНВ), секретируемых клетками эпителия толстой кишки и/или клетками аденокарциномы толстой кишки (кВНВ), в составе тотальной популяции ВНВ, заключающегося в том, что выделяют тотальную популяцию ВНВ плазмы, оценивают размер и концентрацию ВНВ с помощью анализа траекторий, формируют иммуно-сорбирующие комплексы, состоящие из суперпарамагнитных частиц (СПМЧ) со стрептавидином и 5 антител к маркерам дифференцировки кишечного эпителия CLRN3, GPA33, GCNT3, PIG-Y, Reg IV, комплексы СПМЧ-5АТ собирают на магнитном штативе, супернатант с несвязавшимися антителами отбирают и комплексы промывают два раза, отмытые комплексы СПМЧ-5АТ инкубируют с образцом тотальной фракции ВНВ, образовавшиеся комплексы СПМЧ-АТ-кВНВ собирают на магнитном штативе, супернатант с несвязавшимися кВНВ отбирают и комплексы промывают, кВНВ в составе комплекса СПМЧ-АТ-кВНВ метят антителами к общим экзосомальным маркерам CD63 или CD9, несущими флуоресцентную метку, выделяют кВНВ и оценивают их количественно в составе иммуно-сорбирующих комплексов АТ-кВНВ-флАТ методом проточной цитометрии, при этом у пациентов с КРР фракция кВНВ составляет более 5% от тотальной популяции ВНВ плазмы.

Способ определения циркулирующих опухолевых клеток у больных раком молочной железы // 2770284

Изобретение относится к диагностическим методам в медицине и может быть использовано в онкологии для определения циркулирующих опухолевых клеток у больных с целью определения чувствительности циркулирующих опухолевых клеток к химиотерапии и прогнозирования вероятности возникновения гематогенных метастазов при раке молочной железы.

Способ прогноза неблагоприятного исхода у пациентов с ишемическим инсультом // 2769488

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, и касается способа прогнозирования в остром периоде ишемического инсульта неблагоприятного исхода. Способ прогноза неблагоприятного исхода у пациентов с ишемическим инсультом включает оценку тяжести инсульта у пациента по шкале NIHSS, взятие периферической крови у пациента в острый период инсульта, выделение из периферической крови мононуклеарных клеток, мечение мононуклеарных клеток моноклональными антителами к поверхностным антигенам, присутствующим на моноцитарных миелоидных супрессорных клетках, причем взятие периферической крови у пациента проводят в первые 24-48 часов после инсульта, определяют процентное содержание моноцитарных миелоидных супрессорных клеток среди мононуклеарных клеток, рассчитывают показатель прогностической модели неблагоприятного исхода ишемического инсульта по формуле:Y=е(-3.42+0.23×Х1-0.16×Х2)/(1+е-3.42+0.23×Х1-0.16×Х2)где Y - показатель прогностической модели неблагоприятного исхода ишемического инсульта, Х1 - тяжесть инсульта у пациента по шкале NIHSS в первые 24-48 часов, Х2 - процентное содержание моноцитарных миелоидных супрессорных клеток в периферической крови в первые 24-48 часов у пациента, и при значении Y≥0,24 прогнозируют неблагоприятный исход ишемического инсульта.

Способ обнаружения нейтрофильных внеклеточных ловушек в суправитально окрашенном препарате крови // 2768152

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, патофизиологии и экспериментальной медицине, и может быть использовано для обнаружения морфологических эквивалентов этапов формирования нейтрофильных внеклеточных ловушек (НВЛ). Выделенную на двойном градиенте плотности раствора фиколла-верографина взвесь нейтрофилов после стимуляции смесью Lactobacillus reutri, L.

Новый fab-фрагмент антитела против muc1 человека // 2767793

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен Fab-фрагмент антитела против MUC1 человека.

Способ определения и количественной оценки специфического клеточного иммунитета к антигенам s-белка вируса sars-cov-2 // 2762616

Изобретение относится к области медицинской иммунологии и предназначено для определения и количественной оценки специфического клеточного иммунитета к антигенам S-белка вируса SARS-COV-2. Выделенные из крови пациента мононуклеары инкубируют в лунках 96-луночного планшета, на дне которых сорбирован полноразмерный S-белок, в качестве опытной пробы.

Конъюгированные через cys80 иммуноглобулины // 2756101

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, в частности к новым конъюгатам иммуноглобулинов с различными агентами. Изобретение раскрывает способ получения конъюгированных иммуноглобулинов через химию аминокислотных остатков цистеина в особых положениях вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина («Cys80»).

Способ ранней диагностики алкогольной болезни печени у пациентов с синдромом зависимости от алкоголя // 2792739

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для ранней диагностики алкогольной болезни печени у пациентов с синдромом зависимости от алкоголя. У пациента в сыворотке крови фотометрически определяют активность каталазы, с последующим перерасчетом активности каталазы в мкат/л по формуле: Е=(Ахол - Аопт)×V×t×К×100, где Е - активность каталазы в мкат/л; А - оптическая плотность холостой и опытной проб; V - объем вносимой пробы, 0,1 мл; t - время инкубации, 10 мин; К - коэффициент миллимолярной экстинции перекиси водорода, равный 22,2×103 мм-1×см-1.