Патент ссср 293845

 

293845

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВЙДЕТЕДЬСТВУ

Сойв Сооетскик

Социалистическик

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №вЂ”

Заявлено 27,Х.1969 (№ 1373322/30-15) с присоединением заявки ¹â€”

Приоритет

Опубликовано 26 1.1971. Бюллетень № 6

Дата опубликования описания 10.Ч.1971

МПК С 12d 13/06

KOIHHY8T А0 делам изобретений и открытий при Саеете Министрое

СССР

УДК 57:547.466(088.8) ВСЕСОЮЗНАЯ

Авторы изобретения

Д. Ф. Петров, М. А. Шилова, И. С. Родыиюк, Л. К. Смирнов и Л. H. Изотова

Биологический институт Сибирского отделения АН СССР

Заявитель

ШТАММ AZOTOBACTER SUIS Or. H«(CO АН СССР) — ПРОДУЦЕНТ

L-TPИПТОФАНА

Изобретение относится к области синтеза вецеств биологическим путем.

Известны штаммы микроорганизмов, продуцирующие триптофан у бактерий Е. coli. Bac.

megaterium и другие, которые синтезируют

L-триптофан из 3-индолпировиноградной кислоты, у дрожжей Hansenula, Candida, Тоги!а, которые используют для синтеза триптофана антираниловую кислоту и производные индола.

Предлагается штамм Azotobacter suis Or., продуцирующий L-триптофан. Штамм получен в результате воздействия рентгеновскими лучами на А-suis. Ему присвоен номер Н«(СО

АН CCCP).

Морфологические свойства. Культура нолиморфная. В молодом возрасте клетки имеют вид очень коротких палочек с округлыми краями размером 0,8 — 1Х2,5 — 3,2 мк, затем укорачиваются, становятся кокковидными диаметром 1,2 — 1,5 л к. Подвижна, с полярными жгутиками. жгутики встречаются чаще всего по одному или по два с одного конца. Грамотрицательна, спор не имеет.

Физиолого-биохимические свойства. Культура является факультативным аэробом. На жидкой среде Эшби фиксирует азот до 2—

2,3 иг на 1 г использованной глюкозы. Использует все сахара «пестрого ряда» с образованием кислоты и газа. Хорошо растет на средах с солями органических кислот в качестве источника углерода. Не образует индола, сероводорода, аммиака. Температурный оптимум

25 — 30 С, íî хорошо растет и при 37 С.

5 Культуральные свойства. Культура хорошо растет на белковых, синтетических средах с минеральными источникамп азота, а также на безазотистых средах. Колонии на твердых белковых средах белого цвета с гладкой блестя10 щей поверхностью, с ровными краями, диаметром 1 — 4 ллт. Глубинные колонии мелкие, диаметром 1 — 2 и,и, прозрачные, со слабым голубоватым флюоресцирующим пигментом. Края колоний ровные, поверхность гладкая. На

15 жидких белковых и синтетических средах— равномерная муть по всей толще. На четвертые-пятые сутки образуется пленка.

Требования к питательной среде. Штамм вы20 соко специфичен. В синтетической среде требует для своего роста наличие тирозина и отличается очень высокой чувствительностью к данному ростовому фактору. Хороший рост культуры наблюдается уже при концентрации

25 тирозина в жидкой синтетической среде

0,2 лжг/ял. Максимальный рост — при концентрации тирозина 10 лткг/лл. В отличие or исходного гомосерин-зависимого мутанта тирозин-зависимый мутант А-suis Н«способен да30 вать довольно хороший рост в жидкой среде

293845

Составитель М. Дранишников

Корректоры: М. Коробова и А. Абрамова

Редактор 3. Твердохлебова Техред Л. В. Куклина

Заказ 1153/19 Изд, Мв 429 Тираж 473 Подписнос

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Минисгров СССР

Москва, Я-35, Раушская»a6., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 при высоких концентрациях ростового фактора

400 — 500 мкг/мл.

Продуцирующая способность. Способен синтезировать и выделять в культуральную среду триптофан. Первоначальная продуктивность мутанта 0,1 — 0,2 мкг/мл. В результате селекции

1родуктивность его удалось повысить в пять раз до 0,5 — 0,6 г/л L-триптофана на третьичетвертые сутки. Ферментацию предпочтительно проводить в колбах на качалке при

21 — 23 С. В качестве источника углерода можно использовать меляссу.

Синтез L-триптофана повышается в пять— семь раз при добавлении в ферментационную среду аналога триптофана-3-метилтриптофана в количестве 10 — 20 мкг/мл. В этих условиях мутант способен синтезировать до 3 — 4 г/л Lтриптофана. Другие аналоги триптофана, такие как 5-метилтриптофан, N-ацетил-триптофан, Х-ацетил-P-метил-триптофан, подобного действия на предлагаемый штамм не оказы- вают.

Предмет изобретения

Штамм Azotobacter suis Or. Нвв (CO АН

СССР) — продуцент L-триптофана.

Мор ф о лог и я. Клетки штамма имеют вид коротких палочек с округлыми краями разме4 ром 0,8 — 1,0)(2,5 — 3,2 мк с полярными жгутиками по одному или по два с одного конца.

Грамотрицателен. Спор не образует.

Культуральные свойства. Отношение к кис5 лороду: аэроб. На твердых белковых средах штамм образует колонии белого цвета с гладкой блестящей поверхностью, ровными краями, диаметром 1 — 4 мм. На твердых синтетических средах штамм образует колонии со

10 слабым голубоватым флюоресцирующим пигментом, ровными краями и блестящей поверхностью. На жидких белковых и синтетических средах — равномерная муть по всей толще питательной среды. Использует все сахара

15 «пестрого ряда» с образованием кислоты и газа. Оптимальная температура роста 25—

30 С.

Нуждается в и-оксифенилаланине (тирозине).

20 Отличается способностью выделять в питательную среду триптофан до 0,5 — 0,6 г/л на третьи-четвертые сутки ферментации. Синтез L-триптофана повышается в пять-семь раз при добавлении в питательную среду ана25 лога триптофана — 3-метилтриптофана в количестве 10 — 20 мкг/мл соответственно. В этих условиях штамм способен синтезировать до

3 — 4 г/л L-триптофана.