Патент ссср 375829
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
375829
Союз Соеетскнх
Социапнсткческнх
Республик
Зависимый от патента №
М. Кл. А 61 25/00
Заявлено 08 т/11970 (№ 1447197/31-16)
Приоритет 09Х1.1969, М %Р ба/140363, ГДР
Комитет по делам
УДК 615.8(088.8) Опубликовано 23.III.1973. Бюллетень № 16 изаоретеннй н открытий прн Совета Миннстрав
СССР
Дата опубликования описания 28Х1.1973
Авторы изобретения
Иностранцы
Хорст Тепфер и Клаус Пише (Германская Демократическая Республика) Иностранная фирма
«ФЕБ Арцнаймительверк Дрезден» (Германская Демократическая Республика) Заявитель
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО
ФИБРИНОЛИТИЧЕСКОй АКТИВНОСТЬЮ
Изобретение относится к производству биологически активных, препаратов и касается способов выделения фибринолитпческого энзима.
Известны способы выделения фибрпнолитического энзима из культуральной жидкости плесневых грибков.
Однако они не обеспечивают потучение достаточно чистых препаратов, пригодных для терапевтического использования.
Целью изобретения является повышение качества фибринолитического эпзнма.
Достигается это тем, что культуральную жидкость грибка slspergiillus ochraceus экстрагируют водным буферным раствором, экстракт пропускают через анионообменную смолу, например ДЕАЭ-сефадекс, биологически активное вещество осаждают смешивающимся с водой органическим растворителем, осадок высушивают, растворяют в воде, подвергают гельхроматографии, и протеазосодержащие фракции высушивают.
В качестве буферного раствора используют
0,05 — 0,1 М тряс-HCl или 0,05 — 0,1 М ацетат аммония.
Осаждение биологически активного вещества производят этиловым спиртом при охлаждении до мину" 20 С.
П р и м ер 1. 50 г неочищенной смеси энзимов, выделенной из культуры Aspergillus ochraceus с общей протеолитической активностью 1,4 КЕ/мг, четырежды экстр агируют
5 порциями по 200 лтл 0,05 М трис-НС1 буферным раствором при рН 7,2 путем перемешивания в течение 15 мнн. Объединенный экс-. тракт отделяют от взвеси центрифугированием прп 15000 об лтин, охлаждают до 0—
10 4 С и пропускают через колонну с ДЕАЕ-сефадексом А-50 (диаметр колонны 10 см, высота слоя 18 см). Из полученного фильтрата биологически активное вещество осаждают дооавлением трехкратного объема охлажден15 ного до минус 20 С этилового спирта. Для полноты осажден ия смесь оставляют и ри этой же температуре на ночь. Выделившийся осадок отделяют центрифугнрованием, промывают спиртом и ацетоном и сушат. Полу20 чают 4,43 г фибринолптнчески активной протеазы с активностью 11,6 КЕ/мг. 1,5 г этого препарата смешивают с 8 лтл воды и отделяют нерастворившийся остаток центрифугированием при 5000 об/мин, Раствор пропускают
25 через колонну с набухшим в воде гелем сефадекса Г-75 (диаметр колонны 2,5 см, высота слоя 95 см) при температуре 0 — 4 С.
Элюацпю осуществляют дистиллированной
375829
Предмет изобретения
Составитель Б. Таратута
Техред Е. Борисова
Корректор Н. Стельмах
Редактор Н. Спиридонова
Заказ 1750/9 Изд. № 1386 Тираж 467 Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, 5К-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2 водой фракциями по 20 мл. Фракции с 12 по 18 содержат биологически активные вещества. Эти фракции сушат замораживанием и получают 616 мг белого, хорошо растворимого порошка " удельной протеолитической активностью 15,7 КЕ/мг.
Пример 2. 20 г смеси энзимов с обще.1 протеолитической активностью 1,0 КЕ!мг экстрагируют, как это описано в примере 1, раствор пропускают через колонну, заполненную
ДЕЛЕ-целлюлозой (диаметр колонны 4,5 см, высота слоя 15 см), промытой 0,05 М трисНС1 буферным раствором,при рН 7,2. Затем колонну вновь промывают буферным раствором, а из фильтрата осаждают биологически активное вещество, как это описано в примере 1. Получают 3,19 г препарата с активностью 4,5 КЕ/мг, который затем подвергают гельхроматографии для получения высокоочищенного вещества.
1. Способ выделения вещества, обладающего фибринолитической активностью из
5 культуральной жидкости плесневых грибков, отличающийся тем, что, с целью повышения качества препарата, культуральную жидкость грибка Aspergillus ochraceus экстрагируют водным буферным раствором, экстракт про10 пускают через анионообмен ную смолу, например, ДЕЛЕ-сефадекс, биологически активное вещество осаждают смешивающимся. с водой органическим растворителем, осадок высушивают, растворяют в воде, подвергают гель15 хроматографии, и протеазосодер>кащие фракции высушива1от.
2. Способ по и. 1, отличающийся тем, что, в качестве буферного раствора используют
0,05М вЂ” 0,1М трис-НС1 или 0,05 — 0,1М ацетон
20 аммония.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что биологически активное вещество осаждают этиловым спиртом, охлажденным до — 20 С.
