Способ отмывания размороженных эритроцитов от криоконсерванта

 

ОПИСЛНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЙТВЛЬСТВУ (11) 44972?

Союз Советских I

Социалистических

Республик (61) Зависимое от авт. свидетельства— (22) Заявлено Х2.ЛО. 72 (21583%77/ЗХ-Х

{51) М Кл.

А 6 27/IO с присоединением заявки—

Государственный номитет

Совета Министров СССР па делан изобретений и отнрытий (32) Приоритет

ОпубликованоХ5. И. 745юллетень № 42 (45)! Дата опубликования описаниЖ5. Л2. 74: (53) УЛК 615.45:

: 672.ЛХ/Х2 (088.81

И.М.Думкин, Н.П. Пампутис, Н.В. Шестаков, Н.C. Епифанов, А.Л.Гольдийов и А.Н.Голубев (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

Кировский научно-исследовательский институт переливания крови (54) СПОСОБ ОТМЫВАНИЯ РАЗ40РОЖЕННЫХ ЭРИТРОЦИТОВ

0Т КРИОКОНСЕРВАНТА

Изобретение относится к медицине.

Известен способ отмывания размороженных эритроцитов от криоконсерваята путем повторного смешивания и отделения взвеси эритроцитов от промывной жидкости с последовательно снижающейся гиперосмией до изоосмии.

Для упрощения способа предлагается эритроциты смешивать с изоосмотической поомывной жидкостью,добавляемои непрерывно со скоростью не более I/Ь, предпочтительно I/20-Х/30е части общего количества жидкостй в I мин, взятой из расчета 3,0-3,5 л на Х л взвеси эритроцитов.

Пример I. 8 мл оттаянной ари= троцитарной массы (криоконсервант) — ЦОЛИПК В II смешивают с 34 мл проиывной жидкости, состоящей иэ водного раствора маннита 2,5%, хлористого натрия 0Д и пол ви-. нилового спирта 0,6;Жм.вес П.ОО®

2 Промывную жидкость добавляют непрерывно со скоростью I мл в

Х мин. По окончании смешивания взвесь ставят для спонтанной се5 диментации. После спонтанной седиментации, заканчивалцейся в течение 90 мйн, надстой удаляют. К эритроцитам добавляют взвешйвающий раствор ЦОЛИПК .Ь 8=б в обье1о ме,равном объеру отделенных от надстоя эритроцитов. После этого среда готова к примен нию. .цля контрольных исследований эритроциты вновь отделяют, в полученном нэдстое определяют свободный гемоглобин, характеризующий сохранность мембраны эритроцитов.

Морфологическая оценка эритроцитов показывает,что отмытые эритроциты,помещеннйе в сыворотку свежезаготовленной крови, имеют форму двояковогнутого диска и обладают способностью складываться в монетные столбики.

44972 I составитель С МЯлютинй

Редактор П ° TI0pèHß техред Не Сенина

Заказ

Тираж Я

Подписное

III II1IIfIH 1 осударствен ного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

МЗ, 113035, Р у 6. 4

111п дприятие <11атеит», Москва, (-59„Бережковская наб., 24

Отделение эритроцатов от отмывыцей жидкости ускоряют центрифугированием при 800 об/мин в течение L2 мин в стеклянной или пластикатной таре. В этом случае процесс отделения эритроцитов от промывной жидкости ускоряется в зараз.Центрифугирование не оказывает отрицательного влияния на эритроциты.

Количество глицерина в отмы-. тых эритроцитах составляет

2,0-2 5,о. брймер 2. 8 мл оттаянной эритооцитаонои массы (криоконсервант-ЦОЛИПК Х? ) одномоментно смешивают с 24 мл промывной жидкости, состоящей из водного раствора мвннита 2,5>о, хлористого натрия; О,9 поливинйлового спирта 0,6>о м.вес II.ООО}. После спойтанной седиментации, заканчивающейся в течение 90 MHH,íýäñòîé удаляют. К эритроцитам добавляют взвешивающий раствор ЦОЛИПК Je 8=б, равный объему отделенных от надстоя эритро т ов.

Для исследования результатов отмывания эритроциты вновь отделяют и в полученном надстое определяют свободный гемоглобин, характеризующий сохранность мембраны эритроцитов.

Еорфологическая оценка эритроцитов показывает,что отмытые эритроциты,помещеннйе в сыворотку свежезаготовленной крови, имеют

Зо 1му двояковогнутого диска m об;;G,,à T способностью складываться в монетные столбики.

Предлагаемый способ отмывки позволяет освобождать эритроциты от глицерина, сохраняя их физиологическую полноценность.

5 Несмотря на добавление к эритроцитарной массе после размораmamma раствора с малым осмотическим давлением, разрушения эритроцитов не происходит. Sro обусIo ловлено тем,что промывной раствор, смешиваясь с межклеточной жидкостью эритроцитарной массы,обеспечивает оптимальный осмотический градиент, достаточный эффектив15 ной отмывки глицерина и одновременно не приводяций к гемолизу.

Превышение скорости введения промывной жидкости выше Т/5 общего количества промывной жидкости в

2о I мин приводит к увеличению осмотического градиента и разрушению клеток.

ПРЕЦМ ЕТ ИЗОБРЕТБПИ

25 Способ отмывян я размороженных эритроцитов OT криоконсерванта путем смешивания взвеси зритроцитов с промывной жидкостью и отделения эритроцитов,например, отстаиванием, о т л и ч а ю щ и йс я тем,что, с целью упрощения способа, эритроциты смешивают с изоосмотической промывной жидкостью, добавляемой непрерывно со скоростью не более 75,предпочтительно Х/20-Х/20, части общего количества жидкости в I мин, 40 взятой из расчета З,а-э,5 л на Хл

4 взвеси эритроцитов.