Способ определения токсинов сине-зеленых водорослей
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ (ii) 512427
Союз Советских
Социалистических
Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 14.06.74 (21) 2035483/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет
Опубликовано 30.04.76. Бюллетень ¹ 16
Дата опубликования описания 02.06.76 (51) М. Кл."- б 01N 31/14
Ьсударствеииый комитет
Совета Мииис1ров СССР ло делам изобретений и отхрытий (53) УДК 576.345(088.8) (72) Авторы изобретения
Ю. А. Кириенко, Л. Ф. Лукина, Л. А. Сиренко, В. М. Орловский и В. А. Песков (71) Заявители Институт гидробиологии АН Украинской ССР и Киевский научно-исследовательский институт общей и коммунальной гигиены (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИНОВ СИНЕ-ЗЕЛЕНЫХ
ВОДОРОСЛЕЙ
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для диагностики и профилактики отравлений, для оценки токсичности при получении белково-витаминных концентратов, а также для санитарно-гигиенической оценки качества воды.
Известен способ определения токсинов сине-зеленых водорослей, заключающийся в том, что клетки водорослей высушивают вымораживанием, ресуспендируют в 0,1 н. НС1, а затем полностью разрушают растиранием в течение 6 мин с толченым стеклом. Супернатант обрабатывают 1 н. КОН до рН 5,5.
Полученный осадок удаляют центрифугированием. Частично очищснный центрифугат лиофилпзпруют. Разделение и очистку производят хроматогр афированием.
Однако известный способ не обеспечивает количественного определения токсинов биомассы водорослей.
С целью количественной оценки токсичности биомассы водорослей экстракт инкубпруют с холинэстеразой и ацетилхолином с последующим фотометрированием в .присутствии индикатора бромтимолового синего.
Способ осуществляют следующим образом.
Пример. Для количественного определения токсинов навеску (5 — 10 r) водорослей измельчают в гомогенизаторе при 8000 oo/ìèí в течение 20 мин. Полученную массу разбавляют водой до 20 мл и фильтруют при помощи фильтра Зейца. Аликвотную часть исследуемого раствора (0,1 — 0,5 мл) переносят в пробирку, добавляют 1 — 2 мл раствора холинэстеразы в боратном буфере. Смесь инкубпруют в течение 10 мин при 37 С при периодическом перемешивании, затем в эту пробирку приливают точно 0,1 мл бромтп молового синего и 0,2 мл. 2%-ного раствора ацетилхолина и повторно инкубируют в течение
10 мин. Пропорционально количеству токсина изменяется активность холи нэстеразы и субстрат не полностью разлагается на уксусную кислоту и холин. Образовавшаяся уксусная кислота изменяет рН раствора и интенсивность окраски индикатора бромтимолового синего. Изменение оптической плотности исследуемого раствора определяют на фото20 электроколориметре в кюветах 0,5 прп красном светофильтре.
Контролем служит смесь, содержащая все компоненты и дистиллированную воду в|место
25 исследуемого экстракта. Расчет изменения активности холпнэстеразы производят путем вычитания показаний оптической плотности для раствора с токсином и контроля. Количество токсина рассчитывают по калибровочно30 му графику.
512427
10 т 1
P., (остави ель С. Малютина
Редактор М. Дмитриева Текрсд Л. Камыгиникова !корректор Т. Добровольская
Заказ 1220/!6 Изд, Ла 1304 Тпракк 1029 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
1!3035, Москва. Я(-35, Раушская наб., д.:1, 5
Типография, нр. Сапунова, 2
Калибровку реакции проводят с серией растворов токсина, полученного из исследуемого материала любым извеспным методом.
Оптимальное рабочее разведение — от 1% до 0,000001%. В пробирку:наливают 1 — 2 мл раствора холинэстеразы в боратном буфере, добавляют 0,1 — 0,5 !мл раствора токсина известной концентрации. Смесь инкубируют в течение 10 мин, перемешивая при 37 С. Затем в пробирку вносят 0,1 мл бромтимолового синего и 0,2 мл ацетилхолина и повторно инкубируют в течение 10 мин. Измеряют оптическую плотность раствора. По показаниям оптической плотности строят калибровочную кривую.
Количество токсина в водорослях рассчитывают по формуле: где Т вЂ” количество токсина по сухому веществу мг/г а — количество токсина по калибровоч.ной кривой, мг;
V — объем исследуемого образца (разве дение при проведении реакции);
1 — объем после фильтрации, мл;
Р— навеска сухого вещества, г;
V2 — количество исследуемого экстракта для проведения реакции, мл.
Формула изобретения
Способ определения токсинов сине-зеленых водорослей, включающий их выделение путем
15 экстратирования водой, отличающийся тем, что, с целью количественной оценки токсич ности биомассы водорослей, экстракт инкубируют с холинэстеразой и ацетидхолп:1ом с последующим фотометрированием в присуT20 ствии индикатора бромтимолового синего.
