Способ получения гиалуронидазы

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Своз Советских

Соцналнстичееюа

Реалублнк (1 ца 1 3076 (61) Дополнительное к авт. саид-ву (22) Заявлено! 09,09.74, (21) 2058647 28-.13 (51) М. Кл.

IC12Р 13 10 с присоединением заявки №вЂ”

Гасуднрстванннй каннтат

Савата Мннннтраа СССР вв,валам нзобратаннй

N вткритнй . (23) Приоритет— (Ф) Опубликовано, 0505.7б. Бюллетень № 17 (И) УДК 577.15.07 (088.8) (45) Дата опубликования описания,17.05.7б. (72) Авторы И.М, Грачева, И,П.Афанасьева, Т.А. Сивачева и Т. М. Чудинова: изобретения (71) Заявитель

Московский техноло мческнй институт пищевой промышленности ($4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИАЛУРОНИДАЗЫ

Изобретение относится к микробиологической щюмышленностн, а именно к способам получения фермента гиалуронндазы с помощью микробной ферментации.

;,Известен способ получения гналуронидазы путем выращивания продупирующих ее микроорганизмов, в условиях аэрации в питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли н необходимые ростовые вещества.

С целью возможности использования для получения гналуронидазы непвтогенных микроорганизмов предложено в качестве продуцента нспольэовать дрожжи вида лиЖчфИ ЮФМ ев иВМ4ФМ, а из,вида фюдфУРфс юЫ мэюю ьбе нпзнм т- 54-72.

Штамм имеет следующую характеристику..Мор фологическне признаки.

Разветвленный септнрованный мицелнй с овоидными и сферическими одиночными бластоснорами на концах, сентах или вдоль нитей.

Гифы различны по длине, 1,5-4,5 мк в диаметре.

Почкующнеся клетку овальные, почти сферические и продолговатые 4-8 х 4,5-17 мк, одиночные, в нарах или цепях.

Может присутствовать псевдомнцелий.

Культуральные признаки.

Иа сусло-агаре через 3 дия при 25оС круглые ко- лонии с ровными краями, 3-5 мм в диаметре. В цент, ре колоний заостренная приподнятость. Обильная ушенн >сть белого цвета дутнйстый запах, На жидком сусле мицеливльмые! раэветвяенвН,Вн:

1 гифы и мочкумщиеся клетки одиночные, в парах и . цепочках. Обильный осадок.

На картофельном агаре истинный рвзветвлещщй ьощелий с бластоспорами ма концах, сентах, вдоль митей.

Образует от 2 до 4 щла овндных аскоенор.

Физиологические признаки. !

Отношение к источникам углерода.

Ассиьаклнрует декстрнны, мальтозу, сахарову, глюкозу, рафниозу, кснлоэу, маннит. !

Гидролиэует крахмал.

Не усваивает гинистозу, лактоэу.

Отношение K источникам азота. р0 Ннтраты не усваивает.

Рост лрн 37 С слабый нлн отсутствует.

Штамм хранится в колле1сцни кафедры техноло.

1 гнн микробиологических щюизводств Московского технологического института пищевой промышленности, Формула . изобретения

1. С1тособ получения гиалуронндаэы путем выра1I щивання продуцирующнх ее микроорганизмов в условиях аэрации в питательной среде, содержащей источники углерода, азота. минеральные соли н не-! обходимые ростовыевещества,о т л н ч а ю щ и и c a тем, что, с целью воэможности использования для получения гиалурониляэы ненатогенных микроор. ганизмов, в качестве продуцента используют дрожжи вида gggemp 4 мю ифЮМ"

Составитель Л. Минеева

Техред М. Ликович

Корректор В. Мнкизв

Редактор Л, Гончарова

Заказ 515/S Тираж 551 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров CO.P по делвм изобретене» и oTKpMTHN

113035, Москве, Ж-35, Раушсквя наб., д. 4/S

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

51307 Пример. Ютамм выращивают иа агаризованной пнтате/1ьной среде следувицего состава {в г/л): кукурузный экстракт (технический, содержание . сухих веществ 50%) 0,8; кукурузный крахмал 10,0;. (Ян4 )фО 2,0; кн2ю4 1,О; $80 7н20 6

0,5; 3И® 0,5; Ре4040,01; агар 20,0 в термостате ирн 36@С в течение двух суток. Далее готовят пи-; татезвную среду следующего состава (и г/л): кукурузный экстракт (технический, содержание сухих веществ 50%) 80,0; кукурузный крахмал ®

13,0; гистидни 5,0; глицерин 20>0Я Н4Н2РО4

13,0; gag2,5; оленновая кислота 2,0.

Лля приготовления среды крахмал предварител но разваривают путем ндгревания иа водяной бане водной суслеизии крахмала до тех пор, пока раствор не станет прозрачным. Все компоненты раство: рякуг в водопроводной воде.

Затем с иомацью 4н.раствораЯйз рН среды до. водят до 4,0. г реду стернлиэуют лри 1 ати в течение 40 мин.

После охлаждения среды до 30оС ее засевают суснензией дрожжевых клеток, полученной смывом с косяков иэ расчета 7 косяков на 3 л среды.

Культивирование ровоЬп в лабораторном фермеитере емкостью 5 л при скорости вращения меS, .

1.- шапки 300:об/мнй и прод ванин воздуха 1 обмм

::на Гобмм среды в 1 мин. Поав ферментацни в

:течение 36 часов в культуральной вящкости накапливается до 200 ед/мл гналуроиидазы, определяемой турбидиметрическим методом.

Помимо гналуронидаэы в культуральной жид кости обнаружнвают1 17-20 ед/мц -амнлазы, 20.22 ед/мл глюкоамилазы,н 10.12 ед/мл мальтазы.,2.С1тособпон.1; .отличающийся тем, . что иэ выдачу 4Ж4 peg используют штамм -54-72.