Способ получения холерных бактериофагов для дифференциации вибрионов эль-тор на вирулентные и авирулентные

 

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ХОЛЕРНЫХ БАКТЕРИОФАГОВ ДЛЯ даФФЕРЕНЦИАЦИИВИБРИОНОВ ЭЛЬ-ТОР НА ВИРУЛЕНТНЫЕ И АВИРУЛЕНТНЫЕ, отличающи.йся тем, что холерные диагностические монофаги ХДФ-З, 4 и 5 культивируют на микробных штаммах в питательном бульоне Мартена, инкубацию ведут до наступления лизиса и образовавшийся фаголизат обезвреживают.2. Способ ПОП.1, отличающийся тем, что холерные диагностические монофаги и микробные штаммы берут в соотношении 0,1:1,0 - - 0,05:1,0.

СОЮЭ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУЬЛИН,.SU, 43260

3(sg С 12 Й 7/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЭОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 2159735/13 (22) 25.07.75 (46) 15.04.84. Бюл. Р 14 (72) Н.Ф.Быстрый, А.К.Адамов и В.Г.Середин (71) Всесоюзный ордена Трудового

Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт - Мик" .роб" (53) 576.858.9(088.8) (54)(57) 1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ХаЧЕРНЫХ БАКТЕРИОФАГОВ ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ

ВИБРИОНОВ ЭЛЬ-ТОР НА ВИРУЛЕНТНЫЕ И

АВИРУЛЕНТНЫЕ, о т л и ч а ю щ и .й с я тем, что холерные диагностические монофаги ХДФ-З, 4 и 5 культивируют на микробных штаммах в питательном

1 бульоне, Мартена, инкубацию ведут до наступления лизиса и образовавшийся фаголизат обезвреживают.

2. Способ по п.1, о т л и ч а юшийся тем, что холерные диагностические монофаги и микробные штаммы берут в соотношении О, 1:1,0—

- 0,05:1,0.

Серотипы вибриона

Эль-Тор

Вирулентность

"С" П Зль-Тор ХДФ-3 ХДФ-4 ХДФ-5

Вирулентные

Огава

+(-) +(-) +(-) Авирулентные

Огава

1 5432

Изобретение относится к микробиоло. гической промышленности и может найти применение,при изготовлении препаратов,бактериофагов.

Способы получения холерных бакте5 риофагов для дифференциации вибрионов Зль-Тор на вирулентные и авирулентные в литературе не описаны.

Для получения. холерных бактериофагов для дифференциации вибрионов

Эль-Тор на вирулентные и авирулентные по предлагаемому способу холерные диагностические монофаги ХДФ 3, 4 и 5 культивируют на микробных штаммах в питательном бульоне Мартена, инкубацию ведут до наступления лизиса и образовавшийся фаголизат обезврежимают; хлореные диагностические монофаги и микробные штаммы берут в соотношении 0,1:1 — 0,05 :1.

Способ осуществляют следующим образом.

Посев маточного фага проводят в подогнетую до 36 С питательную среду при плотности 1 10 - 2 10 микробных тел на 1 мл среды при оптимальной множественности заражения 0,1 — 0,05.

Посевы инкубируют при 37 С вЂ” монофага ХДФ-3 и ХДФ-5 3-4 ч, монофага

ХДФ-4 5-6 ч до наступления лизиса

30 на 3+ или 4+. Фаголизат немедленно обевреживают фильтрацией через бактериальные фарфоровые фильтры Л3-Л5 при 300-350 мм рт.ст. Препарат проверяют на стерильность общепринятыми .методами, разработанными ГИСК

35 им. Л.Г.Тарасевича. Препараты монофагов ХДФ-З, 4 и 5 должны отвечать следующим стандартам: концентрация фаговых частиц в 1 мл препарата шаждого монофага не ниже 10 и вышее; б0 2 при этом условии ДРТ будет составлять

10 2и 10 3или выше.. Каждый монофаг должен быть чистым серотипом и нейтрализоваться на 1007 гомологичной антифаговой сывороткой за 15 мин.

Определение специфичности препарата монофагов является важным элементом его технологии. Установлено, что для этой цели необходимо применять 20 типичных эталонных штаммов вибрионов Эль-Тор, хранящихся в высушенном лиофильным методом состоянии, из которых 10 штаммов вибрионов .серотипа Инаба и 10 штаммов вибрионов серотипа Огава. В свою очередь, каждая группа представлена пятью вирулентными штаммами, выделенными от больных или вибриононосителей, чувствительными ко всем трем (ХДФ-З, ХДФ-4 и ХДФ-5) монофагам в ДРТ, холерогенными и .не гемолитичными в тесте Грейга с .2Х-ной взвесью эритроцитов барана и пятьюавирулентными штамI мами, выделенными из объектов внешней среды вне эпидсезона, устойчивыми ко всем трем монофагам ХДФ-З, 4 и 5, нехолерогенными и гемолитичными в тесте Грейга.

В зависимости от условий каждый препарат монофага, разведенный до

ДРТ, должен быть литически активен ко всем 10 вирулентным эталонным штаммам вибриона Эль-Тор обоих серотипов и полностью инактивным ко всем

10 невирулентным эталонным штаммам.

Схемы дифференциации вибрионов

Эль-Тор на вирулентные и авирулент- . ные с помощью монофагов ХДФ -3; 4 и 5, приведены в таблице,где +: поло-жительные эффекты (Лизис фагом) †:отсутствие лизиса.

Чувствительность к монофагам

1 1 1 1

543260

Продолжение таблицы!

Серотипы вибриона Эль-Тор

Иирулентность

1 I

Огава

+(-) +(-) Инаба .

Вирулентные

+(-) +(-) +(-) +(-) +(-) Авирулентные - +(-) +(-) Инаба

Техред О.Неав

Корректор Г.Решетник

Редактор О.Юркова

Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, R-35, Раушская наб., д. 4!5

Заказ 2473/6

Филиал ППП "Патент", r. ужгород, ул. Проектная, 4

Вирулентность определяют с привлечением дополнительных тестов

Чувствительность к монофагам

"С" П Эль-Тор ХДФ-3 ХДФ-4 ХДФ-5