Способ раздельного количественного определения пурина и производных пурина,пиримидина в их смеси

 

«111 556378

СОЕЗ СОВЕтсииХ

СФцееюлистичфбких

Реслублик

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 02.12.74 (21) 2079558/04 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 30.04.77. Бюллетень № 16

Дата опубликования описания 31.05,77 (51) М. Кл. G 01N 31/16

Гасударственный камитет

Совета Министров .СССР еа делам, изобретений и еткрытий (53) УДК 543.257.1 (088.8) (72) Авторы изобретения У. Я. Микстайс и А. Я. Веверис (71) Заявитель Латвийский филиал Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательского института химических реактивов и особо чистых химических веществ (54) СПОСОБ РАЗДЕЛЬНОГО КОЛИЧЕСТВЕННОГО

ОГ1РЕДЕЛЕНИЯ ПУРИНА И ПРОИЗВОДНЪ|Х ПУРИНА—

ПИРИМИДИНА В ИХ СМЕСИ

Предлагаемое изобретение относится к способу количественного определения пурина и производных пурина — пиримидина в их смеси.

Производные пурина и пиримидина — обширный класс природных соединений, входяш,их в состав нуклеиновых кислот и многих синтетических «ризпологически активных соединений.

Р1звестен спектрофотометрический способ определения пурина и производных пурина— пиримидина в их смеси, основанный на их обраоотке йодом.

Однако этот способ не обладает достаточной точностью и чувствительностью, Ограниченно количество определяемых веществ и длителен анализ.

Известен способ количественного определения пурина и производных пурина и пиримидина в их смеси путем растворения вещества в органическом растворителе и титрования основным титрантом в среде огранических растворителей, Недостатком известного способа является невысокая точность определения при анализе труднорастворимых производных пиримидина, пурина и их смесей.

Целью изобретения является повышение точности анализа.

11ðåäëàãàåìûé способ заключается в том, 1то пробу вещества растворяют в смеси воды с формальдегидом с последующим потенциометрическим титрованием вещества в смеси с добавлением органического растворителя.

Способ количественного определения пурина и производных пурина — пиримидина в их смеси основан на использовании общих физико-х«1м11ческ1«х, В том числе к1! Сл от но-основных своиств, присущих пурпнам и ппрпмцди11аы из-за наличия в обеих гетероциклических

10 системах пиримидинового цикла. «зозде11ствием формальдегида на образцы значительно увеличивается растворимость в воде как производных пурина, так и производных пиримидина и обеспечивается определение таких

15 труднорастворимых веществ, как гуанин, мочевая кислота, ксантин и др. 11ри добавлении формальдегида возможно в одной среде раздельно титровать трудноди«рференцируемые смеси, например б-меркаптопурпн-1-гипоксан20 тин, урацил+2-тиоурацил и др. Формальдегид в условиях титрования не имеет выраженных кислотно-основных свойств.

Способ заключается в следующем.

Образцы определяемых веществ при ком25 натной температуре или при нагревании растворяют в 0,5 — 10 мл водного раствора формальдегида. Затем к раствору дооавляют

50 мл воды или органического растворителя, в раствор погружают пару электродов — стек30 лянный, каломельный и потенциометрическп

556378

3 титруют 0,1 н. спиртовым раствором едкой щелочи или тетраметиламмония до появления 1 — 2 скачков потенциала на кривой титрования. Известным образом вычисляют содержание определяемых веществ в образцах.

Ошибка определений составляет +I о/О. Продолжительность определения 20 — 30 мин.

П р и м ер 1. Количественное определение компонентов в смеси 6-меркаптопурин+гипоксантин.

Навеску предполагаемой смеси 6-меркаптопурина с гипоксантином (0,10 — 0,15 r) взвешивают с точностью10,0002 г и помещают в стаканчик емкостью 100 мл. Добавляют 1 мл нейтрализованного от кислых примесей

40 -ного водного раствора формальдегида и при перемешивании в течение 3 — 5 мин растворяют. Добавляют 50 мл предварительно нейтрализованного от кислых примесей диметилформамида, погружают электроды и титруют 0,1 н. раствором гидроокиси тетраметиламмония в изопропиловом спирте до появления на кривой 2 скачков потенциала (см. чертеж, кривая 1). По первому скачку известным путем находят точку эквивалентности и объем титранта, прошедшего на титрование 6-меркаптопурина. По второму скачку аналогично находят точку эквивалентности и объем титранта прошедшего на титрование гипоксантина.

Содержание 6-меркаптопурина и гипоксантина вычисляют по общеизвестным формулам.

Пример 2. Количественное определение гуанина.

Навеску образца (0,08 — 0,10 г) взвешивают с точностью +-0,0002 г и помещают в стаканчик емкостью 100 мл. Отмеряют и добавляют

10 мл предварительно нейтрализованного от кислых примесей 40О/о-ного водного раствора формальдегида, нагревают раствор и кипятят в течение 3 — 5 мин до полного растворения образца. Затем раствор охлаждают до 30—

40 С и при перемешивании добавляют 50 мл нейтрализованного от кислых примесей диметилформамида. Погружают электроды и титруют потенциометрически 0,1 н. раствором

КОН в метилцеллюзольве. На кривой титрования наблюдается скачок потенциала (см. чертеж, кривая 2), который соответствует ко5

50 личеству гуанина. Известным способом находят точку эквивалентности, объем израсходованного титранта (V гуанин) и вычисляют количество найденного гуанина.

Пример 3. Количественное определение компонентов в смеси урацил+2-тиоурацил.

Навеску предполагаемой смеси урацила и

2-тиоурацила (0,10 — 0,12 r) взвешивают с точностью+0,0002 г, помещают в стаканчик емкостью 100 мл и добавляют 3 мл нейтрализованного от кислых примесей 40 /о -ного водного раствора формальдегида. Навеску растворяют при перемешивании и нагревании в течение 3 — 5 мин. Затем добавляют 50 мл нейтрализованного диметилформамида, погружают электроды и потенциометрически титруют 0,1 н. изопропиловым раствором гидроокиси тетраметиламмония до появления 2 скачков потенциала на кривой титрования (см. чертеж, кривая 3). По первому скачку находят точку эквивалентности и объем израсходованного на титрование 2-тиоуранила титранта (V тио). По второму скачку находят точку эквивалентности и объем израсходованного на титрование уранила титранта (V урацил). По известным формулам вычисляют содержание 2-тиоурацила и урацила в смеси.

Пример 4. Количественное определение тимина.

Навеску ооразца (0,06 — 0,08 г) взвешивают с точностью+0,0002 г и переносят в стаканчик емкостью 100 мл. Добавляют 5 мл предварительно нейтрализованный от кислых примесей

40О/о-ный водный раствор формальдегида и после нагревания до кипячения раствор перемешивают в течение 3 — 5 мин до полного растворения образца. Затем добавляют 50 мл диметилсульфоксида, который предварительно отнейтрализован от кислых примесей. В раствор погружают электроды (стеклянный и каломельный) и потенциометрически титруют

0,1 н. спиртовым раствором гидроокиси калия. На кривой титрования скачок потенциала соответствует количеству кислотной группы тимина (см. чертеж, кривая 4).

Известным способом находят точку эквивалентности, объем израсходованного титранта (V тимин) и вычисляют содержание тимина в образце.

55В378

Взято

40% -ного водного раствора формальдегида, мл

Найдено компонента в образце, мг

Относительнаяя ошибка, оо

Взято образца, мг

Среда титрования в присутствии формальдегида

Определенные компоненты

Вода-диметилформамид

Вода-ацетон

Вода-диметилформамид

Вода-ацетон

6-Меркаптопурин

Теофиллин

Гипоксантин

Ксантин

Мочевая кислота

Гуанин

Урацил

Тимин

Ксантин+-мочевая кислота

Вода-диметилформамид

100, 1 — 1,0

0,5 Вода-диметилсульфоксид

63,6

42,6

94,7

30,8

61,3 — 0,5 — 0,9

Вода-ацетон

+0,6 — 0,8 — 0,5

Вода-ацетон итрил

Вода-ацетон

81,0

61,2 — 0,6

+0,8

Пример 5. Количественное определение мочевой кислоты.

Навеску образца (0,10 — 0,12 г) взвешивают с точностью+0,0002 r и помещают в стаканчик с емкостью 100 мл. Добавляют 10 мл

40О/О-ного водного раствора формальдегида и при нагревании и перемешивании растворяют навеску в течение 3 — 5 мин. Добавляют 50 мл дистиллированной воды, погружают стеклянный и каломельный электроды и потенциометрически титруют 0,1 н. спиртовым раствором гидроокиси калия. На кривой титрования один скачок потенциала, что соответствует количеству кислотной группы мочевой кислоты (см. чертеж, кривая 5). Известным образом находят точку эквивалентности и объем израсходованного титранта (V мк) и вычисляют содержание мочевой кислоты в образце.

Формула изобретения

Способ раздельного количественного определения пурнна и производных пурина пиримидина в их смеси путем потенциометри10 ческого титрования пробы вещества в среде органического растворителя основным титрантом, отличающийся тем, что, с целью повышения точности анализа, пробу вещества предварительно растворяют в смеси воды с

15 формальдегидом.

2-Тиоурацил

6-Меркаптопурин+гипоксантин

Урацил-1-2-тиоурацил

6-Меркаптопурин+тиофилин

Тимин+4-тиоурацил

Мочевая кислота -+- гипоксантин

Барбитуровая кислота+тиофилин

120, 1

138,5

40,4

110,8

135,5

120,0

139,7

125,5

56,1

75,7

131,1

35,7

101,5

71,2

101,2

23,4

63,9

43,0

94,1

31,0

58,5

61,3

31,5

60,7

0,5

2,5

1

5

5

Вода-диметилформ амид

Вода

Вода

Вода-диметилформамид

Вода-ацетонитрил

Вода-диметилсульфоксид

Вода-изопропанол

Вода-диметилформамид

120,7

137,5

40,2

111,7

134,7

121,1

139,3

126,3

55,8

75,1

130,1

35,8

+0,5 — 0,7 — 0,4

+0,8 — 0,6

+0,9 — 0,3

+0,6 — 0,5 — 0,8 — 0,8

+0,3

55В378

Составитель В. Хованская

Техред О. Тюрина

Корректор 0. Тюрина

Редактор В. Зенкевич

Типография, пр. Сапунова, 2

Заказ 1055/18 Изд. № 403 Тираж 1106 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5