Разбавитель для сухой вирусвакцины против болезней марека

 

ОПИСАН И Е

ИЗОБРЕТЕ Н И Я

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ пщ 563I75

Союз Советских

Социалистических

Республик

t т ъ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 28.05.74 (21) 2031633/15 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 30.06.77. Бюллетень ¹ 24

Дата опубликования описания 22.08.77 (51) М. Кл.2 А 61К 39/12

С 12К 5/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 576.8.094. .29:66.063 (088.8) (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

Э. ф. Токарик, Т. Б. Слепенко, T. А. Авдеева и А. А. Потемкин

Всесоюзный научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности (54) РАЗБАВ ИТЕЛ Ь ДЛЯ СУХО Д В ИРУСВАКЦИ НЪ1

ПРОТИВ БОЛЕЗНИ МАРЕКА

1

Изобретение относится к разбавителям сухой вирусвакцины против болезни Марека из вируса герпеса индеек.

Сухая вакцина против болезни Марека отличатся от других тем, что вирус в ней неустойчив и плохо сохраняется в свободном от клеток состоянии. Использование эффективного разбавителя вызвано необходимостью сохранить исходную активность разведенной вакцины, предназначенной для вакцинации 500 †10 цыплят, в течение всего периода вакцинации (2 ч). Поэтому особое значение приобретает разбавитель для сухой вакцины.

Известны разбавители для нативной вакцины против болезни Марека, представляющие собой солевой сбалансированный физиологический раствор с добавлением сыворотки крупного рогатого скота до концентрации

10% (1). Однако он оказался малоэффективным для сухой вирусвакцины. Сухая вакцина, суспендированная в этом разбавителе, уже через 1 ч при комнатной температуре сохраняет только 60% исходной активности, а через 2 ч — 30%.

Известны также разбавители — фосфатный буфер или среда 199 с добавлением и без добавления 4% триптозофосфатного бульона; смесь СФГА, представляющая сахарозофосфатный буфер с добавлением аль2 бумина и глютамата натрия, сахарозофосфатный буфер с альбумином (СФА) (2). Наиболее эффективным оказались разбавители, содержащие стабилизатор альбумин и

5 сахарозофосфатный буфер в качестве его растворителя (СФГА, СФА). Однако этн разбавители обладают антигенной активностью, очень дороги (цена 1 кг бычьего сывороточного альбумина — 3,4 тыс. руб.; альбу10 мина из сыворотки крови человека—

8,6тыс. руб.) и технология их изготовления сложна тем, что общепринятый метод стерилизации — автокл авирование — непригоден.

Все это ограничивает их применение, особен15 но в промышленном масштабе.

Цель изобретения — разработка разбавителя, повышающего длительность сохранения исходной активности вируса, дешевого, простого в изготовлении и не обладающего

20 антигенной активностью.

Это достигается тем, что в качестве стабилизирующего вещества разбавитель содержит необладающий антигенностью и устойчивый к воздействию высоких температур

25 пептон, а в качестве его растворителя — глициновый буфер с рН 7,0 — 7,2 при следующем соотношении компонентов, %:

Пептон 1 — 10

Глициновый буфер с рН

7,0 — 7,2 Остальное

563175

Активность вакцины после разбавления, в ФОЭ/мл

Физиологический раствор включающий 10% сыворотки крупного рогатого скота

Время, ч

1чъ¹

2О -ный раствор, пептона

СФГА

1150(100)

1100(96)

1000(87) 1050(92)

1000(87)

1000(87) 500(43)

400(35)

100(9) 3000(100)

2000(67)

2250(100)

2100(94) 3000(100)

2000(67) 1000(33)

200(7)

1330(59)

70O(31) 1000(84)

1000(84) 1200(100)

1000(84) 500(42)

ЗЗО(27) IV

Состав пель Л. Ллексеенок

Техред 3. Тараненко

Корректор Л, Брахнина

Редактор Н. Богатова

Заказ 1667/6 Нзд go 590 Тираж 693 Подписное

НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, >К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Предлагаемый разбавитель значительно дешевле известных (цена 1 кг пептона—

13,руб.) и эффективность его действия не ниже СФГА, являющегося в настоящее время лучшим разбавителем для вакцины против болезни Марека.

При получении предлагаемого разбавителя навеску пептона для получения 2 — 10 ного раствора растворяют в бидистиллированной воде. Для осветления раствора его подкисляют 1 н. соляной кислотой до рН

5,5 и кипятят в течение 30 мин, фильтруют и нейтрализуют 2 М глициновым буфером (рН 8,6) до рН 7,0. После этого разбавитель расфасовывают, герметически укупоривают

Из данных таблицы видно, что предлагаемый разбавитель (2%-ный раствор пептона на глициновом буфере) так же, как и СФГА, хорошо сохраняет титр вакцины в течение

2 — 3 ч, в то время как разбавитель, включающий 10% сыворотки крупного рогатого скота значительно, снижает титр вакцины уже в момент разбавления (на 50% от исходной активности).

Формула изобретения

Разбавитель для сухой вирусвакцины против болезни Марека, содержащий стабилизатор и растворитель его, отличающийся тем, что, с целью повышения длительнои стерилизуют автоклавированием при 1 атм в течение 1 ч, Разбавитель обладает надежными стабилизирующими свойствами при концентрации пептона — 10%, но для прак5 тического применения наиболее пригоден разбавнтель с концентрацией пептона, равной 2%.

Б таблице приведены примеры сохранения

10 активности вакцины в предлагаемом разбавителе в течение 2 — 3 ч после ее растворения в сравнении с другими известными разбавителями (в разбавители вносили равное Количество вирусвакцины; данные в скобках—

15 / от исходной активности в СФГА). сти сохранения исходной активности вируса и снижения стоимости разбавителя, в качестве стабилизатора разбавитель содержит пептон, а в качестве его растворителя — гли20 циновый буфер с рН 7,0 — 7,2 при следующем соотношении компонентов, о/о.

Пептон 1 — 10

Глициновый буфер с рН

7,0 — 7,2 Остальное

25 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Биологические и химиотерапевтические ветеринарные препараты. M., 1963, с. 65.

2. Патент США № 3783098, кл. 195-1.1, 30 1974.