Способ получения антибиотических веществ
О п (и, 588926
Союз Советских
Социалистических
Республик
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К flAYEHTY (6!) Дополнительный к патенту— (22) ЗаЯвлено 0806.73 (21) 1931001/30-15 (23) Приоритет 08.06.72 (32) 57058/72 (51) М . Кл, С 12 D 9/14 (31) (33) Япония
Гее деретееннын немнтет
Оееета мнннетрее СВОР на делам наебретеннй н етнрытнй (43) Опубликовано150128. Бюллетень №. 2 (45) Дата опубликования описания 1201.78 (53j УДК 615.779.931 (088. 8) Иностранцы
Апуси Аоки, Рикия Фукуда, Тосно Накаябу, Кэйдэиро Исибаси, Чиеко Такэичи и Мицуо Исида (Япония) (72) Авторы изобретения
Иностранная фирма Санкио Компани Лимитед (Япония) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ
Неб
Изобретение относится к способам получения антибиотиков с помощью микробиологического синтеза, в частности к способам, основанным на культивировании в качестве продуцента видов, относящихся к gkraptornyces.
Йзвестен способ получения антибиотиков, по которому нродуцент антибиотиков, относящихся к 5 t rep t o w y ce e e культивируют на жидкой питательной среде, близкой к нейтралЬной, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, в аэробных условиях.
После культивирования продуцента производят выделение целевых продуктов.
По предлагаемому способу получейия антибиотиков возможно получение в одном технологическом т икле соединений общей формулы (1(2 где Яа — водород или метил;
М2 — метил илк пирроилоксиметильная группа — СН,00
И
5 Н Д вЂ” метйл, этил, причем в том случае, когда %т —.водо род, то к — метил или пирроилокси метильная группа и Т з — метил или этил, l0 а в том случае, когда Ра — метил, то
М вЂ” метил и Яа-: метил или этил, и формулы TI 6н
Ъ о(и, По предлагаемому способу в ка25 честве 6Ф re р1о m у се Е берут штамм
В-41-146 (депонирован в научно-исследовательском институте промышленной микробиологии агенства промышленной науки и техники Японии, I3i ko ken ki n k i
30 Р 1438) .
588926
Культивирование продуцента ведут на жидкой питательной среде, близкой к нейтральной, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли,в азробных условиях способ предусяатри вает выделение целевого продукта из культуральной среды.
В результате обширных исследований авторами изобретения было установлено что новый антибиотик — соединение 1, которое названо заявителем В-41, производится микроорганизмами штамма
В-41-146, то есть штамма, который относится к роду Skveptowусез, не только значительно превосходит по акаРицидной активности органические соединения, обладающие акарнцидной акти. ностью, но также может быть эффективно использован для борьбы с сельско,6 хозяйственными и садовыми вредными насекомыми, в частности с тлей, личинками насекоьых отряда Лепидоптера и т.д.
Антибиотик В-41, который представляет собой активнодействующий компонент о инсектицидной и акарицидной композиции, можно разделить на девять типов вещестВ А1 У А% У АЬ У АМ, В.1, Ва
В Р С1 H C
Физико-химические свойства этих ве 6 ществ приведены в табл. 1.
588926 c1 РЪ
an л
СЧ
I» х
ОЪ ь 4 Ф
СЧ В
° Ф и
° ° й1
° Ф 1 °
C0 Pl
СЧ ОЪ с
СЧ an
1О о
И
Ъ ж о
Ю С«Ъ
CO «Ф
М »
С» С»
С«Ъ «Ф
СС1 1 E Ь
СЧ О
СЧ
4 х в
CO ь 4
g (ч в
° Ф ° ° и х
° « «Ф ми
° ° ° Ф
Ж;и о
И
® и ф оа о ED л
4 х
Ю (Ч
1»
g в
ОЪ СЧ аО 1 с с
Со Ю
С»
О\
ЦЪ
М.СО
С»
1А
° и х
СЧ В
Ф
СЧ л
М о ж
Я
v (Ч
° Ф л
1 (Ч
4 х в
СЧ
CO
М
Ю
«Ф 1О иЪ аО
Ь
CO 0Ъ
СЧ
Р Ъ
00
fh
Ю
° Ф
СЧ
ССЪ
ad о
Ф ж е" и
СФЪ (Ч
g в ль
ССЪ Ю
Ь Ь
СО CO
\О
Ch л
CO
1О
СЧ
С«Ъ
00 я
М
Ch (Ч О в а С»
° Ф
СЧ & e
1 о
0 ч ж
С»
С0
Ln л
С«Ъ
Саа
С Ъ
Ж в
<Ч
СЧ
Щ в
1 »
С«Ъ
CO
O ь
+ ю.
° Ф в
1« о ж м
««Ъ и
СЧ
СЧ л
СЧ
СЧ л
М в л
СЧ
ОЪ
М (»
О
Ю
Ю л
+ («Ъ
ССЪ 4
° Ф («I В
C)
С» л
О о
Ф
Щ
01
v ф 1С оа л
4 х в
Ю
С«1
1»
Id в
Л1
»
СЧ
1 »
1О ю I» Ф х
СЧ & о Ф
an
Чх х àoH ао оа
111
) л
% ь 4 Ф g
СЧ &
1 о
Ф ч ж
СЧ
A и
СЪ
C)
\О л
+ Ф СО л
» с
Ю В
С»
Ю ÑO
an ñO
М »
Ю Со
1 ь
Г»
М в
О\
М
Г Ъ л
М о х е
Ц
Id е х
1 х е
1 IaI о н х о
Х OI
m О х х
e o
СО CO an Ch
4 anлю
М с с с
С0 1» СЧ СО
1О . \О
СЧ «I an
CO В С0
% с
Ю CO Oa
1 аО
<«Ъ Ch С Ъ
° Ф С«Ъ 1
% ъ С
Ю CO а
1 10
С«Ъ О\ С«Ъ
СО m
Ъ с Ь с0 л
С7 С»
v ж ж х
С3 Ch хо ф х5 а х е Ф х х
Е е к о е ехх а хо
1»
3 ф х
Х Oa td а х х ах к н0 а ф
Х g Ц е оо к н
О оф
0 OÈ
g
p,+ е
И о а ао н н х е е И
И о х
I Х о х
o o
ld ф
Х Ф
rd ни
adII а
Е»
IC е:> 5о
ad с г а х о" о 1 е е еМ ех
О. ла О
ХО Х Н
43RЯ 4 ф О L
z8 ай
Д Д Р3
„ 1 х я еббр
4 31a1
О ad хах ф-1 IC хвю
vs*
ы
О, Ф х ео
Нн ое кх
4 о
C Cd е а0 н хк ф I
И М им о и ° .о
-OКО о
Я g в«
Щ $1«I «g«
0в «О а с х ч
dI IC 1aI O и 5х а
588926 а
Зн о
Р
1 а
М х
1 х аф
2 %
Вн
Э Э жо юона
-eu
Э Э хо вой
- cu о ° гч о m а су л4 лФ ар
И 3н о он о ч ж
Ф Э
М О
03 ни
1 о а
on
0m ж OI фя л Г ъ о
° ф л л
1 а а о и о
Е х а о х х о
Э х х х и
1 Х оо х m хи х в
Э Э
1 Л ао а оло
Э со о
e o m ало
Э Э хо
° Ф LA (л lA
- о ю о ч 05
° э л л ллем- и
Э Э
ыо
СЧ Ф N 1 Л о о и) О 5 ю л л л И
Ф Э
Ы О о л кл о а0 лиз 05 е лЕ и
I а Э о > а
Й!н э
ГАХН ХЭо ох ххо ах -ox н ахэ1
@9m Но
9 Q P6 сч
g хОъ 0) хл и IRt о хи 3 иххое ю
uuкхоо хох оа я - Q юсч х
Х I
Фо ЯЭ Э
О11 ХХХХ хххео а аа внэо
410 О
ЭОа 901:В н х Ф Мх а
-ouх ао
ЕЭНЮЕН1: цаео1:лх
Щ
Щ
3 и х х а м х о рхх в хйх-R ф ОВФО хйо @ фонио х ceo
tume
9 ОХ
Й- Йй
8 4 оа
I 6 °
О а5 и
Э х
1Я 63 оа хе аа
Э и их х
Э хо
Э 3
588926! н е и э ео м х
О. о Ф ж !
»
I н
Э
Ю ие ео
f4 х
0 о л
z л о
Ф ж
v йо
05 е и о 0 ж !! и о
2 иэ ео !
Н е
Ol
В1 иэ е о
1!3 Х л о
Г о
Э
I!1 о н
2 ие ео м х л
„,о
4 к ж
1 н
Э
5 иэ ео
fo x йо
c v
1 о
00 ж о
Э х и
Э
Э
A х v
X IX ! о о m х v х х в
1 Ж
Ie а з х Р3 и д Э Хл ннМа!
o v ад ч о
I ЖC(XI ьх В
u I!I e g
3 и аRoai3, ! .нэ а . их <ч иР\ ехл ннма! о и а.х! оа
Ц 1 с х но а и
1 к
v ае х охх
Й R9 и но э х х о нц
l. 1 Ц о х щ:". 3 он ма а н уо
I н
Э
v e эо ах
Э йВOOxI и х е
1! !1ХХ онеа
I!! V Ê И Е еоеео ххцшх
М о л о .! -ох 1 чх! х 1!1<х!
Э Э 1!! е я щ «не к н<их оинхй х едено
ЦО я О е н н х х о mхоо
4 Э О Х с
Оохин+ х 4О хО
ooze
О мах х voeì !т
Е Х 1 Й !!! х 0 w о ххжн н
V. 0ÖV1а
Q ф ф ф Ы с
4+Хэа0 о н х < хех>
xNegco )!
Э 1 л
I!!ХКЕ ИХ о ах>о аох х -I!I хее к ео цхью н хаохл х но!:е -e
ЕХ4ЦИ X аоо ао э Nx ц ° д
Н 4 4 хиох «о ах &м х
5 а н нхя э «с хиэах х х ин ю4ц
e I!I v х .делса
e I Х AX лба и!<5
Й о е50 -д ми хю À
V nt X X 1!I е 1 хх эн х
g v ñ е ирмне «а
ЭХИЦХИ на не
-еаао ю1д ох
Зйенонх
X Оg О 4 Х Э хн ooeI!I иэ2иххн х vov о.эи ем н
V 4 %X 0 3 Е
o e e x o I!1
g x Io 1 н м н
-кх а о о. ооаэхко
Р4 н!О 1:и
5 о п1 е х х х х х фэ э э
О 1.
vvevge ех 1н ажао хм и
4О Х МУ
Rill I «к ф
x2ev х э g e се(4» 4 ° !Ц < 4
vae4mO1
4 Ц X 1 Оi и с йа о
@(et: 401 õ
5 х х хе -йХ мехи ае
Ца Фан
eg Ac и х -эх а х о !с И и!
588926
Таблица 2
Силикагель F
Система растворителей
1. Ацетон: н-гексан=30:70
0,47 0,32 0,42 0,44 0,47 0,61 О 63 0,22 0,24
2. Этилацетат: бензол 50:50
О 61 О 62 О 63 О 65 О 79 О 80 О 82 О 45 О 47
3. Этилацетат: хлороформ 25:75 0,17
0,35 0,39 0,41 0>75 0,79 0,81 0,12 0,13
4 . Ацетон: бензол=40: б О
О 85 О 75 О 77 0 79 О 92 0 92 О 92 О 60 0 63
5. Ацетон: бензол=15:75
О 39 О 32 О 39 О 39 О 57 О 51 О 53 О 11 О 13 с б. Этанол:Я-гексан 2:98
О О
Таблица 3
Глинозем Р
Система растворителей (табл.2) А1 в
В>
0,55 0,16 0,32 0,34 0,67 0,92. 0,92 О
0,56 0,10 0,21 0,23 0,73 0,81 . 0,83 О
О 40 0,10 0,15 О 17 О 63 0 65 О 67 О
0,27 0,05 0,09 О,ll 0,35 0,45 0,47 О
0,17 0,03 0,07 0 09 0,20 0,42 - 0,44 О
Величины Р для укаэанных веществ, которые получены с помощью хроматографии в тонком слое с применением пленки для хроматографии в тонком слое, содержащей флуоресцентный реагент, (вы-,б пускаемый фирмой Токио Касеи Когио М под торговым наименованием Спотфилм
Из исследования приведенных физико- химических свойств, в частности очень четкого расщепления линий масс-спектра, и результатов анализа с помощью рентгеновых лучей следует, что компоненты флуоресент ), приведен в табл. 2 и 3
Определение проводили, измеряя интенсивность флуоресценции, которая достигалась в тех случаях, когда каждое иэ веществ облучали УФ-лучами с длиной волны 2 536 я.
А, Ag, А4, В1, В, В, С и Ст антибиотика В-41 характеризуются общей структурной формулой I, где радикалы имеют значения, приведенные в табл. 4 °
588926
Таблица 4
° Л
Н
Снз
СН3
Н снэ
Н
CHS снз сн
В2
Н сн
-At„eC к
-At eeC к
СН3
С,Н6 снэ
Н
СН5
Н
Н сн -ососн, .сн сн сн
0494 г с11э
Снгснгснз
ОН
CHS
0Н
25 СНЗ сн
В1
СИ1
35 си
tNoC !
Из изложенного выше становится со- 30 вершенно очевидно, что компонент А1 .антибиотика В-41 отвечает структурной формуле П. ежив
Поскольку какие-либо антибиотики, отвечающие приведенным формулам и обладающие указанными физико-химическими свойствами, неизвестны, совершенно очевидно что вещества В-41 иэобреI
50 тения являются новыми антибиотиками.
Штамм В-41-146 рода, который производит антибиотик Ц;41, обладает следующими микологическими характеристиками °
1. Морфологические характеристики:
В самых обычных лабораторных сре;дах иэ тонкодисперсного разветвленного субстратного мицелия образуется динный воздушный мицелий и образуются мутовки со спиралями или петлями.
На ранней стадии .не наблюдается фрагментация мицелия.
Споры с более или менее короткими наростами от 0,6 до 0,9х1,1-1,5 мкм образуют цепочки с 10-50 конидиями.
На поверхности спор имеются короткие бородавчатые наросты.
Спорангии и склероции не наблюдаются.
2. Характеристики культуры в различных питательных средах, I) Сахарозо- нитратный агар: .
Хороший рост, бесцветность субстратного мицелия, с обратной стороны бледно-коричневый, воздушный мицелий слабый, . полупрозрачный, кожистый, растворимый пигмент бледно-коричневый.
П) Глюкозо-аспарагиновый агарг
Интенсивный рост; бесцветность субстратного мицелияг с обратной стороны бледно-коричневыйг воздушный мицелий обильный, окрашенный в серый цветг растворимый пигмент бледно-коричневый.
Ш) Глицерино-аспарагиновый агар
Интенсивный рост; бесцветность субстратного мицелия; с обратной стороны бледно-коричневьФ; воздушный мицелий белый,.а на срезе на белом фоне образуется множество ярких серовато-коричневых точек; растворимый пигмент желтовато-серый.
IV) Агар иэ неорганических солей н крахмалаг
Интенсивный рост; бесцветность субстратного мицелия; с обратной стороны желтовато-серый; воздушный мицелий серый,а на срезе на сером фоне обраэуется множество бледно-желтоватых точек, растворимый пигмент яркий оливково-серый.
5889 6
V) Тиросиновый агар:
Интенсивный рост; субстратный мицелий серовато-желто-коричневый; с обратной стороны коричневый; воздушный мицелий серый, а на срезе на сером фоне иногда образуются желтоватосерые точки; растворимый пигмент яркий коричневый.
VI) Питательный агар:
Слабый рост; бесцветность субстратного мицелия; с обратной стороны бледно-коричневый; воздушный мицелий слабый, белого цвета, растворимый пигмент не образуется.
VII) Агар на основе дрожжевого и солодового экстрактов:
Интенсивный рост; субстратный мицелий серовато-желто-коричневый; с обратной стороны желтовато-коричневый„. воздушный мицелий обильный серого..
20 цвета, а на срезе на сером фоне образуется множество бледно-желтых пятен; растворимый пигмент желтый;
УШ) Овсяно-мучной агар:
Интенсивный рост; субстратный мицелий бесцветный; с обратной стороны
25 оливково-серый; воздушный мицелий серый, а на срезе образуются бледножелтые точки; растворимый пигмент бледно-оливковый.
3<1
3 Физиологические характеристики:
T) Температурный интервал роста:
18-37 С.
Оптимальный температурный интервал роста: 25-30 С.
П) Разжижение желатины: медленное, но сильно положительное.
Ш) Гидролиз крахмала: сильно положительный.
IV) Коагуляция снятого молока: положительная (28 С) .
V) Образование меланина: отрицательное.
УХ) Восстановление нитрата: положительное.VII) Утилизация различных источников углерода (агар Придхэма и Готтли-. еба).
Степень утилизации:
+++Рафиноза.
++ 11 -глюкоза,=О -фруктоза, сахароза ) -рамноза .tI -инозит 7) маннитол.
+ L -арабиноза, 1) -ксилоэа.
По указанным свойствам этот штамм наиболее близок штамму 8krepkomycee
ChаНа поо Двн.s.tS . (Международный жур-. нал систематической бактериологии, том 18, И 2, стр. 97, 1968), однако этот штамм .характеризуется следующи. ми отличиями от штамма В-41-146.
1) Штамм В-41-146 интенсивно образует мутовку, тогда как штамм g4 . сяо140tfoogerr& jg моноподиально разветвлен. 65
2) Поверхность спор микроорганизмов штамма В-41-146 бородавчатая, тогда как поверхность спор микроорганизмов штамма &1г. сЬаНа it аосте п sos покрыта иглами.
3) На агаре на основе дрожжевого и солодового экстракта и arape на основе неорганических солей и крахмала микроорганизмы штамма В-41-146 íà сером фоне образуют бледно-желтые точки, тогда как микроорганизмы штамма $kr.
charta поофе к Э S таких точек не образуют.
4) Микроорганизмы штамма B-41-146 усваивают Ь -арабинозу, 17 -ксилозу и Х -инозит, тогда как микроорганизмы штамма gkr. спаНалоофе fist& такие источники углерода не усваивают .
Учитывая эти отличия по микологическим свойствам, авторы изобретения пришли к выводу, что штамм В-41-146 является новым видом микроорганизмов
Рода /(rept щусЕВ.
Известно, что актиномицеты проявляют тенденцию к мутации в естествен-. ных условиях и под воздействием таких искусственных факторов, как, например облучение Уф-лучами, облучение радиоактивными лучами, а также прй обработке химическими средствами и т .д .
То же самое явление наблюдается при испытании штамма по изобретению В-41146. Предлагаемый штамм В-41-146 включает в себя все такие мутанты, то есть он включает в себя или охватывает все штаммы, которые производят антибиотик
В-41, и те штаммы, которые невозможно четко отличить от штамма В-41-146, а также их мутанты.
При осуществлении предлагаемого способа антибиотик В-41 получают выращиванием штамма В-41-146 в соответствующей питательной среде с последующим его выделением. Этот штамм можно выращивать в соответствии с методами выра- щивания в неподвижном состоянии, но при получении антибиотического вещества в больших количествах наиболее предпочтительно выращивать штамм в соответ» ствии с методами выращивания в жидкой среде с аэрацией и перемешиванием.
В качестве питательной среды можно использовать любую питательную среду которую обычно применяют для выращивания штаммов, относящихся к роду Strep
kornyCes . Группа веществ, являющихся источниками углерода, включает в себя крахмал, декстрин, глюкозу, мальтозу, кукурузный экстракт и мелассу, а грувпа веществ, являющихся источниками аэа та включает в себя мясной и дрожжевой экстракты, соевую муку, казеин, сульфат аммония и нитрат аммония. В случае необходимости в питательную среду можно добавлять неорганические соли калия, кальция, магния, железа, меди, 17
588926 цинка, марганца, кобальта и др. эле- земом и элюируют хлороформом. Эффекментов или микроэлементов. тивные по акарицидной активности фракДля выделения антибиотика В-41 из ции отбирают и отгоняют хлороформ.Эту жидкой питательной среды разработаны операцию повторяют несколько раз, в и применяются такие обычные методы, 5 результате чего получают 8,2 г сырокак экстрагирование органическим рас- ro вещества. При использовании сырого творителем в присутствии или в отсут- вещества в концентрации 2 мг/мп его ствии адсорбента или вспомогательного акарицидная активность составила 100%. агента. В этом случае клеточную мас- Сырое вещество пропускают через су можно отфильтровать от жидкой 10 колонну, заполненную адсорбентом среды и затем проэкстрагировать opra- geyhadex L. H-20 (торговое наименическим растворителем, например ме- нование продукта, выпускаемого фирмой танолом или ацетоном, или же жидкую Фармасиа Ко ) и элюируют метилосреДУ М«« НеПОСрЕдСтвенно экстраги- вым спиртом. Получают вещ чают вещества которовать таким органическим растворите- рые являются основн с о новными компонентами ю ей последовательностиг лем как хлороформ, этилацетат, бен- B-41, в следующей
У
Ь и A . Однако каждое зол, н-гексан или циклогексан. Agi В1, В, аз, H y Д
Для очистки маслообразного сырого из этих веществ содержит некоторое
В-41 которое получают при количество веществ смежных фракций, вещества —, к вие чего их выделяют в виде далении растворителя иэ экстракта, вследствие чего их выд уд н применяют известные способы очистки, смеси двух в ще х ве еств а именно: В +A
И в частности способ хроматографическо- »g+Ag
+А +А . Смесь В +A обрабатывают
2 го выделения в колонне или способ экс- в силикагеле р вой х оматографической олонне и элюируют смесью хлороформа трагирования растворителем. колонне и э ру
В приведенных примерах активность = и этилацетат . у
Смесь В + A + A также обжидкой среды определяют методом оку- 115 мг А . Смесь ают в силикагелевой хроматогранания паутинных двупятнистых клещи- рабатывают ков. Для этого листья обыкновенной фа- фическай колонне олонне и получают 200 мг Вд. соли, на которых паразитируют паутин- и и 30 мг В, который идентичен Вд Даче ез глиноземную хроматогра ичеую ографичеонк п опускают оставшуюся ные двупятнистые клещики, окунают и э лее через г выдерживают в течение 1 мин в 70%-ном скую колон у р у
oN с или группу веществ A,+ A> и получают 372мг
4 5 тем их сушат на воздухе и опред акарицидную активность по истечении 3 которую пропускали указанн вое масло, повторно и многократно проI
П и м е р l. 30 л жидкой питатель- мывают метиловъм спиртом и полученные
Н 7 21 д р ащ элюаты пРопУскают чеРеэ силикагелевУю хроматографическую колонку, вследствие с Н 7 2) содержащей 2,0Ô ,@ чего получают 78 мг компонента С проОЪ ки соевых бобов и 0,2В дукта В-41 и 52 мг компонента С ваемый сосуд емкостью 50 л и затем стеВ-41. рилиэуют нагреванием. Штамм В-41-146 дукта В- 1. инокулируют в указанную среду и прово- Для приготовлвни р лвния предлагаемой индят процесс выращивания при аэробном сектицидной акарицид и и ной комнозицин одперемешивании среды при 2ФС, расходе 45 но или несколько уч пол енных таким обтока воздуха на аэрацию 8 л/мин и разом веществ A- yi ф э в A A В «Вз Су и Сд азбавляют наполнителем,,перемешивании со скоростью мешалки продукта B-41 раз
250 об/мин. Процесс выращивания прово- после чего в случа сл ае необходимости в дят в течение 120 мин причем питатель- эту композицию добавляют другие вспоная среда приобретает яркую желтую 50 могательные агенты. ак окраску. ооле
П 300-кратного раэбавле- основе таких веществ м ств можно приготовсты г ан лированные и тонкодисI ния акарицидная активность жидкой сре- лять дусты гранулирова ды составила 100Ъ. осле этого клеточ- персные гранулиров ли ованные препараты,сманую массу отфильтровывают и экстраги- чиваемые корош, У ки эм льгирующиеся конаэ оэольные препарат ацетоном который затем отгоняют. z,-, центраты,масляные р
Получают 44 г коричневого вещества. ты и т.д.Операции .Опе а ии очистки можно преЭто вещество экстрагируют гексаном, который потом отгоняют. Остаток рас- не полностью очищенное вещество можно использовать в качестве активнодействуго компонента. В случае необходилового спирта и приготовленный раст- ющего компонента. мости использования сырого вещества вор оставляют стоять на ночь нри темтнвно ейстй о адок от- как такового в качестве актнвноде стпературе -20С; выпавший осадок отвующего компонента вполне достаточно фильтровывают. Метиловый спирт отго35 г коричневого мас- очистить сырой продукт до такой степеняют и получают г к ла. Полученное таким образом масло ни, при которо в к хроматографируют на колонне с r а колонне с глино- 5 вес.ч./1000000 вес.ч. его акарицид588926
20 ная активность была бы равна 1000. В этом случае содержание антибиотика
В-41 в сыром продукте составляет приблизительно 50%, а остальная часть приходится на долю примесей жидкой ) среды.
Приведенный в данном описании термин наполнитель использован для обозначения искусственного или природного неорганического или органи- П1 ческого материала, который добавляют в инсектицид с целью упростить перенос его активнодействующего компонента на различные обрабатываемые объекты, в частности на растения, клещей, 15 вредные насекомые и т.д., или с целью упростить хранение, транспортировку или обращение с активнодействующим компонентом.
В качестве примеров подходящих твер20 дых носителей можно указать неорганические вещества, в частности глину, тальк, диатомовую землю, каолин, бентонит, карбонат кальция и искусственный-силикат кальция; натуральные и 25 синтетические смолы, в частности кумароновые и алкидные смолы и поливинилхлорид; воски, в частности карнаубский и парафиновый воск; скорлупу орехов, в частности грецких и кокосовых, а также соевую муку.
Приемлемы также и жидкие наполнители или носители, такие как вода, спирты, в частности этиловый и изопропиловый, и этиленгликолЫ простые З5 гликолевые эфиры, в частности этилен1гликольмонофениловый и диэтиленгликольмоноэтиловый; кетоны, в частности ацетон, метилизобутилкетон, циклогексанон, ацетофенон и изофорону простые эфиры, в частности тетрагидрофуран и диоксану ароматические углеводороды, в частности бензол, толуол, ксилол и метилнафталин; хлорированные углеводороды, в частности трихлорэтилен и четыреххлористый углерод, а также ниэ . кокипящие, средние и высококипящие фракции нефти, которые включают в себя керосин, легкие масла или ароматические углеводороды.
Группа примеров подходящих пропеллентов включает в себя фуроновые газы, сжиженные нефтяные газы, метиловый простой эфир и винилхлоридные мономеры.
Для эмульгирования, диспергирования, смачивания или распределения по поверхности используют поверхностноактивные вещества, которые могут быть как ионогенными так и неионогенными.
Группа приемлемых анионоактивных по- б0 верхностно-активных веществ включает в себя натриевую и кальциевую соли лигносульфокислоты, натриевую соль лаурилсульфокислоты и натриевую и кальциевую соли додецилбензолсульфокислоты и натриевую и кальциевую соли додецилбен золсульфокислоты. Группа примеров приемлемых катионоактивных поверхностно-активных веществ включает н себя высшие алифатические амины и продукты конденсации окиси этилена и высших алифатических аминов. Группа примеров подходящих неионогенных поверхностно-активных веществ включает в себя глицерины жирных кислот, сложные эфиры сахарозы жирных кислот, продукты конденсации окиси этилена с высшими жирными кислотами, продукты конденсации окиси этилена с алкилфенолами и алкилнафтолами и сополимеры окиси этилена с окисью пропилена, Предлагаемая инсектицидная и акарицидная композиция может содержать защитный коллоидный агент, в частности желатину, аравийскую камедь, казеин, поливиниловый спирт или карбоксиметилцеллюлозу, или тиксотропный агент, в частности полифосфат натрия или бентонит. Кроме того, композиция может содержать другое соединение, которое также характеризуется инсектицидной и акарицидной активностью, в частности такое как 2-(1-метилпропил) -4,6динитрофенил- Р -диметилакрилат,ди(п-хлорфенил)-циклопропил-карбинол, М вЂ (2-метил-4-хлорфенил) — М, М диметилформамидин, 2,4,4,5-тетрахлордифенилсульфон, 1,1,-бис-(п-хлорфенил)
-2,2,2-трихлорэтанол, 0,0-диэтил- 6—
-(2-этилтио)-этилфосфордитиоат,0,0-диметил- 9 -(Н -метил- К -формилкарбамоилметил)фосфордитиоат, 2-втор. бутилфенил- М -метилкарбамат или м-толил- И -метилкарбамат, или минеральное масло, вследствие чего эффективность композиции значительно увеличивается, а в некоторых случаях можно ожидать синергический эффект. Предлагаемую композицию можно использовать в смеси с любыми фунгицидами,, регуляторами роста растений, удобрениями и т.д.
Об эффективности предлагаемых инсектицидных композиций с акарицидным действием можно судить из приведенных примеров испытаний.
Пример испытания 1.
Иэ каждого из эмульгирующихся концентратов, которые содержат по 20% одного из веществ A1 — A4, В1 — В, Сз и продукта  — 41, которые были выделены по примеру 1, разбавляют до определенной концентрации. Листья фасоли обыкновенной, зараженные двупятнистым паутинным клещиком, погружают и выдерживают в течение 1 мин в приготовленных химических растворах. Затем их сушат на воздухе и по истечении 24 ч определяют акарипиднуюактивность в процентах. Данные полученных результатов приведены в табл.5.
588926
Таблица 5
Антибиоти
Акарициднан активность а
Концентрация раство а ч млн р
20 . 10 5, 2 5 1 25 0 63 (0 31 0 16 0 08 0 04
100 100 100 19, 9
100 100 100 67,6
А1
100 100 100 100 100
100 100 100 100 100
100
100 98,2 100 15,2
100 100 100 21, 3
100
В1
100
100
100
100
100
190
100
100
100 56,4 0
Пример испытания 2.
Эмульгирующийся концентрат, содержащий 20% сырого, полученного по при- 40 меру 1 коричневого маслообраэного продукта В-41, дважды очищенного хроматографическим методом на глиноземной колонке, разбавляют до заданной концентрации . Полученным химическим раствором 45 опрыскивают яблоневые листья, зараженные приблизительно 100 паутинными волосатыми клещиками и по истечении пяти дней подсчитывают число живых клещиков. Данные испытаний приведены в табл. 6, где в числителе указано количество живых клещиков в момент подсчета, а в знаменателе — количество клещиков до опрыскивания.
Таблица 6 ран ч ннн
Про
200
50/115
56/128 4/121
8/103
88/102
Сырой продукт В-41 5/108
Продукт Кельтан О/97
Беэ обработки меру 1 н очищенных хроматографическим методом с применением силикагелевой колонки, и сырой смеси А +А +А, по65 лученной путем обработки сырого проПример испытания 3.
Из эмульгирующихся концентратов, каждый из которых содержит 20% одного из продуктов В-41, полученных по при98, 1 81,5 69,2 20,0
100 100 100 100
100 100 100 100
100 100 100 100
100 100 1() 0 100
1,1-бис(п-хлорфенил)—
2,2,2-трихлорэтанол (торговое наименование Кельтан ) .80,5 16,6 0
100 74,1 18,3 0
100 100 100 51,8
100 100 100 97,3
588926
23 дукта В-41 на хроматографической колонке с использованием смеси этилацетатг бенэол 50:50, готовят растворы и разбавляют их до заданной концентрации.Полученный раствор используют для
Таблица 7
Продукт
Ака ицидная активность % н.
100
85,5
100
100
30,8
Пример испытания 4.
Иэ эмульгирующегося концентрата, который содержит 20% сырой, полученной 25 по примеру 1, смеси А1+ В, и трижды очищенную хроматографическим методом с применением силикагелевой колонки с использованием смеси н-гексан: ацетон 70:30 и сырой смеси A>+A>+B< про- ф) дукта В-41, полученного по аналогии
Таблица 8
Продук
64,2
92,3
100
Сырая смесь A +B1
Сырая смесь.A2+АЭ+В
52,8
89,8
100
О,О-Диметил-О(2,2-дихлорвинил) фосфат
33,1
73,1
100
Пример испытания. 5.
Яйцами стебельковой огневки первого поколения заражают ростки риса (сорт Кинмаэе ), высаженные в горшки площадью по 200 см . После того 85 как из яиц выведутся личинки, стебли риса опрыскивают предлагаемым продуктом. Смачивающийся порошок, содержащий 401 сырого, приготовленного .по примеру 1 продукта В-41, двукратно
Сырой продукт В-41
Сырая смесь А +А +А
Продукт Кельтан 90,9 опрыскивания листьев апельсинового дерева, зараженных цитрусовым красным хлещем, и по истечении 24 ч определя-. ют акарицндную активность в процентах.
Данные результатов приведены в табл.7. с первым продуктом, готовят растворы и разбавляют нх до заданной концентра-,. ции. Полученный раствор используют для опрыскивания капусты китайской, зараженной персиковой тлей. По истечении 24 ч определяют смертность, тли в процентах. Данные результатов нриведены в табл. 8. очищенного хроматографическим методом на глиноземной колонке, разбавляют до заданной концентрации и опрыскивают растения 100 мл раствора на каждый горшок. По истечении пяти дней стебельки срезают для подсчета живых и погибших личинок и определяют смертность личинок в процентах. Данные результаты приведены в табл. 9 °
588926
Т а б л и ц а 9
Продукт
Акарицидная активность %
Концентраци млн.
100
Сырой продукт В-41
100
79,4
0,0-диэтил-О- (2изопропил-4-метил-6пиримидинил)фосфортиоат
82,1
25,5
Формула изобретения
Как следует из примеров испытаний
1-5, антибиотик В-41 обладает высокой 20 инсектицидной и акарицидной активностью и имеет значительно больший эффект в борьбе с клещами, чем обычные химические средства, Пример приготовления 1. 10 вес.ч. сырого, полученного по примеру 1 продукта В-41, дважды очищенного хроматографическим методом с применением силикагелевой колонки, гомогенизируют смешением 5 bee.ч. белой сажи, ЗО
50 вес.ч. талька и 35 вес.ч. глины.
Полученную смесь трижды измельчают в мельнице ударного типа, гомогенизируют и получают дуст.
Пример приготовления 2. 40 вес.ч. сырого, полученного по примеру 1 продукта В-41 гомогенно смешивают с
20 вес.ч. белой сажи, 5 вес,ч. додецилбензолсульфоната натрия, 2 вес.ч. поливинилового спирта и 33 вес.ч. гли- 40 ны. Конечную смесь трижды измельчают на мельнице ударного типа и вновь гомогенизируют, получая смачивающийся порошок.
Пример приготовления 3. 20 вес.ч. сырого, полученного по примеру 1 продукта В-41 гомогенно смешивают с
7 вес.ч. полиоксиэтиленнонилфенилового эфира, 3 вес.ч. додецилбензолсульфоната кальция и 70 вес.ч. ксилола.
Полученную смесь профильтровывают и
50 получают эмульгирующийся концентрат.
Пример приготовления 4 . 1 О в ес.ч . сырого, полученного по примеру 1,продукта В-41 растворяют в 10 вес.ч.ксилола. Конечный раствор смешивают с
80 вес.ч. машинного м сла, фильтруют в результате чего получают маслянистый препарат для опрыскивания.
Способ получения антибиотических веществ, включающий культивирование продуцента, относящегося к & Ид где М1 — водород или метил; М вЂ” метил или пирроилоксиметильная группа -CH ÎÎ м I (Н Я З вЂ” метил, этил, причем в том случае, когда Ф1 — водород, то к — метил или пирроилоксиметильная группа и Р5 — метил или этил, а в том случае, когда к< — метил, то М вЂ” метил и к — метил или этил; и формулы И : 1Й(I Си 0(На в качестве $ 588926 100 Вв Фиа 2 Длина Йлны, ммк.м фи@! Ялино 3олнцминм ФИи 3 д,лина 6юлны наемки Фиа.5 с вв Фв I бв % 0 4 с 3 ф вби N Длина Выну| ммкм Длина Адни иянм мьаЭ. ювв гм ввю Длина Волны мам фжб 588926 gprrrчrо Ваонермкм фею.б 4 1 Ь Ъ И ф г Ч000 0000 2000 1000 16I0 1ц00 и00 боонгбое число, сн фиг. 1/ 5 00 с b М % 3 Ь L бб ь < 110 II g ЛИ 000 До на аОЛНа1, ММИМ фиа. 7 tN t00 w 000 Д овю оапек, kwrrm ФжУ с 1 00 М 4 ДЮ МФ ЮЮ 4КФ )НУ ЖЮ МЮ Nt бовюбоо мачо, см фиа М Ч000 З000 0000 1000 1000 1Ч00 1гж WW ж болнабаг число, cw -1 фви 12 588926 W ?О Фив.Я МЮ ЗЯО 2000 1В001000W01200ПЮ Оа Великое числе см - Фиа1б фнв1б ИВО Зввв 2000 1ООО 1000 1400 280 1000 000 ВолмоВое росло гм Фив. 10 Фив. 17 ° 4 % Ъ 1 ф 40ОО ЯЯО 2ЯВ 1ЯО 1 1ЕВВ 1200 1ВЯ IIII ВолиоВее росло. ем ъ ь Я 1 НОО 3Nt 20N 1000 1ФЮ JMI ФЯ 1ОВВ ВФ. ВолиоВое число ом ь в у I0 Ь Ью 4N 0000 2ЯО 1ВЯ 1ИУ .ад 1200 1ВВОВОВ -в Веллер росло, ом ° Ю 6О вв в 1 _#_N 2000 1000 VN W0 1200 1000 000 оолноВое число, см QueJO 588926 Фиа Рб ФмаИ Составитель M. Дранишников Редактор Л. Емельянова Техред А.Богдан .-Корректор С.нмалова Эаказ 195/721 Тираж ХЯ Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,,й. 4/5 Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4