Способ получения литических ферментов

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ (ii) 587l49

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (63) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 280775 (21) 2163334/28-13 с присоединением заявки РЬ (23) Приоритет (43) Опуоликовано 0501.78Бюллетень М 1 (45) Дата опубликования описания 11.01.78

2 (51) М. Кл.

С 12 Р 13/10

fssf)(s)aTsssshls ass)N и (assn Nasasrpss ИР

ss авиа ии1(мнй п отирв1М (53) УДК 615. 779.94 (088.8) М.B.Ãóñåâ, К.A.Íèêèòèíà и Т,Г,Юдина (71) Заявитель

Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного

Знамени Государственный университет им. М.В.Ломоносова (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ

Нитрат калия КИОЭ

Сульфат магния Mg604

Дикалийфосфат ЖгНРО4

Хлорное железо ГеСРа

Хлорид кальция

CaCi! ° 6Н О

Цитрат натрия

1,0

0,25

0,04

0,002

0,024

0,165

Раствор микроэлементов

1 мл.

Борная кислота НЗБО

Хлорнд марганца

Мясйг 4Нго

2,86

i1 81

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения микробиологических препара" тов.

Известен способ получения литичес-. ких ферментов путем выращивания продуцента гриба М с оро(уз рога штамма 434 на питательной среде, содержащей источники углерода и азота в присутствии минеральных. солей, с последующим вы- 10 делением фермента из культуральной жидкости обработкой ее сульфатом аммония и ацетоном fl) .

Известен также способ получения литических ферментов путем культиви- 15 рования продуцентов на питательной среде, содержащей основные источники питания, с последующим выделением целевого продукта центрифугированием(2

Однако известные способы не позво- 26 ляют получить препараты с высокой активностью.

С целью повышения активности препарата по предлагаемому способу в качестве продуцехта используют синезеле- 25 ные водоросли АиаЬаека va iabi Fis или

Лиасуэйэ про 0а пв культивируют их на минеральной среде при освещенности

600-6000 лк и температуре 30-35 С, полученный после центрифугирования оса- 30

2 док клеток дезинтегрируют, экстрагируют целевой продукт буферным раствором с детергентом Тритон Х-100 и осаж» дают сульфатом аммония.

Способ осуществляют следующим образом.

Пример. Сеют по 5 мл восьмидневной культуры 4 паЬаепа va (а Ь Oi з в колбы . со 100 мл среды следующего состава г/л:

Раствор микроэлементов имеет следующий состав, г/л:.11кти :«ЯскиЯ ферменты из культураль ной жидкОсти р Остаэ(11айся посля удаления иэ няе клеток кутам цантрифугироВания, BMgGJIRjaT GR (j

50 мл охлажденной До ., - "С культуральной >хидкости Добавля "„т 28 мл 8ОВ-нога раствора сульфата а(-. (с:.-.и R цянтриФУГИруют при 6000 об/мин в "Ячение 10 и""н с Охл ждением, Ос дo;". Зл Окруют 5 j ë фосйатнсго бчйерн(ТГО ра стSQpB.,ОИ 7 (» ".

U(.1 рифугируют п«эи 8ООО Об/мин В те" чакке 5 мч(4 " G: (."(i- ";,. (Я 1:.1,.а-1»1 Дс О"-1 С и

Э ГЯ (ОПРЕЛЯЛЯЮ ;:;тч "(i.. с,"-Р - К 16-. «(j» TНВНОС:.:,; Э»»i)31 .(T» 1 Ц: -I 7" Э (В "-1(1ЧО ) "ЧПЯРНЯ" 171 . Ый (ЧЧЯ" КУЮ ВЯТВ. - ИО -:. Ь (. ЯРМЯН (ОВ ° и ь1д я пе и ных и э:*() е т Ок и ч э к ул ь ту) а дьНО((РИЦКОСТ(ОГ>ат-Я11-: Д.(. (-Л(:*ДУЮУУРР -(а нного 1(э 1(ул: ":",;р..- лэной;. .Идк(1сти -, ы ,"„П(О ВС1 11С(",У((1(; ..—.,"";1 B .- i B R TЫХ В ТОМ:: "(Уi чая э -:. ачяс (B : (i Gт- с сT ниэ» (а;, Qp (нЧЕСКУЮ ПЛОТ (1QCТ 1«КG (GpGfj д(»ВОДят

1 25 BpjI 4 50 1=:1;1.„: и 1 2 мл ф.=с(ЬЯ ТИСГQ буфер= И 7: об;-,ляю": О " ",1

4. нм за. Врэ1 -(я к ( рментного препа«рата 10(Сульфат марГанЦа

МПВО ° 4И О

Молибдат натрия

ЙаМОО4 2Н 0

Сульфат меди

С ВО 5н 0

Вода дистиллированная

0,022

0,0252

0 079

ОТНССИ ЯР ЧЫ ННЫЕ И 2ЯТiii я 4 "О активнОсти (".й((Оезпю inc

ФОрмула иэобретениЯ

Составитель С.Малютина

Техред N Keëåìåø - Корректор А.лаккда

Редактор Л.Волкова

Заказ 84/21 Тираж Я Р Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, r Ужгород, ул. Проектная, 4

ВыраЩквают кульTуру В 1ьЯми -1остатЯ

10 в течение 20 суток при Осаеи(енности

2000 лк и температура 35-40 C. Затем берут 1000 мл суспензия KreTG!i;,„ сгуЩают В 50 раэ Центрифуги »оэанием при

1-2 cgTGK при -20- С, ::.::TTG(1 6"0 НрН кОмнатнОй темпяратуряр затем экстра

Гируют лнтичяский пряпаОат кэ раэру

111ЕННЫХ КЛЕТОК П РТЯ14 ПЕР, (1 1;.111ВВ НЧ У, Н 1

Маf 1jитиой МЯ1»аЛ ь е ПРИ О1".(ая(ДЯНИ "» B т еч ение 2 О мин с О сл ЯД":;-,".;1Яей смесью:

13 (ритона X- 00 0i,(,.5 М-:оц:-. -ИСР=бу= ф рный раствор (рН 7,0/10 ;-:«(ТР., .

Смесь добавляют B Gбъаме, равном 1/5 объема. сгуценной сус.".Янеки клеток, Затем смесь цен-.рнфугируют при

17000 об/мин в течениа 1 ч с охлажде .нием до 0-4 с,получен:.-;:В(й супернатант

ПОдВерГают днэлиэу o i .. 1(х ажляеии >:Q

4 С в Фосфатно(4 6уфезii i с .. г 7 р . » т " ." чение 48, ч GQ сменой растэора чэреэ

24 ч и определяюх Ан:-:.:.::-:-"==;::Ую актив=" ность Ферментов.. Оа;=-.".:-. а1 (:;= -.("."лмео" ф б Относк1тяль.""1-..г;",; ",:;:,-,ц,":,". -;,,(Вкоc тк

Предлагае1 ЯЮ способ О6ЯЕПЯ4ивает .0 получение Оч11иянного препарата лнти ческик ферментов н по сравнению с иэ=

Вестным более прас::.

СпОсОб ПОлучения лнтических фермен"

ТОВ..ПУТЕМ КУЛЬТИВИРОВЯНИЯ ПРОДУЦЯНТОЕ на питательной среде, содяржадяй Qcновные источники питания, с последующим Выделением целевого продукта цен-: трифугированиям,, а =. л и == а ю щ к и =

С Я ТЕМр ЧТОp C ЦЕПЬЮ ПОВЫЯЯНИЯ аКТИВ" ности препарата, В качестве продуцен=

Я (,-СПОЛЬЭ ) .Дт С1,;:,.(Я«; ьлеи1 iqGr(Q»ОСЛЧ,((ноЬс1В (Q ч(э (jQ1О1 249 или i!(!G(1(ц. л -".о 1 FQ! j(g . культивируют 1х на кер= льиой среде при есвщячн "»500--6000 лк к температуре 30=35" С( (Ор1УуУЯ У((Ый ПОСЛЕ (1ЕНТРИФУГИООВ осадок клеток дяэиитегоируют, э(а т1«1(дд

ГИРУЮТ ЦЯЛЕВОй ПРОДУКТ 6УФЕРНЬМ Р«нат-: "рем с детергенто(я Тритон К-1(1 0 -и осаждают сульфатОм з34яонкя. информацииа принятыя

Внимание прк экспертизе:

1 Патен(СССР Р 348010 кл. С 12 В 13/ 10, 1972.

2. Авторское cs iBTeJIBGTBG СС Р

358360а кл «2 О 13/10