Способ получения флавоноидов

 

Оп ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПАТЕНТУ

Срез Советских

Социалистических

Уеслублин (1е) 588544 (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 27,01.75 (21) 2100757/28-13 (23) Приоритет - (32)(51) М. Кл.е

А 61 К 35/78

Государственный комитет

Совета Министров СССР

flD делам изсоретевий и открытий (31) (33) (43) Опубликовано15.03.78, Бюллетень hh 10 (53) УДК 615.45:6154 . 7 (088. 8)(45) Дата опубликования описания 28.02.78

Иностранпы

Имре Силадьи, Ене Терек и g na Штибер (BHP) (72) Авторы изобретения

Иностранное предприятие йьедьневень Кутато Интезет (BHP) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЛАВОНОИДОВ

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается получения лекарственных препаратов, которые могут быть использованы при лечении болезни печени, б

Известен способ. получения флавоноидов из семян растений расторопши (6 j?y Ьцпт тнa t iа пиги или, piRybuт ebuт ттецm

Coss е1Зцп) путем обработки размельченных обезжиренных семян системой органических 10 растворителей, диспергирования с двухфазной не смешивающейся друг с другом системой растворителей, упаривания и осаждения.11J.

Однако известный способ не обеспечи- 1б вает высокой чистоты целевого продукта.

Uen изобретения является повышение чистоты целевого продукта, Бель достигается тем, что сырье кипятят с четыреххлористым углеродом, затем обрабатывают N полярным растворителем, например, формамидом, смесь экстрагируют ацетоном или этилапетатом с последующим добавлением водного раствора хлорида натрия, из образованной при этом двухфазной системы ра- хб створителей осаждают в воде целевой продукт после повторной экстракпии этиленгликолем, содержащим хлорид кальция, и в случае необходимости, например, хроматографируют на колонке.

Способ осуществляют следующим образом.

Размолотые семена видов 5 i R y Ь 0 rat (расторопши) или их разновидностей, после того как семенную кожуру подвергают обогащению путем экстракпии жира и крахмала, осуществляемому с помощью растворителя жиров, предпочтительно галогенированного углеводорода с удельным весом свыше l,35, переводят в растворимую форму с помощью сильно полярного растворителя, например, формамида, диметилформамида, диметил-. сульфоксида, В качестве растворителя жира применяют четыреххлористый углерод, так как он не огнеопасен и хорошо растворяет выкристаллизовывающиеся из масла при стоянии природные сложные эфиры кислот жирного ряда

С1 - С (т.пл. 79-84 С). В четырех,59854-4

Флавоноидные компоненты распределяют между двумя растворителями. Распределеэкстоакции в системе из этилацетата, сильно полярного растворителя и водного расч вора хлористого натрия. В качестве системы экстракции предпочтительно применяют смесь иэ этилацетата, формамида и 2%-ного водного раствора хлористого натрия в объемном соотношении 60:25:15. Отдельные компоненты получают в чистом виде, их физические константы совпадают с указанными в литературе.

Компоненты можно отделять друг от друга при помощи KIMIoaoIkIOH хроматографии, В качестве носителя применяют силикагель, в качестве неподвижной фазы — сильно полярный растворитель и в качестве подвижной фазы - элюотропный ряд, который состоит из приготовленных с помощью хлороформа, н-бутилацетата и этилацетата смесей растворителей различного состава.

Для получения чистого силидианина в качестве исходного вещества применяют семена SI!?ybuw ebgrIIeukkI, осажденный в воде сырой продукт кристаллизуют из небольшого количества метанола. Для получения чищества используют семена вариантов 8ily Ьцт щд г а II и щ(расторопши пятнистой), цветущие лиловым или белым цветом. Осаж» денный в воде сырой продукт кристаллизуют иэ небольшого количества метанола и при желании кристаллизуют из смеси ацетонметанол.

П р,и м е р 1. 6 кг тонко размолотых семян g,еЬцгт ецм (26% масла, 3% флавона) сусцендируют в емкости с четыреххлористым углеродом, Через несколько минут нижнюю, состоящую из содержащих масло и крахмал частиц семян осажденную фазу переводят в другую емкость для перегонки.

Емкость для перегонки заполняют растворителем, благодаря атому устанавливается объемное соотношение между ржаво-коричневого цвета осажденной фазой и растворителем, равное 1:3. Растворитель нагревают и поддерживают при слабом кипении (77 О), о благодаря этому достигается аффект смешения. Путем регулирования нагрева емкости для перегонки устанавливают скорость циркуляции системы 7 кг ССР на 1 кг семенного материала в час. После пятичасовой экстракции, когда фаза растворителя под семенной .кожурой осветляется, процесс считают законченным. Твердые фазы отфильтровывают и высушивают. Четыреххлористый углерод путем отгонки освобождают хлористом углероде флавоноиды не: . претер- ношении I:0,5-1:1 экстракцию осушествпевают никакого термического разложения. ляют в течение 2-4 ч.

Размолотые семена или обезжиренная семенная кожура в соотношении к обогащен- ной семенной кожуре из расчета ние осуществляют путем фракционированной

1:0,5-2 г/объем, в случае размолотых семян 10:0,5.-2 г/объем, смешивают с раствоl рителем и затем при комнатной температуре выдерживают 5-15 ч.

За это время лекарственное растение о претерпевает изменения: сначала оно вспенивается, затем становится коричневым, набухарт и под действием полярного растворителя приобретает вид стекловидной смолы.

Экстракцию осуществляют при комнатной 15 температуре, например, путем перколяции или экстракции с обратным холодильником в пространстве над жидкостью. Если осуществляют перколяцию при комнатной температуре, на вес переведенного в растворимую о форму .материала применяют рассчитанное четырехкратное количество растворителя, Если экстракцию осуществляют в пространстве над жидкостью и в точке кипения, то весовое соотношение материала и растворителя составляет 1:1, При перколяции лекарственного растения при комнатной температуре применяют этилацетат. Если к перколянту прибавляют 24%-ный водный раствор хлористого натрия, Зо стого силимарина в качестве -асходного вето образуется двухфазная тройная система растворителей (этилацетат-формамид — раствор хлористого натрия, объемное соотношение 50:25:25). Для экстракции поименяют любой известный экстрактор жидкостьжидкость, После частичного испарения этил- ацетатной фазы светло-желтого цвета флавонбиды непрерывно переносят в значительно насыщенный Са CR этиленгликоль, причем при энергичном перемешивании,верх ,няя фаза непрерывно насыщается неполярным углеводородом, предпочтительно петролейным эфиром. В верхней фазе скапливаются остатки жирного масла, хлорофилла и желтых красителей, в нижней фазе - флавоно45. иды. Нижнюю (этиленгликолевую) фазу при постоянном перемешивании диспергируют в воде (1:5 - 1 ;10) по объему. Экстракт осаждают в виде тонкого желтого порошка, 50 который хорошо отфильтровывается. Находящаяся сверху жидкость прозрачная. Выход составляет в зависимости от качества лекарственного растения 1-4%, т.пл. 150160oC.

Если для экстракции до истощения применяют ацетон или матанол и экстракцию осуществляют в пространстве над жидкостью при кипении, растворителя требуется меньше, затраты времени меньше, так, например, при использовании ацетона в соот598544 от жирного масла и таким образом регене- ровывают, промывают неболыпим количест рируют, Получают следующие продукты: вом метанола и высушивают, Получают обогащенная семенная кожура 3,5 кг 39,2 r слабо окрашенного продукта с (58,5%), флавон 5,5%, крахмал 0,94 кг т.пл. 165-171 С. Этот продукт ра:творяют

15,8%), не представляющий ценности фла- в 196 мл кипящего ацетона, раствор филы вон 0,7%, жирное масло 1,54 кг (25,7%) руют и насыщают 98 мл метанола. Полу»

3,5 кг высу»,»енной семенной кожуры чают кристаллический метилат (т.пл. 172медленно гомогенизируют с формамидом в 176 С). 34 г продукта белого цвета растсоотношении 1:1 в течение 15 мин и вы- воряют при 50 С в смеси иэ 340 мл держивают в течение 15 ч, Полученную ко- 10 10%-ного метанольного Раствора С С8 и ричневого цвета набухшую массу помещают 240 мл перегнанного формамида, РаствоР в устройство для перколяции с 24 л атил- фильтрУют и при перемешивании прикапыацетат » бь»стро выпускают и теми„красный в к 6000 дистиллированной вод, пре вари льн и эк трак отводят для гомо- После выдержки в течение 15 ч при 4 С гениэирования. Затем первый перколят отво- fS ввьщелне сЯ силидианин-гидрат в фоРме ba

-о

> л/ч для дальней»»»ей пе виш»ых игn Выход 3 1 6 гю T U» 18 9»1 91 C ° ,- -» 2o реработки. Затем с 14 л перколята, полу- " 1 0 (С 0>25 ченных при продоЛжении процесса, начинают эта»»ол). Продукт по сравнению с подлинным экстракцию следующей загрузки лекарствен- образцом не показывает никакого понижения ных растений (первый перколят второй за- 20 точки плавления. груэки), Из лекарственных. Растений этил- Пример 2. 3 кг тонко размолотых ацетат регенерируют с помощью водяного семян&.п»а1»а»»»»»»»(масло 10,6%, флавон пара. Первый перколят поступает в квази- 2,3%) гомогенизируют в 30»» мл диметилнепрерывный экстрактор (смеситель отстой- формамида в течение нескольких минут и ник). Экстрактор работает по принципу про- 2 выдерживают в течение 15 ч. Переведенное тивотока. Первый перколят диспергируют в в растворимую форму сырье заливают 3 л

3%-ном водном растворе хлористого натрия, ацетона, кипятят в течение 4 ч. Желто-коКоличество флавонов в солевой жидкости ричневого цвета двухфазный. экстракт вы«. затем экстрагируется в последующей второй нарывают на водяной бане при температуре стадии с помощью чистого этилацетата. Зо 50 С при пониженном давлении до тех пор, При непрерывном процессе применяют пока не останется никакого растворителя.

0,6 л раствора соли на 1 л перколята, при Верхняя фаза полученной двухфазной эмульпоследуюшей экстракции - 0,4 л этилацета- сии состоит из 302 г масла, нижняя фаза та на 1 л перколята, время обработки иэ 330 мл раствора флавона в диметилфорЭ5

З,З мин. Коричнево-красный солевой рафи- мамиде. Нижнюю фазу отделяют и переменат отбрасывают. шивают со смесью из. 400 мл этилацетата

Светло-желтый, не содержащий формамида. и 330 мл 2%»ного водного раствора хло» раствор атилацетатн выпаривают в вакууме, ристого натрия. Нижнюю, красного цвета

Получают 250 г светло-коричневого цвета водную фазу, которая содержит ga СР,еше

40 аморфного остатка. Остаток растворяют в два раза встряхивают каждый раз по 200мл

"1 л 10%-ного метанольного раствора Сс»СР этилацетата, объединенные, составляющие и суспендируют в петролейном эфире до»»p »»Me но 900 мл фазы встряхивают с очистки. жира. Нижнюю содержащую СССР »150 мл 2%-ного водного раствора хлорифаэу при постоянном перемешивании в тече-. стого натрия, т.е. диспергируют (распре Д5 ние 1 ч прикапывают в воду- где флавоноид-,деляют флавоноиды., 900 мл светло-желто1

7 ная смесь осаждается в виде осадка жал- го этилацетатного экстракта выпаривают в того цвета. Находящаяся сверху жидкость вакууме при 50 С до 1/3 его объема, Конпрозрачная и светлая, Остаток отсасывают центрированный акстракт гомогенизируют с. в вакууме, промывают путем суспендирова- . 75 мл этиленгликоля, содержащего 5% ния в воде и затем лереоабатывают. Полу= COCA<, при анергичном механическом перечают 130 г (по отношению к-весу приме-; мешивании и наеышают во время перемешиЪ ненной семенной кожуры 2,2%) сырого про- вания путем прикапывания 300 мл петроо ,.дукта светло-желтого цвета, т.пл. 155- лейного афира (т. кип, 30-40 С). Содержа180 С. ние остаточного масла в верхней фазе ro, 130 г содержащего 60% силидианина сы- ставляет 5,5%. Полученные 100 мл этиленрого продукта растворяют»». 384 мл мета- гликолевой фазы красно-коричневого цвета иола. Раствор насыщают путем прикапы- эатем выливают s 1000 мл дистиллированвания 15 мл воды, затравливают:кристал- ной воды, Образовавшийся осадок хорошо лом и затем оставляют на 2-3 дня в холо- отстаивается, находящаяся над ним жидкость дильнике. Кристаллический продукт отфилы» прозрачная. Отфильтрованный и промытый и 98544

Составитель С. Малютина

Редектор Т. йевятко Техред К. 1аврон Корректор А. Лакида

Заказ 1289/52 Тираж 703 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., p. 4/5

Филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,.4 водой осадок высушивают в вакууме. Выход

57,3 г (1,97), т, пл. 153 159оС.

40 г сырого продукта, содержашего 507 силимарина, измельчают до сосгояния тонкого порошка и путем быстрого .внесения растворяют в 70 мл метанола. Самопроизвольно кристаллнзуюшийся, без филвгрования, красно коричневый сироп выдерживают с

4-5 дней при.+4 С. Кристаллы отделяют на центрифуге, суспендируют 2-3 раза в небольшом количестве метанола, отфилвгровывают и сушат в вакууме. Получают 14 г слабо окрашенного продукта, который плавится при 158-162 С. Продукт перекристаллизуют путем растворения при нагревании в

300 мл смеси ацетон - метанол при соо ь .ношении 1:l и выпаривании раствора до половины его объема. Получают 9,9 г продукта белого цвета. Т, пл. 163-168 С, g< j = . +10,8 (С-0,25, 957-ный этанол). %a маточного раствора путем упаривания получают дальнейшую фракцию.

Предлагаемый способ обеспечивает получение продукта высокой степени чистоты, 25

Формула изобретения

Способ получения фтддоноидов из семян, растения расторопши(3 2уЬиФ лц2 ш 2пцп 7

burn еЬигиец rn Cosa etDurr) путем обработки размельченных. обезжиренных семян системой органических растворителей, диспергирования с двухфазной не смешиваюшейся друг с другом системой растворителей, упаривани я и осаждения, о т л и ч а ю ш и йс я тем, что„с целью повышения чистоты целевого продукта, сырье кипятят с четыреххлористым углеродом, затем обрабатывают полярным растворителем, например формамидом, смесь экстрагируют ацетоном или этилацетатом с последуюшим добавлением водного раствора хлорида натрия, из образовавшейся при этом двухфазной системы растворителей осаждают в воде целевой продукт после повторной экстракции этиленгликолем, содержашим хлорид кальция, и в случае необходимости хроматографируют на колонке.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1,Патент Германии Х 2017789, кл. 30 И 2/03, 1940.,