Способ определения биосинтеза белка
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Соавтскмх
Социо алнстимеских
Ресяублик (< ) 602863.
t 1
I (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 19.02.76 (21) 23261 4/28-1 3 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано15.04.78.Бюллетень №14 (45) Дата опубликования описании 31.03.78 (5é) М. Кл.
С 01 Д 33/16
Государственный квинтет
Совета Мнннетров СССР оо.делам нэооретеннй я открытей (53) УДК 612.398. (088.8) (72) Автор изобретения
Ц. Я. Жгенти (7е) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОСИНТЕЗЛ БЕЛКЛ
Изобретение относится к обпасти мопекупярной биологии и может быть использовано в медико-биологических исспвдованиях.
Известен способ определения биосинтеза белка в цитоппазме зародьшювой ткани путем етксяции, гидропиза срезов панкреатичвской рибонуклеазой, специфического окрашивания копичественной оценки остаточных
РНК j1), Однако известный способ не обеспечивает получения данных о копичестве транспирующих ри босом.
Цепью изобретения является получение данных о количестве транслирующих рибосом.
Эта цепь достигается тем, что среды обрабатывают;трипеи. ом и оценку функциоиа т ной активности рибосом проводят по остаточ- . ному копичеству РНК и белка, Способ осуп,ествляют следующим образом.
Проводят фиксацию исследуемого материала в денатурирующих смесях. Готовят серий- go ные препараты исследуемого материаца, срезы тканей ипи их отпечатки и мазки. Поспе депаряфинизации и обводнения серийныв препараты подвергают гидропизу в растворах кристаппических. ферментов рибонукпеаз в то- д чепце 15> 30 мпн, 1 4 ч„с интервальным различием в 30 мин в течение 24 ч и трипсина в течение 30 мин с интервальным различием в 3 мнн и в течение 1, 5, 2 ч. Гидропизированньюg кисл оторястворимые фрагментыты удаляют 5%-ной трихлоруксусной кислотой, Употребляют растворы ферментов допустимо высокой концентрации и проводят экстракцию три повьппвнной температуре до 41 С, о что обеспечивает насыщение фермвйтями суострата и вго исчерпывающую сорбцкю.
Затем гидропизированные в ферменте рибонуклеазя и контрольные, неподввргавшнеся ферментативному гидропизу, препараты яцетилируют и для воспроизведениях РНК, окрашивают краситепвм гядлоциянином с хромовыми квасцами контрольные и гидропизовянные в трипсине препараты, дпя воспроизведения суммарного бенка окрашивают красителем бромфеноповым синим с сулемой. Выбор красителей зависит от их пригодности для количественной питохимии.
Все препараты обезвожцвают, диЦерепцируют, просветляют и заключают в бальзам, Проводят морфб-фотометрию исследуемых суб-гб (,"-. i- р»-,у т«н:лн C Яалютина
Редк;гоР Ао 1овс килсва . exPeP Зб- Фанта ИОРРектоР С ГаРасиннк
Заказ 1846/4О 7ирюк 1112 Подписное
ЦНИИГП4 Государстмзнно..о коъщтета Совета Министров СССР укк«дол рк изобр теций h открытий
1 к Зубб, Москва, д 35, рнушсквн нвб„д, 4/Ь джлнвл ППП Пнлннг", г. ужгород, ул. Гккснкгнвк
КЛЕ клоду«К .Л .. « .."., . .О -i = i:..::... - А;Л ;.у r:ук М ГЕ!ГФОЛИЗИ ронк Н .".;, с.,ф;, Пар Яб ИХ б f a Пордуча ЯЯл м даН»
НЫМ ОГЖЭДкап Ð ОТБОГИдоЛЬ!П= Е ОбГЧЕ M a
ТатоднбЬЯ ИОГИЧестна " Yi(t И Оапдд Оно к Тройт
Сроки ппзп-:ваaчли ецб р - "..„урии„.-д оивлию
ЩЕл ОСИ Р"=П=" .ЩО:-об 8-: .: =. ;- = к «лЩ олнзго =-,Х -КРг«ЯВкык, Прид:Н,"НОТ:: об - ;"к:к"о.,,уК,л",,у ЗКСНО Иукийо
Г Оспе етого пр i ça . =.""т Б. ..дпиэ активностей дяРГ""" Р ""я " ЧК" """ ="- - улк«лоМ «-B -" "" K3BF »3л»ванепрп ферркконтз:,.;, «5,"" -,-Р, атсчклдот P -„(и бккл
КОВо втО = : -"".-" - МЯЯГЛТ :::.. = :Э «У -. .,П ЙМЕ ТРЫ фУ ЖХЦИ ОНИЩ f ных, белОУАФтялазиру7оиях активн жтей пибо@фф„4 ЯВУД2:Яко ПнГ::..БУВ = :..-6:«"," Ск В ЯПЯРклоках ОЦ оллпкоеорЯкл%гон /;,;.:-, -;-уобб в нкк. рЯъл«жсктед„. Ьунк нк„с ОП Орж
МАХ GЩНИкДЙХ кгв!ГВк ". " «" СО4ЕРИаннй «ереый &=-д.акж -" .р -.о«но ".Синтеэирчю цей ак
ТИВЯОСТИ рнй№ОЪд !«эб «бСЬ", ЗИКУУНЭТ (Ж6ЯЕЕ Копи» кбЫ Ь л";О ОСТ 1Р- Рког . . .::лк - :" ; =.:":",= .":. "" .:. кбп",",Зьдлзатовсн
1 лииестве рембо:".,Ом... лн1-:.;:,- уцестлдлккри6.х лузянсля..— б
ИИЮ ГЕНЕТИ =,, ":; Ой б:;-;, ": -1,.:,,-цл "И, Ир-,, ;..,.одсуц ух
Cj Б ПСРЕНИПЕЛЬНДИ : . ТС к ....он и К «Зж Оюиэсуукк.
НЛЕЧИЦ ВТЦ ОИ;Уаоад;нб1Р ."л„"кдпсивлД ъЧ1бк лУУЗй алктЕВНОСТИ "Г "ЯЮбколкд ":З к у"уГл" 1лу«ЕТ ОЬцр Ск КОл ц че с АБО вну1 2 и ри босом ю .. ЬБьФ: ЙОГА ме риз атов аддЧЧ КИСПОТ : Q „ г«нуоогкp к « ð; . b«к««ллн рт
Я юБЯх Рибосомр так KBK Одна Рибосома GRH-. тезирует только одну белковую молекулу в
ОДИН ОТРЕ ЗОК ВРЕ МЕ ЦИ
Гфедла аемый способ обеспечивает получение данных О количестве транслирующих рибжом, Использование предлагюмого способа определениа биосинтеэа белка позволит установить роль изменений активносхн етого процесса fJpH тех илн иных функциональных и па» топогических состоянияху чтО поможет pBUH ональной выработке рофилактических и лечебньк мероприитий. дрормулйиэобретении
Способ Определении биосицтеэа белка в цитоплаэме эародьпцевой ткани путем фиксации гидрмиэа срезов панкреатической рибонуклеазой, спецнфичейсого окрашивання, коаи- честненной Оценки ОстатОчных .PHK o т л ич а ю щ и и c s тем, что, с целью попуче. ыа джиьщ о количестве ascwpntmmsx рибосом, срезы обрабатывают трипсииом и оценку фу жциональной активности рибосом проводит по остаточному количеству PHK и белка.
Источники информации, принятые во внтмйи1е при зкспртизе;
Л о 1 ирС,Зв ГИСТОХИМИБ, Мн 1 962, Св1 54Ьб,
