Способ определения общего белка в растворе

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Сеоз Советскнк

Сещиалистнческии республик

<11>б 365 34 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 050176 (2I} 2310166/28-13 с присоединением заявки Ю— (23) Приорнтет— (43) Опубликовано 05.12,78,Бюллетень ¹ 45 (45) Дата опубликования описания 10.1278 (51) М. Кл.

G01 Н 33/16

Государственный комитет

Совета Министров СССР по дедам изобретений и открытий (53) УДК616. 5 (088.8) (72) Авторы изобретения

О.В.Чеботарев, Г.П.Коренев, A.A.Äðóæèíèí, Е.Н.Храмов и М.Ф.Моряшов

Pl) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЩЕГО БЕЛКА

В РАСTBGPE

Для этого на испытуемый раствор воздействуют смесью 0,253-ного раствора 1,2-динитробензола в метаноле, формалина и 20%-ного едкого натра в соотношении 1:2:2, и перед фотометрированием реакционную смесь нагревают 25 в течение 3-4 мин при 60-61 С.

СПособ осуществляют следующим образом.

Изобретение относится к биологической химии и может быть использовано в анализе растворов для количественного определения общего белка °

Известен способ определения общего белка в растворе путем воздействия на испытуемый раствор реагентом с последующим фотометрированием полученного окрашенного комплекса (lj .

Однако на приготовление модифицированного раствора Фолина затрачивается значительная часть времени (10 ч ) и известный способ не обеспечивает высокой чувствительности °

Целью изобретения является повышение чувствительности и ускорение способа.

В каждую из двух пробирок, в одной из которых находится 1 мл испытуемого водного раствора (опытная проба), а в другой 1 мл бидистиллята (контрольная проба), последовательно добавляют

1 мл 0,25%-ного раствора 1,2-динитробензола (Ч Ту-44-68, дважды перекристаллизованного из этанола) в метаноле (ХЧ ГОСТ 6995-67), 2 мл раствора 40%-ного формальдегида и 2 мл

20%-ного раствора едкого натра (ХЧ

ГОСТ 4328-66) . Опытную и контрольную пробы термостатируют при ЪО+1 С в течение 4+0,5 мин. Через 3 мин после окончания термоататирования измеряют разность оптических плотностей обоих проб дифференциальным способом в кюветах 2 см при 520 нм на фотоколориметре типа ФЭК-М. Концентрацию общего белка в пробе определяют по заранее построенной калибровочной кривой в координатах разность оптических плотностей — логарифм концентрации белка.

Ниже на примере лактальбумина приведены расчетные данные, позволяющие оценить точность количественного опрецеления по предлагаемой методике.

636534

Т а б л и ц а 1

Концент белка в ходном воре, м ельервал

6,8 10

5,1

4,5

9,0

11 0

12,1

19,5

5 10

1 10

5 10

1 10

5.10 4

1 ° 10

12

5

5

0,87

2,02

1,78

1,56

1,42

1,19

1,09

1,65

2,7

2,6

3,7

4,1

4,4

5,4

Примеры количественного определения общего белка в Ъ в некоторых препаратах даны в табл.3, где также приведены соответствующие результаты определения известными методами.

Таблица 3

Кровь

8-9 8-9

8-9

Дрожжевой автолизат

20 18

Оценка специфичности предлагаемого метода по ряду примесей в исследуемык растворах, а именно наименьшие концентрации примесей в растворе, мешающие определению общего белка в мг/мл, приведена в табл.4.

j Концентрация ь Концентрация

Примесь

Глюкоза

-2

2 ° 10

1 10

5 10

Фруктоза

Вензоин

Серебро (Х)

Кобальт (I) Бензил

Железо (ХХ,TTI) 3 10

2 10

Е4арганец (ХХ) Гидрохинон

l.10

2 .10

1 10

1 10

Ртуть (ХХ)

Арсенит,арсенат

Бензофенон

Этиленгликоль

Целлозольвы

Ацетон

Ацетоуксусный эфир

Эфиры малоновой кислоты

В табл. представлены экспериментальные данные кинетики распада окрас ки восстановленной формы 1,2-динитробензола (при 520 нм) после окончания термостатирования. 20

Представленные результаты свидетельствуют о том, что максимальное развитие окра".êè наблюдается на 3

5 мин после термостатирования с последующим ее ослаблением. 25 а б л и ц а 2

Время, после Оптическая плотность термостатиро,растворов при разли Eвания, мин ных концентрациях лактальбумина

0 )1 1p ) "10 " 10

1 0,860 1,08 1,40 1,76

2 0,865 ió,085 l,41 1,77 35

3 0,870 1,-09 1,42 1,78

4 0,860 1,08 1,40 1,77

5 0,850 1,07 1,38 1,,5

6 0,840 1 04 1 36 1 73

10 0,80 0,87 1,18 1,55 40

10 О,бб 0,74 0,81. 1,15

1. 10

1 10 4 10

4 10

1-10

-1

2-5 10

5-10

1.10

-4

1-3 10

Сульфиды,сульфиты, бихроматы, перманганаты 1 ° 10

-2

636534

)О

Составитель В.Головин

Техред Н.Андрейчук Корректор Л.Небола

Редактор A.Ìóðàäÿí

Заказ 6932/35 Тираж 1070 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, F-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП Патент, r.Óærîðoä, ул. Проектная, 4

Оптимальными средами для проведения реакции являются водно-спиртовые.

При исследовании бинарных смесей различных спиртов (от метилового до амилового) с водой существенных отличий не наблюдалось. Допустимое содержание метанола в реакционной среде не более

25%. Более высокое содержание спирта 5 приводит к уменьшению чувствительности определения белка.

Предлагаемый способ обеспечивает высокую чувствительность и сокращает время определения белка.

Формула изобретения

Способ определения общего белка в растворе путем воздействия на испытуемый раствор реагентом с последующим фотометрированием полученного окрашенного комплекса о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повышения чувствительности и ускорения способа, на испытуемый раствор воздействуют смесью 0,25%-ного раствора 1;2-динитробензола в метаноле, формалина и

20%-ного едкого натра в соотношении

1:2:2, и перед фотометрированием реакционную смесь нагревают в течение 34 мин при 60-61 С.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. X.Â1îÂ.ÑÈtiò- 19 3265, 1951.