Способ получения протеолитического фермента

 

ОПЙСАНИЕ

«» 649215 (Союз Советских

Социалистических

Республик

- 1, /

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ „: (61) Дополнительное к авт, свид-ву— (22) Заявлено-3003.76 (21) 2342995/23-04 с присоединением заявки ¹(23) Приоритет—

Опубликовано 250380, Бюллетень ¹ 11. г ",т (51)М. Кл,2

С 07 G 7/02//

A 61 К 37/48

Государственный комитет

СССР но делам изобретений и открытий (53) УДК 577.15.07 (088.8) Дата опубликования описания 30. 03. 80 (72) Авторы изобретения

E. Д. Казаков, М. П. Попов, О. В. Козырева, Ю. И. Гончаров и P. И. Захарова

Московский ордена Трудового Красного Знамени технологический институт пищевой промышленности и Московский опытный завод ферментных препаратов (71) Заявители (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОГО ФЕРМЕНТА

Изобретение относится к производству ферментов и предусматривает использование нового источника протеолитических ферментов при комплексной. переработке сырья (пшеничные отруби) в промышленности микробиологического синтеза. Пшеничные отруби широко используются в. качестве питательной среды при культивировании микроорганизмов. Criособ позволяет предварительно выделить из отрубей собственнь.е протеолитические ферменты. Получаемый предлагаемым способом репарат протеолитического фермента может применяться в пищевой, медицинской и 15 микробиологической промышленности, а также лабораторной и медицинской практике.

Высшие растения используются для получения разнообразных ферментов и 20 белковых препаратов. Так, из пшеничных отрубей получают фермент р -амилазу посредством экстрагирования отрубей пшеницы водой (1).

Известен также способ выделения протеолитических ферментных препаратов из семян пшеницы, заключающийся в экстрагировании на холоду семян пшеницы буферным раствором пирофос4ата натрия (рН 7,0) с последующим 30 центрифугированием и высаливанием чротеолитических ферментов сульфатом аммония (2) .

Этот способ позволяет выделить кислые протеаэы с оптимумом действия при рН 3,8.. Их активность в непроросшем зерне пшеницы очень мала. Способ имеет чисто научное значение и предназначен для изучения свойств этих ферментов. Способ не предусматривает получения фермента в значительных количествах для практического использования.

Целью изобретения является получение высокоактивного препарата протеолитического фермента, имеющего оптимум действия при рН 6,3-6,7, для использования в пищевой промышленности и медицине,.и расширение сырьевой базы.

Это достигается тем, что в качестве сырья используют пшеничные отруби и экстракцию фермента проводят 0,150,75%-ныл раствором соды с последующим осаждением путем подкисления экстракта кислотой до рН 5,3-6,0.

Предпочтительно процесс проводят следующим образом: пшеничные отруби экстрагируют 6-10 вес.ч. 0 15-0,30Ъ-ного раствора соды в течение 3-5 мин при интенсивном перемешивании или пу649219 4

- с -а костью по 250 л. В диффузор загружают 40 кг отрубей и заливают их 0,30%-ным раствором соды с температурой

40оC . При периодическом перемешивании, экстракция продолжается 40 мин. ой Для удаления грубых взвешенных частиц экстракт пропускают через марлю

5 и направляют в сборник. Фермент осажо- дают путем подкисления раствора лиы- монной кислотой (в другом варианте— соляная кислота) до рН 5,7 ° Образовавшийся осадок отделяют от жидкости на сепараторе и высушивают в сублимационной сушилке. Выход ферментного препарата 7,25% с активностью 1 мг тирозина в 1 мин на 1 r препарата.

15 Высокий выход препарата связан с большим содержанием балластных веществ, поскольку перед осаждением фермента не проводилось центрифугирование экстракта, Формула изобретения

С ос тави тель A. Бочаров

Редактор Е. Месропова Техред H.Ковалева Корректор В. Бутяга

Тираж 495

Заказ 503/48

Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Филиал ППП Патент, г ° Ужгород, ул. Проектная, 4 тем настаивания в диффузорах в течение 30-40 мин с последующим прокачиванием раствора соды через батарею диффузора. После центрифугирования или фильтрования экстракта фермент осаждают, подкисляя экстракт кислот до рН 5,7. Полученный осадок высуши вают в сублимационной сушилке.

Использование предлагаемого спос ба позволяет получить из дешевого с рья новый ферментный препарат. При этом все отходы производства (остав шиеся после экстракции и осаждения фермента отруби и жидкость) могут и пользоваться для приготовления пита тельных сред на предприятиях Микроб ологического синтеза. Способ позволяет. более рационально и комплексно испольэовать пшеничные отруби в промышленности микробиологического син теэа.

Пример 1. 80 r отрубей экст- 20 рагируют 0,8 л раствора соды 0,25Ъ.-йой концентрации,.при интенсивном перемЕшивании (до 3000 . об/мин) в течение 3 мин при 20 С. Суспензию центрируют прч 4000 об/мин, и 400 мл цент- 25 рифугата используют для осаждения фермента. Для этого центрифугат подкисляют лимонной кислотой до рН 5,7.

Протеолитические ферменты полностью переходят в осадок. Надосадочная жид- 3О кость не обладает ферментитивной активностью. Осадок отделяют на центрифуге и высушивают в вакуумсушильном шкафу при комнатной температуре. Выход сухого препарата 3,6%, его ак- З5 тивность 3 мг тирозина в 1 мин на 1 г препарата при использовании в качестве субстрата 0,5Ъ-ного раствора бычьего альбумина.

Пример 2. Экстракцию пшенич- 40 ных отрубей проводят в диффузорах емСпособ получения протеолитического фермента из пшеницы путем экстрадиции и осаждения, отличающийся тем, что, с целью получения высокоактивного ферментного препарата и расширения сырьевой базы, в качестве сырья используют пшеничные отруби, экстракцию фермента осуществляют 0,150,75%-ным раствором соды, а осаждение — подкислением экстракта кислотой до рН 5,3-6,0.

Йсточники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент ФРГ Р 1792362, кл. С 07 G 7/022, опублик. 1973.

2. Береш И. Д. Исследование протеолитических ферментов проросшего зерна пшеницы . Автореф. дис . на соиск . учен. степени канд . биол . наук. Москва 1972.