Способ получения -3- (3,4-диоксифенил) -2- метилаланинпептидов

 

<,ц6565О5

Союз Советских

Социалистических

Реслублик (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 1(Е0376 (21) 2329948/23-04 (23) Приоритет — (32) 12. 03. 75 (31) Р 2510634.7 (33) ФРГ (й1) Л . Кл.

С 07 С 103/52

l/А 61 К 37/02

Госуаарствениый комитет

СССР по лелам изобретений и открытий (53) .УД!(547.964. .4,07 (088,8) Опубликовано 050479. Бюллетень ¹ 13

Дата опубликования описания 050479 (72) Авторы Иностранцы изобретения Франц Браун (ФРГ), курт Llxax (Австрия),, Макс Тиль, Гисберт Ыпонер и Карл Дитманн (ФРГ) Иностранная фирма Берингер Маннхайм ГмбХ (ФРГ) (73) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-3- (3, 4-ДИОКСИФЕНИЛ)-2-МЕТИЛАЛАНИНПЕПТИДОВ

ЙЕз

СНе С СОО1Е

3٠— (,0-Л-ЗПй(10

1ЕЗ

I мо йт — С вЂ” С.оон ! и OC- А- Z.

Изобретение относится к способу получения новых соединений — производных L-3-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланина общей формулы

НО 5 где A означает насыщенную, линейную или разветвленную низшую алкиленовую цепь, которая может быть замещена оксигруппой или фенильным остатком, имеющим в случае необходимости окси- 15 группы,"

R — водород, низшую алкильную группу или аланильный остаток, обладающих биологической активностью, которые могут найти применение в меди- 20 цине.

В химии пептидов широко используют для получения пептидных цепей конденсацию отдельных пептидных фрагментов и аминокислот с аминокислотами 25 и их производными карбодиимидным методом (1), для защиты оксизаместителей применяют бензильную и бензилоксикарбонильную грУппы; для карбокси)групп-зтерификацию или низшими алифа ЗО

2 тическими спиртами, или бензиловым спиртом 12).

Целью изобретения является разработка способа получения новых пептидов, расширяющих арсенал средств воздействия на организм.

Поставленная цель достигается способом получения L-3-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланинпептидов, который заключается в том, что L — 3-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланин формулы

МН2 окси- и/или карбоксигруппы которого могут быть защищены, конденсируют с карбоновыми кислотами общей формулы в которой

A имеет вышенаэванные значения

 — оксигруппа, низший алкоксил

S или галоген;

Š— галоген или NHR — группа, в которой R имеет вышеназванные значения,3 56505

15

30

60 в присутствии инертных растворителей и водоотщепляющих средств, при комнатной температуре с последующей, в случае когда Е - галогеп, обработкой полученного продукта амином общей формулы ЫН Р, где R — - как указано выше.

Предлагаемые соединения имеют амфотерный характер. Поэтому они могут образовывать фармакологически переносимые соли как с кислотами, так и с основаниями. Для получения солей с кислотами предлагаемые соединения вводят во взаимодействие с эквивалентным количеством фармакологически переносимой органической или неорганической кислоты, например соляной (НСР), бромистоводородной, фосфорной, серной, уксусной, лимонной, малеиновой, бензойной. Нейтрализацию карбоксильной группы можно осуществлять, например, путем взаимодействия с основаниями щелочного или щелочноземельного ряда, с аминами или органическими. аминами.

Пример 1. Глицил-L-З-,(3,4-диоксифенил) -2-метилаланин.

11,25 r (0,05 моль) сложного метилового эФира Ь-З-(3,4- диоксифенил)—

-2-м тилалзчяна, т.пл. 164-166 С; (о(.) 1) = -6 3 (с = 1, 1 н ° . HC8 ), помещают в трехгорлую колбу емкостью

500 мл, снабженную мешалкой и хлоркальциевой трубкой, и суспендируют в 250 мл абсолютного диоксана. Последовательно добавляют 12,52 г (0,06 моль) бензилоксикарбонилглицина и 10,3 г (0,05 моль) N,N-дициклогексилкарбодиимида (ДЦГКД) и перемеши вают при комнатной температуре. Через несколько минут начинают выпадать кристаллы N,N-дициклогексилмочевины.

После 4-часового перемешивания и

16-часового выдерживания при комнатной температуре мочевину отсасывают (10,0 r, 89,4Ъ) и фильтрат упаривают в вакууме. Очень вязкий остаток растворяют в 150 мл этилацетата, поочередно промывают 5Ъ-ным раствором бикарбоната натрия (4 х 20 Мл) 1 н, HCE (4 х 20 мл) и водой (2 х 30 мп), сушат сульфатом натрия, упаривают в вакууме и получают 20,82 г (100,0%) сложного метилового эфира бензилоксикарбонилглицил-L-З-(3,4-диоксифенил)—

-2-метилаланина в виде бесцветного аморфного порошка. Чистоту продукта контролируют по данным тонкоалойной хроматографии (ТСХ).

Для полной очистки сырой продукт растворяют в 100 мл смеси хлороформметанол (15;1), хроматографируют на колонке (90 х 5,5 см), заполненной силикагелем 60 (70-230 меш,йерк), элюируя той же смесью растворителей, и получают 17,5 r (84,1Ú) бесцветного аморфного порошка.

Для гидролиза сложноэфирной метильной группы в трехгорлую колбу, снабженную мешалкой, капельной воронкой и подводом для газа, помещают

10,4 г (0,25 моль) сложного метилового эфира бензилоксикарбонилглицил-L-3-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина .

После полного удаления воздуха с помощью слабого тока азота через капельную воронку приливают 95 мл 1 н. едкого натра и перемешивают раствор в течение 30 мин при комнатной температуре. После этого добавляют по, каплям 95 мл 1 н. HCe . Сырой продукт выделяют в виде очень вязкого масла, которое обрабатывают 100 мл этилацетата и для дальнейшей очистки экстрагируют 3 х 30 мл 1ОЪ-ного раствора бикарбоната натрия. Объединенные водные экстракты осторожно подкисляют 2 н. НСЕ, выделившуюся свободную карбоновую кислоту извлекают

100 мл этилацетата и сушат сульфатом натрия. После полной отгонки растворителя в вакууме получают

9,0 г (89,5Ъ) хроматографически однородного бензилоксикарбонилглицил-L-3-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина в виде бесцветной аморфной пены. Чистоту продукта контролируют по данным ТСХ.

Для гидрогенолиза бензилоксикарбонильной группы предварительно гидрируют 2,5 г окиси палладия в 130 мл метанола при комнатной температуре и нормальном давлении. Затем прибавляют раствор 20,12 г {0,05 моль) бензилоксикарбонилглицил-L-З-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина в 170 мл метанола и гидрируют при комнатной температуре обычным способом 4 ч до полного отщепления двуокиси углерода.

Катализатор отфильтровывают и растворитель отгоняют в вакууме. Получают 13,45 r (100Ъ) бесцветного аморфного сырого продукта, который растворяют в 28 мл воды и охлаждают до О С. Из раствора выкристаллизоо вывается 11,88 г хроматографически и аналитически чистого дигидрата глицил-L-З-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина, т. пл. 187 C; (cC ) = — 8,0 (с = 1, вода) ° Чистоту продукта контролируют по данным ТСХ.

В четырехгорлой колбе на 2 л с мешалкой, двумя капельными воронками подводом для газа,ðH-электродами и термометром смешивают 45 г (0,2 моль) сложного метилового эфира Ь-З-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланина, 300 мл воды и 500 мл хлороформа и при интенсивном перемешивании охлаждают до

О С. Затем в течение 1 ч.по каплям и перемешивании добавляют 12,34. r (0,11 моль) хлорацетилхлорида, растворенного в 12 мл хлороформа. В течение 45 мин для удаления воздуха пропускают слабый ток азота и поочередно добавляют по каплям 14,8 г (0,13 моль) хлорацетилхлорида, раст-. воренного в 15 мл хлороформа, и раствор 36,96 г (0,26 моль) карбоната натрия в 118 мл воды при 0 С в тече6565

5 ние 1,25 ч (рН растнора 7,5-8,5).

Перемешивание продолжают без охлаждения 1,5 ч. Непрореагиронавший сложный метиловый эфир (20,0 r, 44,4Ъ) отсасывают, отделяют хлороформный раствор и сушат.

Получают 33,0 г (54,8Ъ) сложного метилового эфира И-хлорацетил-1 -3"(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина в ниде желтоватого вязкого масла.

30,17 г (0,1 моль) полученного сложного метилового эфира гидролизу- )О ют в атмосфере азота в 305 мл 1 н. едкого натра в течение 1 ч при комнатной температуре, нейтрализуют

77 мл 4 н. НС1 и экстраГируют выделившееся масло 2х 150 мл этилацетата. ЭкстраКт сушат сульфатом натрия, упаривают в вакууме и получают 26,1 (91,0Ъ) N-хлорнцетил-L-З-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланина в виде желтонатого масла.

28,7 г (0,1 моль) N-хлорацетил-L-3-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланина в атмосфере азота растворяют в 260 мл концентрированного аммиака и на

5 дней оставляют при комнатной температуре. После этого упаривают в ва- 25 кууме и сырой продукт очищают, пропуская через колонку (60 х 6,4 см) с силикагелем (60 меш.Мерк), элюируя смесью н-бутанол-ледяная уксусная кислота-вода (2:1:1). Чистоту продук- 3О та контролируют по данным ТСХ.

Из элюата после упаривания в вакууме и перекристаллизации из 35 мл воды получают 22,8 r (75,0Ъ) дигидрата глицил-L-3-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланина, т.пл. 186-187 C.

Пример 2. L-йланил-Ь-3-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланин.

11,25 г (0,05 моль) сложного метилового эфира L-3-(3 4-диоксифенил)—

-2-метилаланина и 13,38 r (0,06 моль) бензилоксикарбонил-L-аланина, т.пл. 84-86 С; (M ) = -15 6 (с = 2, ло уксусная кислота), вводят но взаимодейстние с 10,3 r (0,05 моль) ДЦГКД как в примере 1, и после обработки получают 21,5 г (100Ъ) бесцветного сырого продукта, из которого после очистки на колонке выделяют 16,51 г .(76,9Ъ) чистого сложного метилового эфира бензилоксикарбонил-L-аланил- 50

-Ь-З-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина.

10,75 r (0,025 моль) полученного эфира гидролизуют, как в примере 1, 95 мл 1 н. едкого натра в течение

50 мин при комнатной температуре.

Получают 9, 46 г (91,0Ъ) бензилоксикарбонил-L-аланил-L-3-(3„4-диоксифенил) -2-метилаланина в виде бесцветной пены.

20,8 г (0,05 моль) бензилоксикарбонил-L-аланил-L-3-(3,4-диоксифенил)—

-2-метилаланина гидрируют для гидрогенолиза бензилоксикарбонильной группы, как в примере 1, в течение 1,5 ч при комнатной температуре. Получают

05 6

13, 38 r (94,7Ъ) сырого продукта, который перекристаллизовывают из

13,5 мл воды, и получают 11,7 r аналитически чистого тригидрата L-аланил-L-3-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина, т.пл. 82-87 C (в заплавленном капилляре); (с(.) »= -26,9 (с = l, нода) .

II p H м е р 3, 0-Аланил-Ь-3- (3, 4-диоксифенил) -2-метилаланин.

15,75 r (0,07 моль) сложного метилоного эфира L-3-(3,4-диоксифенил)—

--2-метилаланина и 16,83 г (0,075 моль) бензилоксикарбонил-D-аланина, т.пл. 84-85 С; (pC,)> = +14,8 (с = 2, уксусная кислота), в 350 мл диоксана обрабатынают 14,4 r (0,07 моль) ДЦГКД, как в примере 1. Получают 30,1 г (100Ъ) бесцветного сырого продукта, пропускают его через колонку и получают

29,1 г (96,6Ъ) сложного метилоного эфира бензилоксикарбонил-D-аланил-L-3-(3,4-диоксифенил)-2-.метилаланина в виде бесцветного порошка.

10,75 r (0,025 моль) полученного эфира гидролизуют, как в примере 1, 95 мл 1 н. едкого натра в течение

2 ч при комнатной температуре. Получают 9,46 г (91,0Ъ) бензилоксикарбонил D-аланил-L-3(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина н виде бесцветной пены.

Продукт однороден по данным ТСХ.

Гидрогенолиз бензилоксикарбониловой группы осуществляют, как в примере 1, используя 20,8 г (0,05 моль) продукта. Получают 14,05 г (99,6Ъ) сырого вещества, перекристаллизовывают его из 20 мл воды и получают

8,35 г бесцветного аналитически чистого моногидрата D-аланил-т -3-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланила, т.пл. 205 С; (сС) = +33,7 (с = 1, вода) .

Пример 4. L-N-Метилаланил-L-3-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланин.

15,75 г (0,07 моль) сложного метилоного эфира L-З-(3,4-диоксифенил)—

-2-метилаланина и 18,79 г (0,077 моль) бензилоксикарбонил-L-N-метилаланина, масло; (cC.) = -24,8 (с = 1, диметилформамид), в 350 мл безводного диоксана обрабатывают 14,42 r (0,07 моль)

ДЦГКД, .как в примере 1. Получают

29,21 г (94,0Ъ) бесцветного сырого продукта, хроматографируют era на колонке, элюируя смесью хлороформ-меTBHosI (20:1), H получают 14,18 r. (45,5Ъ) сложного метилового эфира бензилоксикарбонил-Ь-N-метилаланил-L-3-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланина в виде аморфного порошка.

1,1 r (0,025 моль) полученного эфира гидролизуют, как в примере 1, в течение 5 ч при комнатной температуре. Получают 9,20 r (85,5Ъ) порошкообразного бензилоксикарбонип-L-N-метилаланил-Ь-3 †(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина.

Смесь 10„27 г (0,025 моль) бензилоксикарбонил-1.-N-иетилаланил-1.—

656505

-3-(3,4-диоксифенил) -2»метнлаланина в 90 ил метанола и 30 мп воды гидрируют таналОгиЧНО прим ру 1 над

1 25 г Окиси палладин в 100 мл мета» иола. Получа зт 7,11 г (96,0Ъ) сырого продукта„ который хроматографируют на колонке .(90 х 3,0 см), заполненной аиликагелем 60 (70-230 меш, Керк), элюируя смесью ацетон-вода (4:1). Чистоту продукта контролируют методом ТСХ. Элюат упаривают в вакуме, остаток растворяют в небольшом 10 количестге воды, медгенно высаживают метанолом H сушат выпариванием. Получают 5„69 г (76,8Ъ) порошкообразного Х-,.<-метилаланил-Х.-З-(3,4-диО1<сифенил) -2-метилаланина, кОтОрый 15 после сушки при комнатной температуре еШе содержит 0,95 моля ВОДЫ и

0,63 моля этанола, (aC ) = +38,9 (с = 1, метанол), Пример 5. Р-Аланил-L-320 †(3,4-диоксифенил) -2-метилаланин.

15,15 г (0,07 моль) сложного метилового эфира ь -3-(3,4-диоксифенил)—

-2-метилаланина и 17,20 г (0,077 моль) бензилоксикарбонил- ф-аланина, -.ïë, 106 С, В 350 мл диоксана обрабатывают 14,4 r (0,07 моль) ДЦГКД, как В примере 1. Получают 27,8 г (92,4Ъ) бесцветного порошка, хроматографируют его на колонке и получают

15,15 г (50,3Ъ) сложного метилового эфира бензилоксикарбонил- р-аланил-Ь-З-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина. Чистоту продукта контролируют по дан ным ГСХ, 10,76 г (0,025 моль) полученного 35 эфира гидролизуют, как в примере 1 в течение 11,5 ч при комнатной температуре. Получают 8,90 г (85,6Ъ) бензилоксикарбонил- Р-аланил-L-З-(3,4— диоксифенил) -2-метилаланина В ВиДе 40 бесцветной пены.

Раствор 12,49 г (0,03 моль) бензилоксилкарбонил- Ь-аланил-L-Ç-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланина в 110 мл метанОла и 40 мл ВОДЫ гидрируют В присутствии 1,5 г окиси палладия в

100 мл метанола, как в примере 1.

Катализатор отделяют, хорошо промывают 200 мл воды и фильтрат упаривают в вакууме. Получают 7,88 г (92,9Ъ) сырого продукта, после перекристаллизации которого из 100 мл воды получают 6,64 r (78,4Ъ) бесцветного аналитически чистого дигидрата р-аланил-1 -3-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланина, т.пл. 147 С; (ck )

О . 2O

37 г7 (c = 1<,уксусная кислота) °

-Ю

Пример 6. L-Серил-L-Ç-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланин.

14,63 г (0,065 моль) сложного ме-, тилового эфира L-Ç-(3,4-диоксифенил)—

-2-метилаланина и 22,39 г (0,068 моль)

N-бензилоксикарбонил-О-бензил-L-серина в 325 мл диоксана обрабатывают

13,36 г (О 065 моль) ДЦГКД, как в примере 1. Получают 34, 15 г f 100Ъ) сыраго продукта в виде бесцветной пены, хроматографируют его на колонке (90 х 4,5 см), заполненной силикагелем 60 (Мер1<), элюируя смесью хлороформ-метанол (49:1), и получают

21,88 r (64,1Ъ) сложного метилового эфира N-бензилоКсикарбонил-0-бензил-L-серил-L-3-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина в виде аморфного порошка.

Чистоту продукта контролируют по данным 1СХ.

13,40 г (0,025 моль) полученного эфира растворяют в 100 мл тетрагидрофурана и, как в примере 1, гидролизуют 50 мл 2 н. едкого натра в течение 3 ч при 35 С. Смесь нейтрализуют 50 мл 2 í. HCC и тетрагидрофуран полностью отгоняют в вакууме.

Добавляют 40 мл воды, продукт гидролиза извлекают 100 мп этилацетата, далЬнейшую обработку ведут, как в примере 1, и получают 10,20 г (78,4Ъ)

И-бензилоксикарбонил-0-бензил-L-серил-L-З-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина в. виде бесцетного порошка.

Раствор 13,06 г (О 025 моль) N-бензилоксикарбонил-0-бензил-L-серил-L-З-(3,4-диоксифенил)- 2-метилаланина в 150 мл диоксана и 25 мл

1 н. НС<, прибавляют к свежему предварительно прогидрированному палла-. дию (1,25 г окиси палладия в 90 мл диоксана и 30 мл воды), через смесь в течение 6 ч при 25 С пропускают водород. Катализатор отделяют, фильтрат нейтрализуют 25 мл 1 н. едкого натра, упаривают, остаток сушат в вакууме, растворяют в 70 мл воды и охлаждают до О С. Получают

2,24 г (30,1Ъ бесцветного аналитически и.хроматографически чистого

L-серил-L-3-(З,4-диоксифенил) -2-метилаланина, который после сушки в вакуум-эксикаторе содержит еще

2,3 моля воды, т.пл. 196-197 С (разл); (О(.) = -4,4 (с = 1, уксусная кис2о лота).

Пример 7. L-Лейцил-L-З-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланин.

16,90 r (0,075 моль) сложного метилового эфира L-З-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина и 21,87 г (0,083 моль) бензилокисикарбонил-L-ëåéöHíà, (с<.) ф= -18,4@(с = 1, уксусная кислота), в 380 мл диоксана обрабатывают 15,45 г (0,075 моль)

ДЦГКД, как в примере 1. Получают

35,4 г (100Ъ) бесцветного порошка, очицают его аналогично примеру 1 и получают 21,70 r (61,4Ъ) сложного метилового эфира бензилоксикарбонил-L-лейцил-L-3-(З,4-диоксифенил) -2-метилаланина в виде аморфного порошка.

18,88 г (0,04 моль) полученного эфира гидролизуют 152 г 1 н. едкого натра в течение 2 ч при комнатной температуре аналогично примеру 1 и после обработки получают 14,32 г (78,2Ъ) хроматографически однородно65650

ro бенэилоксикарбонил-Ь-лейцил-Ь—

-3-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина в виде аморфного порошка. 2,0 г окиси палладия предварительно гидрируют в 110 мл метанола и 25 мл воды, прибавляют раствор 18,34 r (0,04 моль) бензилоксикарбонил-L-лейцил-L-3-(3,4- 5

-диоксифенил) -2-метилаланина в 120 мл метанола и 50 мл воды и гидрируют

2 ч. Получают 13,0 г (100Ъ) сырого продукта, который перекристаллизовывают из 30 мл воды, и выделяют 8,34 г(0 бесцветного хроматографически и аналитически чистого L-лейцил-L-3-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина, который после сушки в вакуум-эксикаторе содержит 2,5 моля воды, т.пл. 106-107 С}я (в заплавленном капилляре); (С )

-21,4 (с = 1, вода) .

Пример 8. L-Фенилаланил-L-3-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланин.

В результате взаимодействия

15,78 г (0,07 моль) сложного метипового эфира L-З-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланина и 23,92 г (0,08 моль) бензилоксикарбонил-L-фенилаланина, т пл 85 87. С. ()ао +4 бо( — 1,5, уксусная кислота) в 350 мл диаксана с 14,42 r (0,07 моль} ДЦГКД в условиях примера 1 получают

35,45 г (100Ъ) сырого продукта в виде бесцветной пены. После хроматографирования на колонке, как в примере 1, получают 33,67 г (95Ъ) сложного метилового эфира бензилоксикарбонил-L-фенилаланил-L-З-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланина в виде аморфного порошка. 35

20,26 г (0,04 моль) полученного эфира -идролизуют 152 мл 1 н. едкого натра в течение З,ч при комнатной температуре и обрабатывают, как в примере 1. Получают 16,35 г (83Ъ 40 бензилоксикарбонил-Ь-фенилаланил-L-3-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина в виде желтоватого хроматографически однородного порошка .

19,70 r (0,04 моль) бензилоксикаркарбонил-фенилаланил-L-3-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина подвергают гидрогенолизу, как в примере 1, в течение 5 ч при комнатной температуре (2,0 г окиси палладия в 330 мл метанола). Получают 14,08 r (98,1Ъ) сырого продукта, переосаждают его из спиртового. раствора с помощью дйэтилового эфира и сушат в течение 2 ч при

80. С в вакууме, создаваемом масляным насосом, над пятиокисью фосфора. Получают 9,61 г чистого моногидрата

L-фенилаланил-L-3-(3,4-диоксифенил)—

-2-метилаланина, т.пл. 160-163 C (разл.); (K ) = +8,1 (с = l, метанол) . 60

Пример 9. Ь-Тирозил-L-3†(3,4-диоксифенил) -2-метилаланин-.

9,0 г (0,04 моль) сложного метилового эфира L-3-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланина и 22,08 r (0,063 моль) дигидрата N-бензилоксикарбонил-Ь5 lO

-тирозина, (о(.) = +3,8 (с = 1,5, уксусная кислота}, в 200 мл диоксана обрабатывают 11,3 r (0,055 моль)

ДЦГКД, поступают далее, как в приме= ре 1, и хроматографируют на колонке.

Получают 19,7 г (94,2Ъ) сложного метилового эфира бензилоксикарбонил-L-zvpoazz-L-3"(3,4«диоксифенил) -2-метилаланина в виде бесцветного порошка.

20,90 г,(0,04 моль) полученного эфира гидролизуют 192 мл 1 н. едкого натра в течение 2,5 ч при комнатной температуре и обрабатывают, как в примере 1, получая 18,20 г (89,5Ъ) хроматографически однородного бензилоксикарбонил-Ь-тирозил-L-З-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланина.

1,5 r окиси палладия предварительно гидрируют в 100 мл метанола и

20 мл воды, прибавляют раствор 15,?5 г (0,03 моль) бензилоксикарбонил-Ь-тирозил-L-3-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина в 150 мл метанола и 30 мл воды, гндрируют в течение 3 ч и после обработки пс}лучают 10,4 г (92,5Ъ) бесцветчого сырого продукта, который перекристаллизовывают из 20 мл воды.

Выделяют 8,1 r (72,6Ъ) хроматографически и аналитически чистого-I -тиразил-L-3-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланина, т.пл. 205 С (разл. при быстром нагревании); (cC ) > = +6,5е (с = I, 2о

;метанол).

Пример 10. L-3-(3,4-Диокснфенил)-2-метилаланил-L-3-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланин.

13,50 r (0,06 моль} сложного метилового эфира Ь-3-(3,4-диоксифенил} †. 2-метилаланина и 22,80 r (0,066 моль)

N-бензилоксикарбонил-L-3-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина в 300 мл диоксана обрабатывают 12,36 г (0,06 моль)

ДЦГКД в условиях примера 1, сырой продукт хроматографируют на колонке (90 х 5,5 см) с силикагелем 60 (Керк),, элюируя смесью хлороформ-метанол (10:1), и получают 10,62 r (32,1Ъ) порошкообразного хроматографически чистого сложного метилового эфира Ы-бензилоксикарбонил-L-(3-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланил)-Ь-З-(3,4-диоксифенил)-,2-метилаланина.

22,10 г (0,04 моль) полученного эфира гидролизуют 232 мл 1 н. едкого натра в течение 3,5 ч при комнатной температуре и обрабатывают аналогично примеру 1. Получают 16,5 г (76,7Ъ) хроматографически однородного И-бензилоксикарбонил-1 -(3-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланил) -L-З-(3,4-днокснфенил) -2-метилаланина (И-бензилоксикарбонил-о(. -метил-допил-L- cC-меткл-допа).

1,25 г окиси палладия предварительно гидрируют в 100 мл метанола и

30 мл воды, прибавляют раствор

13,46 r (0,025 моль) N-бензилоксикарбонил-L-с -метил-допил-Ь L— су -метил656505

-допа в 90 мл метанола, гидрируют н течение 3-4 ч и после обработки получают коричневатый сырой продукт, который хроматографируют на колонке (90 х 5,5 см) с силикагелем

60 (Иерк), элюируя смесью ацетонвода (8:1}, Хроматографически чистый 5 элюат упаривают в вакууме, растворяют остаток в 50 мл воды, обрабатывают неоольшим количеством угля и сушат в вакууме. Получают 38 г порсшкообразного аналитически чистого Х -(3- 10

-(3,4-диоксифенил} -2-метилаланил)-L-3- (3,4-диоксифенил) -2-метилаланина (L-M-метил-допопил-L-N -метилдопа), который после сушки в вакуумэксикаторе содержит еще 2,36 моля )5 воды, («..) . = +34,4 (с =- 1, вода) . с о д

Исходный N-Бензилоксикарбонил-Ь-З-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланин можно получить следующим образом.

В трехгорлую колбу на 1 л, сйаб- 0 женную мешалкой, двумя капельными воронками и подводом для газа, помещают 23,8 r L-3-(3,4-диоксифенил)—

-2-метилаланина (содержание воды

11,8Ъ, мол.вес 238) . После полнбго удаления воздуха с помощью слабого тока азота приливают при охлажДении льдом через капельную воронку

150 мл 2 н. едкого натра и охлаждают до О С. В течение 25 мин прикапывают при интенсивном перемешивании . ,и охлаждении льдом, чередуя друг с другом, маленькими порциями раствор 66 мл сложного бензилового эфира хлормуравьиной кислоты в 66 мл толуола и 150 мл 2 н. едкого натра. 35

После перемешивания в течение 30 мин слегка подкисляют б н. НСС, продукт реакции экстрагируют 3 х 200 мл дизтилового эфира. Экстракты промывают 0,5 н. НСО, сушат сульфатом 40 натрия, выпаривают в вакууме и получают 59,57 г (97,4Ъ) N-бензилоксикарбонил-L-3-(3,4-дибензилоксикарбонилоксифенил)-2-метилаланина в виде хроматографически и аналитически чистой желтоватой смолы.

12,26 r (0,02 моль) N-бензилоксикарбонил-L-3-(3,4-дибензилоксикарбонилоксифенил)-2-метилаланина растворяют в 550 мл тетрагидрофурана и 890 мл воды и гидролизуют 160 мл

1 н . едкого натра 1 ч при комнатной температуре, нейтрализуют 160 мл

1 н. HCC и в вакууме полностью отгоняют тетрагидрофуран. Добавляют

40 мл воды, экстрагируют 100 мл 55 этилацетата и экстракт обрабатывают, как в примере 1. Получают 5,80 г ,(84,1В) хроматографически однородного очень вязкого желтоватого масла.

Пример 11. L-Аланил-L-ала60 нил-L-3- (3, 4-диоксифенил) -2-метилаланин.

Раствор 11,25 г (0,05 моль) метилового эфира L-3-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина и 16,18 (0,055 моль) бензилоксикарбонил-?—

-алампил-L-аланина, т.пл, 152-153 С; (с )П = -34,5 (c = 1, метанол) в

250 мл диоксана подвергают пептидному синтезу с (0,05 моль) ДЦГКД, как в примере 1, и получают 11,76 г (46,93) порошкообразного хроматографически чистого сложного метилового эфира бенэилоксикарбонил-L-аланил-L-аланил-L-3-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина.

12,5 г (0,025 моль) полученного эфира гидролизуют 190 мл 0,5 н. едкого натра в течение 50 мин при комнатной температуре и обрабатывают, как в примере 1. Получают 4,90 г (40,3Ъ) хроматографически однородного Н-бензилоксикарбонил-N"L-аланил-L-апанил-L-3-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина.

1,9 г окиси палладия предварительно гидрируют в 50 мл метанола и 5 мл воды, прибавляют раствор 9,75 r (0,02 моль) И-бенэилоксикарбонил-трипептида в 80 мл метанола и гицрируют 3-4 ч. Бесцветный сырой продукт пропускают через колонку (90 х х 3,5 см) с силикагелем 60 (Nep ), элюируя смесью ацетон-вода (4:1) .

Хроматографически чистый элюат упаривают в вакууме, сушат в эксикаторе и получают 6,14 r аналитически чистого L-аланил-L- aviv-L-З-(3,4-диоксифенил) -2-метилаланина в виде желтоватого порошка, который содержит

1,78 моля воды, (M ) = +20,5 (с = 1, метанол).

Формула изобретения

Способ получения L""3-(3,4-диоксифенил)-2-метилаланинпептидов общей формулы где A — насыщенная, линейная или разветвленная низшая алкиленовая цепь, которая может быть замещена оксигруппой или фенильным остатком, имеющим в случае необходимости оксигруппы

R — водород, низшая алкильная группа или аланильный остаток, отличающийся тем, что

L-3-(3,4-диоксифенил) -2-мет@паланин формулы ио

СН, NQ 14

/ !

13 656 где окси- и/или карбоксигруппы могут быть защищены, конденсируют с карбоновыми кислотами общей формулы

Я ОС-А-7 где A имеет вышеназванные значения (I

R — оксигруппа, низший алкоксил, 6 галоген;

Z — галоген или NHR-группа, в которой R имеет вышеназванные значения, в присутствии инертных растворителей и водоотщепляющих средств при комнат-)Q

505 )4 ной температуре с последующей, в случае когда 2 — галоген, обработкой полученного продукта амином общей формулы NH

Источники информаиии, принятые во внимание при экспертизе

1. Порошин К.Т., Шибнев В.A.

Синтез полиаминокислот и регулярных полипептидов, Душанбе, ДОНИШ, 1968, с. 3l.

2. Шредер Э., Любке К. Пептиды, ч.l, И., Мир, 1967 с . 27, 57. р E Ы

Тираж 512 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва Ж-35 Раушская наб. д. 4/5

Заказ 1581/52

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Составитель В. Волкова

Редактор Т. Ша ганова Тех ед З ° фанта Ко ректорИ. Ковальчук