Способ определения антигена или антител е вируса гепатита в

 

И С А Н И Е (щя2О91

О П изоы вт ин и я

Союз Советских

СоКиалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (б1) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 31.07.78 (21) 2663727128-13 (51) М. Кл 2

А 61К 39/00 с присоединением заявки ¹

Государственный комитет (23) Приоритет (43) Опубликовано 30.01.80. Бюллетень № 4 (45) Дата опубликования описания 30.01.80 (53) УДК &616-07 (088.8) по делам изобретений и открытий (72) Авторы изобретения

А. Ф. Блюгер и Е. К. Яворковская

Рижский медицинский институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНА ИЛИ АНТИТЕЛ Е

ВИРУСА ГЕПАТИТА В

Изобретение относится к области медицины, а именно иммунологии.

Известен способ определения антигена или антител Е вируса гепатита В путем сведения антигена и антител в реакции иммунодиффузии в геле в присутствии поддерживающей среды с последующим учетом полученных результатов (1).

Однако известный способ обладает низкой чувствительностью, процент выявления антигена E вируса гепатита В у больных равен 5 — 10, кроме того, результат получают через 24 — 48 ч, а в отдельных случаях даже через 7 суток.

Целью изобретения является повышение чувствительности и ускорение определения.

Эта цель достигается тем, что реакцию осуществляют при соотношении антиген— антитело 1: 13, при этом в качестве поддерживающей среды используют агарозный гель, приготовленный на буфере рН 7,1—

7,5, и реакцию ведут при 33 — 37 С.

Способ осуществляют следующим образом.

Реакцию начинают с приготовления буферного раствора. Состав буферного раствора (на 0,5 л дистиллированной воды): протамин сульфат 1 г; ЭДТА (этилен-дионин-тетра-ацетик) или трилон Б 0,372 г; веронал 0,491 r; поваренная соль 2,34 r; рН буферного р а створ а 7,3.

Реакцию проводят в 10 с-ном агарозном геле на предметных стеклах, На каждое предметное стекло заливают по 3,5 мл агарозного геля, после застывания которого в

5 нем металлическим пробойником вырезают одну центральную лунку (диаметром 3 мм) и круговую траншею (наружный диаметр

15 мм, внутренний — 10 мм); емкость центральной лунки 12 мкл, а круговой траншеи

1О бО мкл (соотношение антиген — антитело

1: 13).

Гель из центральной лунки и круговой траншеи отсасывают.

При заполнении центральной лунки сы15 вороткой, содержащей антиген E вируса гепатита В (НВ,Аг), а круговой траншеи сывороткой с антителами E вируса гепатита В (НВ,Ат) через 3 — 4 ч появляется круговая линия преципптации вокруг централь20 ной лунки. Реакцию проводят при 33 — 37 С.

Имея контрольную сыворотку, содержащую НВеАг, можно определять НВеАт в исследуемых жидкостях (сыворотке крови), 25 для чего необходимо контрольную сыворотку с НВ,Аг залить в центральную лунку, а исследуемую сыворотку в круговую траншею. При определении HBeAr в исследуемых жидкостях ее помещают в центральную

30 лунку, а контрольную сыворотку, содержащую НВ,Ат, заливают в круговую траншею, 712091

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Техред А. Камышникова Корректор О. Данишева

Редактор 3. Ходакова

Заказ 2792/6 Изд. № 120 Тираж 673 Подписное

НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская паб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Появление круговой линии преципитации между центральной лункой и круговой траншеей указывает на положительный результат, т. е. на наличие НВ«Аг или НВеЛт в исследуемой сыворотке крови.

При низком содержании антигена Е вируса гепатита В (НВ,Аг) в исследуемой сыворотке крови ее вносят в центральную лунку три раза с интервалом времени в

1 — 2 ч или по кругу вводят соответствую- 10 щие антитела с более низкой концентрацией, используя разведенные в физиологическом растворе антитела (1: 2 — 1: 8 и т. д.).

При низком содержании антител Е вируса гепатита В в исследуемом материале — 15 сыворотке крови — ее вводят дважды в круговую траншею с интервалом времени в2 — Зч.

Предлагаемый способ позволяет повысить чувствительность в 3 — 4 раза и ускорить 20 регистрацию результата реакции в 12 — 14 раз при достаточной простоте постановки.

Способ определения антигена или антител Е вируса гепатита В путем сведения антигена и антител в реакции иммунодиффузии в геле в присутствии поддерживающей среды с последующим учетом полученных результатов, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и ускорения определения, реакцию осуществляют при соотношении антиген — антитело

1: 13, при этом в качестве поддерживающей среды используют агарозный гель, приготовленный на буфере рН 7,1 — 7,5, и реакцию ведут при 33 — 37 С.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. 1. О. Magnius, J. А. Espmark. New

specificities of Australia antigen positive

sera distinct from the Le Bouvier determinants J. of Immunologi, 1972, v. 109, № 5, рр. 1017 — 1021.