Способ получения производных винбластина

 

О П И (: -А- Н И- Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

CoIo3 Советскик

Сфциаиистичесиик

Республик

< 731900 (6!) Дополнительный к патенту—! (22) Заявлено 01.04.74 (21) 2013753/23-04 (5!) М. Кл. (23) Приоритет — (32) 02.04.73

С 07 D 519/04//

A 61 К 31/475

Государственный комитет ссср но делам изобретений и открытий (3!) 347225 (33) CIIIA

Опубликовано 300 480.бюллетень A&16 (53) УДК547.94.07 (088. 8) Дата опубликования описания 300480

Иностранцы

Джордж Джозеф Куллинан и Коерт Джерэон (ClIIA) (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма Эли Лилли энд Компани (CItlA) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ BHHBJIACTHHA

Известен способ получения амндов карбоновых кислот, заключающийся в том, что сложный эфир карбоновой кислоты подвергают взаимодействию с аммиаком или аминами (1).

Вит

NI — В

0й-0-ес3

- бй,-ец о вФ

Е3С-0! ю, е-в !0 к

0 где R - амино-, гидраэино,- аэидо

I или метиламиногрупна . °

R - водород или С - С алканоил! 5

R - водород или С - С алкилт

R" — оксигруппа;

III I

R - этил, обладающих фармакологической активностью, ЗО

Изобретение относится к способу получения не описанных s литературе производных винбластина общей формулы A

Использование известной реакции позволяет получать не описанные в литературе производные винбластина общей формулы A.

Цель изобретения — способ получения новых фармакслогически активных производных винбластина общей формулы A °

Поставленная цель достигается описываемым способом получения производных винбластина общей .формулы А, заключающимся в том, что соединение общей формулы А, где R -метоксигруппа, R, R", R и R ймеют вькаеукаэанные значения, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы RH, где R — амино,- гидраэино-, азидо.» или метиламиногруппа, в безводном метаноле или этаноле при 50-100оC. В случае необходимости соединение общей формулы А, где R — гидраэиногруппа, нитрозируют.для получения соединения общей формулы А,где R — - азидогруппа.

731900

Целевые соединения формулы Л выделлют и разделяют известными методами.

Производные винбластина общей формулы А обладают антивирусной и противоопухоленой активностью.

П р и м.е р 1. Винбластин-С-ÇN-метилкарбоксамид и 4 -дезацетилнинбластин-С-ÇN-метилкарбоксамид.

К раствору 21 г метиламина в о

100 мл безводного метанола при -78 С добавляют примерно 3,5 г нинбластина о и оставляют на 8 дней при 50 С, затем удаляют летучие компоненты при выпаривании в вакууме. По данным спектра ядерного магнитного резонанса (ЯМР) и инфракрасного спектра остаток представляет собой смесь

4-дезацетилвинбластин-С-ЗМ-метилкарбоксамида и 4-дезацетилвинилбластина.

Этот остаток растворяют в 100 мл пиридина и добавляют 20 мл уксусного ангидрида, оставляют на 18 ч, затем выпаривают в вакууме. Полученный остаток хроматографируют на окиси алюминия, применяя смесь этилацетат и хлороформа (1:1) для элюирования.

Фракции, содержащие винбластин-С-ÇN—

-метилкарбоксамид, объединяют и удаляют растноритель при выпаривании в вакууме.

При описанной выше методике ацетилиронания реацетилируют не только

С-4-гидроксил, но также ацетилируют

С-3-гидроксил . Ацетильную группу у С-3 удаляют обработкой силикагелем в водном метаноле при комнатной температуре в течение времени от 6 ч до нескольких дней и получают продукт, не содержащий С-3-ацетильной группы. В этом случае остаток объединенных хроматографических фракций растворяют н 50 мл метанола и к раствору добавляют 20 мл воды и 2 r силикагеля. Полученную смесь фильтруют, фильтрат выпаривают досуха в вакууме и остаток хроматографируют на силикагеле. Для элюирования применяют смесь бензола, хлороформа и триэтиламина (100:50:7,5) отбирают фракции, содержавшие желательный винбластин-С-ÇN-метилкарбоксамид.

Удаляют растворитель при выпаривании в вакууме. Остаток растворяют в водном метаноле и устанавливают

РН Э 9 при добавлении 13-ной кисло1 о ты.,После выпаривания полученной смеси в вакууме получают сульфат винбластин-С-ÇN -метилкарбоксамида, который после перекристаллизации из безводного этанола имеет темперао туру плавления 272-275 С (с разложением) .

4-Дезацетилвин бластин-С-ÇN-метилкарбоксамид выделяют из смеси с 4- °

-деэ ацетилвин бластином, полученной на стадии амидиронания, следующим способо)к.

Остаток, полученный при выпаривании первоначальной (до перекристаллизации) реакционной смеси досуха в вакууме, хроматографируют на сили кагеле, применяя для элюиронания смесь бензола, хлороформа и триэтиламина, указанную выше. Фракции, содержащие 4-дезацетилвинбластин-С- .

-ЗИ-метилкарбоксамид, как установлено тонкослойной хроматографией, объединяют, выпаривают в вакууме растворитель и получают N-метилкарбоксамид и виде аморфного твердого вещества.

Сульфат 4-дезацетилвинбластин-С— 3N-метилкарбоксамида получают по методике, описанной для приготовления

15 сульфата винбластин-С-ÇN-метилкарбоксамида.

По описанной выше методике 2 г 4-дезацетилвинбластина растворяют в смеси 75 мл безводного метанола

2О и 20 г этиламина. Реакционную смесь нагревают при температуре около

60 С в течение примерно 8 дней. Полученный 4-дезацетилвинбластин-С-ÇN-этилкарбоксамид отделяют методом

25 хроматографии в тонком слое. Получен.ное твердое вещество имеет полосу при 1670 см " в инфракрасном спектре, характерную для замещенного карбоксамида.

Пример 2. 4-Дезацетилвинбластин-С-З-карбоксамид.

Примерно 10 r сульфата винбластина превращают обычным способом в свободное основание винбластина. Это основание, полученное в виде остатка после выпаривания эфира, растворяют примерно в 200 мл безводного метанола. К раствору добавляют безводный жидкий аммиак (300 мл), реакционную смесь выдерживают при температу40 ре около 100 С н течение 60 ч. Затем выпаривают в вакууме. Полученный остаток хроматографируют и фракции, содержащие 4-дезацетилвинбластин-С-З-карбоксамид, как показала тонко45 слойная хроматография, объединяют, выпаривают в вакууме растворитель и получают в виде остатка чистое свободное оснонание 4-дезацетилвинблас. тин-С-3-карбоксамида. Свободное основание имеет полосу в инфРакРасном спектре 1687 см ", характерную для амидной группы. Молекулярный вес свободного основания, определенный масс-спектроскопией,равен 753, что

55 совпадает с величиной, вычисленной теоретической для С4з Нз Из О .

600 мг остатка превращают в сульфат в условиях примера 1..При выпаривании реакционной смеси досуха получают сульфат 4-деэацетилнинбластин О-С-Ç-карбоксамида, который после перекристаллизации из смеси этанола и изопропилового спирта плавится при

250ОС (с разложением).

4-Дезацетилвинбластин-С-3-карбоксамид превращают в винбластин-С-3731900

- карбоксамид по методике примера 1 сл едующим образ ом.

2,8 г свободного основания 4-дезацетилвин бластин-С-3-карбоксамида ацетилируют смесью безводного пиридина и уксусного ангидрида. Реакцион- 5 ную смесь выдерживают в течение трех дней при комнатной температуре. После удаления летучих компонентов путем выпаривания в вакууме получают остаток, который растворяют в хлорис- t0 том метилене. Раствор промывают водой, высушивают и выпаривают досуха, получают винбластин-С-З-карбоксамид.Амид очищают хроматографией на силикагеле, применяя для злюирования смесь этил- 5 ацетата и этанола (1:1) .Фракции,содержащие винбластин-С-3-карбоксамид,как показала хроматография в тонком слое, обьединяют, выпаривают растворитель и получают в виде остатка свободное основание винбластин-С-3-карбоксамида. Это основание имеет характерную для амида полосу в инфракрасном спектре около 1700 см . Молекулярный вес, определенный масс-спектроскопией, равен 795, то есть совпадал с теоретической величиной, вычисленной для

С4 Н В7 N O . Сульфат вин бластин-2-3-карбоксамида получают способом, описанным в примере 1, и кристаллизуют из этанола; т.пл. выше 250ОC.

Пример 3 ° 4-Дезацетилвинбластин-С-З-карбоксигидразид.

По методике из примера 1 4-дизацетилвиибластин нагревают в безводном этаноле с избытком безводного гидразина при температуре около 60 С в течение примерно 18 ч, затем выпаривают в вакууме. летучие компоненты.

Полученный остаток, состоящий из 40

4-дезацетилвинбластин-С-3-карбоксигидразида, растворяют в хлористом метилене. Этот раствор промывают водой, отделяют и удаляют хлористый метилен при выпаривании в вакууме. 45

Остаток растворяют в смеси хлороформа и безола (1:1) и хроматографируют на силикагеле. Для элюирования применяют смесь бензола, хлороформа и триэтиламина, указанную в при- 50 мере 1.

Начальные хроматографические фракции содержат непрореагировавший 4-дезацетилвинбластин ° Последующие фракции содержат 4-дезацетил-18-дескарбометоксивинбластин-С-3-карбоксигидраэид. Следующие фракции, содержащие 4-дезацетилвинбластин-С-3-карбоксигидразид, как установлено тонкослойной хроматографией, объединяют и удаляют из них растворитель при выпаривании в вакууме. Полученное твердое вещество плавится при 210220 С (с разложением) . Полученный таким образом 4-дезацетилвинбластин- 65

-С-3-карбоксигидразид имеет полосу поглощения карбметокси в инфракрасном спектре при 1725-1735 см и полосу в 1690 см,обусловленную гидразидной функцией. Молекулярный вес, определенный масс-спектрографией, равен

768, что соответствовало теоретической величине вычисленной для С4 Н Я40

Пример 4, 4-Дезацетилвинбластин-С-З-карбоксазид.

Раствор 678 мл 4-дезацетилвинбластин-С-3-карбоксигидризида (пример 3) и 15 мл безводного метанола смешивают с 50 мл 1 н.раствора соляной кислоты и полученный раствор охлаждают примерно до 0 С. Затем добавляют примерно 140 мг нитрита натрия и реакционную смесь перемеши вают 10 мин., поддерживая температуру около 0 С, При добавлении 140 мг нитрита натрия и перемешивании

10 мин при О С раствор приобретает темную-красновато-коричневую окраску.

Затем реакционную смесь подщелачивают избытком холоднorо 5Ъ-ного водного раствора бикарбоната натрия и трижды экстрагируют хлористым метиленом.

4-Дезацетилвинбласгин-С-3-карбоксазид, образовавшийся в этой реакции, растворяют в хлористом метилене.

Обычно раствор 4-дезацетилвинбластин-С-3-карбоксазида в хлористом метилене применяют без дополнительной очистки и аликвотное количество его обрабатывают способом для идентифи- кации азида. При выпаривании хлорис-того метилена получают азид в аморфном состоянии. Этот остаток промывают эфиром и фильтруют полученную суспензию . Остаток в виде порошка ры-. жевато-коричневого цвета имеет следующие физические свойстваг ультрафиолетовый спектр Л„ „, =?69 ммк (P.

16700) у плечо около 290 — 309 ммк (Е 7100), максимум поглощения в инфракрасном спектре при 1690 см " (карбоксигидразид) отсутствует максимум при 1730 см" не изменяется. Кроме того, присутствует резко выраженный максимум при 2135 см ", характзрный для карбоксамидной функции.

В масс-спектре наблюдается молекулярный ион m/е = 708, доказывающий потерю 71 единицы массы (Н, CON>) из молекулярного веса, вычисленного для С4з Низ N>O> 799, В таблице йоказаны результаты нескольких экспериментов, при которых

ылаам с трансплантированными опухолями вводят соединения формулы A. POC означает остеогейную саркому Риджвея и ГЛС лимфосаркому Гарднера, CA 755 аденосаркому.

Соединения формулы А, ядовиты для мышей при дозах больше тех, при которых происходит 100%-ное торможение роста трансплантированных опухлей, 731900

Соедин ение

Доза, мг/кг„

* дни

Опухоль

Замедление роста, %

0,25-0,3х9

0,15-0,3х10

0,15-0,4х8

0,1-0,5х10

0,5-0,8х8

0,15-1,0х10

35-49

48-100

60-lOCi

23-84

Сульфат винбластин-С- РОС

-3-карбоксамида

Сульфат 4-дезацетилвин- ГЛС бластин-С-3-карбоксамида

ГЛС

47-100

79-109

49-100 38-100

0,15-0,4х10

0,1-0,25х8

Сульфат винбластин-С-ЗН-метилкарбоксамида

57-100

49-100

0,1-0 Зх10

0,1-0,3х8-10

4-Деэацетилвинбластин-С-3-карбоксигидразид

О, 2-0,4х10

73-100 ЕЗ

И к, о

el3, @ИЗ

0-В но

45 и

c-a

И

Составитель T. Левашова

Техред Ж.Кастелевич Корректор M,Вигула

Редактор Л.Герсимова

Заказ 3266/59 Тираж 495 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. ужгород, ул. Проектная, 4

Соединения формулы А активны так« же в отношении других трансплантированных опухолей. Например, при инъек ции 0,25 мг/кг в течение 9 дней сульфата винбластин-С-3N-метилкарбоксамида для лечения лимфосаркомы

Мекка, рост замедлялся на 54%, а при инъекции винбластин-С-3 на 283.

Сульфат 4-дезацетилвин- С Н грудной бластин-С-3-метилкарбохс- железы амида

POC

ГЛС

Формула изобретения

1. Способ получения производных винбластнна общей формулы A где R - амино-, гидразино-, азидоили метиламиногруппа у

I , — водород или С вЂ” Сз алканоил °

При исследовании активности в отношения адемокарциомы СА 755 установлено, что сульфат 4-деэацетилвинбластин-С-3-карбоксамида дал 75% замедления роста опухоли, сульфат -4-дезацетилвинбластин-С-ЗМ-метилкарбоксамида

61% и сульфат винбластин-С-3-карбоксамида 49% при дозе 0,25 мг/кг в течение 8 дней и 72% при дозе 0,3 мг/кг, R — водород или С вЂ” С алкил;

It( л э

R — оксигруппа;

R" - этил, отличающийся тем, что, соединение общей формулы А, где Rметоксигруппа R, R ",,R ", и R имеют вышеуказанные значения, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы RH где R - амино-, гидразино- или метиламиногруппа, в безводном метаноле или этаноле при

50-100 С и в .случае необходимости о соединение общей формулы А, где Rгидразиногруппа, нитрозируют для получения соединения общей формулы А, где R — - аэидогруппа после чего целевые продукты выделяют.

Источники информации, принятые во внимацие при экспертизе

1. Вейганд-Хильгетаг. Методыэксперимента в органической химии., N., изд. химия,. 1968.