Питательная среда для выявления р детерминанты вирулентности

Авторы патента:

C12K1/06 - Биохимия; пиво; алкогольные напитки; вино; уксус; микробиология; энзимология; получение мутаций; генная инженерия

ОПИСАНИЕ щ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

CoIos Севетсиии

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ С ТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. саид-ау (22) Заявлено 030678 (21) 2640373/28-13 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет

Опуоликоваио 050680 Бюллетень ¹ 21

Дата опубликования описания 050630 (51)M. Кл.

С 12 К 1/06

ГосударственнмЯ номнтет

СССР но делам нзобретеннЯ н открмтн 4 (53) УДК576.8,093. . 1 (088.8) (72) Автор изобретения

К. В, Дурихин (71 ) Заявитель

Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт (5 4 ) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫЯ ВЛЕНИЯ Р+

ДЕТЕРМИНАНТЫ ВИРУЛЕНТНОСТИ

0,4-0,7

1, 8- 2, 5

О р О 5-0, 30

Однако известная среда является сложной и дорогостоящей.

Целью изобретения является упрощение среды с сохранением ее ростовых свойств.

Эта цель достигается тем, что среда содержит в качестве ростового фактора сернокислое закисное железо, в качестве красителя вЂ” Эванс голубой при следующем количественном соотношении компонентов (г/л воды):

Агар 18, 0-20, 0

Калий фосфорнокислый однозамещенный

0,0001-0,0005 ( (О, 5-2, О

0,01-0,10

4,0-4,2

Изобретение относится к области медицины, а именно микробиологии.

Известна питательная среда для выявления р детерминанты вирулентности, содеркащая агар, калий фосфорнокислый однозамещенный, хлористый аммоний, сернокислый аммоний, галактозу, B-фенил-4аланин, метнонин, цистеин, валин, изолейцин, глицин, сернокислый магний, сернокнслый цинк, сернокисяый марганец, 4В-раствор молочной кислоты, аргннин, краситель, ростовой фактор и воду (11.

Хлористый аммэний О, 4-0,7

Сернокислый аммоний

Галактоза

В-фенил-danaнин О,10-0,18

Метноннн 0 05-0 10

1О 0,04-0,08

Валин 0,04-0,08

Изолейцин 0,05-0.,10

Глицин 0,04-0, 10

Сернокислый магний

Сер ноки слый цинк 0,0001-0,0005

Сернокислый марганец

Молочная кислота

Эванс голубой

Сернокислое закисное железо 0, 3-1,0

Аргинин О, 1-0,2.

Способ иллюстрируется следующим примером.

Пример. Для приготовления

:1 л дифференциальной среды с звано

739 1{} 4

Формула изобретения

0,4-0,7,7 ,5,18, 10 ,08 ,08 ,10 ,1, 30,0005,0005,О,10

11HHHGH Заказ 2777/24 Тираж 522

Подписное

Филиал ППП Патент „ г. ужгород, Ул. Проектная, 4 гоЛубым 20 г агар-агара эамачивают в дистиллированной воде. Набухший агар-агар промывают, меняя воду в течение 2-3 суток не менее 8-10 раэ, Отмытый агар расплавляют нагреванием в 500 мл воды, устанавливают рН 1N раствором NaOH до 7, О. Продолжая нагревание, добавляют 4, 12 r КН РО, растворенного в 300 мл воды при оН 8 0 (добавляя 1N NaOH), 0,53 г

NHg Cf раст воренного в 10 О мл воды и 0, 53 r (NHq )р БОч, растворенного также в 100 мл воды. Агар перемешивают, доводят до кипения, устанавливают рН до 7,4-7,5 и автоклавируют при 120 20 минут. После автоклавирования агар фильтруют и стерильно на 1 литр агара прн температуре

55< 5 добавляют следующие компоненты среды:

2 r галактозы (10,0 мл 20% раствора)

120 мг -феннл- -аланнна (30 мл

0,4% раствора)

60 мг метионина (5 мл 1, 2% раствора )

48 мг цистеина (5 мл 0,96% раствора)

48 мг валина (5 мл 0,96% раствора )

55 мг иэолейцина (15 мл О, 363% раст вора)

50 мг глицина (5 мл 1% раствора)

100 мг MgSOg (2,5 мл 4% раствора)

0,1 мг ZnSOq (1 мл 0,01% раствора)

0,1 мг MnSOq (1 мл 0,01% раствора)

40 мг молочной кислоты (1 мл 4% раствора)

104 мг аргинина (10 мл 1, 04% раот вора)

30 мг Эванса голубого (5 мл 1% раствора)

800 мг Fe (16 мл 5% раствора)

Готовую среду разлив ают в чашки:

Петри, которые на сутки помещают в термостат прн 37 для проверки на стерильность. На чашки высевают по

200-500 м.к. изучаемого штамма чум-}( ного микроба и выращивают при 28 в течение 4-6 суток. P колонии-темб но синие, Р вЂ” светлые.

Данная среда может быть модифицирована путем использования в качестве стимулятора роста сульфита натрия в конечной концентрации 0,1% либо соли Мора в конечной концентрации 50-80 мг %, а в качестве красителя вЂ” трипанового синего, конго красного или амидочерного в конечно1 концентрации 3-5 мг %. бспольэование изобретения поэволит выявить Р детерминанту внрулентностн б у чумного микроба с использованием более доступной и дешевой среды.

Питательная среда для выявления

Р детерминанты вирулент.ности б содержащая агар, калий фосфорнокислый ,однозамещенный, клористый агоний, сернокислый аммоний, галактозу, P-фе нил- C-алании, мет ионин, ци ст еи н, вали н, и з оле йци н, гли ци í, сер ноки слый магний, сернокислый цинк, сернокислый марганец, 4% раствор молоч(5 ной ки слоты, ар гиии н, кра сит ель, ростовой фактор и воду, о т л ич а ю щ а я с я тем, что, с целью упрощения среды с сохранением ее ростовых свойств, она содержит в

20 качестве ростового фактора сернокислое эакисное железо, в качестве красителя вЂ” Эванс голубой при следующем количественном соотношении компонентов (r/ë воды):

Arap 18, 0-20, О

Калий фосфорно ки слый 4,0-4,2 однозамещенный

З0 моний

Сернокислый аммо ний О, 4-0

Галактоза 1, 8-2

Р-фе нил-б{-аланин 0 10-0

Метиони н О, 05-0

Ци стени 0,04-0

Валин 0,04-0

Иэ оле йци н О, 05-0

40 Глицин 0,04-0

Сернокислый магний 0,05 вЂ” О