Способ получения циклогексиламмониевой соли трифосфоинозитида
Союз Советских
Социалистических
Республик
{ii> 74()749 (61) Дополнительное к авт. свид- ву— (22) Заявлено 210378 (21) 25yzg07/23-04 (51)м. Кл.
С 07 С 69/18
С 07 С 43/02//
А 61 К 29/00, с присоединением заявки { {о—
Государственный комитет
СССР но делам изобретений и открытий (23) Приоритет—
Опубликовано 1506.80.Бкзллетень И9 22
Дата опубликования описания 150680 (53) УДИ 547. 953. 07 (088.8) (72) Авторы изобретения
В.Н. Крылова, Н.П. Горнаева, В. И.{{{вец и Р.П.Евстигнеева
Московский ордена Трудового Красного Знамени институт тонкой химической технологии им.М.В.Ломоносова (71 ) За яв и тель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦИКЛОГЕКСИЛАММОНИЕВОЙ
СОЛИ ТРИФОСФОИНОЗИТИЛА
Изобретение относится к новому химическому методу получения трифосфоиноэитида формулыI и Н
О- - О нт
Ов 6- Н4ообб,тя„
©З ©, О Ит Ооббпнзв принадлежащего к классу природных биологически активных соединений, ответственных эа происхождение целого ряда важнейших биологических процессов в клеточных мембранах.
Известен способ получения трифосфоинозитида выделением из головного мозга млекопитающих путем зкстракци" онных и хроматографических методов
t1l .
Недостатком известного метода получения трифосфоинозитида является длительность процесса (многократные экстракции, отделение от балластных примесей и хроматография) и получение целевого продукта в виде смеси трифосфоинозитидов с различными жирными кислотами.
Целью изобретения является упрощение процесса и улучшение качества целевого продукта (получение индивидуального целевого продукта) .
Цель достигается разработкой нового химического метода получения трифосфоинозитида формулы I, заключаюrgегоCg в том, что 1(3),2-0-циклогексилиден 3(1), 6(4)-ди-0-бензилsn-миоиноэит общей формулы {{.0И обрабатывают вось{ыкратным избытком дианилидохлорфосфата в пиридине с последующим нагреванием с 80%-ной
20 уксусной кислотой при 90-100 С, о двойной избыток полученного 1(3), 4 (6) -ди-О-бензил-5, 6 (4) -ди-0-дианилидофосфорил- sn-миоинозита вводят во взаимодействие с 1, 2-ди-0-стеаро25 ил-3-0-фосфорилглицерином в присутствии тройного избытка 2,4,6-триизопропилбензолсульфохлорида в пиридине с последующим удалением защитных групп действием тридцатикратного избытка иэоа{плнитрита B смеси пиридин740749 уксусная кислота (1:) и гидрогенолизом в присутствии палладиевой черни. Выход целевого продукта 6.9Ъ.
П р и и е р. К охлажденному до
-100C раствору 4,1 г 1(3),2-0-циклогексилиден-З(1),б(4)-ди-О-бензил-зпмиоиноэита (П) в 25 мл пиридина прикапывают при перемешивании раствор
35 г дианилидохлорфосфата в 130 ил пиридина. Перемешивание продолжают при
18-20 С B течение 2 c+T затем до4 .» бавляют 240 мл 5Ъ-ного раствора уксу- снокислого калия к через 30 мин экстрагируют полученное вещество хлороформом, промывают 20Ъ-ным раствором кислого сернокислого натрия н водой, сушат, удаляют растворитель и оста- 15 ток разделяют .хроматографией на силикагеле. Выход 1(З),2-0-циклогексилиден-3 (1), б {4) -ди-О-бензил-4 (6), 5-диi0-дианилидофосфорил-Sn -w,oíoçèòã. (ITI
6 87 г (82,0Ъ), т.пл.126-127 С (иэ
2О спирта) Rg0,73 (силикагель, бензолацетон, 7: 3) . ИК-спектр (см ): 3100(Н),, -1
3100 3020, 1610, 1505 (бензольные кольца), 1400 (Р-N), 1220 { Р=О)„
1110, 1085, 1060„ 1035, 1010 (С-О-С), 25
{P-0-С), 870 (Р-N) .
Найдено,Ъ : С 64,66; Н 6,24„.
И 6,51; Р 6,34.
С5 с Нв» 08К4 Р °
Вычислено, Ъ: C 66, 65," Н 6, 04, ЗО
»»» б, 22, Р 6, 88.
Затем растворяют 1,8 г соединения (III) в 54 мл 8ОЪ уксусной кислоты и перемешивают в течение 2 ч при 90100 С, уксусную кислоту удаляют в вакууме, остаток разделяют хроматографией на силикагеле. Выхоц 1(3), 4(6)-ди-О-бензил-б(4),5-ди-О-дианилидофосфорил-зп-миоинозита (IV) 0,83 г (50,3Ъ), т.пл.182-183 С (из спирта), В =0,28 (силикагель, бенэол — ацетон
7:3), К 0,55 (силикагель, хлороформ— ацетон — метанол, 1I:2:3 (ИК-спектр см ")у 3300 (ОН), 3200, 1710, 1670, 1550(НН), 3100, 3060, 3040, 1610Ä
1505 (бензольные кольца) 1420 (Р-N), 45
1220 (Р=О), 1070-1080, 1010 (С-О-С, С-ОН, С-О-P) 890,860(Р-N) .
Найдено,Ъ: С 61,78, Н 5,88, N 6,55, P 7,32.
36
Вычислено, Ъ". С 51 87, Н 5,88
И 6,55, Р 7,24.
Вслед за тем, растворяют в 25 мл сухого пиридина, свежеперегнанного над натрием, 0,82 r соединения (IV), высушенного в вакууме, добавляк»т
0,457 г 2,4,,6-трииэопропилбенэолсульфохлорида и перемешивают 40 мнн при
18-20 С. Добавляют 0.322 г 1,2-ди-Qстеароил-3-О-фосфорилглицерина (Ч) и реакцию оставляют на 2 сут при 18-20 С»{»О
После этого приливают 40 мл сухого хлороформа и перемешивают 1 ч. Удаляют растворитель в вакууме, остаток разделяют хроматографией на силикагеле.
Выход 1(3) -0-(1, 2-ди-О-стеароилглице- 65 ро 3 0 "Фосфорил) — 3 {1) 6 (4)» -ди-О-бензил-4(6),5-ди-О-дианилидофосфорилвп-миои» 3300-3200 (NH), 1 150-1 /30 (C=O B СООР), 1610, 1510 (бензольные, кольца), 1345(-C-N), 1275 (Р=О), 890, 860 (P-N) . Найдено,Ъ: С 65,43; Н 8,57;К 3,61, Р 5,83. Сб.,й,.„„о„,. Р„)») „ Вычислено,Ъ: С 66,11; Н 8,88; И 3,71; Р 6,16„ Далее растворяют 0,28 r соединения :, И ) в 7 мл смеси пиридин-уксусная кислота (1:1) и добавляют 2,8 мл изоамилнитрита. Перемешивают 24 ч при 18-2G C, Отгоняют растворитель и изоамилнитрит в вакууме, добавляя гиридин. Обрабатывают остаток ацетоном и полученный Осадок без дополнительной очистки гндрируют в 20 мл смеси метилового спирта и хлорофоро ма (4: 1) при 18-20 C. Катализатор отфильтровывают. Переводят вещество B циклогексиламмониевую соль, обрабатывают раствор смолой (50<8, 200-400 меш в Н-Форме) н доводят рН до 8,5 цнклогексилами»»ом. Выход циклогекснламмониевой соли трифосфоинозитида (1) 0,07 г (32,0Ъ), т. пл. 165-168 С (из ацетона),Я О, 51 силикагель, н-пропанол-4н-аммиак), О, 28 (обработанная формальдегидом бумага, верхняя фаза смеси н-бутанол:ледяная уксусная кислота, вода = 4."1:5). ИК-спектр (cM ) : 2860 (ИН ) (1730 (C=U в CO0P), 1195Ъ (Р: О), 10 /0-1050 (С-О-С, С-ОН,C-О-Р) . Найдено,Ъ: С 53,72; Н 10,54; »(3,87; Р 6,66. С, „ I 4 04„И4 Р2 68,0 Вычислено, .-: С 54, 09; Н 10,06; И 3,90; Р 6,06. Формула изобретения 1 . СпОсОб пОлучения циклОгек сил аммониевой соли трифосфоинозитида общей формулы T ОЯ ОН « 2 Π— Р— O(712 -2 » ОРОз О- НбОО М17И,„ » О«РО Н 2 {» в б >""" + 3 ь ОЯ отличающийся тем, что с целью упрощения процесса и улучшения качества целевого продукта 1(3),2-0циклогексилиден-3!1),6(4) -ди-О-бензил-Б»»-»иоинозит общей формулы )» 140749 Составитель Л.Никулина Редактор Л.Емельянова Техред Н.-Бабурка Корректор С.Шекмар Заказ 3143/27 Тираж 495 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5 Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная,4 обрабатывают восьмикратным избытком дианилидохлорфосфата в пиридине с последующим нагреванием с 80Ъ-ной уксусной кислотой при 90-100 С, двойной избыток полученного. 1(3), 4(6)-ди-0-бензил-5,6(4)-ди-О-днанилидофосфорил Sn -миоинозита вводят во вз аимодействие с 1,2-ди-0-стеароил-3-0-фосфорилглицерином в присутствии тройного избытка 2,4,6триизопропилбензолсульфохлорида в пиридине с последующим удалением защитных групп действием тридцатикратного избытка изоамилнитрита в смеси пиридин — уксусная кислота (1:1) и гидрогенолизом в присутСтвии палладиевой черни. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1.Дворкин В.Я.,Киселев Г.В. Фракционирование и характеристика фосфоинозитидов головного мозга.Биохимия, 34,1245, 1969 (прототип) °
