Патент ссср 826228

 

Союз Советскнк

Соцналмстмческнн

Республнк

ОП И<АНИЕ п8262

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 06.08.79 (2! ) 2812798!28-13 (5) ) Я Кл з

С. 01Н 33ГОУ

A 23 С 9/00 с присоединением заявки ¹

Гоеударотеенный комитет (23) Приоритет во денем изобретений н открытий

Опубликовано30.04.81. Бюллетень № 16

Дата опубликования описания 30.04.81 (53) УДК 632.9 (088.8) 1

В. И. Мочалов, Л. А. Еремина, Л. H. Семенова и И. Ю. К ис лицы на

/ (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский институz молочной промышленности (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АФЛАТОКСИНА В„

В МОЛОКЕ

Изобретение относится к молочной промышленности и может быть использовано дпя определения афлатоксина В1 в молоке.

Извес тен сп особ опре депе ния афпа токсина в молоке, предусматривающий подготовку исследуемого объекта с получе5 нием хлороформенного раствора афлатоксина и тонкослойно-хроматографическое определение его путем нанесения на хроматографическую пластинку, разгонки хромата тограммы в смеси растворителей и проявпения хрома тогра м мы 111.

При этом подготовку пробы ведут путем приливания метанола, добавления целита, фильтрации, экстракции жира гекса15 ном, экстракции афлатоксинов В хлороформом, очистки экстракта. Тонкослойнохроматографическое определение афлатоксинов ведут путем нанесения раствора на пластинку, покрытую сипикагелом. Разгонку хроматограмм проводя в бензоле, насыщенном формамидом, а проявление хрсьматограмм — в лучах ультрафиолетового света.

Цель изобретения - ускорение и упрошение способа определения афпатоксина

В„в молоке.

Поставленная цель достигается тем, что в способе определения афлатоксина

Я в мопоке, предусматривающем отделение из исследуемой пробы жировой фракции и белка, получение хпороформенного раствора афлатоксина В, его концентри1 ° рование, растворение сухого остатка в хлороформе, нанесение полученного хлороформенного раствора на хроматографичес-, кую пластинку, разгонку хроматограммы в подвижном растворителе, ее проявление и последующее определение афлатоксина путем сравнения проявленной хроматограм мы с эталоном по интенсивности свечения при подготовке объекта, отделение жировой фракции от исследуемого объекта осуществляют центрифугированием молока, осаждением белков молока проводят аце;тоном, а при тонкослойно-хроматографичес:ком определении афпатоксина 8 дпя нанесения его хпороформенного раствора ис826228

Продолжение табл ицы

То же

25

3 пользую". силуфоловую пластину и разгонку хроматограммы ведут в смеси раст» воритепей бензол-хлороформ-ацетон, взятых в соотношении 45:40:15.

Способ осуществляется следующим об5 разом.

В центрифужные стаканчики помещают

25-30 мп молока и центрифугируют 15. 30 мин при скорости врашения3000 об/мин.

Отдел: в жировую фазу, отбрасывают ее, а обезжиренное молоко помешают в делительную воронку со шлифом, приливают

100 мл ацетона, встряхивают 1-2 мин, добавляют 1-2 r хлористого натрия, полученну.о смесь встряхивают 1-2 мин, припивают 100 мл хлороформа и вновь встряхивают содержимое воронки 1-2 мин, После разделения .слоев хлороформенный слой отфильтровывают через бумажный фильтр в круглодонную колбу емкостью 20

250-300 мл со шлифом, Фильтрат упаривают на ротационном испарителе при 8085 С. Сухой остаток в колбе растворяют в 4 мл хпороформа, Аликвоту из этого раствора наносят на хроматографическую силуфоловую пластинку, помещают ее в камеру для хроматографирования и раз.гоняют в подвижном растворителе (бен" зол-хлороформ-ацетон в соотношении 45:

:40:15) . 30

После разгонки хроматограмму подсушивают на воздухе при комнатной температуре и проявпяют в пучах уньтрафиолетового света.

При содержании афлатоксина В в мог поке не ниже 4 мкг/и он проявляется в виде светящихся пятен фиолетового цвета от 0,32 до. 0,35.

При апробации способа в качестве контроля используют обычно сырое цельное 4О моцоко, а в качестве исследуемой пробымолоко, загрязненное стандартным раствором афпатоксина В .

Полученные результаты приведены в та бпице.

45.Таким образом, контрольные пробы молока и пробы с концентрацией 2 мкг/л не дали на силуфоловых пластинках светящихся пятен фиолетового цвета, яркость свечения которых возрастает с увеличением концентрации афлатоксина.

Пример. В центрифужные стаканчики помешают 30 мл молока с содержанием афлатоксина В 5 мкг/л и центрифу1 гируют 30 мин при скорости вращения

3000 об/мин. Жировую фазу отделяют, а обезжиренное молоко помешают в делитепьную воронку, приливают 100 мл ацетона, встряхивают 1-2 мин, добавляют хлористый натрий, полученную смесь встряхивают, приливают 100 мл хлороформа и вновь встряхивают содержимое воронки. После раздепения слоев хпороформенный слой отфильтровывают в круглодонную колбу. Фильтрат упаривают при

80 С. Сухой остаток растворяют в хлороформе. Аликвоту из полученного раствора наносят на хроматографическую пластинку, помещают в камеру для хроматографирования и разгоняют в подвижном растворителе (бензол-хлороформ-ацетон в соотношении 45:40:15). После разгонки хроматограмму подсушивают и проявпяют в лучах упьтрафиолетового света. На пластине обнаруживают светящееся пятно фиолетового цвета, яркость свечения которого соответствует яркости свечения пятна из стандартного раствора с концентрацией афлатоксина В„, равной 5 мкг/и.

Таким образом, достигается ускорение и упрощение способа определения афпатоксина В в молоке при обеспечении точности. вн мо

Контроль молока

Не обнаружен

То же

Обнаружен

Формула из обре тени я

Способ определения афлатоксина В в молоке, предусматривающий отделение из исследуемой пробы жировой фракции и белка, получение хлороформенного раствора афлатоксина. В, его концентрирование, растворение сухого остатка в хлороформе, нанесение полученного хлороформенного раствора на хроматографическую ппастинS 826228 d ку, разгонку хроматограммы в подвижном афлатоксина В используют силуфоловуюрастворителе, ее проявление и последую- пластинку, разгонку хроматограммы вещее определение афпатоксина путем срав- дут в смеси растворителей бензол-хлорюнения проявленной хроматограммы с эта- формацетон, взятых в соотношении 45: лоном по интенсивности свечения, о т -:40:15. л и ч а ю шийся тем, что, с целью Источники информации, ускорения и упрощения проведения процес принятые во внимание при экспертизе са определения. целевого продукта, отделе-1. ЗаСОЬео МС. Нси щЕ Р. Ф.С.3Ение жировой фракции от исследуемого обь 1. 36СОЬВОВ М .,Н екта осуществляют центрифугированием, а М 11МР П Ф М М. егщюаОоп of ЖСсйозгмч Ь and Ih ю / . о белка - осаждением ацетоном, при этом IRk.— 3.0RHXHrw 8С пс,

Составитель . Л. Семенова

Редактор Е. Днчинская Техред Л.,Пекарь Корректор М. немчик

Заказ 2512/67 Тираж 907 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета, СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород,,уп. Проектная, 4