Реактив для анализа хроматина ихромосом растений

 

(i ц 843876

ОП ИОАН И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 19.12.79 (21) 2852730/30-15 с присоединением заявки № (51) М. Кл.

А ОIН 1/04 (43) Опубликовано 07.07.81. Бюллетень № 25 (45) Дата опубликования описания 07.07.81 (53) УДК 631.52 (088.8) по делам изобретений и a".êpûòèé ( 2 (72) Автор изобретения

В. Ю. Щебитченко

) Мироновский ордена Ленина научно-исследовательскттй институт селекции и семеноводства пшеницы (71) Заявитель (54) РЕАКТИВ ДЛЯ АНАЛИЗА ХРОМАТИНА И ХРОМОСОМ

РАСТЕНИЙ

ГосУдарственный комитет (23) При„ритет

Изобретение относится к цитологии и генетике растений и может быть использовано в биологии и сельском хозяйстве для идентификации хромосом на всех стадиях митотического и мейотического деления клеток.

Известны реактивы для анализа хроматина и хромосом растений, содержащие гематоксилин, неорганические соли алюминия, железа, хрома, глицерин, тимол, сали- (0 циловую кислоту и другие добавки (11.

Анализы с указанными реактивами очень трудоемкие, длительные по времени, так как требуют проведения предварительной протравы и отмывания избытка красителя (5 под контролем под микроскопом.

Известен также реактив для анализа хроматина и хромосом — «квасцовый гематоксилин караччи», содержащий гематоксилин, сульфат калия, йодноватистокислый калий, глицерин, дистиллированную воду (2).

Однако наличие в составе реактива сильного окислителя — и одно ватисто кисло го калия приводит к дополнительному окрашиванию крахмала в клетке, что мешает анализу хроматина и хромосом за счет уплотнения содержимого протоплазмы.

Использование такого реактива требует дополнительной фиксации цитологического 30 материала уксусноспиртовыми или хромовыми смесями.

Цель изобретения — ускорение и улучшение окрашиваемости препаратов и упрощение анализа клеточных структур.

Поставленная цель достигается тем, что в состав реактива включают гематоксилин, железо-аммиачные квасцы с 45%-ную уксусную кислоту при следующем соотношении компонентов, вес. :

Гем атоксилин 3,90 — 4,00

Железо-аммиачные квасцы 0,90 — 1,00

45:% -ная уксусная кислота Остальное

Пример. В стеклянную колбу из прозрачного стекла помещают указанное количество гематоксилина и приливают 1/2 часть

45%-ного раствора уксусной кислоты при температуре +20 С. В течение 0,5 ч гематоксилин растворяют при постоянном перемешивании с помощью магнитной мешалки. Далее добавляют 1/4 раствора уксусной кислоты и после кратковременного перемешивания постепенно присыпают железо-аммиачные квасцы. При перемешивании в течение 20 мин порциями по 3 — 4 мл добавляют оставшуюся уксусную кислоту. Реактив «созревает» (окисляется) в течение

160 ч в темноте при подогреве при +40 С в термостате, после чего получают краси843876

Составитель Л. Марченкова

Техред А. Камышникова Корректор А. Степанова

Редактор Л. Ушакова

Заказ 1558/14 Изд. № 429 Тираж 712 Подписнос

НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 тель черного цвета. После фильтрации реактив готов к употреблению.

Предложенный способ приготовления реактива не требует предварительной протравки квасцами и последующей дифферен- 5 циации исследуемого материала в них. Реактив следует оберегать от возможного избыточного окисления на свету. Хранится он более трех лет в темной банке с притертой пробкой в холодильнике при 0 С. Одну его 10 порцию при приготовлении препаратов хромосом можно использовать три-четыре раза. В зависимости от специфики окрашивания избранного объекта реактив следует разбавлять полтора-два раза 45% -ной уксусной кислотой. Используя предложенный реактив, получают хромосомы черного или темно-синего цвета (в зависимости от рН среды) и прозрачную плазму клетки.

Эффективность предложенного реактива испытывали при изучении морфологии и количества хромосом сельскохозяйственных культур и декоративных растений в период мейоза и митоза соматических тканей.

В качестве объекта для анализа берут пыльники из цветков пшеницы, винограда, хлопчатника, лука, нарциссов и тюльпанов.

Пыльник помещают в сосудик (с притертой пробкой), заполненный предложенным реактивом; ацето-железо-аммонийным гематоксилином. Окрашивание ведут в термостате при температуре +45 С на протяжении 1 — 24 ч (в зависимости от плотности тканей изучаемого объекта растения).

Предварительно окрашенные пыльники раз- 35 давливают на предметном стекле в капле просветляющей, консервирующей жидкости. Консервирующая смесь состоит на 1/3 пз глицерина и 1/3 концентрированного раствора (75% ) хлоральгидрата. Раздавлен- 4р ный пыльник накрывают покровным стеклом и изучают под микроскопом. Таким же образом готовят препараты кончиков корешков растений для изучения морфологии и количества хромосом в митотически де- 45 лящихся клетках соматической ткани.

Препараты сохраняются продолжительное время (до года), что позволяет зарисовать и сфотографировать необходимые хромосомные картины. При этом получают хромосомы черного или темно-синего цвета и прозрачную плазму клеток.

Предлагаемый реактив в сравнении с известным, например с ацетокармином или гематоксилином, исключает наличие брака при приготовлении препаратов, позволяет сократить хромосомный анализ в сто раз.

В то время как в бальзамированных препаратах, полученных с помощью известных реактивов, подсчет хромосом можно провести только после 8 — 10 дней лабораторной работы, с помощью предложенного реактива для получения одного препарата требуется всего 0,5 ч. Таким образом, за один рабочий день можно приготовить

200 †3 препаратов, а по способу-прототипу — только 10 — 15.

Предложенный реактив может быть использован многократно, улучшает качество визуально наблюдаемых хромосом, что позволяет с большей точностью их фотодокументиров ать.

Формула изобретения

Реактив для анализа хроматина и хромосом растений, включающий гематоксилин, отличающийся тем, что, с целью улучшения и ускорения окрашиваемости препаратов и упрощения анализа клеточных структур, реактив дополнительно содержит железо-аммиачные квасцы и 450 -ную уксусную кислоту при следующем соотношении компонентов, вес. %, Гематоксилин 3,90 — 4,00

Железо-аммиачные квасцы 0,90 — 1,00

45% -ная уксусная кислота Остальное

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Лилли P. Патологическая техника и практическая гистология. М., «Мир», 1969, с. 163 — 167.

2. Малый практикум по цитологии. Под ред. Ченцова Ю. С. М., Изд. МГУ, 1977, с. 274 — 275 (прототип).