Среда для экстракции полового секретаиз придаточных желез самцов komapob

 

ю843897

Союз Советских

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

СоииалистическиХ

Республик (61) Дополнительное к авт. саид-ву— (22) Заявлено 24.07,79 (21) 2817823/30-15 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (43) Опубликовано 07.07.81, Бюллетень № 25 (45) Дата опубликования описания 07.07.81 (51) Uy К, з

А 01 К 67/00

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (, ») УДК 632,7 (088.8) (72) Авторы изобретения г.;,, Р. И. Лачинова и О. В. Захарченко

Ф) едициньт " т1, . reer - <,c (71) Заявитель

Ордена Трудового Красного Знамени инст медицинской паразитологии и тропической им. Е. И. Марциновского (54) СРЕДА ДЛЯ ЭКСТРАКЦИИ ПОЛОВОГО

СЕКРЕТА ИЗ ПРИДАТОЧНЫХ ЖЕЛЕЗ САМЦОВ

КОМАРОВ AEDES АЕОУРТ1

Изобретение относится к области сельского хозяйства и медицины, в частности к физиологии размножения насекомых.

Известна среда для экстракции секрета из половых желез самцов дрозофил, состоящая из (г/л) NaCI 6,0, КСI 0,1, СаС1 0,1, ЯаНСОз 0,1 — раствор Рингера (1).

Известна среда для экстракции секрета из половых желез сверчков, содержащая (г/л) СаСI 0,302; NaCI 5,22, КСI 0,968, MgSO4 7Н О 2,50, Na HPO4 0,105, КН РО4

0,060, декстроза 1,00, неомицин 0,12, стрептомицин 0,12, пенициллин 0,06 — раствор

«Kirstens» (2).

Известна среда для экстракции секрета из половых желез самцов комаров, состоящая из (г/л) NaC! 9,0, КСI 0,2, СаСI2 0,2.

NaHCO, — 0,1 раствор «Aedes aegypti» (3).

Известные среды не обеспечивают полной экстракции секрета из придаточных желез самцов насекомых.

Цель изобретения — повышение выхода полового секрета.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве солей щелочных металлов используют 1,27 — 1,29 M водный раствор

NaCI.

Пример 1. Экстракция полового секрета из придаточных желез некопулировав2 ших самцов А. aegypti 4-дневного возраста водным раствором 1,28 М NaCI.

Выделили 25 пар придаточных желез в растворе «аедес», перенесли в микропробирку с 25 — 30 мкл. раствора 1,28 М NaCI и на

1 сут. поместили в холодные условия для полной экстракции секрета. Затем содержимое микропробирки перемешали мандреной с электроприводом в течение 30 с, отцентри10 фугировали в течение 10 мин при 8000 об/

/мин, надосадок перенесли в чистую мерную микропробирку, осадок дважды промыли дополнительными порциями 1,28 М NaCI no

25 мкл каждая, осадили центрифугировани15 ем и надосадки объединили. Общий объем экстракта довели до 100 мкл раствором

1,28 M NaCI, определили содержание в нем белка по Лоури в модификации А. А. Покровского микрометодом.

Конечный объем измеряемой пробы составил 320 мкл, из них 80 мкл экстракта и

240 мкл реактивов. Оптическую плотность определяли против контроля, содержащего вместо экстракта 80 мкл 1,28 М NaCI, в микрокюветах на СФ-4А с оптической приставкой при 750 нм. Количество белка в экстракте рассчитали по калибровочной кривой, построенной с сывороточным альбуми,"-,о ном.

843897

»1 э

CC «> ое о

o v о

О:3 а о

o s

m o

А й

Д о мгк белка на особь

М m

О о

К Оо

v о о д о ..

O - = a

Среда для экстракции

Р 2 о>у о. ж о о ч

«I «3 о. и-. а5

Я

О о

Р> о о

5

О E

1,34

0,78 0,05 141,8

1,28М NaCI

Дистиллированная вода

Раствор

«аедес»

6,4

200

13,2

3,00

0,53 0,07

98,2

200

2,89

0,55 + О,CG 100,0

300

1 0,9

Составитель М. Маландииа

Техред И. Заболотнова

Корректор H. Федорова

Редактор Е. Хорина

Заказ 4600

Изд. 433 Тираж 712

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и откр3ятпй

113035, Москва, Ж-35, Раугпская иаб., д. 4/5

Подписное

Загорская типография Упрполиграфиздата Мособлисполкома

Результат: количество белка секрета, экстрагированного из придаточных желез раствором 1,28 М NaCI, составило 0,78 мкг на особь.

Пример 2. Экстракция полового секрета из придаточных желез некопулировавших самцов Л. aegypti 4-дневного возраста дистиллированной водой.

Выделили 25 пар придаточных желез в растворе «аедес», выделенные железы поместили в микропробирку с 25 — 30 мкл дистиллированной воды. Дальнейшая последовательность действий, как в примере 1, с использованием дистиллированной воды вместо 1,28 М NaC1.

Результат: количество белка секрета, экстрагированного из придаточных желез дистиллированной водой, cocTaall;Io 0,53 мкг на особь.

П р и м ер 3. Экстракция полового секрета из придаточных желез пекопулировавших самцов А. aegypti 4-дневного возраста раствором «аедес».

Выделили 25 пар придаточных желез, выделенные железы поместили в микропробирку с 25 — 30 мкл раствора «аедес». Дальнейшая последовательность действий, как н примере 1, с использованием раствора

«а едес» вместо 1,28 М N a C l.

Результат: количество белка секрета, изолированного из придаточных желез раствором «аедес», составило 0,55 мкг на особь, 4

Количество белка полового секрета, экстрагировапного из придаточны: желез девственных сампов

Предлагаемая среда для экстра кции полового секрета из изолированных придаточны.; желез самцов насекомых обеспечивает по сравнению с существующими среда10 ми увеличение болес чем на 40% (по белку) выхода секрета, повышение точности, воспроизводимости и достоверности результатов, Использование данной среды делает возможным разработать метод количест15 венной оценки секреторной активности придаточных желез, позволяет сократить число экспериментов и pacxoд насекомых, Ileобходимых для получения достоверных резул1>TBTOI3, II так;кс обеспе IH13aeT

0 ность расширения биохимических и токсикологических исследований на изолированных половых железах насекомых, что имеет важное зна гение при разработке методов борьбы с насекомыми и методов стандартизации лабораторного культивирования их.

Формула изобретения

СРЕДа ДЛЯ ЭКСтРаКЦИИ НОЛОВО)гп СЕКРЕта

30 11з придаточных желез самцов комаров ,cdes aegypti, содержа)цая хлористые соли щелочных металлов, о т;I и ч à Ki гц а я с я тем, что, с целью повышения выхода полового секрета, в качестве солей щелочных металлов используют 1,27 — 1,29 М водный раствор NaCI.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1, P. S. Chen Experientia», 1976, т. 32, ;хг 5, р. 549.

2. М. S. Kaulenas, К, L. Genobslcy, Н. E.

Potxvald, ),). L. BuIns. «G. Fxpt. Zoo):>, 1975, т. 193, р. 21.

3, М. S, Fuchs, G. В. Craig, E. А. Idiss, «Life science», 1968, v. 7, р. 835 (прототип).