Способ обработки пленочных фильтровальных материалов

 

ОП ИСАКИИ

И ЗОВРЕТИН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДИТВЛЬСТВУ

СЮ4еэ Соввта4ми

Социалше тически к

Республик (6l) Дополнительное к авт,саид-ву (22) Заявлено 16,01.80 (21) 2873088/18-2б. с присоединением заявки М (23)Приоритет

Опубликовано 23.09.81 Бюллетень .% 35

Дата опубликования описаиик 03 . 10, 81 (5f)M. Кл.

01 1 1/28

ВВклефвтмйньй кейитет

ССС.Р ао лелем изввретеии1 и вткрытий (53) УДк(543. . 053 (088,8) В.Ф,Кондратьева, Т.И.Ивасенко, Л.M,Âîðoá

Н.А.Николаева и А.Г.Мегрелишвили (72) Авторы изобретения кий

Всесоюзный научно-исследовательский и ко институт медицинской лабораторной техник (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОБРАБОТКИ ПЛЕНОЧНЫХ ФИЛЬТРОВАЛЬНЫХ

МАТЕ РИАЛОВ

Изобретение относится к области микробиологии и иммунологии.

Известен способ иммунолюМинесцентиого исследования микробиологических объектов, например, с целью их идентификации, согласно которому исследуемые препараты наносят на предметные стекла и после фиксации окрашивают специфическими люминесцентными сыво" ротками 1 j.

Однако использование стекол требу10 ет специальной обработки их до и после исследования, они обладают цовьииенной хрупкостью и легко бьются.

Для исследования микробиологичеси ких объектов используют пленочные фильтровальные материалы, применение которых ие требует обработки до и после применения, ие нужна постоянная перефокусировка микроскопа из-за маЮ лого допуска по толщине пленки.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому эффекту предлагаемому является способ обработки пленочных фильтровальных материа лов, заключающийся в окрашивании и последующем просушивании пленочйых материалов $2).

Недостатками способа является то, что коричневый фон фильтра недостаточно контрастен с окрашеиживк иммунофлуоресцентныма сывороткаьж s желто-зеленый цвет микрообъектамн, Это затрудняет процесс исследования под микроскопом. Кроме того, контрастность нарушают зеленоватые очертания ячеек материала остаточная люминесценция.

Способ обработки материала достаточно трудоемкий и длительжФ, Для его осуществления необходимо кипячение материала до окраски и многократное кипячение с целью промывки после окрас" ки ллеиян. В процессе обработкн требу-.. ется непрерывное внимание лаборанта в течение 1,5 ч, Цель изобретения - увеличение контрастности фона материала, упрощение и сокращение времени обработки.

6449

ВНИИПИ Заказ 8066/66 Тираж 910 Подписное

3 86

Поставленная цель достигается тем, что в способе, заключающемся в окрашивании и последующем просушивании перед окрашиванием, пленочный фильтравальный материал погружают s глицерин до полного просветления, подсу шивают и помещают при комнатной температуре на 2-3 мин в черную тушь, затем высушивают до полного высыхания.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

Пленочный фильтровальный материал, в частности ацетилцеллюлозную пленку типа "Владипор", опускают в глицерин и выдерживают в нем до пол-, ного просветления пленки. По времени эта процедура занимает около 1 ч. 3атем дают стечь глицерину и подсушивают на воздухе не обязательно до полногг высыхания. После чего пленку по ружают в черную тушь до получения равномерного пропитывания пленки, )1 среднем на эту процедуру уходит

2-3 мин, Окрашенную пленку высушивают на воздухе или для ускорения в термо стате. Обработанные таким образом фильтры становятся более эластичны" ми, их можно хранить в виде полос или накрученными на бобинах и по мере надобности использовать, Были проI ведены многочисленные исследования по выбору пленки, дающей наибольший положительный результат. Окраске подвергались пленочные фильтровальные материалы:

"Владипор" ИФА-NA из ацетилцеллюлозы, "Хемофил ПВХ на основе поливинилхлорида, "Хемофил" СПА на основе алифатического полиамида и фенилон на основе полифеииленизофталамида, С окрашенными по предлагаемому способу фильтрами были проведены испытания с использованием различных видов бактерий. Взвесь бактерий или исследуемый жидкий материал выдерживают в течение 15 мин в пробирке с иммунной люминесцирующей сывороткой, взятой в двойном титре, и равном с последуемой пробой объеме. Затем каплю этой смеси наносят на матовую поверхность обработанной пленки и высушивают. На место нанесения материала кладут покровное стекло и исследуют люминесцентном микроскопе.

В работе были использованы энтеропатогенные. эшерихии типов ОВ коли!

0111,055, 026 и вакцина СТИ и соответствующие им иммунные люминесцентные сыворотки, На всех исследуемых материалах наблюдалось достаточно яркое свечение бактерий (++++, +++). Однако наилучший эффект был получен с ацетилцеллюлозой пленкой типа "Владипор", В люминесцентном микроскопе пленка имеет однородный черный фон, на котором ярко светятся желто-зеленым цветом окрашенные специфической сывороткой бактерии.

Предлагаемый способ позволяет по15 лучить однородный контрастный фон для исследования микрообъектов, окрашенных как флуорохромами, так и специфическими иммунофлуоресцентными сыворотками >

Способ прост в осуществлении, эко2Р номичен, благодаря ему сокращается в

3 раза процесс пробоподготовки и в 2-3 раза по сравнению с известным ьремя исследования микрообъектов под микроскопом. Пленочный фильтроваль25 йый материал, обработанный по предлагаемому способу, приобретает дополнительную эластичность и прочность,улучшается удержание препарата на подложке.

Использование предлагаемого способа . позволяет автоматизировать процесс пробоподготовки и процесс исследования под микроскопом, Формула изобретения

1. Способ обработки пленочных фильтровальных материалов для люминесцентной микроскопии путем их окрашивания и последующего высушивания, отличающийся тем, что, с целью повышения контрастности фо

4р на материала, упрощения и сокращения времени обработки, перед окрашиванием пленочный фильтровальный материал погружают в глицерин до полного просветления, после чего под4> сушивают, а окраску ведут при комнатной температуре путем погружения в черную тушь на 2-3 мин.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Латинская А.С. Микрс биология с техникой микробиологических исследований. И., "Медицина", 1972, с. 35.

2. Авторское свидетельство СССР

У 358362, кл. С 12 K 1/10, 1972.

Филиал ППП "Патент",г.Ужгород,ул.Проектная,4