Эталон для определения активности энтобактерина

 

Союз Советсннк

Соцналнстнчвскня

Республнк

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕПЛЬСТВУ

«в 869736 ф :, C (61) Дополнительное к авт. свмд-ву

<я)м. кл. (22) Заявлено 040180 (21) 2863500/30-15

f с присоединением заявки ¹

А 01 и 63/00

Государственный комитет

СССР по делам изобретений н открытий (23) Приоритет (53) УДК 63: 576. 8 (088.8) Опубликовано 07.10.81. Бюллетень HQ 37

Дата опубликования описания 07.1081

Н. И. Горышин, Е. В. Крусанова, В.A. Масленникова и С.И.Черныш (72) Авторы изобретения

Ленинградский государственный университет им. A.À.УКданова (73) Заявитель (54) ЭТАЛОН ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

ЭНТОБАКТЕРИНА

Изобретение относится к области микробиологических средств защиты растений и может быть использовано для контроля качества энтобактерина.

Известны способы контроля активности энтобактерина, в которых препаратом воздействуют на гусениц вощинной моли.

В качестве эталона используют инсектицид хлорофорс f1j. Однако, это вещество отличается ярко выраженным специфическим действием на организм насекомого, совершенно отличным от механизма действия энтобактерина. Эти различия приводят к тому, что уровень устойчивости гусениц тест-объекта к хлорофосу и энтобактерину будет меняться различным образом. Поэтому использование хлорофоса в качестве эталона сопряжено с риском получения ошибочных данных при определении активности образцов энтобактерина.

Известно использование формальдегида в химической промышленности в качестве сырья для синтеза различ» ных соединений, а также в медицине и ветеринарии в качестве дезинфицирующеro средства (2).

Целью изобретения является повышение стабильности свойств эталона л и увеличение степени корреляции уровня устойчивости гусениц тест-объекта к эталону и испытанному образцу энтобактерина.

Цель достигается применением в качестве эталона формальдегида.

Применение формальдегида по предлагаемому назначению возможно благодаря тому, что изменение устойчивости к нему тест-объекта хорошо коррелируют с изменениями устойчивости тэ к энтобактерину.

Определение активности энтобактерина с использованием в качестве эталона формальдегида проводят сле20 дующим образом. Из одновозрастной партии гусениц вощинной моли отбирают особей одинакового веса и разделяют их на две группы. На гусеницах одной группы определяют ЛКСМ@ (кон25 центрацию, вызывающую смертность 50% гусениц) йспытуемой партии энтобактерина. На гусеницах другой группы определяют JIK формальдегида. Истинное значение ЛК 5р энтобактерина

30 (с учетом физиологического состоя- .

869736

Категория ry сениц

Ф

Бо ст

ЛК 5о ния данной партии гусениц тест-объекта) определяют по формуле

Э

5рист 5о оп

К ЛК где ЛК вЂ” истинное значение ЛК5

5 о ист о данной партии энтобактерина, ЛК „ — значение ЛК рартии энтобактерина, полученное при тестировании 1

К вЂ” поправка на физиологическое состояние гусениц. значение К определяется по формуле

Ф где ЛК вЂ” значение ЛК . формаль р дегида для данной партии гусениц, ЛК вЂ” стандартное значение

ЛК формальдегида для

so данной генетической линии тест-объекта.

ЛК определяют для каждой используемой для тестирования генетической линии тест-объекта при строroM соблюдении всех регламентов культивирования.

П. р и м е р. Определение активности партии энтобактерина проводят на гусеницах вощинной моли Са11ег1а

me1lonol1а линия У111, выделенной в лаборатории генетики животных Биологического института Ленинградского университета. Гусениц содержат при температуре 29-30 С на стандартном корме, включающем мед, воск, кукурузную и пшеничную муку, пивные дрожжи, сухое молоко, глицерин. ЛК 5о (концЕнтрацию, вызывающую гибель 50% гусениц) формальдегида определяют следующим образом. Готовят ряд разведений формальдегида в воде с кратностью 2, начиная с 2%. Погружают гусениц на 30 мин в раствор формальдегида затем тщательно промывают гусениц в дистиллированной воде и помещают по 10 штук в чашки Петри с 3 r корма.

Смертность учитывают на 6-е сут. после обработки формальдегидом. Рассчи.тывают ЛК5р по фоРмУле

19 ЛК = .19 ʄ— д (2„- 0 5), где К1,, - максимальная иэ испытанных доз, Π— логарифм отношения каждой последующей концентрации к предыдущей логарифм крат-ности разведения

2 — доля погибших гусениц.

В таблице приведеные данные по устойчивости к формальдегиду стандартных гусениц (вес 70+5 мг) и более мелких (50+5 мг).

Смертность после о6работки формальдегидом, % в концентрации, %

1,2 5 10 20 40

Стандартные 0 10 50 70 83

Я Со сниженным весом 80 100 100 80 100

Расчет по приведенной выше формуле показывает, что ЛК р для стандартных гусениц У111 линии составляет 12,3%, а для гусениц сниженного веса 2,9%.

Поправка на отклонение физиологического состояния гусениц, обусловленное низким весом, составляет

12,3

К = — = 4,18

2,9

Параллельно со значением K onpe25 деляют ЛК р испытуемого образца энтобактерийа.

Для этого готовят ряд разведений энтобактерина, начиная с 2 r препарата на 98 мл воды. Суспенэню вносят

30 из расчета 0,5 мл на 3 r корма.

Дальнейшие подсчет смертности, о6работка результатов и вычисление ЛКр производят также, как и для формаль,цегида. Положим, опытным путем установлено, что для гусениц сниженного веса ЛК р образца энтобактерина составляет 0,025 r на 100 мл воды.

В таком случае истинное значение

ЛК5. данного образца с учетом поправки на физиологическое состояние гусеииц составляет:

ЛК горист= К ЛК5-р = 4 18 0 025

6,104 (г на 100 л воды) Применение формальдегида в качест45 ве эталона для определения активности энтобактерииа оказалось возможным благодаря выявленной закономерности коррелирования уровня устойчивости гусениц вощинной моли к энтобакте50 рину и формальдегиду.

Применение формальдегида по указанному назначению позволяет заменить изменчивый биологический эталон на стабильный химический, что обеспечивает увеличение точности тестирования энтобактерина. По данным авторов, коэффициент вариации для одной эталонной партии энтобактерина, использованной на протяжении непро60 должительного времени (менее 2 мес.) и хранившейся в тщательно контролируемых условиях (5 С, темнота), составил 20,1%. Для эталона — формальдегида коэффициент вариации соста65 вил 9,7% или в 2,07 раза меньше, 869736

Составитель М.Мирзаев

Техред A.A÷ Корректор М.Шарсви

Редактор Н.Потапова

Заказ 8687/7 Тираж 703 Подписное

BHHHHH Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 чем для энтобактерина. Следовательно, использование в качестве эталона формальдегида в указанных условиях обеспечивает повьиаение точности .определения активности образцов эитобактерина примерно в 2 раза.

Формула изобретения

Применение формальдегида в качестве эталона для определения активности энтобактерина.

Источники информации принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

9525750, кл. A 01 N 15/00, 1976.

2. Каррер П. Курс органической химии. Изд. хим. литературы. Л., 1962, с. 219-212 (прототип).