Способ определения скорости рассасывания пересаженного трансплантата

 

Союз Советскин

Соцнапнстнчесинк

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (iii881616 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 170479 (21) 2787781/28-13 с присоединением заявки РЙ (23) Приоритет

Опубликовано 15,1 1.81 ° Бюллетень ¹ 42

Дата опубликования описания 15.11.81 (51)М. Кл.

G 0I N 33/50

Ркудеретееннык комнтет

СССР

II0 делам нзаеретеннй н открытнй (53) УДК 616.089. .843(088,8) о

С.Н.Румянцев, Т.И„Замыслова, В.И.Савельев, и Р.В.Росков

1

1

Ленинградский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и Ленинградский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии им. P.P.Âðåäåíà (72) Авторы изобретения (71) Заявители (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СКОРОСТИ РАССАСЫВАНИЯ

ПЕРЕСАЖЕННОГО ТРАНСПЛАНТАТА

Изобретение относится к медицийе ,и может быть использовано для определения качества консервации биологических трансплантатов из соединительной ткани.

Наиболее близким к изобретению является способ определения скорости рассасывания пересаженного трансплантата путем пересадки его животным, выявления замещения трансплантата тканью реципиента, и определения скорости рассасывания трансплантата по величине этого замещения (I)

Однако известный способ является сложным и трудоемким.

Целью изобретения является ускорение и упрощение способа.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения скорости рассасывания пересаженного трансплантата, последний инкубируют при рН 7,2 и температуре 37 С в физио ологическом растворе, содержащем

0,1% коллагеназы и 0,08% СаС1, далее определяют содержание аминокис лот в инкубационной среде и по их количеству — скорость рассасывания пересаженного трансплантата.

Пример. Проводят определение скорости рассасывания образцов ткани сухожилий, консервированных замораживанием, в парафине, в силиконовом каучуке (СКТН) и формалине. При этом контролируемые образцы сухожилий в навесках по 50 мг помещают в 10 пробирок (по две пробирки на образец, законсерВированный аналогичным способом), с добавлением в каждую из них по 5 мп физиологического раствора, содержащего, 0,1 r коллагеназы и

78,8 мг СаС1 . Для доведения рН раствора до 7,2 в него добавляют бикарбонат натрия. Образцы выдерживают в указанном растворе в течение 48 ч при 37 С, после чего проводят визуальное и биохимическое определение интенсивности их рассасывания.

881616

Интенсивность рассасывания

Количество микромолей аминокислот (биохимическая оценка) Целостность образца (Визуальная оценка) Способ консервации

Образец, ФМ 3400

Высокая

Полное рассасывание

1 СКТН

Частичное рассасывание

Средняя

2700

Замораживание

2450

То >ке

То же

3 В парафине

4 В формалине

Низкая

Целостность сохранена

Формула изобретения

Результаты исследования контролируемых образцов приведены в таблице.

При визуальной оценке исследуют степень целлостности исследуемых образцов по сравнению с замороженным.

При биохимической оценке исследуемых образцов определяют содержание аминокислот в инкубационной среде. Для этого из пробирок берут выемки по

0,2 мл (надосадочную жидкость), к которым добавляют по 1 мл 4Х-ного раствора нингидрина, содержащего на

1 мл 0,2 М цитратного буфера (pH=5,0)

160 мг СаС1 2Н О. Смесь подогревают в течение 20 мин в кипящей водяной бане. После охлаждения до комнатной температуры, в каждую пробирку добавляют па 5 мл пропанола и исследуют на спектрофотометре СФ-1б при

570 НМ. При этом количество микромолей аминокислот определяют по стандарту лизина.

Из таблицы ВиДнО, чтО трансплантат, консервированный в СКТН, под действием физиологического раствора, содержащего коллагеназу, полностью рассасывается, а в инкубационной среде содержится большое количество аминокислот. В организме реципиента под взаимодействием ферментных систем трансплантат рассасывается быстрее, K 3-6 месяцам на месте трансплантата образуется сухожилистоподобСпособ определения скорости рассасывания пересаженного транспланный регенерат. Однако регенерат был вдвое тоньше и менее прочный по сравнению с исходным трансплантатом.

Трансплантат, консервированный в растворе формалина, почти не рассасывается и сохраняет свою целостность.

При трансплантации в организме реципиента, его рассасывание проходит в течение 9-12 месяцев. Транспланта-, 1О ты, консервированные замораживанием и В парафине, рассасываются синхронно. При этом интенсивность рассасывания средняя.

В организме реципиента эти трансплантаты подвергались процессам рассасывания и замещения новой коллагеновой тканью, протекающим также синхронно. В результате к 3-6 месяцам HB месте трансплантата образоВывался полнОценный регенерат ткани по структуре и физическим свойствам близкий к нативному сухожилию.

Использование изобретения позволяет исключить применение лабораторных животных, пересадку им образцов ткани и длительные гистологические исследования. Кроме того, изобретение позволяет резко сократить трудоемкость и длительность процесса, а также производить количественный анализ степени и скорости лизирования ткани под,цействием ферментной системы °

55 тата, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, трансплантат инкубируют при рН 7,2 и 37 С в физиологическом

881616

Составитель В.Матвеева

Редактор М.Погориляк Техред A.À÷ Корректор М.Пожо

Заказ 9962/67 Тираж 910 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 растворе, содержащем 0,1Х коллагеназы и 0,08X CaCl>, далее определяют содержание аминокислот в инкубационной среде и по их количеству — скорость рассасывания пересаженного

Трансплантата.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Демичев Н.П. Сухожильная гомопластика в реконструктивной хирургии.

Ростов-на-Дону, 1970, с. 29-65.