Способ определения кофеина в лекарственных смесях

 

ОП ИСАКИЙ

Союз Советскик

Социалистическик

Республик в9

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22)Заявлено 10.06,80 (2!) 2944003/28-13 (51)М. Кл.

С О! и 31/08 с.присоединением заявки М

Гесударстеенный камнтет

СССР ло делам нзобретеннй н открытнй (2;3) Приоритет

Опубликовано 07. 02. 82.. Бюллетень М5

Дата опубликования описания 10.02. 2 (53) УД К 615..2!.071

8.8) (72) А вторы изобретения

Л.Н. Слепова и Л.В. Саливанова (7I) Заявитель - Иркутский государственный медицинский институт (54) СПОСОБ. ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОФЕИНА В ЛЕКАРСТВЕННЫХ

С!1ЕСЯХ

Изобретение относится к определению кофеина и лекарственных смесях и может быть использовано при анализах фармацевтических препаратов в контрольно-аналитических лабораториях.

Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ определения кофеина в лекарственных смесях путем растворения анализируемой пробы в органическом растворителе, отделения сопутствующих веществ и фотометрирования. Точную навеску анализируемого образца, равную 0,16 г, помещают в мерную колбу емкостью 50 мл

l5 и обрабатывают 20-25 мл теплого хло" роформа для извлечения действующих веществ из таблеточной массы, после охлаждения раствор доводят до метки

20 хлороформом, перемешивают и фильтруют.

Первую порцию фильтрата отбрасывают, из следующей порции 2 мл переносят в делительную воронку и промывают 2 раза 1 н раствором серной кислоты пор,циями по 5 мл, взбалтывая каждый раз в течение 2 мин. Хлороформный раствор переносят в мерную колбу емкостью

50 мл, сернокислое извлечение промывают хлороформом дважды по 5 мл, при" соединяя его к основному раствору в мерной колбе. Хлороформ отгоняют, остаток растворяют в 0,01 н растворе гидроокиси аммония. Оптическую плотность раствора определяют при 240 и

273 нм при использовании в качестве раствора сравнения 0,0! н раствора гидроокиси аммония. Содержание кофеина определяют по известной формуле E12 .

Недостатком известного способа является его низкая селективность, что ограничивает применение. Способ не может быть использован для определения кофеина в лекарственных смесях, содержащих такие вещества, например, как промедол, папаверина гидрохлорид, фенацетин вследствие активного

3 90 поглощения этих веществ в области поглощения кофеина и невозможности отделения указанных компонентов от кофеина методом экстракции из-за растворимости промедола и солей папаве" рина в хлороформе, а также содержания фенацетина, являющегося макрокомпонентом (в лекарственных смеСях соотношение кофеина и фенацетина обычно равно 1;10), в анализируемой фракции даже с учетом его ограниченной растворимости в хлороформе.

Известный способ неприемлем для определения кофеин-бензоата натрия вследствие его нерастворимости в хлороформе, хотя кофеин-бензоат натрия значительно чаще кофеина входит в состав различных фармакологических сочетаний.

Цель изобретения — повышение селективности способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения кофеина в лекарственных смесях путем растворения анализируемой пробы в органическом растворителе, отделения сопутствующих веществ и фотометрирования, пробу растворяют в 50601-ном этаноле, сопутствующие Вещества отделяют хроматографией в тонком незакрепленном слое кислой окиси алюминия в системе хлороформэфир, взятых в соотношении 25-35:

:50-65, полученную зону кофеина выявляют в ультрафиолетовом свете и фотометрируют.

Способ осуществляется следующим образом.

Анализируемую пробу растворяют в 50-60",ь -ном этаноле, полученный раствор хроматографируют в тонком незакрепленном слое кислой окиси алюминия в системе хлороформ-эфир, взятых в соотношении 25-35:50-65.

Зону кофеина выявляют в Уф-свете, элюируют анализируемое вещество 0,050,1 н раствором соляной кислоты и полученный элюат спектрофотометрируют при 273 нм.

Обработка анализируемой пробы растворителем, отделение сопутствующих веществ и фотометрирование позволяет перевести в раствор в случае порошка всю анализируемую пробу, а в случае таблеток — все действующие вещества, включая кофеин-бензоат натрия.

Хроматографирование раствора смеси в тонком незакрепленном слое кис3765

° А Vq P ° 1/4

О, .Ч,1 количество кофеина или кофеин-бензоата натрия в анализируемой пробе, г; оптическая плотность элеатов анализируемого образца и стандартного раствора соответствени но; количество кофеина или кофеин-бензоата натрия в 1 мл стандартного раствора с учетом исходной концентрации, наносимого на хроматограмму количества раствора и разведения при элюировании, г; объем пробы, наносимой на хроматограмму, мл; объем мерной колбы, используемой для растворения анализируемого образца; объем мерной колбы, используемой при элюировании; вес лекарственной Формы по прописи, г; точная навеска анализируемого образца, г. ления точности предлаа проводят его испытай серии опытов, для кофеин-бензоат .натрия определяют в "искуссттвенных формах, пригогде

DxuD|;

4С

45

Для установ гаемого способ у ния постановко чего кофеин и количественно венных" лекарс лой окиси алюминия в системе растворителей хлороформ-эфир в соотношении 25-35:50-65 позволяет полностью и со значительным различием в вели5 чинах Rf отделить кофеин от сопутствующих компонентов.

Кофеин-бензоат натрия дает на хроматограмме две зоны, одна из которых является зоной кофеина, а втораязоной бензоата натрия и находится на линии старта.

Хроматографическое разделение веществ, составляющих кофеин-бензоат натрия, позволяет использовать предлагаемый способ для количественного

15 определения в лекарственных смесях различного состава не только кофеина, но и кофеина-бензоата,натрия.

Количество кофеина вычисляют по формуле:

D х х—

903765 товленных по прописи отвешиванием ингредиентов, без включения стадий измельчения и смешивания ингредиентов, во избежание наложения ошибок, не связанных с точностью анализа, а характеризующих потери на различных стадиях технологического процесса.

Взвешивание ингредиентов проводят на аналитических весах, поэтому навеска анализируемого образца соответствовала весу порошка по прописи.

Экспериментальные данные многократной повторности и результаты статистической обработки данных, полученных при анализе сложных ("искусственных") смесей при терапевтической дозе 0,1 r, представлены в табл. 1.

Как видно из данных статистической обработки, способ не содержит систематической ошибки, та как истинное содержание кофеина не выходит за пределы установленного интервала.

Относительная погрешность среднего результата с надежностью < - =0,95 равняется -3,04 .

В качестве сбъектов исследования используют сложные кофеиносодержащие порошки, приготовленные в аптеках и кофеинсодержащие лекарственные фор-ЗО мы заводского изготовления - таблетки при различных терапевтических дозах. Результаты приведены в табл.1-4.

Технологический процесс изготовления порошков в условиях аптек вклю35 чает взвешивание ингредиентов на технических весах в расчете на все до" зы, измельчение, смешивание и раэвеску на дозы.

На стадиях измельчения и смеши-. вания возможны потери ингредиентов, а также ошибки, обусловленные взвешиванием .на технических весах, поэто му точный вес порошка не соответствует весу порошка по прописи, что

45 учитывается при расчете результатов анализа.

Исходя из многостадийности техно- . логического процесса, допускаются отклонения в содержании отдельных ин50 гредиентов в дозе.

Для лекарственных форм аптечного изготовления в соответствии с инструкцией допустимыми являются «10, +15, +-203 при содержании 0,1; 0,05;

0,02 г вещества соответственно.

Найденное содержание кофеина и кофеин-бензоата натрия (табл. 2 и 3) не выходит за пределы допустимых отклонений. Относительная погрешность среднего результата с надежностью

K 0,95 равняется - 4,14 (табл. 2).

Способ испытывают на заводских лекарственных формах.

Данные количественного анализа таблеток свидетельствуют о возможнос" ти использования предлагаемого способа для анализа таблеток и показывают, что вспомогательные вещества, входящие в состав таблеточной массы, не оказывают влияния на ход анализа, поэтому способ может быть применен для таблеток кофальгин (кофеин-бензоата натрия 0,053, анальгина 0,34), пира" меин (кофеина 0,03 г, амидопирина

0,3 г), пираминал (кофеина 0,03 г, фенобарбитала 0,02 г, амидопирина

0,25 г), кофадин (кофеин-бензоата натрия 0,1 г, кодеина 0,0015 г, амидопирина 0,25 r, анальгина 0,25 г), диафеин (кофеин-бензоата натрия 0,05 г, фенобарбитала 0,02 г, анальгина

0,25 г, фенацетина 0,25 г), дикафен (кофеин-бензоата натрия 0.05 г, ко деина 0,015 г, анальгина 0,25 г, фенацетина 0,25 г), так как количественное определение кофеин-бензоата натрия проводят при испытании способа на порошковых лекарственных смесях подобного или более сложного состава (табл. 1).

Пример 1. Один порошок лекарственной смеси (ц — точная навеска 0,38 г), содержащей, r: папаверина гидрохлорида 0,03; фенобарбитала 0,05; кофеин-бенэоата натрия 0,1; бромиэовала 0,2; вес по прописи P равен 0,38 г) растворяют в мерной колбе емкостью 25 мл в 504-ном этиловом спирте и доводят объем до метки.

Параллельно готовят раствор стандарта растворением в мерной колбе емкостью 25 мл 0,1 г кофеин-бенэоата натрия, соответствующего требованиям и содержащего 404 кофеина.

На стеклянную пластинку размером

20 20 см с помощью прибора наносят слой выпускаемой фирмой "ReanaI" окиси алюминия II степени активности по Брокману, модифицированной добавлением 24-ной ледяной уксусной кислоты; толщина слоя 1 мм.

На линию старта с помощью микропипетки наносят 0,15 мл (V) раствора анализируемого образца и раствора стандарта кофеин-бенэоата натрия в виде полос шириной около 4 мм и дли03765 8

0,635 r) растворяют в мерной колбе емкостью 25 мл в 604-ном этиловом спирте и доводят объем до метки.

Параллельно доводят раствор стандарта кофеина в концентрации, соответствующей содержанию кофеина в анализируемом образце.

В дальнейшем ведут анализ по методике, описанной в примере 1, но используя в качестве подвижной фазы, взятых в соотношении (30:60), Rf кофеина в этих условиях 0,35.

При этом получают D 0,13 и

О, 0,165. Содержание кофеина

0,0218 г.

Пример 3. Один порошок лекарственной смеси (q - точная навеска 0,63 r), содержащей„ г: промедола 0,03", кофеин-бензоата натрия 0 1 анальгина 0,25; амидопирина 0,25; (вес по прописи Р равен 0,63 г) растворяют в мерной колбе емкостью 25 мл в 60io ном этиловом спирте и доводят до метки.

В дальнейшем ведут анализ по методике, описанной в примере 1, но используя окись алюминия и систему растворителей хлороформ-эфир, взятых s соотношении 30:60, Rf кофеина в этих зо условиях 0,35.

При этом получают бк 0,45 и

0 0,42.

Содержание кофеин-бензоата натрия составляет 0,1070 г, а содержание кофеина — 0,0428 г.

Пример 4. Одну таблетку (точная навеска 0,6574 г), содержа40

56

7 9 ной около 4 см. (Увеличение объема наносимой пробы до 0,15 мл с использованием в процессе элюирования йриема разведения дает возможность избежать ошибок на первой стадии анализа за счет неточности измерения малых объемов).

На хроматограмме оставляют пустую зону тех же размеров. Зоны подсушивают до полного удаления растворителя, затем хроматограмму развивают в системе растворителей хлороформэфир, взятых в соотношении 25 :65.

Обнаружение зоны кофеина проводят в Уф-свете, источником которого служит хроматоскоп с максимумом излучения 254 нм (Rf кофеина 0,33), Обкалывают иглой зону кофеина стандарта, зону кофеина в исследуемом образце и пустую зону таких же размеров, расположенную на уровне кофеина стандарта. С хроматограммы удаляют лишний адсорбент.

Зону кофеина анализируемого образца, зону кофеина стандарта и пустую зону помещают в микроколонки и элюируют 0,1 н раствором соляной кислоты в мерные колбы 25 мл (Н )..

Полученные элюаты центрифугируют при скорости 10000 об/мин в течение

5 мин.

На спектрофотометре СФ-26 при толщине поглощающего слоя 1 см и длине волны 273 нм определяют оптическую плотность элюатов, полученных с зон кофеина в исследуемом образце (Dx 0,37) и стандарте (О,„ 0,368) при использовании в качестве раствора сравнения элюата пустой зоны. (Спектрофотометрирование элюата исследуемого образца и стандарта при использовании в качестве раствора сравнения элюата пустой зоны дает возможность учесть помехи, обусловленные наличием в элюате побочных продуктов, зависящих от природы адсорбента).

Содержание кофеина и кофеин-бензоата натрия в исследуемом образце определяют по формуле, при этом содержание кофеина равно 0,0402 г, а содержание кофеин-бензоата натрия

0,1005 r.

Пример 2. Берут полученную навеску порошка (q 0,635 г), приготовленного по прописи, г: кофеина фосфата 0,015; кофеина 0,02; анальгина 0,2; амидопирина 0,2; фенацетина 0,2;(вес по прописи P равен щую, г. кофеин-бензоата натрия 0,1; анальгина 0,25> амидопирина 0,25, вспомогательных веществ достаточное количество до получения таблетки средним весом 0,663 г, помещают в мерную колбу 25 мл и обрабатывают

60"ь -ным этиловым спиртом при покачивании до полного распадания таблетки, затеи доводят объем до метки.

В дальнейшем ведут анализ по методике, описанной в примере l, но используя систему растворителей хлороформ-эфир, взятых в соотношении

35:50 (Rf кофеина 0,42), и для элюирования кофеина с адсорбентом—

0,05 н раствор соляной кислоты.

При этом получают О„ 0,395 и

0 0,405.

Содержание кофеина равно 0,0394 r, а кофеин-бензоата натрия — 0,0984 r.

Пример 5. Один порошок лекарственной смеси (q 0,565 г), соо а

Сос фенобарбитала 0,01

Кофеин-бензоата натрия 0,1

0,41 0,44 0,41 0,0373 0,0932 х = 0,0985 о,3

0,3 0,63 0,42 0,44 0,0419 0,1048 x = 0,0039

Амидопирина

Фенобарбитала

Кофеин-бензоата натрия

0,1

x = 0,0013

0,25

Амидопирина фенацетина х = 0,0030

0,25 деРжащей, r: кодеина фосфата 0,015; кофеин-бензоата натрия 0,05; анальгина 0,25; фенацетина 0,25; (вес порошка по прописи P равен 0,565 г) растворяют в мерной колбе емкостью

25 мл в 603-ном этиловом спирте и доводят объем до метки.

Параллельно готовят раствор стандарта кофеин-бензоата натрия в концентрации, соответствующей содержанию кофеин-бензоата натрия в анализируемой смеси.

В дальнейшем ведут анализ по методике, описанной в примере 1, но наносят на линию старта по 0,3 мл раствора анализируемой смеси и раствора стандарта, систему растворителей хлороформ-эфир, взятых в соотношении

30:60.

Получают 0„ 0,45 и 0 0,5.

Содержание кофеина составляет

0,018 r, а содержание кофеин-бензоата натрия — 0,045 г.

Il р и м е р 6. Одну таблетку (точ ная навеска равна 0,779 г), содержащую, г: кодеина 0,0015; фенобарбитала 0,01; кофеин-бензоата натрия 0,05; анальгина 0,3; амидопирина 0,3, вспомогательных веществ достаточное количество до получения таблетки средним весом 0,773 г помещают в мерную колбу 25 мл и обрабатывают 603-ным этиловым спиртом при покачивании до полного распадания таблетки. В дальнейшем ведут анализ по методике, опи03765 10 санной в примере 1, включая приготовление стандарта, но используя в качестве системы растворителей смесь хлороформа и эфира в соотношении

30:60.

Получают 0 0,15 и 0 0,32.

Содержание кофеина равно 0,0186 r, а содержание кофеин-бензоата натрия0,0465 г.

io . Предлагаемый способ позволяет проводить количественное определение кофеина и кофеин-бензоата натрия в различных лекарственных смесях слож ного состава в присутствии бромизовала, фенацетина, фенобарбитала, кодеина, амидопирина, промедола, анальгина, папаверина гидрохлорида, т.е. веществ, наиболее часто сопутствующих кофеину в лекарственных смесях.

Предлагаемый способ по сравнению с известным обеспечивает высокую селективность определения кофеина в лекарственных смесях различного состава и позволяет определять количественное содержание пооизводного кофеина " кофеин-бензоата натрия в сложных смесях.

Способ прост по выполнению и обладает высокой точностью определения кофеина и кофеин-бензоата натрия в различных дозах, а также высокой чувствительностью, так как уменьшение дозы кофеина в анализируемом образце соответственно вызывает уменьшени оптической плотности элюата.

Таблица 1

9Î3?65

12

Продолжение табл 1

Состав

Кофеин-бенэоата натрия

0,60

0,1

0,25

0,25

0,015 0,615 0,40 0,40 0,0400 0,1000

Кофеин-бензоата натрия

0,1

0,25

0,25

0,015 0,365 0,44 0,42 0,0382 0,0955

Кофеин-бензоата натрия

0,1

0,25

Амидопирина

Кофеин-бензоата натрия

0,60

0,1

0,25

Амидопирина

Анальгина

0,25

0,03 0,63

0,1

0,25

Амидопирина

Анальгина

0,525

Промедола

0,1

0,2

0,2

0,025 0,425 0,39 0,39 0,0400 О,!000

0,1

0,3

Амидопирина

Амидопирина

Анальгина

Кодеина

Амидопирина

Фенацетина

Кодеина

Промедола

Кофеинбензоата натрия

Кофеинбензоата натрия

Амидопирина

Фенацетина

Промедола

Кофеинбензоата натрия

Содержание, г

0,25

0,025

0,40 0,40 0,0400 0,1000 -3,043

0,39 0,37 0,0380 0,0949

0,42 0,4 0,0381 0,0952

0,39 0,40 0,0411 0,1027

903765

14

Таблица 2

Количество, г,Состав

Ор„ О»

0,4095 0,37 0,39 0,0422 0,1055 0,1024 фечобарбитала 0,01

О,l

0,0051

0,6174 0,40 0,43 0,0438 0,1096 0,0018

0,3

Амидопирина

Фенобэрбитала i 0,03

0,0042

0,1

0,25

Амидопирина

Фенацетина

i4, 103

0,25

0,5917 0,35 0,35 0,0405 0,1014

0т 1

0,25

0,25

0,015 0,6135 0,40 0,41 0,0411 0,1027

О,1

0,25

Анальгина Амидопирина

Кодеина фосфата 0,015

0,3620 0,42 0,40 0,0384 0,0960

0,1

0,25

Амидопирина

Промедола

0,03 0,6229 0,42 - 0,45 0,0433 .0,1083

0,1

0,25

0,25

0,025

0,5343 0,42 0,42 0,0392 0,0982

Кофеинбензоата натрия

Кофеинбензоата натрия

Кофеинбензоата натрия

Анальгина

Амидопирина

Кодеина

Кофеинбензоата натрия

Кофеинбензоата натрия

Кофеинбензоата натрия

Амидопирина

Анальгина

Промедола

Содержание, г

Точная навеска анали зируемого образца кофеинбензоата натрия

Результаты статистической обработки

903765 е

16

Продолжение табл 2

Содер- Точная жанне, навеска

Количество, r

Состав

0с

0к кофеина кофеинбензоата нализируемого образца натрия

Кофеинбензоата

О, I

0,2

0,0976

0,3

Таблица 3, Точная навеска

Содержание, r

Количество кофеина (кофеин-бензоата натрия), r

Состав

0,015

0,0203

0,02

0,2

0,2

0,2

Папаверина гидрохлорида

0,1018

0,1046

0,03 фенобарбитала

0,05

Кофеин-бензоата натрия

0,34 0,34

0,1

0,2

Бромизовала

Кодеина

0,015

Кофеин-бензоата натрия

0,05

0,25

Анальгина

Эенацетина

0,25 натрия

Амидопирина фенацетина

Промедола

Амидопирина

Кодеина фосфата

Кофеина

Анальгина

Амидопирина

Фенацетина

0,2

0,025 0,4355 0,39 0,39 0,0390

0,6229 0,34 0,36

0,3631 0,36 0,37. 0,37 0,37

0,36 0,3 1

0,5592 0,42 0,4

0,1046

0,1075

0,0481

Результаты статистической обработки

17!

Таблица 4

903765

Средний вес таблетки, г

Содержание, r

Точная

КолиКолиРезультаты статистической обработки

Состав навеска, г чество кофеина, r чество бензоата натрия,г

Кофеинбензоата натрия

0,663

0,6577 0,38 0,36 0,0382

0,38 0,40 0,0424

0,40 0,42 0,0445 о,4а 0,4î о,о4о3

0,40 0,38 о,оз83

0,1

Амидопирина 0,25

Анальгина 0,25

0,773 0,7791 0,30 0,32 О 0209

0,30 0,32 0,0209

0,0529

0,0529

Кодеина фенобарбитала

0,0015

0,01

Кофеинбензоата натрия

0,3а о,28 0,0164 о,0463 о,0031

0,34 0,34 0,0198 0,0496 . 0,0014

0,32 0,30 0,0187 0,0468 0,0038

0,0497+

О 0038

0,05

0,3

0,3

Амидопирина

Анальгина 7,643 слое кислой окиси алюминия в системе хлороформ-эфир, взятых в соотношении

25-35:50-65, полученную зону кофеина выявляют в ультрафиолетовом свете и фотометрируют.

Источники информации, принятые во внииание при экспертизе

Некрасов В.И. Спектрофотометрическое определение амидопирина, кофеина и фенобарбитала в таблетках.

Труды I Всесоюзного сьезда фармацевтов. И., 1970, с. 740-745.

Формула изобретения

Составитель А. Бражникова

Редактор P. Цицика Техред С. Мигунова, Корректор О. Билак

Тираж 882 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 102/25 м ю

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Способ определения кофеина в лекарственных смесях путем растворения анализируемой пробы в органическом растворителе, отделения сопутствующих веществ и фотометрирования, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения селективности способа, пробу растворяют в 50-603-нои этаноле, сопутствующие вещества отделяют хроматографией в тонком незакрепленном

0,0955 ,. О, 1061

0,1058 о,1аао

0,0958

0,1006 о,оа51

0,0023

+0,0063

0,1006t

0,0063

+ 6,263

0,0497