Способ диагностики генитального туберкулеза

 

Г. А. Вахидова,A. A. Каланходжаев, P. А, Агзамев и Й. A. Ахмедова (72) Авторы изобретения

Узбекский научно-исследовательский институт 1губеркулеэа им. акад, Ш. А. Алимова 1 (71 ) Заявитель (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГЕНИТАЛЪНОГО

ТУБЕРКУЛЕЗА

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии и гинекологии, и предназначено для диагностики туберкулеза женских половых органов.

Известен способ диагностики генитального туберкулеза путем иммунологического исследования лейкоцитов. — определение степени торможения миграции лейкоцитов до и после введения гурбекулина пациенту )1j.

Однако для выполнения известного спо-1 соба требуется большой объем крови (1012 мл), стерильные условия, специальные камеры сложной конструкции, что усложняег технологию осуществления способа.

В результате на выполнение диагностики

15 затрачивается большое количес гво врем ни.

Целью изобретения является ускорение способа.

Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа диагностики генитального туберкулеза путем иммунологического исследования лейкоцитов до и после введения туберкулина пациенту взвесь лейкоцитов инкубируюг с эрит роцитами, сенсибилизированными туберкулином, полученную смесь ценгрифугиру« ют, иэ образовавшегося осадка готовят мазки, окрашивают, затем под микроскопом подсчитывают число роэеткообраэуюших лимфоцитов и по разнипе розегкообразуюших лнмфоцитов до и после введения туберкулина пациенту диагностируют генигальный туберкулез.

Способ осуществляют следующим образом.

Для приготовления взвеси лейкоцитов кровь забирают иэ локтевой вены сухим стерильным шприцем в количестве 3 мл и переносят в центрифужную пробирку, в которую предварительно помещают растворенный в 0,3 мл питательной среды гепарпн в гаком количестве, чтобы обеспе» чигь конечную конценграцгпо 25 ед. гепарина на 1 мл крови. Для предупреждения свертывания крови ее перемешивают, до бавляюг 0,2 мл 10%-ной желагины, вновь

3 9048 перемешивают пастеровской пипеткой и ставят в термостат при 37 С на 2530 мин для отстаивания эритроцитов.

Весь слой плазмы забирают в соликонированную круглодонную пробирку. объемом 5 мл, доливают питательную среду № 199 объемом 3»4 мл, перемешивают, центрифугируют при 800 об/мин в течение 10 мин. Недостаточную жидкость слива."от, к осадку вновь добавляют пита to тельную среду % 199, в которой осадок взвешивают нестеровской пипеткой и центрифугируют прй тех же режимах. После двухкратного отмывания концентрацию клеток доводят до 2х10 в 1 мл суспен6

" 35 зии.

Затем проводят сенсибилизацию эритроцитов туберкулином. Йля этого одну ампулу туберкулина разводят в 1 мл питательной среды М. 199 - исходное разведение из

2о которого готовят рабочее разведение

1: 10.

Эритроциты человека 110) группы Я% (-) крови трижды отмывают питательной средой № 199, центрифугируя при

1500 об/мин в течение 7.мин. После последнего центрифугирования надосадок сливают, из" осадка готовят 5 /ную взвесь в среде № 199 с т беркулином.

Взвесь тщательно перемешивают пасЗо теровской пипеткой и ставят в термостат при 37 С на 2 ч для сенсибилизации эритроцитов туберкулином. Через каждые 30 мин взвесь встряхивают.

После инкубации в термостате эритроциты трижды отмывают от несвязавшегося туберкулина питательной средой № 199, ценгрифугируя при 1500 об/мин в течение 7 мин. Из осадка сенсибилизированных эритроцитов готовят 0,5%-ную взвесь, перенося микропипеткой 0,05мл эритроцитов в мерную центрифужную пробирку и прибавляют питательную среду Мо. 199 до метки 10 мл, Взвесь тщательно перемешивают, Затем в микропробирку длиной 80 мм

9 7-8 мм приливают по 0,1 мл лейкоцитарной взвеси и сенсибизированных эритроцитов, пробирку встряхивают, ставяг в термостат на 30 мин при 37 С

После инкубации смесь центрифугируют в течение 5 мин при 800 об/мин. Содержимое.пробирки фиксируют. глитаровым альдегидом (0,05 мл 0,6%-ного раствора в фосфатном буфере) в течение 20 мин при комнатной температуре. Затем добавляют 55

1 мм дистиллированной воды, центрифугируют, недосадок сливают, из осадка готовят смазки на предметном стекле, высушивают, фиксируют в метиловом спирте 10 мин. Препараты окрашивают гем&токсилин эозином, Подсчет 300 лимфоцитов производят в световом микроскопе под иммерсией (90х10). За розеткообразующую клетку принимают лимфоцит, фиксирующий на своей поверхности 3 и более эритроцитов, Кроме того, подсчитывают и абсолютное содержание розеткообразующих лимфопитов по формуле

Х—

10000 где Х - абсолютное содержание розеткообразующих лимфопитов в 1 мм

Э периферической крови;

А - общее количество лейкоцитов в

1 мм периферической крови;

B — - процентное содержание лимфоцитов периферической крови;

С - процентное содержание розетко обр азутощих лимфоци тов.

Реакция считается положительной при обнаружении свыше 2% иммуиных" рсзеткообразующих лимфоцитов.

После оцределения "иммунных розеткообразующих лимфоцитов больным подкожно вводят 100 TE туберкулина. Через 48 ч повторно определятот содержание "иммунных" розеткообразующих лимфоцитов в периферической крови. По разнице показателей "иммунных" розеток судят о наличии туберкулезного процессе и его активности.

По указанной методике обследована

61 женптина. В грунпе здоровых содержание "иммунных" розеток колебалось в пределах 0-2%. Наиболее высокие показатели "иммунных" розеток были у боль» ных с активным туберкулезом гениталий (1% 7%) . В группе больных с неак тивным процессом в гениталиях уровень "иммунных" розеток колебался в небольших пределах (1-3%). У больных с неспецифическим воспалением гениталий количество "иммунных розеток было в пределах 0-4%.

После введения турбекулина у больных со скрытой активностью процесса уровень

"иммунных" розеток увеличился почти вдвое (4,7+0,6%), у лиц с неактивным туберкулезом, у больных с неспецифическим воспалением гениталий и у здоровых лиц наблюдалось незначительное умеFibHIeHHe числа иммунных розеток, соответственно 1,4+0,3%; 0,7+0,2%;

0,9+0,3%.

Формула изобретения

Ис точники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

Nq 552074, кл, А 61 В 10/00, 1 76

Способ диагностики генитального туберкулеза путем иммунологического исследования лейкоцитов до и после введе- 1 ния туберкулина пациенту, о т л и ч аСоставитель Л. Соловьев

Редактор О. Персиянцева Техред A. Ач Корректор Н. С reu

Заказ 193/7 Тираж 716 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений н открытий

113035, Москва, Ж35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 904669 6

Таким образом, предложенный способ ю ш и " с " тем, что, с целью ускорение является высокочувствительным диагнос- способа, взвесь лейкоцитов инкубируют с тическим тестом. Способ технически эритроцитами, сенсибилиэированными тупрост и доступен в выполнении, не тре- беркулином, полученную смесь центрифубует дефицитных реактивов и оборудования 5 гирст, иэ образовавшегося осадка гото стерильных условий. Для анализа доста сят мазки, окрашивают, затем под микточно 3 мл крови. Результаты метода раскопом подсчитывают число роэетмоиммунного" розеткообразованияоценива образуюших лимфоцнтов и по разнице ро ются в течение 6-7 ч. эеткообразукяцих лимфоцитов до и после

10 введения туберкулина пациенту диагностируют генитальный туберкулез.