Способ получения терапевтически активного сложного полиэфира серной кислоты с мукополисахаридом из трахей крупного рогатого скота

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (»)918294

Союэ Соватсккх

Соцналксткческнх

Республик (89} 136572 ГДР

{6l ) Дополнительное к ввт. свид-ву(ЙВ} Заявлеио 06,09.78(21) 7770292/23/05 (23) Приоритет (32) 06.10. 77

Р1} РС 07 С 201389(33т Гдр (51) М. Кл..3

С 08 В 37/00

Гооуаерстваниый комитет

СССР ао лелеи изабретеиий в открытий

Оиубликоваио 07.04.82Бюллетень № 13 (53) УДК 547.458..8(088,8) Дата опубликования описания 10.04.82 (У2) Автор изобретеиитт

Иностранец

Тепфер Хорст (ГДР) т . . I

Иностранное предприятие

А рциеймиттельверк, Дрезден (ГДР) (71) Заявитель

)

Изобретение касается способа получения терапевтически активного сложного жижэфира серной кислоты с мукопоатсахарипоае из трвхей крупного рогатого скота, пригодного в качестве фармацевтического срецства цля лвеэния заболэваний суставов, который главным образом можно вводить внутрь суставов» действия или другого их состава, как правило, не пригодны для лечения заболеваний суставов относительно действия и переносимости, что особенно выявляется при внутрисуставном ввецении.

Известны способы выделения кислых мукополисахаридов (ОЕ- 08 1492 0 17, ЭЕ- 0$ 1467810, BE 843 095, lP

031353, 3Р076160, ЗР123444), не !

О пригодных, однако, щтя внутрисуставной иньекдии при заболеваниях суставов.

Сложные полиафиры серной кислоты с мукополисахаридом, обладающие .тормозяшим свертыванием «рови и/или липолитиче.ским (антилипемическим) действием, могут быть получены сульфатйрованием йо. жжахаридов животного или оастительного происхождения (Р1ЯГФ. Рт Эк13, 12,281 (1969) ) .

Несмотря нв то, что соответствующие способы получения часто содержат такие технически сложные ступени очистки, как энзиматические шаги частичного отшепления группы при помощи пвдаина, тридеина, гиалуронидазы или бактериальных протеаз, известные цо сих пор препараты на основании резко выраженного гапариноидного

По QE-05 1492017 кислые полисахариды получают из костной или хрящевой

l5 ткани прн помощи экстракции слабощелочным. водным раствором этилендиаминтетрауксусной кислоты, обработкой s«c рактов при рН 5 квтионообменной смолой 1,Р 50 и энзимвтическим отшеплением нерастворимых остатков при помощи папаина и трипеина и последующим осаждением кислых полисахаридов четвертичными соединениями аммония.

Далее дуоценвльный гепариноиц с ан25 тнлипемнческнм действием по ВЕ-0S (S4) СПОСОВ ПОЛУЧЕНИЯ. ТЕРАПЕВТИЧЕСКИ АКТИВНОГО

СЛОЖНОЙЭ ПОЛИЭФИРА СЕРНОЙ КИСЛОТЫ С МУКОПОЛИСАХАРИДОМ

ИЗ ТРАХЕЙ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

3 9 18294 4

1467 !8 10 был очищен фракционным нием желаемой мукополисахаридной фрак жаеиием четвФичными слояу амм ци коценФрцией эти во с рта 70ния или хлористого цинка. Сульфаты хонд 74 об.%. Подученцую главную фракцию роитина были получены обработкой хря- после tact o гидролиза и сульфати» ша пепсином и папаином (BE 843095), 5 рования для отделения низВомолекуляркультуральной жидкостью штаммов, ных составных частей с молекулярным

Sarr rt Cia или /etc. ьпЬ ° весом до 5000 подвергают диализу в ви(О 031353), обработкой кожи живот де 5%-ного водного раствора при рН 9ных лнпазой, проназой и хроматографиро» 10 и 20 С ttpa помощи полых волокон ванием на Ьоие к. -1(gp 076160) to или мембран,"Частичный гидролиз соляной

itna очисткой нри помощи хроматографи- кислоты и сульфатироваиие хжрсульфоно ровання на грубопористой сильноосновной .вой кислотой в среде формамида Проводии аннонообменной смоле (1 123444), ся известным способом. Полученный проИзготовляемые по японским патен пукт очищается сильнокислотной катионотам 7000 156-R (Эеtwertt 04390P), 15 обменной смолой и обесцвечивается пере7001 445 (Эегюе 1 065049), кисцю водорода.

7004 744 (Get.er е 14519R)., Полученный сложный полиэфир серной

7314 078 (Det"m t 255480) низко .. кислоты с мукополисахаридом (ЙПС) сомолекулярные .полисульфаты хондроина . держит 11-13,5% серы, 1,7-2,2% азота, (молекулярный вес 400-6000), полчча» 5й 20 26% уроновой 1сислоты, Тормозящая емые 10 ч обработкой сульфата хондрои- свертывание крови активность по сравнетнна (молекулярный вес 400-4000) хлор нию со стандартом гепарина составляет сульфоновой кислотой в пиридине или фор менее 15 международных единиц на мг. маьпще с последующим подщелачиванием, . После 12-кратного вливания по 0,2мл перегонкой с водяным паром или обработ- j5 раствора 50 мг МПС/мл в правый коленаей катиенообменной смолой или же депо ный сустав задних конечностей кроликов . лимериэацией полисульфага хондроитина (tlo три ийьекции в неделю) никаких восиви пемоши хондроитинаэы и фракционным палительных реакций суставной сумки не. ееажаением органическими растворителями,наблюдалось, сетя и обладают высоким антилипемичес- После 10-кратного внутрисуставного лего, т,е, антиартериоскюротическим дей вливания по 50 мг МПС/1 мл человеку .ствием, однахо, пригодность для лечения обнаруживалась хорошая переносимость и эабелеваний неизвестна. эффективность препарата при дегенератив

Целью изобретения является получение ных заболеванийс коленного сустава. ележного полиэфира серной кислоты с му Пример 1 ° 10 кг свежих трахей кеполнсахаридом в качестве терапевти- . крупного рогатого скота размельчают в 35 ческого средства, вводимого прямо s су- мясорубке и полученную массу трижды ставную сумку при дегенеративных эаба- перемешивают с 35 л ацетона при комле ваниях сус гавов. натной температуре (20 С) в течение

Изобретение основывается аа задаче 3 ч. После каждого перемешивания фильтраэработать способ получения высокоочи- руют через грубое сито, Црубоволоконис40 щенного сложного полиафира серной кисло тый порошок из трахей сушат аа воздухе; ты с мукополисахаридом, свободного от Выход 2,150. кг. непереносимых подисахаридных и проте» Пример 2. 2 at сухого порошка ииевык составных частей.; . -трахей экстрагируют 600. г едкого патра

В соответствии с изобретением уста- 45 н 15 л воды в течение 20 ч при 15 С, новлено, что для получения терапевтичес- изредка перемешивая. Затем грибавлением ки активного и переносимого суставами 3,9 л 18% ной соляной кислоты, pH рапрепарата с целью отшепления мешающих створа доводят до 1 и центрифугируют. K высокомолекулярных полисахаридов фрак- прозрачному цещрифугату (16 л) прибавцненирования этиловым спиртом сырой 5О лают 48 л втанола, после!,стояния в саеси мукополисахаридов, полученной иэ течение 15 ч при - РС осадок отделяют. вестпым способом из трахей.крупного центрифугированием и промывают алкогорогатого скота путем щелочной экстрак - лем и ацетоном а сушат в вакуумном ции, фракционирование провоцится преиму- ексикаторе, щественно осаждением предварительной 55 Выход 203,4 г сырой мукополисахафракции при рН 1 2 и 20 С концентра- ридной емеси, цией этилового спирта 30-34 об.%, кото- Пример 3. 200 г сырой мукопорую отбрасывают, и последующим осажде лисахаридюй смеси растворяют в 1800мл

23,0

11,3

1,9

5 9182 воды. Прибавжнием соляной кислоты ьН раствора доводят до 1 и доливают водой до получения 2000 мл. Прибавжнием

1000 мл 96%-ного этвнола при 20 С осаждают препвар::тельную фракцию, кото- > рую после стояния в течение ночи при

+4 С отделяют центрифугированием и ог брвсыввют. Прибавлением дальнейших

5000 мл этанолв к центрифугату .при

+4вС получают фракцию мукополисахари .>© дов, которую отделяют центрифугированием и промывают зтвноюм и ацетоном. Bsaoa

118,2 r мукополисахаридной фракции, Пример 4. 10%-ный раствор

100г мукополисакаридной фракции в 0,1 н. И растворе соляной кислоты оставляют сто4 ять в течение 3 ч при 80 С. Осаждение частично расщепленной мукополнсвхаридной фракции проводят прибавлением

5000 мл этанола. Осадок отделяют цент- 2î рифугироввнием и промывают этвнолом и ацетоном, Выход 76,1 г, .

П р и м е .р 5. 75 г частично рас-: щепленнойй мукополисахвридной фракции . растворяют в 750 мл формамида в колбе H для сульфвтирования, после чего в течение

;1 ч по каплям прибавляют 112,5 мл хлорсульфоновой кйслоты при перемещиввнии и охлаждении. Температура при этомдолжнв срставлять,не более 1 0-15 С.Затем еще перемешивают в течение 4ч при ком.

samoa температуре (20 С)

Сульфатироввнный мукополисахарид осаждают. наливанием раствора в 6 л ьжтвнолв Осадок отсасывают и pacTBops ют его в 1500 мл воды. Прибавлением раствора едкого патра рН раствора дово-. дят до 10 и с целью диализа раствор про качивают в течение 3 ч через патрон из soiaac в<жокон (граница исключения: мо. лекулярный вес до 5000), внешнюю руба- 4в

1шку которого сначала промывают водопро. водной, в затем дистиллированной водой.

После концентрирования диализированного раствора мукополисахариаа путем ультрафиюьтрации через тот же патрон мз полых м волокон до 695 мл осаждают сульфагиро. ванный МПС рибавлением 3500 мл эга» иола и вцетата натрия, Выход 75,8 г, П р. и м е р 6. Раствор 75 г сульфатироввнный МПС-фракции в 750 мл и ци- go стиллированной воды фильтруюг через

750 .мл аильнокисютной катионообменной смо п1, состоящей из сополимеризата стирола и дивиниЮензола с сульфогрудпами в ядре (Н+ - форма). Прибввжнием, 4. н; у раствора едкого патра, рН фильтратв доВНИИПИ . Заказ 2039/29

94 6 водят до 7,0, прибавляют 75 мл 30%ного раствора перекиси soaopoaa и раствор оставляют стоять в течение 60 мин при

70 С, причем через каждые 10 siss нр»бввлением 0,1 н. раствора едкого натрв рН растворв доводят до 7,0.

После охлаждения мук ополисахарид осаждают наливанием раствора в 5000 мл этвнолв (прибавляют ацетвт натрия для лучшей «оагуляции) . Осадок центрифугируют, промывают ацетоном и сушат под вакуумом. выход: 71,5 г натриевой соли сложного полиэфира серной кисло гы с мукополисахвридом

Содержание серы,% 11,32

С одержание уроыовой кислоты, %

Содержание натрия,%

Содержание азота,%

Ф ор мула изобретения

Споссб получения терапевтически активного сложного полиэфирв серной кис лоты с мукополисвхаридом из трахей крупного рогатого скота,. о. т л и ч а ю ш и и с я тем, что выделяют мукоп свхаридную фракцию путем фракционирования низшим алифатическим спиртом сырой мукополисвхаридной смеси, получен% ной известным методом щелочной экстрак ции трахей крупного рогатого скота Му " кополисахаридную фракцию получают пре» имущественйо осаждением предварительной фракции при рН 1-2 и 20 С юицентрв» цией этилового спирта 30-34 об.%, ко-, торую огбрасыввют и посждующим осаждением желаемой мукополисвхаридной фракции концентрацией этилового спирта .

70 74 об.%. Далее способ получения ха рвктеризуется тем, что мукополисахарид» ную фракцию оцсле частичного гидролиза и сульфатирования, проводимых известныы образом, в виде 5%-ного водного раство-. ра при рН 9-10 и 4-25 С с целью диа» лиза фильтруют через полые волокна.или мембраны с границей исключения до мо . лекуляриого веса 5000, очищают ее при помощи сильнокислотной квтионообменной смолы и обесцвечивают перекисью soaoрода

Признано изобретением по ревуювтатвм экспертизы, осуществленной ведомством по изобретательству Германской ge» мократической Республики, Тираж 51 2 Подписное.

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4