Способ получения высокомолекулярного левана
О П И С А Н И Е ()859375
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ. СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советск их
Социалистических
Респубпии (6l ) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 26 12 78 (21) 2696403/23 05 с присоединением заявки.% (23) Приоритет— (51)М. Кл.
С 08 В 37/00
Гааударстееиный комитет
СССР по делам изобретеиий и открытий
Опубликовано 30.08.81. Бюллетень ¹32
Дата опубликования описания 01.09,81 (53) Уд K 677.469 (088.8) (72) Авторы изобретения
М. С. Лойцянская и В. И. Элисашвили
Ленинградский ордена Ленина и ордена Трудового-Красного .Зйамени государственный университет им. А. А. Жданова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНОГО
ЛЕВАНА
Изобретение относится к способам полученйя полисахаридов, предназначенных цля использования в пищевой, химической промышленности, в медицине и научных исследованиях.
Наиболее близким . к предлагаемому является способ получения левана в растущей куль5 туре Cluconobacter oxydans Л вЂ” 1. Согласно этому способу культивирование бактерий осуществляют в течение 72 ч в среде с 5% сахарозы в стерилыгых условиях в ферментере, снабжен1О ном устройством для перемешивания питательной среды. В начале процесса (через 24 ч культивирования) синтезируются всего около 2 г левана/л, из которых 70% составляет высокомолекулярный полисахарид (мол. вес более
1 млн.) и 30% — низкомолекулярный (мол.вес менее 30000). Через 48 ч, когда количество синтезированного левана увеличивается до
13 мг/мл, доля низкомолекулярной фракции возрастает до 95% и остается на этом уровне до окончания процесса. После окончания культивирования бактериальную массу отделяют центрифутированием, а из насадочнсй жидкости выделяют леван путем двукратного осаждения полисахарида этиловым спиртом и растворения его в дистиллированной воде. Затем леван освобождают от следов бактериального белка встряхиванием со смесью хлороформа и фенола (10:1), дополнительно очищают диализом против дистиллированной воды и высушивают в Вакууме над CaCI2. Конечный выход высокомолекулярного левана составляет 1-2 г/л (1).
Известный способ получения левана требует специального оборудования для выращивания бактерий и сохранения стерильных условий.
В конце процесса необходимо удаление бактериальной массы, а после осаждения полисахарида эталоном требуется его очистка от бактериального белка и других веществ, содержащихся в,культуральной жидкости. Еще одним недостатком способа является то, что концентра. ция сахарозы в питательной среде составляет
5 — 10%. Повышение ее с целью увеличения выхода левана не приводит к увеличению выхода продукта, так как при этом, с одной стороны, замедляется рост бактерий и синтез левансахврозы, с другой, быстро увеличивается кислотность среды (рН падает с 5,9 — 6,0 до 2,5859375
Способ получения высокомолекулярного левана с использованием водного раствора сахарозы, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и увеличения выхода целевого продукта, 25 — 35 .ный раствор сахарозы выдерживают 18 — 24 ч в присутствии
5 — 7,5 единиц левансахаразы/мл при 10 — 25 С и рН 5,2 — 5,4.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Авторское свидетельство СССР М 461616, кл. С 12 0 13/04, 1975 (прототип).
Составитель Т. Мартинская
Техред A. Ач.
Корректор E. Рошко
Редактор В. Петраш
Заказ 7466/40
Тираж 530
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Подписное
Филиал П11П "Патент", г. Ужгород, 11л. Проектная, 4,3,0) и вследствие этого происходит инактивация левансахарозы и прекращение синтеза левана.
Цель изобретения — упрощение способа и увеличение выхода целевого продукта.
Поставленная цель достигается тем, что в способе получения высокомолекулярного левана с использованием водного раствора сахарозы, 25 — 35 -ный раствор сахарозы выдерживают 18 — 24 ч в присутствии 5 — 7,5 единиц 1î левансахаразы/мл при 10 — 25 С и рН 5,2 — 5,4 (1 единица левансахаразной активности— количество фермента, которое катализирует гидролиз 1 мкмоль сахарозы при рН 5,2 — 5,4, температуре 30 С и концентрации сахарозы
025 М).
Пример 1. Берут три объема 35 ного раствора сахарозы и 1 объем раствора левансаха. разы в 005 М фосфатном буфере с рН 5,4 и акивностью 20 единиц/мл. Смесь перемешивают и оставляют при 25 С на 18 ч. После окончания инкубирования смесь разводят в три раза дистиллированной водой и добавляют к ней при перемешивании два объема этанола. Леван, выпавший в осадок; отделяют центрифугированием и растворяют в дистиллированной воде.
Выход левана высокого молекулярного веса (1 — 10 млн) составляет 50 г/л.
Пример 2. Берут три объема 48%-.ного раствора сахарозы и 1 объем раствора левансахаразы в 0,05 М фосфатном буфере с рН
5,3 и активностью 30 едикщ/мл. Смесь перемешивают и оставляют при 10 С на 24 ч, а затем осуществляют все приемы, описанные в примере 1. Выход левана высокого молекулярного веса составляет 61 г/л.
Таким образом, в предлагаемом способе выход левана высокого молекулярного веса составляет 50 — 61 г/л, т.е. более чем в 6 — 10 раз выше, чем в известных способах. Предлагаемый способ получения левана значительно проще, так как не требует специального оборудования, а может быть осуществлен в любом сосуде, колбе. Эффективность процесса также выше, так как он длится не более суток, тогда как в известном способе 3 сут для выделения левана требуется в три раза меньше этанола, чем в известном, способе.
Формула изобретения
