Способ определения эстрона или этинилэстрадиола

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное н авт. сеид-ву (22) Заявлено 15. 07. 80 (21) 2959643/23-04 с присоединением заявки Мо (23) Прйоритет (Н) М. Кл.з

G 01 М 31/00

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (И) УДК 543. 42 (088. 8) Опубликовано 2305.82. Бюллетень ¹ с

Дата опубликования описания 23. 05. 82 -к:;., г

lg

1

Всесоюзный научно-исследовательский ин ститут

1 фармации и Ордена Ленина институт химической физики AH СССР (72) Авторы изобретения

A.Ó.Тулегенова., В.Ф.Цепалов, Г.П. Гладышев, Л.И.-Врутко и Т.Р.Попова (71)Заявители (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭСТРОНЛ

ИЛИ ЭТИНИЛЭСТРАДИОЛА

Изобретение относится к аналити. ческой химии, а именно к способу ко личественного определения стероидных гормонов эстрона и этинилэстрадйола, и может быть использовано при анализе эстрогенных препаратов, которые широко используются в медицинской практике.

Известен способ определения эстрона или этинилэстрадиола, который состоит в том, что в бутыль с порошкообразным гидрофобным адсорбентом вводят эстрогенсодержащую жидкость, после адсорбции эстрогена из бутыли удаляют жидкость, проьывают адсорбейт, после чего вводят жидкость, растворяющую эстроген, полученный раствор удаляют из бутыли, добавляют к нему сложный или простой эфир гидрохинона и с помощью серной кислоты хроматографируют (1).

Недостатком известного способа является относительно невысокая точность и большая продолжительность определения.

Известен способ определения эстрогенов путем экстрагирования анализируемой пробы спиртом, получения при отгонке растворителя сухого остатка и взаимодействия его с раствором солянокислого гидрохинона и и-нитрофенола с образованием окрашенного раствора, который анализируют колориметрическим методом (21.

Недостатком известного способа является сложность определения за счет необходимости предварительногo получения окрашенного производного

1р гормона.

Цель изобретения — упрощение способа. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения эстрона или этинилэстрадиола анализируемую пробу растворяют в кумоле, добавляют азобисизобутиронитрил, через полученную смесь пропускают кислород, термостатируют ее при 6065 С и измеряют скорость поглощения о кислорода, при этой же температуре.

На чертеже показан график зависимости поглощенного кислорода от времени в реакции инициированного окисления кумола в присутствии ингибитора.

В основе способа количественного определения стероидных гормонов ле— жит кинетический метод определи иия

ЗО их концен трации, осущес.твл нем я и;— тем проведения реакции инициированного окисления кумола кислородом.

Введение ингибитора в окислительную систему приводит к резкому снижению скорости реакции окисления, что обусловлено участием молекул ин- 5 гибитора в стадии обрыва цепи. После полного израсходования ингибитора скорость реакции окисления значительно возрастает и принимает характерное для нее значение. Время действия ин- 1Q гибитора (период индикации) пропор ционально его начальной концентрации.

Стероидные гсэмоны (эстрон и этинилэстрадиол) являются ингибиторами реакции инициированного окисления ку-)$ мола кислородом.

Способ осуществляется следующим образом.

Готовят реакционную смесь, содержащую (1,0-1, 3) 10 4моль/л анализируемого препарата.и определенное количество инициатора азобисизобутиронитрила (для эстрона 18-25 мг, для зтиленэстрадиола 12-15 мг) в кумоле с таким расчетам, чтобы общий объем ее составлял 5 мл. Сосуд с реакционной смесью продувают кислородом, присоединяют к газометрической ус тановке, термостатируют,:перемешивают и измеряют поглощение кислоро- 30 ,да во времени. Газометрическая установка состоит из измерительной. бюреТКН, соединенной с помощью резиновой трубки через нижнее отверстие с уравнительной склянкой и через верх- 35 нее отверстие . — с реакционным сосу,дом. Бюретка заключена в стеклянную термостатируемую (250 С) рубашку.

На полученной,кинематической кри- 40 вой поглощения кислорода определяют периодом индикации по точке пересечения двух прямых, связанных соотношением tgg — — 2tgg<. Первая прямая является прямой, на которую "выхо,дит" кинематическая кривая после израсходования ингибитора, а вторая . есть касательная к кривой в точке, для которой скорость реакции в два раза меньше скорости после израсходо->О ванин ингибитора. По найденному значению периода индикации рассчитывают содержание гормона в препарате по формуле где - период индикации за вычетом эффективного времени -прогрева реакционного сосуда бО (2 мин), с;

Ы.— скорость инициирования, соотг ветствующая взятой в опыт навеске азобисизобутиронитрила, моль/л с (N-: =б, 27 10 моль/л ° с5 соответствует 5,05 мг инициатора при 60 С и 2,38 мг— при 65оС); коэффициент ингибирования, равный числу обрываемых цепей одной ингибирующей группой (для рассматриваемтх гормонов f равен 2);

n — число иигибирующих групп в молекуле ингибитора (для рассматриваеьих эстрогенных гормонов п равно 1);

М вЂ” молекулярная масса гормона;

Ч вЂ” общий объем реакционной смеси, равный 5 мп; объем исходного раствора препарата, мл, объем раствора препарата, взятый на реакцию, мл, навеска препарата, мг.

Пример 1. Количественное определение э страна.

В сухой реакционный сосуд через стеклянную воронку помещают 17,4 мг азобисизобутиронитрила 0,1 мл предварительно приготовленного раствора препарата (14,2 мг в 10 мл ацетона марки "ОС4") и 4,9 мл кумола. Сосуд с реакционной смесью продувают кислородом, присоединяют к газометрической установке, термостатируют при

60 С и спустя 3-5 мин снимают кинетическую кривую поглощения кислоро.да при постоянном перемешинании. По кинетической кривой определяют с учетом эффективного времени прогрева реакционной смеси период индукции, равный 16, 0 мин. Содержание э страна рассчитывают по формуле (C=99Ú )..

Пример 2. Количественное определение э тинилэ страдиол а.

В сухой реакционный сосуд помещают

11,9 мг азобисизобутиронитрила, 0,1 мп раствора препарата (19,3 мг в 10 мл ацетона) и 4,9 мл кумола.

Дальнейшее определение ведут по методике, описанной н примере 1 при

65 С. Период индикации 14,0 мин.

Содержание этинилэстрадиола 101 Ъ .

Ошибка определения указанных гормональных лрепаратон составляет 1-2 %.

Формула изобретения

Способ определения эстрона или этинилэстрадиола, а т л и ч а ю шийся тем, что, с целью упрощения способа, анализируемую пробу растворяют н кумоле и добавляют азобисизобутиронитрил, через полученную смесь пропускают кислород, термостатн0 руют ее при 60-65 С и измеряют скорость поглощения кислорода при этой же температуре.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент Японии Р 54-35118, кл. 113Еб, опублик. 1979.

2. Патент ФРГ Р 2049526, кл. G Ol N 33/14, опублик. 1971 (прототип).

930111

Составитель С.Хованская

Техред М. Рейвес Корректор С- цомак

Редактор Т.Киселева

Филиал ППН "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Заказ 3456/55 Тираж 883 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1130 35, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5